全 文 ：正交试验优化复方卡力孜然凝胶剂的提取工艺
赵媛! 邢建国+! 王新春!)!! 薛桂蓬+! 党学良
f石河子大学 药学院! 新疆 石河子 ()+$$$% +f新疆维吾尔自治区药物研究所!
新疆 乌鲁木齐 ()$$$&% )f石河子大学 医学院 第一附属医院! 新疆 石河子 ()+$$( #
$摘要%!目的&优选复方卡力孜然凝胶剂的最佳提取工艺( 方法&采用正交试验设计$分别以补骨脂素%异补骨脂素%蛇
床子素和浸膏收率为指标$优化补骨脂等 ( 味药材的提取工艺)以二苯乙烯苷和浸膏收率为指标$优选白芥子与何首乌 + 味药
材的提取工艺( 结果&( 味药最佳提取工艺为 ( 倍量 #$g乙醇$提取 + 次$每次 ?)何首乌和白芥子的最佳提取工艺为 ( 倍量
&$g乙醇$提取 + 次$每次 ?( 结论&优选的提取工艺稳定%可行(
$关键词%!补骨脂素) 异补骨脂素) 蛇床子素) 二苯乙烯苷) 复方卡力孜然凝胶剂
$稿件编号%!+$$*$(+$$&
$基金项目%!自治区科技支疆项目!+$$*#)自治区高技术与
发展计划项目!+$$($$
$通信作者%!!王新春$主任药师$博士$NQV#!$**) +((+%$H5
0BRV#.,1,7.3#)f./0
!!复方卡力孜然凝胶剂是一种由补骨脂%蛇床子%
驱虫斑鸠菊%何首乌等 $味药材制成的外用制剂$该
方具有祛风燥湿%活血化瘀%舒经活络之功效$是维吾
尔民族用于治疗白癜风的经典名方*+ ( 为了确保疗
效$最大程度发挥活性成分作用$作者根据方中药材
所含有效成分的性质$拟定了本方药材的提取方法(
采用正交试验设计法$以多种有效成分为指标$筛选
了复方卡力孜然凝胶剂的最佳提取工艺条件$为复方
卡力孜然凝胶剂的进一步研究奠定了基础(
!材料
8GI5$4\G型高效液相色谱仪!日本岛津制造
所)MG+I型电子天平!=$ 万$SBC@/CRWS)9RVR5
A/CQSR0AVR.R@65(超纯水器!美国密理博公司)Ia5
bZ5型电热恒温水浴锅!北京市光明医疗仪器厂(
补骨脂素!批号 $%)*5+$$#))异补骨脂素!批
号 $%)(5+$$)蛇床子素!批号 $(++5+$$&$#
均够自中国药品生物制品检定所( 甲醇为色谱纯!美
国ERS?QC公司提供$批号 $#&*$磷酸为分析纯!西
安化学试剂厂提供$批号 $$%$+$水为超纯水( 本
实验中所用的药材均由安徽亳州提供(
!方法与结果
]!补骨脂素%异补骨脂素及蛇床子素的含量测定
]]!补骨脂素%异补骨脂素对照品溶液的制备
分别取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量$精密称
定$于 + 0F棕色量瓶中$制成质量浓度为 +)$$+&$
0D-F
d的储备液( 分别吸取上述储备液 +f$$+f
0F至 + 0F棕色量瓶中$加甲醇稀释至刻度$即得
质量浓度 +)f$$*f+$ 0D-Fd补骨脂素和异补骨
脂素的混合对照溶液(
]]!蛇床子素对照品溶液的制备!取蛇床子素
对照品适量$精密称定$于 + 0F棕色量瓶中$加
*g乙醇配制成蛇床子素质量浓度为 %$ 0D-Fd
的储备液$吸取储备液 )f$ 0F至 + 0F量瓶中$加
*g乙醇稀释至刻度$即得质量浓度为 +$f&$ 0D-
F
d的蛇床子素对照溶液(
]]&!色谱条件!8?R0BUYW \G5OI8 色谱柱!&f#
00i+$ 00$
0)流动相甲醇!45$f&g磷酸
!M$梯度洗脱 $ j 0R2$45M!r&*) j+
0R2$45M!r&* j%&r+#)+ j) 0R2$45M!%&r
+#)双波长检测 +& 20!检测补骨脂素%异补骨脂
素$)++ 20!检测蛇床子素)流速 0F-0R2d)柱
温 ) h( 分别测定样品%对照品和阴性样品$色谱
图见图 ( 结果表明$在此色谱条件下样品中其他
成分对补骨脂素%异补骨脂素和蛇床子素的测定无
干扰(
]]Y!补骨脂素%异补骨脂素标准曲线的绘制!分
别精密吸取混合对照溶液 $)$$%$$ 0F$依法稀
释得系列对照品溶液( 精密吸取各对照品溶液 $
F$在上述色谱条件下分别测定分析$以对照品浓
度为横坐标K$峰面积为纵坐标 L$得补骨脂素%异
补骨脂素标准曲线( 结果见表 (
-$)-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
4f对照品!+& 20)Mf样品!+& 20)
图 !复方卡力孜然凝胶剂中对照品%样品及阴性的JGF<图
表 !各指标标准曲线方程!-e
对照品 标准曲线 线性范围=0D-Fd %
补骨脂素!
Le%f$) i$
&
Km&f+* i$
)
+f) j+)f$ $f*** *
异补骨脂!
Le(f%& i$
&
Km)f$% i$
)
f*+ j*f+ $f*** *
蛇床子素!
Le)f* i$
&
Kmf) i$
)
+f$& j+$f&$ $f*** %
二苯乙烯苷
Le&f+) i$
&
Km%f(% i$
)
)f# j)#f$ $f*** #
]]$!蛇床子素标准曲线的绘制!分别精密吸取
对照品溶液 $+f$$%f$$ 0F$依法稀释得系列
对照品溶液( 进样 $
F$在上述色谱条件下分别
测定分析$以对照品浓度为横坐标K$峰面积为纵坐
标L$得蛇床子素标准曲线( 结果见表 (
]!二苯乙烯苷的含量测定
]]!对照品溶液的制备!精密称取二苯乙烯苷
对照品适量$加稀乙醇配制成 ($ 0D-Fd二苯乙
烯苷储备液( 精密吸取储备液 0F$置 + 0F棕色
量瓶中$加稀乙醇稀释至刻度$摇匀$得质量浓度
)#f$ 0D-F
d的二苯乙烯苷对照品溶液(
]]!色谱条件!8?R05AB.[ \G5OI8 色谱柱!&f#
00i+$ 00$
0)流动相乙腈5水!+r%)检测
波长 )+$ 20)柱温 )$ h)流速 f$ 0F-0R2d(
]]&!标准曲线的制备!分别精密吸取对照品溶
液 f$$)f$$f$$%f$$$f$ 0F$依法稀释$得系列对
照品溶液( 进样 $
F$在上述色谱条件分别测定
分析$以对照品浓度为横坐标 K$峰面积为纵坐标
L$得二苯乙烯苷标准曲线( 结果见表 (
]&!浸膏收率的测定
精密量取各个正交试验号的醇提液 0F$置干
燥至恒重的蒸发皿中$水浴挥干$于 $ h干燥至恒
重后于干燥器中冷却 )$ 0R2$迅速精密称重(
]Y!供试品溶液的制备
分别按F
*
!)
&
正交设计表对样品进行提取$提取
液稀释后过 $f&
0滤膜$即得供试品的测定溶液(
]$!提取工艺的优选
]$]!正交试验设计!根据处方 ( 味药材药效成
分的作用*+5)+ $选用补骨脂素%异补骨脂素%蛇床子素
含量和浸膏得率为指标$依据单因素试验结果$采用
F
*
!)
&
正交表进行试验$见表 +(
]$]!正交试验结果与分析!试验结果采用综合
评分法进行分析!权重系数分别为 $fr$f&r$f$
结果见表 )$方差分析见表 &(
-)-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
表 +!( 味药材提取正交设计因素水平
水平
# C >
乙醇浓度=g 乙醇倍数 提取时间=?
$ (
+ #$ $ f
) %$ + +
!!由方差分析结果可知$因素#对综合指标的影响
有显著性$结合其极差分析$选取#
+
水平)C$>对指标
影响均无显著性$水平可任选$结合大生产合理%节能
降耗的要求及其极差分析$C$>因素均选取水平 (
综合分析$确定出 ( 味药材的较优工艺条件是 #
+
C
>
( 即 (倍量 #$g乙醇$提取 +次$每次 ?(
表 )!( 味药材提取工艺的正交试验!-e)
;/f 补骨脂素 =0D-Dd 异补骨脂素=0D-Dd 蛇床子素=0D-Dd 浸膏收率=g 综合评分
&f*$ +f)# +)f( +)f$ *f+
+ f&+ +f%+ ++f( +&f#& *f
) f$( +f +)f% +#f$# *)f*$
& f&$ +f%) +)f& +)f *f+
f# +f(# +)f( +&f&$ *(f#(
# f +f%# +)f* +)f+ *%f#
% &f* +f+# ++f +f (f*$
( &f( +f) +f( +f&+ (#f&
* &f*& +f)* +&f+ ++f) *f*+
!!注#综合评分e补骨脂素和异补骨脂素总含量=补骨脂素和异补骨脂素最大总含量i$ m蛇床子素含量=蛇床子素最大含量 i&$ m浸膏
得率=最大浸膏得率i$(
表 &!方差分析
变异来源 77 4 @7 N
# +#f + #)f+ ++f%%
C +$f** + $f&* )f%(
> (f(( + &f&& f#$
3 f# + +f%(
总变异 #f*) (
!!注#N
$f$
!+$+ e*f$$(
]$]&!验证试验!按上述较优工艺条件制备 )
批样品$进行工艺验证$测定所得提取液中指标
性成分的含量$结果$补骨脂素含量为 f&( 0D
-D
d
$>8If+g)异补骨脂素含量为 +f* 0D
-D
d
$>8I)f#g)蛇床子素含量为 +)f#( 0D
-D
d
$>8I$f(%g)浸出物得率为 +)f+)g$
>8If*g( 可见按优化工艺进行提取$补骨脂
素%异补骨脂素%蛇床子素含量%浸出物得率均
取得较理想的结果( 表明该工艺合理% 稳定
可行(
][!+ 味药材提取工艺的优选
][]!正交试验设计!根据处方 + 味药材的药物
性质及单因素考察结果$白芥子及何首乌 + 味药材
的提取以二苯乙烯苷含量和浸膏物得率为指标$采
用F
*
!)
&
正交表进行试验$见表 (
表 !+ 味药材提取正交设计因素水平
水平
# C >
乙醇浓度=g 乙醇倍数 提取时间=?
)$ (
+ &$ $ f
) $ + +
][]!正交试验结果与分析 实验结果采用综
合评分法分析试验结果$结果见表 #$方差分析
见表 %(
表 #!+ 味药材提取工艺的正交试验
;/f
出膏率
=g
二苯乙烯苷
=0D-D
d
综合评分
++f% %f$ (#f(+
+ +)f$ %f+ ((f#(
) +)f* %f)) *$f$#
& +f)+ %f%* *&f+%
+f*& (f+& **f&#
# ++f# %f** *#f(+
% (f* %f&# (*f)+
( (f#+ %f)+ (%f*(
* *f$) %f( *f$$
!!注#综合评分e二苯乙烯苷含量=二苯乙烯苷最大总含量i*$ m
浸膏得率=最大浸膏得率i$(
-+)-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
表 %!方差分析表
变异来源 77 4 @7 N
# +f+) + #+f#+ )$f&+
C $f% + f$( +f&%
> *f$ + &f+ +f*
3 )f( + f*%
总变异 &(f) (
!!注#N
$f$
!+$+ e*f$$(
由方差分析结果可知$因素#对综合指标的影响
有显著性$结合其极差分析$选取#
+
水平)C$>对指标
影响均无显著性$水平可任选$结合大生产合理%节能
降耗的要求及其极差分析$C$>因素均选取水平 (
综合分析$确定出 + 味药材的较优工艺条件是 #
+
C
>
( 即 (倍量 &$g乙醇$提取 +次$每次 ?(
][]&!验证试验!按上述较优工艺条件制备 ) 批
样品$进行工艺验证$结果二苯乙烯苷质量分数为
%f*& 0D- D
d
$ >8I $f%+g) 浸 出 物 得 率 为
++f$g$>8I+f*g( 可见按优化工艺进行提取$
二苯乙烯苷含量%浸出物得率均取得较理想的结果(
表明该工艺合理%稳定可行(
&!讨论
本方由 $ 味药材组成$药材有效成分的理化性
质各异( 为保证药材提取工艺设计的合理性$首先
测定了 $ 味药材混合提取液 AJ&f)( 提示若方
中某药材中的有效成分在酸性条件下不稳定$则该
药材应单独提取( 本方何首乌中的二苯乙烯苷具有
酸不稳定性*&+ $因此$该药材采用单独提取更具合
理性(
本研究在单因素试验的基础上确定了正交试验
的因素和水平( 其中提取溶剂的单因素考察结果表
明$方中补骨脂及蛇床子等药材中的有效成分补骨
脂素%异补骨脂素及蛇床子素在高浓度乙醇中提取
率较高)何首乌的有效成分二苯乙烯苷在低浓度醇
中提取率较高( 据此$确定了 + 个正交试验设计中
的乙醇浓度的考察水平(
本实验采用双波长梯度洗脱方法$建立了同时
测定 ( 味药材提取液中补骨脂素%异补骨脂素和蛇
床子素 ) 个成分含量的高效液相色谱法$方法具有
简便准确%灵敏度高%重复性好的特点$满足了 ( 味
药材提取工艺研究的要求(
$参考文献%
*+!将小音$沈斌f复方卡力孜然酊联合窄谱中波紫外线治疗白
癜风临床疗效观察*X+f临床皮肤科杂志$+$$($)%!+#+f
*++!GBCSBU I$8BR2R>$\QC0B;f.BV.RA/@CR/VR2 cR@RD/*X+fIQC9B@/V/D6$**($*%!+##%f
*)+!陈艳$张国刚$余仲平f蛇床子素的化学成分及药理作用的研
究进展*X+f沈阳药科大学学报$+$$#$+)!&#+#f
*&+!刘新桥$高文远$陈海霞f何首乌中二苯乙烯苷提取物的制备
工艺及含量测定*X+f中国中药杂志$+$$%$)+!&#&%&f
*+!王传金$刘玉全f白芥子中芥子苷提取工艺的研究*X+f中药
材$+$$$+&!##&+#f
5JA-+-U,A-?@?I>MAD,QA-?@JD?Q>HHI?DQ?+JF@ET,.-U-D,@R>.
S-AB?DAB?R?@,.E>H-R@
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/A@R0RYQ@?QQ7@CB.@R2DAC/.QSS/TQRD?@?QC] 0QUR.R2QS,R@? @?QQ7@CB.@6RQVU$ @?Q./2@Q2@/TAS/CBVQ2$ RS/AS/CBVQ2 B2U /S@?/VQBSR2UQ5
7QS$ B2U @//A@R0RYQ@?QQ7@CB.@R2DAC/.QSS/T9<(B<-)**)(=(<%)*;&-A 7+*&- $;-&E;$&(,&+,R@? @?QQ7@CB.@6RQVU B2U @?Q./2@Q2@/T
+$)$$&15@Q@CQ?6UC/765S@RV]Q2QDVW./SRUQBSR2UQ7QSf7>HF.A# N?Q/A@R0W0Q7@CB.@R/2 AC/DCQSS,BSBST/V/,S#QRD?@?QC] 0QUR.R2QS
,QCQQ7@CB.@+ @R0QST/C?/WC,R@? ( @R0QS/T#$g BV./?/V)9f*)(=(<%)*;B2U 7f$;-&E;$&(,&+,QCQQ7@CB.@+ @R0QST/C ?/WC,R@? (
@R0QS/T&$g BV./?/Vf/?@Q.FH-?@# N?Q/A@R0W0Q7@CB.@R/2 AC/.QSSQSBCQS@B]VQB2U TQBSR]VQf
* >^C S?DEH+!AS/CBVQ2) RS/AS/CBVQ2) /S@?/VQ) +$)$$&15@Q@CQ?6UC/765S@RV]Q2QDVW./SRUQ) ./0AW2U [BVRYRCB2 DQV
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$责任编辑!周驰%
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