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Study on quality of flavone in various cultivars of Chrysanthemum morifolium for medicine

不同栽培类型药用菊花黄酮类成分比较分析



全 文 :不同栽培类型药用菊花黄酮类成分比较分析
郭巧生,汪 涛,程俐陶,文晶晶,王桃银,梁迎暖
(南京农业大学 中药材研究所,江苏 南京 210095)
[摘要] 目的:研究药用菊花中主要黄酮组分,对药用菊花质量进行评价,同时对其不同黄酮成分动态积累进
行测定。方法:稀酸水解药用菊花总黄酮提取液,用高效液相色谱法对其中主要黄酮苷元的含量进行比较测定。
结果和结论:桐乡菊花类型中特种亳菊总黄酮、槲皮素和芹菜素质量分数最高,分别为9.81%,417‰,1702‰,射
阳红心菊木犀草素质量分数最高为684‰;江宁菊花类型中特种亳菊总黄酮质量分数最高为759%,异种大白菊
槲皮素质量分数最高为 278‰,射阳小白菊木犀草素质量分数最高为 427‰,济菊芹菜素质量分数最高为
1120‰。不同栽培类型药用菊花中不同黄酮类成分含量存在显著差异;相同栽培类型药用菊花在不同产地黄酮
类成分含量也不同。
[关键词]药用菊花;黄酮;木犀草素;芹菜素;槲皮素
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)07075605
[收稿日期] 20070514
[基金项目] 国家科技攻关计划项目(2004BA721A20);国家
“十一五”科技支撑计划项目(2006BAI06A1211)
[通讯作者] 郭巧生,Tel:(025)84396591,Email:gqs@njau.
edu.cn
  药用菊花是菊科植物菊 Chrysanthemummorifo
liumRamat.的干燥头状花序,是我国常用大宗中
药。药用菊花中主要含有挥发油、绿原酸、黄酮类以
及萜类等成分[1]。其中《中国药典》一部(2005年
版)规定绿原酸质量分数不得低于2‰,为药用菊花
内在质量标准[2],但仅将绿原酸作为菊花的质量评
价标准尚有不足。根据国内外学者的研究,药用菊
花黄酮类成分具有抗癌、抗艾滋的活性。国内外通
过对药用菊花提取分离,发现药用菊花含有木犀草
素、芹菜素、槲皮素等黄酮苷元及其苷。据报道,菊
花中一些由木犀草素和芹菜素组成的苷具有抗癌和
抗艾滋的活性[35]。而菊花中的黄酮类化合物多以
苷形式存在,苷所连配基不同且存在相互转化的情
况。根据药理学研究,黄酮类物质主要在人体小肠
内进行代谢,以苷元的形式被人体所吸收[6]。为了
更直观地反应各种栽培类型药用菊花中黄酮类物质
的质量,本实验利用稀酸水解菊花总黄酮提取液,将
苷水解为苷元母核,通过测定药用菊花中苷元含量
来反应药用菊花黄酮类物质的质量情况。本实验采
用 RPHPLC测定木犀草素、芹菜素和槲皮素含
量[7]。经比较药用菊花中黄酮种类较多,且不同栽
培类型药用菊花间黄酮组分也存在差异。
1 材料
1.1 药材
2006年9月起,从浙江嘉兴桐乡药用菊花种质
圃和南京江宁药用菊花种质圃,同时采集2个种质
圃开放程度为舌状花开放70%、管状花开放50%时
期的药用菊花,杀青、烘干备用。所有供试材料均经
过南京农业大学中药学系郭巧生教授鉴定为菊科菊
属菊Cmorifolium不同栽培类型。
1.2 试剂
甲醇(色谱纯)、95%乙醇(分析纯)、超纯水;亚
硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯;芦丁对照品
(中国药品生物制品检定所,批号100080-200306,
927%),木犀草素、芹菜素、槲皮素(上海友思生物
技术,公司批号及纯度分别为 050225,060122,
041026和982%,999%,989%)。
1.3 仪器
岛津LC-20AT高效液相色谱仪器,SPD-20A
可见紫外检测器,756CRT型紫外可见分光光度计
(上海精密科学仪器有限公司)。
2 方法
2.1 总黄酮含量测定[1]
2.1.1 供试液制备及测定 分别精密称取样品各
1g,置于锥形瓶中,加70%乙醇30mL,在60℃水
温恒温萃取黄酮30min,取出,抽滤,洗涤至100mL
量瓶中,加70%乙醇至刻度,振荡摇匀,备用。
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April,2008
精密吸取供试样品溶液3mL于10mL量瓶中,用
30%乙醇定容至刻度,分别精密吸取2mL于10mL试
管中,加5%亚硝酸钠溶液03mL,振荡摇匀,放置6
min,加10%硝酸铝03mL,振荡摇匀,放置6min,再加
4%氢氧化钠4mL,振荡摇匀,用30%乙醇定容至刻度,
振荡摇匀,放置15min后置比色皿中在510nm处测定
吸光值。以30%乙醇溶液作为空白溶液。
2.1.2 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品
102mg,置 50mL量瓶中,用 70%乙醇并使其溶
解,定容至刻度,振荡摇匀,配制成0204mg·mL-1
的对照溶液,备用。
2.1.3 标准曲线绘制 精密吸取芦丁对照液 0,
10,20,30,40,50mL,分别置10mL量瓶中,加
5%亚硝酸钠溶液03mL,振荡摇匀,放置6min,加
10%硝酸铝03mL,振荡摇匀,放置6min,再加4%
氢氧化钠4mL,振荡摇匀,用30%乙醇定容至刻度,
振荡摇匀,放置15min后采用分光光度法(《中国药
典》2005年版一部附录VB),在510nm处测定吸光
值,以对照品量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,按
芦丁质量与吸光值关系得回归方程 Y=08478X+
00224(R2=09983)。表明芦丁在0~1195mg
与吸光值呈良好线性关系。
2.1.4 精密度试验 取供试品溶液重复测定5次;
结果精密度好,RSD112%。
2.1.5 重复性试验 取一样品粉末按2.1.1项方
法制成供试品溶液5份,依法测定,结果重复性好,
总黄酮质量分数为313%,RSD195%。
2.1.6 稳定性试验 取供试品溶液于室温放置24
h后依法测定,结果稳定,RSD196%(n=5)。
2.1.7 加样回收率试验 称取一定量供试品,分别
加入35,24,27,40,31mg芦丁对照品,按2.1.
1供试品制备项测定,芦丁加样回收率在988% ~
1024%,平均加样回收率997%,RSD186%(n=
5),表明方法稳定可靠。
2.1.8 样品含量测定 样品按2.1.1项制成供试
品溶液,依法测定。
2.2 槲皮素、木犀草素和芹菜素含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱为岛津 VP-ODS(46
mm×250mm,5μm);流动相甲醇水60∶40,用磷酸
调pH≈3;流速 1mL·min-1;紫外检测波长 253
nm;灵敏度00010AUFS;柱温25℃[8,9]。此条件
下槲皮素的保留时间为792min,木犀草素的保留
时间为923min,芹菜素的保留时间为1313min。
2.2.2 供试液制备及测定 取5mL2.1.1项制备
的提取液,加入1mL4mol·L-1的HCl,于80℃恒
温水浴水解1h。用70%乙醇定容至10mL,045
μm微孔滤膜过滤,备用,为高效液相色谱供试
液[1013]。
2.2.3 对照品溶液制备 准确称取58mg槲皮
素、60mg木犀草素、60mg芹菜素用甲醇溶解,并
定容至 50mL,得质量浓度分别为 0116,01,01
mg·mL-1的混合对照溶液,备用。
2.2.4 线性关系考察 吸取0,5,10,15,20μL混合
标准品试液,进样分析,测定峰面积。以进样量(g)为
横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算得回归
方程。分别为,槲皮素 Y=3×1012X+68974(R2=
09991);木犀草素 Y=4×1012X+161843(R2=
09997);芹 菜 素 Y=2×1012X +90498
(R2=09993)。槲皮素在0~232×10-6g;木犀草
素在0~24×10-6g;芹菜素在0~24×10-6g内线
性关系良好。
2.2.5 精密度试验 取混合对照品溶液,进样10
μL,连续进样5次,测定峰面积,并计算 RSD。槲皮
素、木犀草素、芹菜素的 RSD分别是 209%,
135%,150%。表明结果精密度好。
2.2.6 重复性试验 取一样品粉末,按 211和
222项制成供试品溶液,重复5次,计算RSD。经计
算,槲皮素、木犀草素、芹菜素的RSD分别是181%,
178%,173%。表明试验重复性好。
2.2.7 加样回收率试验 取一样品粉末,称取 5
份,分别加入混合标准溶液1mL,按2.1.1和2.2.2
项,制成供试溶液。分别进样,计算得加样回收率,
并同时计算 RSD。槲皮素、木犀草素、芹菜素的加
样回收率分别是 989%,993%,997%。RSD值
分别是169%,191%,177%。表明方法可靠。
2.2.8 供试样品溶液测定 供试品溶液按2.2.1
项色谱条件,测定分析,计算得各样品槲皮素、木犀
草素、芹菜素的含量。
3 结果与分析
3.1 药用菊花黄酮类成分分析
测定结果见表1,2。
由表1分析,2006年桐乡种质圃不同栽培类型
药用菊花总黄酮含量存在显著差异。特种亳菊总黄
酮质量分数最高,为981%;黄药菊总黄酮最低为
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   表1 桐乡产药用菊花黄酮类成分综合分析(珋x±s,n=3)
栽培类型 槲皮素/‰ 木犀草素/‰ 芹菜素/‰ 总黄酮/%
早小洋菊 076±002f 471±006f 413±007j 660±011ef
晚小洋菊 064±001g 396±010i 510±007h 572±006h
大洋菊 095±002de 460±008fg 451±008i 632±009g
异种大白菊 063±002g 269±010k 876±023b 668±018ef
晚贡菊 040±001i 175±007n 157±002n 654±021efg
黄药菊 011±000k 192±001m 281±002l 261±009m
小亳菊 367±010b 090±001o 147±001n 776±012c
大亳菊 247±007c 449±004g 890±019b 528±019i
特种亳菊 417±011a 217±004l 1702±030a 981±009a
射阳小白菊 101±002d 434±006h 316±006k 531±009i
射阳红心菊 027±000j 684±014a 858±014c 321±015l
射阳大白菊 246±003c 655±007b 668±013f 421±016k
射阳长瓣菊 076±002f 449±004g 454±007i 717±026d
射阳大黄菊 032±001j 507±015e 256±005m 643±014fg
金菊1号 062±001g 368±006j 423±008j 803±010b
金菊2号 073±000f 547±017d 543±015g 674±013e
金菊3号 095±001de 607±013c 698±017e 531±022i
金菊4号 093±001e 504±014e 674±011ef 432±012k
香溢 055±002h 465±003f 797±006d 466±011j
  注:置信区间P=95%;表中字母表示P<005差异显著性(表2同)
表2 江宁产药用菊花黄酮类成分综合分析(珋x±s,n=3)
栽培类型 槲皮素/‰ 木犀草素/‰ 芹菜素/‰ 总黄酮/%
早小洋菊 065±002g 343±011d 460±015ef 708±012bc
晚小洋菊 068±003fg 195±001h 162±001j 702±025c
异种大白菊 278±002a 405±006b 981±018b 405±018g
小汤黄 056±001h 289±004f 375±011h 459±016f
滁菊 218±010b 244±010g 445±010f 738±020ab
小亳菊 089±001e 413±007b 477±007e 693±008cd
特种亳菊 063±002g 381±005c 424±006g 759±021a
济菊 152±002d 137±006i 1120±016a 667±024d
射阳小白菊 074±001f 427±010a 753±009d 225±008i
射阳红心菊 208±005c 374±010c 934±008c 347±012h
射阳大黄菊 038±001i 324±006e 332±009i 520±019e
261%。总黄酮含量依次为特种亳菊>金菊1号>
小亳菊>射阳长瓣菊>金菊2号>异种大白菊>早
小洋菊>晚贡菊 >射阳大黄菊 >大洋菊 >晚小洋
菊>金菊3号=射阳小白菊>大亳菊>香溢>金菊
4号>射阳大白菊>射阳红心菊>黄药菊。
不同栽培类型药用菊花槲皮素含量也存在显著
差异。特种亳菊槲皮素最高,为417‰;黄药菊槲
皮素最低,为 011‰。槲皮素含量依次为特种亳
菊>小亳菊>大亳菊>射阳大白菊>射阳小白菊>
金菊3号=大洋菊>金菊3号>射阳长瓣菊=早小
洋菊>金菊2号>晚小洋菊>异种大白菊 >金菊1
号>香溢>晚贡菊>射阳大黄菊>射阳红心菊>黄
药菊。
不同栽培类型药用菊花木犀草素含量也存在显
著差异。射阳红心菊木犀草素质量分数最高,为
684‰;小亳菊木犀草素最低,为 090‰。木犀草
素含量依次为射阳红心菊 >射阳大白菊 >金菊
3号>金菊2号>射阳大黄菊 >金菊4号 >早小洋
菊>香溢>大洋菊>大亳菊>射阳小白菊>晚小洋
菊>金菊1号>异种大白菊>特种亳菊>黄药菊>
晚贡菊>小亳菊。
不同栽培类型药用菊花芹菜素含量同样存在显
著差异。特种亳菊芹菜素质量分数最高,为1702‰;
小亳菊芹菜素质量分数最低,为147‰。芹菜素含量
依次为特种亳菊>大亳菊>异种大白菊>射阳红心
菊>香溢>金菊3号>射阳大白菊>金菊4号>金
菊2号>晚小洋菊>射阳长瓣菊>早小洋菊>射阳
小白菊>黄药菊>射阳大黄菊>晚贡菊>小亳菊。
由表2分析,2006年南京江宁种质圃不同栽培
类型药用菊花总黄酮质量分数存在显著差异。特种
亳菊总黄酮最高,为759%;射阳红心菊总黄酮最
低为225%。总黄酮含量为特种亳菊 >滁菊 >早
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小洋菊>晚小洋菊>小亳菊>射阳小白菊>射阳大
黄菊>小汤黄>异种大白菊>射阳大白菊>射阳红
心菊。
不同栽培类型药用菊花槲皮素含量也存在显著
差异。异种大白菊槲皮素质量分数最高,为
278‰,射阳大黄菊花槲皮素最低,为 038‰。槲
皮素含量依次为异种大白菊>滁菊>射阳红心菊>
济菊>小亳菊>射阳小白菊花>晚小洋菊>早小洋
菊>特种亳菊>小汤黄>射阳大黄菊。
不同栽培类型药用菊花木犀草素含量同样存在
显著差异。射阳小白菊木犀草素质量分数最高,为
427‰;晚小洋菊木犀草素最低,为 195‰。木犀
草素含量为射阳小白菊>小亳菊>异种大白菊>特
种亳菊>射阳红心菊>早小洋菊>射阳大黄菊>小
汤黄>滁菊>晚小洋菊>济菊。
不同栽培类型药用菊花芹菜素含量也存在显著
差异。济菊芹菜素质量分数最高,为112‰;晚小
洋菊芹菜素最低,为162‰。济菊 >异种大白菊 >
射阳红心菊>射阳小白菊>小亳菊>早小洋菊>滁
菊>特种亳菊>小汤黄>射阳大黄菊>晚小洋菊。
4 讨论
通过桐乡、江宁两地药用菊花不同黄酮类成分
的测定,发现不同栽培类型药用菊花黄酮类成分含
量具有差异;相同栽培类型药用菊花黄酮类成分含
量在不同产地和不同生长期也存在差异,因此药用
菊花的黄酮类成分含量与栽培类型、产地有较大关
系。
通过本实验研究可以发现药用菊花中木犀草素
类、芹菜素类、槲皮素物质含量都相对较高,因此这
3类黄酮类成分可作为药用菊花质量评价体系参考
依据之一[14]。槲皮素、木犀草素和芹菜素是具有开
发应用价值的黄酮类物质[35],且在药用菊花中广泛
存在。近年对于药用菊花的药理、药化研究表明,药
用菊花中一些具有抗癌、抗艾滋作用成分均与这类
化合物有关,而药用菊花在保健医疗等领域深度开
发具有极为光明的前景和广大的市场,因此深入研
究黄酮类化合物会对此产生积极的指导作用。
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GUOQiaosheng,WANGTao,CHENGLitao,WENJingjing,WANGTaoying,LIANGYingnuan
(InsitituteofChineseMedicinalMaterials,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)
  [Abstract] Objective:TostudyondynamicaccumulationofvariousflavoneinChrysanthemummorifolium,inordertoappraise
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J=69Hz,H2′),297(1H,dd,J=186,78Hz,H
10),243(1H,dd,J=186,21Hz,H10),116(3H,
t,J=69Hz,H3′)。13CNMR(DMSOd6,125MHz)δ:
1931(C11),1721(C1′),1602(C8),1497(C
6),1458(C2),1437(C4),1403(C5),1386(C
3),1149(C3α),1129(C7α),1080(C7),606(C
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StudiesonchemicalconstituentsfromDavidiainvolucratavar.vilmoriniana
YANGJianbo,JITengfei,WANGAiguo,SUYalun
(InstituteofMateriaMedica,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalColege,Beijing100050,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsofDavidiainvolucratavar.vilmoriniana.Method:Thechemical
constituentswereisolatedbycolumnchromatographyonsilicalgelandsephadexLH-20.Theirstructureswereelucidatedonthebasis
ofspectralanalysisandphysicalconstants.Result:Sevencompoundswereisolatedfromthisplantandthestructuresofthemwerei
dentifiedas3,4,5trihydroxybenzoicacid(1),elagicacid(2),maleicacid(3),quercetin(4),quercetin3OβDgalactoside
(5),2α,3α,19α,23tetrahydroxyurs12en28oicacid28OβDglucopyranosylester(6),ethylbrevifolincarbosylate(7),re
spectively.Conclusion:Compounds17wereisolatedfromthisplantforthefirsttime.
[Keywords] Davidia;Davidiainvolucratavar.vilmoriniana;chemicalconsitituents [责任编辑 王亚君]
(上接第759页)
thequalityofflavone.Method:TheextractwashydrolyzedandtheflavonoidcomponentsweredeterminedbyRPHPLC.Resultand
Conclusion:InthesamplesfromTongxiang,Tezhongbojushowedthehighestflavonoidscontentwiththetotalflavone9.81%,querce
tin4.17‰ andapigenin17.02‰.InthesamplesfromSheyang,Hongxinjushowedthehighestcontentofluteolinwith6.84‰Inthe
samplesfromJiangning,Tezhongbojushowedthehighestcontentoftotalflavonewith7.59%,Yizhongdabaijushowedthehighestcon
tentofquercetinwith2.78‰,Sheyangxiaobaijushowedthehighestcontentofluteolinwith4.27‰,Sheyanghongxinjushowedthe
highestcontentofapigeninwith11.20‰.Therewerediferencesinthecontentofflavonoidsamongthediferentcultivars,andthe
samecultivarsshowedalsodiferentwhenplantedindiferentareas.
[Keywords] Chrysanthemummorifoliumformedicine;cultivars;flavone;luteolin;apigenin;quercetin
[责任编辑 张宁宁]
·977·
第33卷第7期
2008年4月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 7
April,2008