全 文 :热性中药对大鼠肝脏能量代谢相关因子的影响
黄丽萍!)! 彭淑红!*! 张盨! 胡强! 余日跃! 刘红宁&!! 孙建宁)
,江西中医学院! 江西 南昌 ))$&% *,浙江大学 动物科学学院! 浙江 杭州 )*7% ),北京中医药大学 中药学院! 北京 $∗&#摘要%!目的&探讨 # 种热性中药对大鼠肝脏能量代谢相关因子的影响) 方法&# 种热性中药!附子&干姜&高良姜&花椒&
肉桂和吴茱萸水提取物分别 g(g&#g&g)g&g* D.ZDe灌胃大鼠 )Q测定肝脏;Bl4Jl43RE酶&珀酸脱氢酶!8IY的活性&肝糖原含量和解偶联蛋白 *!]
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43RE酶活性其中高良姜&花椒&吴茱萸达到了显著水平!>og$*# 种热性中药有升高肝脏中高良姜达到了显著水平!>og*# 种热性中药均能升高大鼠肝脏 8IY活性除附子组外其他 种热性中药均达到了极
显著水平!>og*# 种热性中药均能显著或极显著降低大鼠肝糖原的含量*# 种热性中药对大鼠肝脏 ]
的影响不明显) 结论&热性中药可能通过促进肝糖原的分解&增加 8IY酶活性而产生更多 3RE$通过增加 ;Bl4Jl43RE酶和
*l
43RE酶活性而增加3RE的消耗从而起到调节肝脏能量代谢的作用)关键词%!热性中药*能量代谢*;Bl4Jl43RE酶*;3表达
稿件编号77(∗基金 项 目 % ! 国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 ! 7%) 项 目
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作者简介副教授在读博士生RMS#!U4
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!!中药四性是指寒&热&温&凉 & 种不同的药性其 中寒与凉&温与热仅是程度上的不同故四性从本质
上而言可分为寒&热两性) 中药寒&热药性可通过物
质流&能量流&信息流影响机体的生理功能或病理状
态) 生物能量是维持机体生命的重要物质基础能 量代谢是人体物质代谢的最基本形式) 中药的寒& 热药性与机体能量代谢的关系密不可分+, ) 寒热 中药可能通过影响能量代谢的某些环节实现对寒
热证的调节) 本试验通过对 # 种热性中药对肝脏能
量代谢的影响试探找出热性中药的作用规律和药性特征进一步为药性的科学评价打好基础从而更 好地指导中药的临床运用) !材料 U!药物及试剂!附子 >BQN63-.1N@N` B@MCBSNO ECMABCB@B干姜 >?NW./B_N1DN\MCNO高良姜 >?NW./B 3SAN1NBMLPN-N1BCT/花椒 EMCN-BCANT/_B1@?.65SN$肉
桂<.C@M6
43RE酶!批号 *($%$&8IY试 剂盒!批号 *(%&考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒
!批号 *($%$ & 大鼠肝糖元测试盒 !批号 *(#均购自南京建成生物工程研究所*RCNW.S 购自RCB1ODM1M公司!批号 <*&*反转录试剂盒
购自 HMC/M1@BO公司 !批号 $$$))#77*荧光定量
E<>试剂盒购自 RBJB>B公司!批号 GJ(($)) 所
用引物通过引物设计软件.SND.# 自行设计$序列如
下#内参基因
!
4B-@N1 参照 FM1MGB1Z 基因序列
!;9s$)&& 设 计$ 上 游 引 物 c4RFFFR3RF4
F33R<
F33FR<3F33R4)c下游引物 c4R3F3FFF333FR4 F3RF3F3R4)c均由上海生工合成)
U!药物制备!由本实验室制备) 取附子&干姜&
高良姜&花椒&肉桂&吴茱萸药材适量分别加入
倍量水浸泡 # /N1回流提取 # /N1倒出药液残
.%&. 第 ) 卷第 期 * 年 # 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [.Sg) :OOTM!
VT1M * 渣再加入 ( 倍水回流提取 # /N1) 合并 * 次药液
滤过&浓缩后制成附子水提液!含生药量 g#) D. ` e &干姜水提液!含生药量 g( D.`e&高良姜
水提液!含生药量 g# D.`e&花椒水提液!含生 药量 g& D.`e&肉桂水提液!含生药量 ,) D. ` e &吴茱萸水提液!含生药量 g)) D.`ee*
h放置备用给药前稀释至所需浓度) U&!动物!8I大鼠清洁级雄性体重!*$$ p*$
D$江西中医学院动物中心提供$许可证号 8
j k#j昼夜自然明暗交替照明给予大鼠标准
饲料和饮用水)
U_!仪器!][4*$ 型紫外4可见分光光度计!尤 尼柯上海仪器有限公司* B`\PTDM&>台式低温离
心机!德国YMCBMTO*荧光定量E<>仪!G:LU>)
!方法
U!动物分组与给药!大鼠 % 只随机分为 % 组 即空白对照组&附子组&干姜组&高良姜组&花椒组& 肉桂组&吴茱萸组每组 只) 各组动物适应性喂 养 ) Q后开始灌胃给药灌胃剂量为 /` .ZDe
每日 * 次共给药 ) Q) 给药剂量#附子 g D. ZD e 干姜 (g& D.ZDe高良姜 #g D.ZDe花椒 &g D. ZD
e
肉桂 )g D. ZDe吴茱萸 &g* D.
ZD
e
对照组给予等容量的蒸馏水) U!试验取材!第 ) 天将大鼠麻醉后取出肝脏
后迅速按照顺序分成若干份分别用锡箔纸包好放
入液氮中然后转移至e( h冰箱保存备用) 每个
实验指标选用同一部位的肝脏组织进行)
U&!大鼠肝组织 ;Bl4Jl43RE酶&8IY的活性及大鼠肝糖原含量的测定!准确称量
一定量肝组织按重量体积比加 7 倍生理盐水制成
j的匀浆 $$ C./N1e离心 $ /N1$取上清液
按试剂盒法进行肝组织 ;Bl4Jl43RE酶&酶&8IY活性的测定以及肝糖原含量的测定$组织
蛋白的测定采用考马斯亮蓝法)
U_!8aG>FCMM1 实时定量 E<>检测 ]
的表达+*,!取肝组织 k /D加入 /` RCNW.S按
照说明书步骤提取总 >;3) 紫外分光光度计测定
>;3浓度及纯度4 *#=*( 为 g%( k*g所提取的
>;3e%$ h储存备用) 按反转录试剂盒说明进行
-I;3合成) ]
4B-@N1 扩增效率的检测#取
份反转录好的肝脏-I;3样品分别稀释至
** 倍) 测定每一个稀释倍数下的
R
f
!
R$]
R ! 4B-@N1 数据经过最小二乘法线性回归
分析) ]
`-I;3为 k* D上游引物终浓度
g /.S.` e 下游引物终浓度 g /.S.` e ) 反应条件为 7 h /N17 h O# h # O共 & 个循环) 最后做溶解曲线以确定扩增产物的特异
性) 所有样品均重复检测 ) 次$用 * e
的表达倍数)
R
f!
R目的样本]
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e
!
R$参照样本]
4B-@N1
)
U!统计学方法!采用 8E88 g 进行统计分析)
资料经过方差齐性检验$数据用
#
?p&表示) 组间差
异比较用!检验)
&!结果
&U!# 种热性中药对大鼠肝脏 ;Bl4Jl43RE酶&
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43RE酶和 8IY活性的影响!与对照组比较# 种热性中药均能升高肝组织 ;Bl4Jl43RE酶活性
其中高良姜&花椒&吴茱萸组达到了显著水平!>o
g$升高的程度高良姜 r吴茱萸 r花椒 r
干姜r附子r肉桂*# 种热性中药有升高肝脏 3RE酶活性的趋势其中高良姜组达到了显著水平 !>og升高的程度高良姜 r吴茱萸 r花椒 r 干姜 r附子r肉桂*# 种热性中药均能升高大鼠肝 脏 8IY活性$除附子组外$其他 种热性中药组均 达到了极显著水平 !>o$g升高的程度高良
姜r吴茱萸r花椒r干姜r肉桂r附子!表 )
&U!# 种热性中药对大鼠肝糖原含量的影响!与
对照组比较# 种热性中药均能降低大鼠肝糖原的 含量其中肉桂&附子组达显著水平!>og干 姜组&高良姜组&花椒组&吴茱萸组均达到极显著水 平!>og$$降低的程度#吴茱萸 r干姜 r高良
姜r花椒r肉桂r附子!表 *)
&U&!# 种热性中药对大鼠肝脏]
影响!与对照组比较$# 种热性中药对大鼠肝脏
]
_!讨论
机体的能量代谢包括能量的生成和能量的分解
两部分) ;Bl4Jl43RE酶&解关系密切) 其中 ;Bl4Jl43REBOM参与机体内多
种生理活动其对 ;BlJl的运转是一个耗能的过
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第 ) 卷第 期
* 年 # 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [.Sg)$ :OOTM! VT1M$ *
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表 !热性中药对大鼠肝脏;Bl4Jl43RE酶&#
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组别
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附子! g )g(& pg*& g%7 pg7 g#* pg&& 干姜! (g& 7 )g7 pg* g7# pg&&
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#g) pg#(
#g pg&* * !!注#与对照组比较>og$$*>o$g$!表 * 同)
表 *!热性中药对大鼠肝糖元含量的影响!
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组别 剂量=D.ZDe ) 肝糖元=/D.De
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表 )!热性中药对大鼠肝脏]
表达的影响!
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组别 剂量=D.ZDe ) ]
对照! e g# pg*
附子! g g& pg#7 干姜! (g& 7 g7 pg*& 高良姜 #g 7 g pg7 花椒! &g 7 g)) pg#7 肉桂! )g 7 g*( pg*7
吴茱萸 &g* 7 g pg*#
程需要消耗3RE在静息的人体内$细胞质内 *j
的3RE被 ;Bl4Jl43RE酶水解+), ) 另一种通过消耗 3RE来维持胞质和肌浆网之间
*l平衡的膜蛋白) 据报道$胞质和肌浆网 循环能为肌肉的静息能量消耗贡献 )j k%j+&, )
在本试验中$# 种热性中药均能显著升高大鼠肝脏
中;Bl4Jl43RE酶和 中药的干预可使肝脏3RE消耗增加)
8IY位于线粒体内是三羧酸循环中的酶也
是呼吸链的氧化还原酶复合体的组成成分之一它 的活性增高表明三羧酸循环的加快同时也标志着 细胞内 3RE生成增强) 本试验中# 种热性中药均
能升高 8IY活性表明 # 种热药都能不同程度地促 进体内三羧酸循环使机体 3RE的产生增加) # 种
热性中药对大鼠肌糖原含量均有明显的降低作用$
提示可能通过促进糖原分解来为机体代谢提供能量
物质的来源)
解偶联蛋白家族!]
作用) ]
较高$ ]
进能量以热能的形式发散即降低细胞氧化底物产 生 3RE的效率) 在本试验中# 种热性中药对肝脏
]
制有待进一步研究)
综上所述热性中药通过增加 8IY活性而使 3RE的生成加快同时通过促进糖原分解来为机体
代谢提供能量物质的来源) 另外$热性中药通过增
加肝脏 ;Bl4Jl43RE酶和 机体3RE的消耗这与热性中药作用于机体后表现 为功能提高消耗能量增加是一致的)
参考文献% +,!王伽伯金城肖小河等,中药药性研究回顾与思考+V,,中华
中医药杂志*(*)!%#%*,
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