全 文 ：热性中药对大鼠肝脏能量代谢相关因子的影响
黄丽萍!)! 彭淑红!*! 张盨! 胡强! 余日跃! 刘红宁&!! 孙建宁)
,江西中医学院! 江西 南昌 ))$$$&%
*,浙江大学 动物科学学院! 浙江 杭州 )$$*7% ),北京中医药大学 中药学院! 北京 $$$*%
&,江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室! 江西 南昌 ))$$$&#
$摘要%!目的&探讨 # 种热性中药对大鼠肝脏能量代谢相关因子的影响) 方法&# 种热性中药!附子&干姜&高良姜&花椒&
肉桂和吴茱萸水提取物分别 $g$(g&$#g$$&g$$)g$&g* D.ZDe灌胃大鼠 )$ Q$测定肝脏;Bl4Jl43RE酶&珀酸脱氢酶!8IY的活性&肝糖原含量和解偶联蛋白 *!];3表达水平) 结果&# 种热性中药均能升高肝组织;Bl4
J
l
43RE酶活性$其中高良姜&花椒&吴茱萸达到了显著水平!>o$g$*# 种热性中药有升高肝脏中高良姜达到了显著水平!>o$g$*# 种热性中药均能升高大鼠肝脏 8IY活性$除附子组外$其他 种热性中药均达到了极
显著水平!>o$g$*# 种热性中药均能显著或极显著降低大鼠肝糖原的含量*# 种热性中药对大鼠肝脏 ];3表达量
的影响不明显) 结论&热性中药可能通过促进肝糖原的分解&增加 8IY酶活性而产生更多 3RE$通过增加 ;Bl4Jl43RE酶和
*l
43RE酶活性而增加3RE的消耗$从而起到调节肝脏能量代谢的作用)
$关键词%!热性中药*能量代谢*;Bl4Jl43RE酶*;3表达
$稿件编号%!*$$7$7$($$*
$基金 项 目 % ! 国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 ! 7%) 项 目
!*$$#$通信作者%!!刘红宁$RMS#!$%7%((%$U4/BNS# S?.1D1N1D25B4
?..,-./,-1
$作者简介%!黄丽萍$副教授$在读博士生$RMS#!$%7%(77$U4
/BNS#061-?SA2#),-./
!!中药四性是指寒&热&温&凉 & 种不同的药性$其
中寒与凉&温与热仅是程度上的不同$故四性从本质
上而言可分为寒&热两性) 中药寒&热药性可通过物
质流&能量流&信息流影响机体的生理功能或病理状
态) 生物能量是维持机体生命的重要物质基础$能
量代谢是人体物质代谢的最基本形式) 中药的寒&
热药性与机体能量代谢的关系密不可分+, ) 寒热
中药可能通过影响能量代谢的某些环节$实现对寒
热证的调节) 本试验通过对 # 种热性中药对肝脏能
量代谢的影响$试探找出热性中药的作用规律和药
性特征$进一步为药性的科学评价打好基础$从而更
好地指导中药的临床运用)
!材料
U!药物及试剂!附子 >BQN63-.1N@N` B@MCBSNO
ECMABCB@B$干姜 >?NW./B_N1DN\MCNO$高良姜 >?NW./B
3SAN1NBMLPN-N1BCT/$花椒 EMCN-BCANT/_B1@?.65SN$肉
桂<.C@M6北京市鹤元堂医药科技有限公司$批号均为
*$$#$$$)$其中附子产于四川江油$干姜产于广东
德庆$高良姜产于广东徐闻$花椒产于陕西凤县$肉
桂产于广东德庆$吴茱萸产于江西抚州$均经江西中
医学院付小梅副教授鉴定) ;Bl4Jl43RE酶!批号
*$$($%$&*l
43RE酶!批号 *$$($%$&8IY试
剂盒!批号 *$$($%$&考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒
!批号 *$$($%$ & 大鼠肝糖元测试盒 !批号
*$$($#均购自南京建成生物工程研究所*RCNW.S
购自RCB1ODM1M公司!批号 <*$&*反转录试剂盒
购自 HMC/M1@BO公司 !批号 $$$))#77*荧光定量
E<>试剂盒购自 RBJB>B公司!批号 GJ(($)) 所
用引物通过引物设计软件.SND.# 自行设计$序列如
下#内参基因
!
4B-@N1 参照 FM1MGB1Z 基因序列
!;9s$)&& 设 计$ 上 游 引 物 c4RFFFR3RF4
F33R<FR!;9s$7)& 设计$上游引物 c43FFR3F<3F4
F33FR<3F33R4)c$下游引物 c4R3F3FFF333FR4
F3RF3F3R4)c$均由上海生工合成)
U!药物制备!由本实验室制备) 取附子&干姜&
高良姜&花椒&肉桂&吴茱萸药材适量$分别加入 $
倍量水$浸泡 #$ /N1$回流提取 #$ /N1$倒出药液$残
.$%&.
第 ) 卷第 期
*$$ 年 # 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
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VT1M$ *$$
渣再加入 ( 倍水$回流提取 #$ /N1) 合并 * 次药液$
滤过&浓缩后制成附子水提液!含生药量 $g#) D.
`
e
&干姜水提液!含生药量 $g( D.`e&高良姜
水提液!含生药量 $g# D.`e&花椒水提液!含生
药量 $g& D.`e&肉桂水提液!含生药量 $,) D.
`
e
&吴茱萸水提液!含生药量 $g)) D.`e$e*$
h放置备用$给药前稀释至所需浓度)
U&!动物!8I大鼠$清洁级$雄性$体重!*$$ p*$
D$江西中医学院动物中心提供$许可证号 8!赣*$$#4$$$) 饲养室温!*& p* h$相对湿度
$j k#$j$昼夜自然明暗交替照明$给予大鼠标准
饲料和饮用水)
U_!仪器!][4*$$$ 型紫外4可见分光光度计!尤
尼柯上海仪器有限公司* B`\PTDM&$$>台式低温离
心机!德国YMCBMTO*荧光定量E<>仪!G:LU>)
!方法
U!动物分组与给药!大鼠 %$ 只$随机分为 % 组$
即空白对照组&附子组&干姜组&高良姜组&花椒组&
肉桂组&吴茱萸组$每组 $ 只) 各组动物适应性喂
养 ) Q后开始灌胃给药$灌胃剂量为 $ /` .ZDe$
每日 * 次$共给药 )$ Q) 给药剂量#附子 $g D.
ZD
e
$干姜 (g& D.ZDe$高良姜 #g$ D.ZDe$花椒
&g$ D. ZD
e
$肉桂 )g D. ZDe$吴茱萸 &g* D.
ZD
e
$对照组给予等容量的蒸馏水)
U!试验取材!第 ) 天将大鼠麻醉后$取出肝脏
后迅速按照顺序分成若干份$分别用锡箔纸包好$放
入液氮中$然后转移至e($ h冰箱保存备用) 每个
实验指标选用同一部位的肝脏组织进行)
U&!大鼠肝组织 ;Bl4Jl43RE酶&8IY的活性及大鼠肝糖原含量的测定!准确称量
一定量肝组织$按重量体积比加 7 倍生理盐水$制成
$j的匀浆$ $$ C./N1e离心 $ /N1$取上清液
按试剂盒法进行肝组织 ;Bl4Jl43RE酶&酶&8IY活性的测定以及肝糖原含量的测定$组织
蛋白的测定采用考马斯亮蓝法)
U_!8aG>FCMM1 实时定量 E<>检测 ];3
的表达+*,!取肝组织 $ k$$ /D加入 /` RCNW.S$按
照说明书步骤提取总 >;3) 紫外分光光度计测定
>;3浓度及纯度$4
*#$=*($
为 g%( k*g$所提取的
>;3e%$ h储存备用) 按反转录试剂盒说明进行
-I;3合成) ]!
4B-@N1 扩增效率的检测#取
份反转录好的肝脏-I;3样品$分别稀释至 $$$$$
*$$$$$*$ 倍) 测定每一个稀释倍数下的


R
f
!
R$]e
R$
!
4B-@N1
$数据经过最小二乘法线性回归
分析) ];3的检测#取待测样品的 -I;3$
按照荧光定量 E<>试剂盒的说明书进行操作) 反
应总体积 *$

$`-I;3为 k*

D$上游引物终浓度
$g

/.S.`
e
$下游引物终浓度 $g

/.S.`
e
)
反应条件为 7 h /N1$7 h O$#$ h #$ O$共 &$
个循环) 最后做溶解曲线$以确定扩增产物的特异
性) 所有样品均重复检测 ) 次$用 * e示所检测样品相对于作为参照因子样品的目的基因
的表达倍数)


R
f!
R$目的样本$]!
4B-@N1
e
!
R$参照样本]!
4B-@N1
)
U$!统计学方法!采用 8E88 g$ 进行统计分析)
资料经过方差齐性检验$数据用
#
?p&表示) 组间差
异比较用!检验)
&!结果
&U!# 种热性中药对大鼠肝脏 ;Bl4Jl43RE酶&
*l
43RE酶和 8IY活性的影响!与对照组比较$#
种热性中药均能升高肝组织 ;Bl4Jl43RE酶活性$
其中高良姜&花椒&吴茱萸组达到了显著水平!>o
$g$$升高的程度高良姜 r吴茱萸 r花椒 r
干姜r附子r肉桂*# 种热性中药有升高肝脏 3RE酶活性的趋势$其中高良姜组达到了显著水平
!>o$g$$升高的程度高良姜 r吴茱萸 r花椒 r
干姜 r附子r肉桂*# 种热性中药均能升高大鼠肝
脏 8IY活性$除附子组外$其他 种热性中药组均
达到了极显著水平 !>o$g$$升高的程度高良
姜r吴茱萸r花椒r干姜r肉桂r附子!表 )
&U!# 种热性中药对大鼠肝糖原含量的影响!与
对照组比较$# 种热性中药均能降低大鼠肝糖原的
含量$其中肉桂&附子组达显著水平!>o$g$$干
姜组&高良姜组&花椒组&吴茱萸组均达到极显著水
平!>o$g$$降低的程度#吴茱萸 r干姜 r高良
姜r花椒r肉桂r附子!表 *)
&U&!# 种热性中药对大鼠肝脏];3表达的
影响!与对照组比较$# 种热性中药对大鼠肝脏
];3表达量的影响不明显!表 ))
_!讨论
机体的能量代谢包括能量的生成和能量的分解
两部分) ;Bl4Jl43RE酶&解关系密切) 其中 ;Bl4Jl43REBOM参与机体内多
种生理活动$其对 ;Bl$Jl的运转是一个耗能的过
.%&.
第 ) 卷第 期
*$$ 年 # 月
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表 !热性中药对大鼠肝脏;Bl4Jl43RE酶&#
?p&
组别
剂量
=D.ZD
e
)
;B
l
4J
l
43RE酶=
]./D
e
* l
43RE酶=
]./D
e
8IY
=]./D
e
对照! e $ )g#) p$g*& g( pg$% g*( p$g&
附子! $g $ )g(& p$g*& g%7 p$g7 g#* p$g&&
干姜! (g& 7 )g7$ p$g* g7# p$g&&
g7% p$g#
*
高良姜 #g$ 7
&g$% p$g#

#g p$g#)

#g) p$g&
*
花椒! &g$ $
)g7% p$g*

#g$$ p$g
#g$# p$g%
*
肉桂! )g $ )g%& p$g() g%& p$g%7
g($ p$g*
*
吴茱萸 &g* 7
)g7( p$g)&

#g$) p$g#(
#g p$g&*
*
!!注#与对照组比较>o$g$$*>o$g$!表 * 同)
表 *!热性中药对大鼠肝糖元含量的影响!
#
?p&
组别 剂量=D.ZDe ) 肝糖元=/D.De
对照! e $ **g(( pg*
附子! $g 7
#g7$ p#g*

干姜! (g& (
)g( p#g&)
*
高良姜 #g$ (
)g(( pg#7
*
花椒! &g$ $
&g# p(g)
*
肉桂! )g 7
g p&g()

吴茱萸 &g* 7
)g)* p(g#(
*
表 )!热性中药对大鼠肝脏];3
表达的影响!
#
?p&
组别 剂量=D.ZDe ) ];3
对照! e $ g$# p$g*$
附子! $g $ g& p$g#7
干姜! (g& 7 $g7 p$g*&
高良姜 #g$ 7 g$ p$g$7
花椒! &g$ 7 g)) p$g#7
肉桂! )g 7 g*( p$g*7
吴茱萸 &g* 7 g$ p$g*#
程$需要消耗3RE$在静息的人体内$细胞质内 *j
的3RE被 ;Bl4Jl43RE酶水解+), ) 另一种通过消耗 3RE来维持胞质和肌浆网之间
*l平衡的膜蛋白) 据报道$胞质和肌浆网 循环能为肌肉的静息能量消耗贡献 )$j k%$j+&, )
在本试验中$# 种热性中药均能显著升高大鼠肝脏
中;Bl4Jl43RE酶和 中药的干预可使肝脏3RE消耗增加)
8IY位于线粒体内$是三羧酸循环中的酶$也
是呼吸链的氧化还原酶复合体的组成成分之一$它
的活性增高$表明三羧酸循环的加快$同时也标志着
细胞内 3RE生成增强) 本试验中$# 种热性中药均
能升高 8IY活性$表明 # 种热药都能不同程度地促
进体内三羧酸循环$使机体 3RE的产生增加) # 种
热性中药对大鼠肌糖原含量均有明显的降低作用$
提示可能通过促进糖原分解来为机体代谢提供能量
物质的来源)
解偶联蛋白家族!]蛋白$在调节机体产热和能量代谢方面发挥着重要
作用) ]低线粒体内膜两侧的质子梯度$从而降低 3RE生
成$使产热增加+ , ) 目前已发现 种不同的 ]家族成员$动物体内已知的 ]]+#,在肝脏中表达水平比
较高$ ]的质子梯度从而刺激呼吸活动$阻止 3RE合成$促
进能量以热能的形式发散$即降低细胞氧化底物产
生 3RE的效率) 在本试验中$# 种热性中药对肝脏
];3的表达不明显$这提示 # 种热性中药可
能通过其他的途径来改变肝脏的能量代谢$具体机
制有待进一步研究)
综上所述$热性中药通过增加 8IY活性而使
3RE的生成加快$同时通过促进糖原分解来为机体
代谢提供能量物质的来源) 另外$热性中药通过增
加肝脏 ;Bl4Jl43RE酶和 机体3RE的消耗$这与热性中药作用于机体后表现
为功能提高$消耗能量增加是一致的)
$参考文献%
+,!王伽伯$金城$肖小河$等,中药药性研究回顾与思考+V,,中华
中医药杂志$*$$($*)!%#%*,
+*,! N`dBZ JV$ 8-?/N@DM1 RI,31BS5ONO.PCMSB@NdMDM1MM6ACMOON.1
QB@BTON1DCMBS4@N/MbTB1@N@B@NdME<>B1Q @?M*
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3SAN1NBMLPN-N1BCT/$ EMCN-BCANT/_B1@?.65SN$ HCT-@TOUd.QNBMDC.TAO,R?MCBNON1D@M1QM1-5.P*l
43REBOMB-@NdN@5?BO\MM1 .\4
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?BO\MM1 N1-CMBOMQMQ \5ON6R<9+?NSMO@B@NO@N-BSOND1NPN-B1-M?BO\MM1 .\OMCdMQ M6-MA@N1 PNdMDC.TAO.P@?MON6DC.TAOM6-MA@N1 >BQN6
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