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Bioactive constituents from whole herbs of Vernonia cinerea (Ⅱ)

夜香牛全草的生物活性化学成分研究(Ⅱ)



全 文 :夜香牛全草的生物活性化学成分研究(Ⅱ)
朱华旭1,唐于平2,闵知大3,龚祝南1
(1.南京师范大学 生命科学学院,江苏 南京 210024;
2.南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室,江苏 南京 210046;
3.中国药科大学 天然药化教研室,江苏 南京 210038)
[摘要] 目的:研究广西产夜香牛生物活性化学成分。方法:用鼠性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤 PC12细胞活性跟踪筛选,
柱色谱方法分离化合物,谱学方法鉴定化合物结构。结果:分离得到12个化合物,根据谱学数据分析鉴定其结构分别为(-)
clovane2,9diol(1),caryolane1,9βdiol(2),洋芹素(3),金圣草素(4),木犀草素(5),金圣草素7OβD葡萄糖苷(6),木犀草
素7OβD葡萄糖苷(7),槲皮素(8),洋芹素4′OβD葡萄糖苷(9),金丝桃苷(10),βamyrinaceate(11),lupeolacetate(12)。
结论:化合物1,2,6和10均为首次自该属植物中分离得到。
[关键词] 夜香牛;倍半萜类;黄酮类;三萜类;生物活性跟踪
[收稿日期] 20080401
[基金项目] 江苏省教育厅“青蓝工程”项目
[通信作者] 龚祝南,Tel:(025)85891736,Email:zngong@263.
net
  夜香牛为菊科斑鸠菊属 VernoniaSchreb.植物
夜香牛 Vernoniacinerea(L.)Less.[V.abbreviana
(Wal.)DC.]的全草或根,分布于浙江、江西、福
建、台湾、湖北、湖南、广东、广西、海南、四川、贵州、
云南、西藏等地。味苦、辛,性凉;具有疏风清热、除
湿、解毒的功效。主治外感发热、咳嗽、急性黄疸型
肝炎、湿热腹泻、白带、疔疮肿毒、乳腺炎、鼻炎和毒
蛇咬伤。夜香牛的全草主要含黄酮类、酚类、倍半萜
内酯类和氨基酸类化合物;根主要含甾类和三萜类
化合物[12]。
用鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞模型系
统,对广西产夜香牛全草的70%乙醇提取物进行体
外活性筛选,初步结果表明该提取物具有较好的神经
生长因子(NGF)诱导活性。为了进一步寻找其活性
成分,本实验对其乙醇提物进行了系统的化学成分研
究,以期获得用于治疗老年痴呆症的先导化合物[3]。
1 材料
X4双目镜显微熔点测定仪,温度未校正;Agilent
110MSD质谱仪;JEOL型核磁共振仪 400,Bruker
DRX500型核磁共振仪,TMS为内标,WatersQTof
Micro质谱。实验所用硅胶和高效薄层色谱板为
Merck公司生产。SephadexLH20为 Amersham
PharmaciaBiotech公司生产。ODS柱色谱材料为
Merck公司生产。
夜香牛采自广西壮族自治区,经广西壮族自治
区药检所赖茂祥研究员鉴定为菊科斑鸠菊属植物夜
香牛V.cinerea的全草,标本存于中国药科大学天然
药化教研室。
2 提取分离
干燥的夜香牛全草粗粉14kg,70%乙醇回流提
取,提取液减压浓缩至无醇味后,加水稀释,分别用
石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取,减压回收溶
剂,得石油醚萃取物21g,醋酸乙酯萃取物165g,正
丁醇萃取物94g。分别取70%乙醇提取物及其萃
取物进行神经细胞活性筛选,结果表明70%乙醇提
取物、醋酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物均有较强的
NGF诱导活性。
醋酸乙酯部分浸膏 150g以硅胶(0063~
0200mm,250g)拌样,上硅胶柱(0060~0200
mm)色谱分离,以石油醚醋酸乙酯甲醇(100∶0∶
0~100∶64∶40)梯度洗脱,每500mL为一流分,共等
到85部分;石油醚醋酸乙酯甲醇(100∶64∶5)部分
经硅胶柱(0040~0063mm)和 ODS柱色谱分离,
分得化合物1(18mg),化合物2(15mg);石油醚醋
酸乙酯甲醇(100∶64∶10)经硅胶柱(0040~0063
mm)和 SephadexLH20柱色谱分离,分得化合物3
(15mg),4(15mg),5(25mg),9(20mg);石油醚
醋酸乙酯甲醇(100∶64∶05)经硅胶柱(0040~
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0063mm)柱色谱分离,分得化合物12(20mg)。
正丁醇部分浸膏 94g以硅胶(0063~0200
mm,250g)拌样,上硅胶柱(0063~0200mm)反
复色谱分离,以二氯甲烷甲醇(100∶0~100∶25)梯
度洗脱,每1000mL为一流分,共15部分;二氯甲
烷甲醇(100∶5)经硅胶柱(0040~0063mm)柱色
谱分离,分得化合物 11(15mg);二氯甲烷甲醇
(100∶15)经硅胶柱(0040~0063mm)和Sephadex
  
LH20柱色谱分离,分得化合物 8(15mg),7(35
mg),10(25mg)。
3 结构鉴定
化合物 1 无色针晶(CH2Cl2),mp152~153
℃,[α]25D -30°(c=02,CHCl3)。
1HNMR(CDCl3,
400MHz)和13CNMR(CDCl3,100MHz)数据见表1。
其波谱数据与文献[4]的(-)clovane2,9diol数
据吻合。
表1 化合物1,2的NMR数据
No.
1 2
δC δH δC δH
1 442   707  
2 809 379(1H,dd,J=58,104Hz) 382 222(1H,dd,J=54,100Hz)
3 476 171,151(each1H,m) 341 150,151(each1H,m)
4 372   351  
5 505 142(1H,m) 440 189(1H,m)
6 206 145,134(each1H,m) 205 154,139(each1H,m)
7 332 141,110(each1H,m) 355 141,116(each1H,m)
8 347   393  
9 751 332(1H,brs) 723 344(1H,brs)
10 260 199,166(each1H,m) 282 204,177(each1H,m)
11 264 170,109(each1H,m) 335 166,163(each1H,m)
12 356 157,092(each1H,m) 425 147,143(each1H,m)
13 254 086(3H,s) 208 100(3H,s)
14 314 104(3H,s) 305 102(3H,s)
15 283 096(3H,s) 266 092(3H,s)
  化合物 2 黄色油状物,mp137~139℃,
[α]25D +20°(c=02,CHCl3)。
1HNMR(CDCl3,400
MHz)和13CNMR(CDCl3,100MHz)数据见表1。以
上波谱数据与文献[5]的caryolane1,9βdiol数据吻
合。结构式见图1。
图1 化合物1,2结构式
  化合物3 黄色针晶(CH3OH),mp>300℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
100MHz)波谱数据与文献[6]的洋芹素数据吻合。
化合物4 黄色粉末(CH3OH),mp298~300
℃(颜色变深)。NMR(DMSOd6)数据与文献[6]的
金圣草素数据吻合。
化合物5 黄色针晶(CH3OH),mp>300℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
100MHz)数据与文献[6]的木犀草素数据吻合。
化合物6 黄色粉末(CH3OH),mp190~192
℃。IRcm-1:3298,1657。1HNMR(DMSOd6,400
MHz)δ:1293(1H,brs,5OH),946(1H,s,OH),
683(1H,s,H3),680(1H,d,J=20Hz,H8),
644(1H,d,J=20Hz,H6),756(1H,dd,J=20,
88Hz,H6′),744(1H,d,J=20Hz,H2′),709
(1H,d,J=88Hz,H5′),386(3H,s,3′OCH3),
508(1H,d,J=76Hz,GlcH1″)。13CNMR
(DMSOd6,100MHz)δ:1628(C2),1037(C3),
1817(C4),1609(C5),995(C6),1639(C7),
947(C8),1568(C9),1053(C10),1228(C
1′),1120(C2′),1511(C3′),1466(C4′),
1130(C5′),1188(C6′),998(C1″),730(C
2″),771(C3″),695(C4″),763(C5″),606(C
6″),558(OCH3)。以上波谱数据与文献[7]的金
圣草素7OβD葡萄糖苷数据吻合。
化合物7 黄色粉末(CH3OH),mp184~186℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
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100MHz)波谱数据与文献[6]的木犀草素7OβD
葡萄糖苷数据吻合。
化合物8 土黄色粉末(CH3OH),mp256~257
℃。1HNMR(DMSOd6,400 MHz)和
13 CNMR
(DMSOd6,100MHz)波谱数据与文献[6]的槲皮素
数据吻合。
化合物9 黄色粉末(CH3OH),mp175~177℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
100MHz)波谱数据与文献[6]的洋芹素4′OβD
葡萄糖苷数据吻合。
化合物10 黄色粉末(CH3OH),mp191~193
℃。IRcm-1:3272,1655。1HNMR(DMSOd6,400
MHz)δ:1262(1H,brs,5OH),1085(1H,s,OH),
972(1H,s,OH),915(1H,s,OH),639(1H,d,
J=20Hz,H8),619(1H,d,J=20Hz,H6),
766(1H,dd,J=24,84Hz,H6′),751(1H,d,
J=24Hz,H2′),680(1H,d,J=84Hz,H5′),
536(1H,d,J=80Hz,半乳糖端基H1″)。13CNMR
(DMSOd6,100MHz)δ:1560(C2),1333(C3),
1772(C4),1560(C5),985(C6),1639(C7),
934(C8),1610(C9),1038(C10),1209(C1′),
1150(C2′),1446(C3′),1482(C4′),1158(C
5′),1218(C6′),1016(C1″),711(C2″),731(C
3″),678(C4″),758(C5″),600(C6″)。以上波谱
数据与文献[6]的金丝桃苷数据吻合。
化合物 11 白色针晶(CHCl3),mp195~197
℃。1HNMR(CDCl3,400MHz)和
13CNMR(CDCl3,
100MHz)波谱数据与文献[8]的β香叶脂醇乙酸酯
数据吻合。
化合物 12 白色针晶(CHCl3),mp220~222
℃。1HNMR(CDCl3,400MHz)和
13CNMR(CDCl3,
100MHz)波谱数据与文献[8]的羽扇豆醇乙酸酯数
据吻合。
[致谢] 课题组叶翠芬博士帮助测试活性。
[参考文献]
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BioactiveconstituentsfromwholeherbsofVernoniacinerea(Ⅱ)
ZHUHuaxu1,TANGYuping2,MINZhida3,GONGZhunan1
(1.SchoolofLifeSciences,NanjingNormalUniversity,Nanjing210024,China;
2.JiangsuKeyLaboratoryforTraditionalChineseMedicineFormulaeResearch,NanjingUniversityofChineseMedicine,
Nanjing,210046,China;
3.DepartmentofNaturalMedicinalChemistry,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038,China)
  [Abstract] Objective:TostudytheconstituentsofthewholeherbsofVernoniacinereabybioactivityguidedisolationwithPC
12model.Method:Theconstituentswereseparatedbycolumnchromatographyandthestructureswereelucidatedbyspectroscopicmeth
ods.Result:Tencompoundswereidentifiedtobe(-)clovane2,9diol(1),caryolane1,9βdiol(2),apigenin(3),chrysoeriol
(4),luteolin(5),thermopsoside(6),luteolin7OβDglucoside(7),quercetin(8),apigenin4′OβDglucoside(9),hyperin
(10),βamyrinaceate(11),lupeolacetate(12).Conclusion:Compounds1,2,6and10wereisolatedfromthisgenusforthefirsttime.
[Keywords] Vernoniacinerea;clovane;caryolane;flavonoids;triperpenoids;inducenervegrowthfactoractivity
[责任编辑 王亚君]
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