全 文 :夜香牛全草的生物活性化学成分研究(Ⅱ)
朱华旭1,唐于平2,闵知大3,龚祝南1
(1.南京师范大学 生命科学学院,江苏 南京 210024;
2.南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室,江苏 南京 210046;
3.中国药科大学 天然药化教研室,江苏 南京 210038)
[摘要] 目的:研究广西产夜香牛生物活性化学成分。方法:用鼠性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤 PC12细胞活性跟踪筛选,
柱色谱方法分离化合物,谱学方法鉴定化合物结构。结果:分离得到12个化合物,根据谱学数据分析鉴定其结构分别为(-)
clovane2,9diol(1),caryolane1,9βdiol(2),洋芹素(3),金圣草素(4),木犀草素(5),金圣草素7OβD葡萄糖苷(6),木犀草
素7OβD葡萄糖苷(7),槲皮素(8),洋芹素4′OβD葡萄糖苷(9),金丝桃苷(10),βamyrinaceate(11),lupeolacetate(12)。
结论:化合物1,2,6和10均为首次自该属植物中分离得到。
[关键词] 夜香牛;倍半萜类;黄酮类;三萜类;生物活性跟踪
[收稿日期] 20080401
[基金项目] 江苏省教育厅“青蓝工程”项目
[通信作者] 龚祝南,Tel:(025)85891736,Email:zngong@263.
net
夜香牛为菊科斑鸠菊属 VernoniaSchreb.植物
夜香牛 Vernoniacinerea(L.)Less.[V.abbreviana
(Wal.)DC.]的全草或根,分布于浙江、江西、福
建、台湾、湖北、湖南、广东、广西、海南、四川、贵州、
云南、西藏等地。味苦、辛,性凉;具有疏风清热、除
湿、解毒的功效。主治外感发热、咳嗽、急性黄疸型
肝炎、湿热腹泻、白带、疔疮肿毒、乳腺炎、鼻炎和毒
蛇咬伤。夜香牛的全草主要含黄酮类、酚类、倍半萜
内酯类和氨基酸类化合物;根主要含甾类和三萜类
化合物[12]。
用鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞模型系
统,对广西产夜香牛全草的70%乙醇提取物进行体
外活性筛选,初步结果表明该提取物具有较好的神经
生长因子(NGF)诱导活性。为了进一步寻找其活性
成分,本实验对其乙醇提物进行了系统的化学成分研
究,以期获得用于治疗老年痴呆症的先导化合物[3]。
1 材料
X4双目镜显微熔点测定仪,温度未校正;Agilent
110MSD质谱仪;JEOL型核磁共振仪 400,Bruker
DRX500型核磁共振仪,TMS为内标,WatersQTof
Micro质谱。实验所用硅胶和高效薄层色谱板为
Merck公司生产。SephadexLH20为 Amersham
PharmaciaBiotech公司生产。ODS柱色谱材料为
Merck公司生产。
夜香牛采自广西壮族自治区,经广西壮族自治
区药检所赖茂祥研究员鉴定为菊科斑鸠菊属植物夜
香牛V.cinerea的全草,标本存于中国药科大学天然
药化教研室。
2 提取分离
干燥的夜香牛全草粗粉14kg,70%乙醇回流提
取,提取液减压浓缩至无醇味后,加水稀释,分别用
石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取,减压回收溶
剂,得石油醚萃取物21g,醋酸乙酯萃取物165g,正
丁醇萃取物94g。分别取70%乙醇提取物及其萃
取物进行神经细胞活性筛选,结果表明70%乙醇提
取物、醋酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物均有较强的
NGF诱导活性。
醋酸乙酯部分浸膏 150g以硅胶(0063~
0200mm,250g)拌样,上硅胶柱(0060~0200
mm)色谱分离,以石油醚醋酸乙酯甲醇(100∶0∶
0~100∶64∶40)梯度洗脱,每500mL为一流分,共等
到85部分;石油醚醋酸乙酯甲醇(100∶64∶5)部分
经硅胶柱(0040~0063mm)和 ODS柱色谱分离,
分得化合物1(18mg),化合物2(15mg);石油醚醋
酸乙酯甲醇(100∶64∶10)经硅胶柱(0040~0063
mm)和 SephadexLH20柱色谱分离,分得化合物3
(15mg),4(15mg),5(25mg),9(20mg);石油醚
醋酸乙酯甲醇(100∶64∶05)经硅胶柱(0040~
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0063mm)柱色谱分离,分得化合物12(20mg)。
正丁醇部分浸膏 94g以硅胶(0063~0200
mm,250g)拌样,上硅胶柱(0063~0200mm)反
复色谱分离,以二氯甲烷甲醇(100∶0~100∶25)梯
度洗脱,每1000mL为一流分,共15部分;二氯甲
烷甲醇(100∶5)经硅胶柱(0040~0063mm)柱色
谱分离,分得化合物 11(15mg);二氯甲烷甲醇
(100∶15)经硅胶柱(0040~0063mm)和Sephadex
LH20柱色谱分离,分得化合物 8(15mg),7(35
mg),10(25mg)。
3 结构鉴定
化合物 1 无色针晶(CH2Cl2),mp152~153
℃,[α]25D -30°(c=02,CHCl3)。
1HNMR(CDCl3,
400MHz)和13CNMR(CDCl3,100MHz)数据见表1。
其波谱数据与文献[4]的(-)clovane2,9diol数
据吻合。
表1 化合物1,2的NMR数据
No.
1 2
δC δH δC δH
1 442 707
2 809 379(1H,dd,J=58,104Hz) 382 222(1H,dd,J=54,100Hz)
3 476 171,151(each1H,m) 341 150,151(each1H,m)
4 372 351
5 505 142(1H,m) 440 189(1H,m)
6 206 145,134(each1H,m) 205 154,139(each1H,m)
7 332 141,110(each1H,m) 355 141,116(each1H,m)
8 347 393
9 751 332(1H,brs) 723 344(1H,brs)
10 260 199,166(each1H,m) 282 204,177(each1H,m)
11 264 170,109(each1H,m) 335 166,163(each1H,m)
12 356 157,092(each1H,m) 425 147,143(each1H,m)
13 254 086(3H,s) 208 100(3H,s)
14 314 104(3H,s) 305 102(3H,s)
15 283 096(3H,s) 266 092(3H,s)
化合物 2 黄色油状物,mp137~139℃,
[α]25D +20°(c=02,CHCl3)。
1HNMR(CDCl3,400
MHz)和13CNMR(CDCl3,100MHz)数据见表1。以
上波谱数据与文献[5]的caryolane1,9βdiol数据吻
合。结构式见图1。
图1 化合物1,2结构式
化合物3 黄色针晶(CH3OH),mp>300℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
100MHz)波谱数据与文献[6]的洋芹素数据吻合。
化合物4 黄色粉末(CH3OH),mp298~300
℃(颜色变深)。NMR(DMSOd6)数据与文献[6]的
金圣草素数据吻合。
化合物5 黄色针晶(CH3OH),mp>300℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
100MHz)数据与文献[6]的木犀草素数据吻合。
化合物6 黄色粉末(CH3OH),mp190~192
℃。IRcm-1:3298,1657。1HNMR(DMSOd6,400
MHz)δ:1293(1H,brs,5OH),946(1H,s,OH),
683(1H,s,H3),680(1H,d,J=20Hz,H8),
644(1H,d,J=20Hz,H6),756(1H,dd,J=20,
88Hz,H6′),744(1H,d,J=20Hz,H2′),709
(1H,d,J=88Hz,H5′),386(3H,s,3′OCH3),
508(1H,d,J=76Hz,GlcH1″)。13CNMR
(DMSOd6,100MHz)δ:1628(C2),1037(C3),
1817(C4),1609(C5),995(C6),1639(C7),
947(C8),1568(C9),1053(C10),1228(C
1′),1120(C2′),1511(C3′),1466(C4′),
1130(C5′),1188(C6′),998(C1″),730(C
2″),771(C3″),695(C4″),763(C5″),606(C
6″),558(OCH3)。以上波谱数据与文献[7]的金
圣草素7OβD葡萄糖苷数据吻合。
化合物7 黄色粉末(CH3OH),mp184~186℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
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100MHz)波谱数据与文献[6]的木犀草素7OβD
葡萄糖苷数据吻合。
化合物8 土黄色粉末(CH3OH),mp256~257
℃。1HNMR(DMSOd6,400 MHz)和
13 CNMR
(DMSOd6,100MHz)波谱数据与文献[6]的槲皮素
数据吻合。
化合物9 黄色粉末(CH3OH),mp175~177℃。
1HNMR(DMSOd6,400MHz)和
13CNMR(DMSOd6,
100MHz)波谱数据与文献[6]的洋芹素4′OβD
葡萄糖苷数据吻合。
化合物10 黄色粉末(CH3OH),mp191~193
℃。IRcm-1:3272,1655。1HNMR(DMSOd6,400
MHz)δ:1262(1H,brs,5OH),1085(1H,s,OH),
972(1H,s,OH),915(1H,s,OH),639(1H,d,
J=20Hz,H8),619(1H,d,J=20Hz,H6),
766(1H,dd,J=24,84Hz,H6′),751(1H,d,
J=24Hz,H2′),680(1H,d,J=84Hz,H5′),
536(1H,d,J=80Hz,半乳糖端基H1″)。13CNMR
(DMSOd6,100MHz)δ:1560(C2),1333(C3),
1772(C4),1560(C5),985(C6),1639(C7),
934(C8),1610(C9),1038(C10),1209(C1′),
1150(C2′),1446(C3′),1482(C4′),1158(C
5′),1218(C6′),1016(C1″),711(C2″),731(C
3″),678(C4″),758(C5″),600(C6″)。以上波谱
数据与文献[6]的金丝桃苷数据吻合。
化合物 11 白色针晶(CHCl3),mp195~197
℃。1HNMR(CDCl3,400MHz)和
13CNMR(CDCl3,
100MHz)波谱数据与文献[8]的β香叶脂醇乙酸酯
数据吻合。
化合物 12 白色针晶(CHCl3),mp220~222
℃。1HNMR(CDCl3,400MHz)和
13CNMR(CDCl3,
100MHz)波谱数据与文献[8]的羽扇豆醇乙酸酯数
据吻合。
[致谢] 课题组叶翠芬博士帮助测试活性。
[参考文献]
[1] 中国药科大学,中国医药科技出版社.中药辞海.第2册[M].
北京:中国医药科技出版社,1993:2159.
[2] 袁瑾,钟华,姚宗仁,等.野生植物夜香牛营养成分的研究与应
用[J].浙江化工,2006,9(6):1.
[3] QinPan,FannyCFIp,NancyYIp,etal.Activityofmacrocy
clicjatrophanediterpenesfromEuphorbiakansuiinaTrkAfibro
blastsurvivalassay[J].JNatProd,2004,67:1548.
[4] HeymannH,TezukaY,KikuchiT.etal.ConstituentsofSindora
sumatranaMIQ.Ⅰ:IsolationandNMRspectralanalysisofses
quiterpenesfromthedriedpods[J].ChemPharmBul,1994,42
(1):138.
[5] WingyanTsui,GeofreyDBrown.SesquiterpenesfromBaeckea
frutescens[J].JNatProd,1996,59:1084.
[6] AgawalPK.Carbon13NMRofflavoids[M].Elsevier,1989:
132,134,139,320,133,154,385.
[7] NShKataev,GKNikonov.ThestructureofthermopsosideA
newflavonoidfromThermopsisalterniflora[J].ChemNatCompd,
1973(9):108.
[8] ViqarVddinAhmad.Handbookofnaturalproductsdata[M].2nd
ed.Elsevier,1994:826,563,566.
BioactiveconstituentsfromwholeherbsofVernoniacinerea(Ⅱ)
ZHUHuaxu1,TANGYuping2,MINZhida3,GONGZhunan1
(1.SchoolofLifeSciences,NanjingNormalUniversity,Nanjing210024,China;
2.JiangsuKeyLaboratoryforTraditionalChineseMedicineFormulaeResearch,NanjingUniversityofChineseMedicine,
Nanjing,210046,China;
3.DepartmentofNaturalMedicinalChemistry,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038,China)
[Abstract] Objective:TostudytheconstituentsofthewholeherbsofVernoniacinereabybioactivityguidedisolationwithPC
12model.Method:Theconstituentswereseparatedbycolumnchromatographyandthestructureswereelucidatedbyspectroscopicmeth
ods.Result:Tencompoundswereidentifiedtobe(-)clovane2,9diol(1),caryolane1,9βdiol(2),apigenin(3),chrysoeriol
(4),luteolin(5),thermopsoside(6),luteolin7OβDglucoside(7),quercetin(8),apigenin4′OβDglucoside(9),hyperin
(10),βamyrinaceate(11),lupeolacetate(12).Conclusion:Compounds1,2,6and10wereisolatedfromthisgenusforthefirsttime.
[Keywords] Vernoniacinerea;clovane;caryolane;flavonoids;triperpenoids;inducenervegrowthfactoractivity
[责任编辑 王亚君]
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