全 文 ：丹皮炭 ＨＰＬＣ指纹图谱研究
李鹏，赵学龙，张丽，丁安伟
（南京中医药大学 江苏省方剂研究重点实验室，江苏 南京 ２１００４６）
［摘要］ 目的：建立丹皮炭的ＨＰＬＣ指纹图谱分析方法，为整体控制和评价丹皮炭的质量提供依据。方法：采用 Ｈｅｄｅｒａ
ＯＤＳ３柱（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），流动相甲醇乙腈（１∶１）０５‰三氟乙酸水，梯度洗脱，检测波长２５８ｎｍ。以丹皮酚为参照
物，对１０批丹皮炭进行指纹图谱的分析。结果：建立了丹皮炭饮片的ＨＰＬＣ指纹图谱共有模式，标定了１１个共有峰，１０批炭
品的相似度在０８３０～０９９１。结论：该指纹图谱方法简便、准确、重现性好，可专属性地研究丹皮炭的指纹图谱，为有效地控
制该饮片的内在质量提供了科学依据。
［关键词］ 丹皮炭；丹皮酚；指纹图谱；高效液相色谱法
［收稿日期］ ２００９０５１８
［基金项目］ 国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０９Ｂ００６０２）
［通信作者］ 丁安伟，教授，博士生导师，主要从事中药炮制与复
方研究。Ｔｅｌ：（０２５）８５８１１５２３，Ｅｍａｉｌ：ａｗｄｉｎｇ１０５＠１６３．ｃｏｍ
［作者简介］ 李鹏，硕士研究生，主要从事中药炮制与复方研究。
Ｔｅｌ：１３７７０５３３６７２，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｏｔｕ１９８５１１＠１２６．ｃｏｍ
牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹 Ｐａｅｏｎｉａｓｕｆ
ｆｒｕｔｉｃｏｓａＡｎｄｒ．的根皮。性微寒，味苦、辛。归心、
肝、肾经。具有清热凉血、活血化瘀之功效［１］，炒炭
后具有活血止血的作用，如元代名方《十灰散》中应
用丹皮炭止血而不留瘀。牡丹皮中主要含有丹皮酚
等酚类化合物、芍药苷等单萜类化合物及鞣质等成
分。目前已有较多文献报道牡丹皮生品的指纹图谱
分析方法［２５］，但尚缺少对丹皮炭指纹图谱的研究，
因此本实验对牡丹皮炭进行了指纹图谱的研究，以
期为全面控制丹皮炭饮片的质量提供参考依据。
１ 材料
Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪（配 Ｗａｔｅｒｓ２９９６
二极管阵列检测器、Ｗａｔｅｒｓ７１７ｐｌｕｓ自动进样器，
ＷａｔｅｒｓＥｍｐｏｗｅｒＰｒｏ色谱工作站，美国 Ｗａｔｅｒｓ公
司）；ＦＡ１１０４Ｎ电子天平（１／万，上海精密科学仪器
有限公司）。甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公
司）；乙腈（色谱纯，美国Ｍｅｒｃｋ公司）丹皮酚对照品
（中国药品生物制品检定所，批号 ０７０８９７０４）。其
余试剂为分析纯。
１０批牡丹皮原药材分别购自道地产地安徽丫
山、凤凰山，山东菏泽，经中试加工炒制出１０批丹皮
炭饮片，打粉，过４号筛。所购药材经本院中药鉴定
教研室吴启南教授鉴定毛茛科植物牡丹皮 Ｐ．ｓｕｆ
ｆｒｕｔｉｃｏｓａ，结果见表１。
表１ 牡丹皮药材收集情况
产地 编号 产地 采集时间 指纹图谱编号
安徽 Ｙｓ１ 安徽南陵丫山 ２００８１０２８ Ｓ１
安徽 Ｙｓ２ 安徽南陵丫山 ２００８１０２８ Ｓ２
安徽 Ｙｓ３ 安徽南陵丫山 ２００８１０２８ Ｓ３
安徽 Ｙｓ４ 安徽南陵丫山 ２００８０９２３ Ｓ４
安徽 Ｔｌ１ 安徽铜陵凤凰山 ２００８１１０３ Ｓ５
安徽 Ｔｌ２ 安徽铜陵凤凰山 ２００８１１０３ Ｓ６
安徽 Ｔｌ３ 安徽铜陵凤凰山 ２００８１１０３ Ｓ７
山东 Ｈｚ１ 山东菏泽牡丹区 ２００８１１１２ Ｓ８
山东 Ｈｚ２ 山东菏泽牡丹区 ２００８１１１２ Ｓ９
山东 Ｈｚ３ 山东菏泽牡丹区 ２００８１１１２ Ｓ１０
注：Ｙｓ１，２，３分别为丫山丹皮一条、二条、三条；ＴＬ１，２，３分别为
凤凰山丹皮一条、二条、三条；ＨＺ１，２，３为菏泽丹皮一条、二条、三条。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件
ＨｅｄｅｒａＯＤＳ３柱（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流
动相甲醇乙腈（１∶１）０５‰三氟乙酸溶液，梯度洗
脱见表２；柱温３０℃；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波
长２５８ｎｍ；记录时间７５ｍｉｎ；进样量１０μＬ。
表２ 丹皮炭指纹图谱梯度条件 ％
ｔ／ｍｉｎ ０５‰三氟乙酸水 甲醇乙腈（１∶１）
０ ９４０ ６０
８ ８５０ １５０
１０ ７８０ ２２０
２０ ７８０ ２２０
２２ ７３０ ２７０
６５ ００ １０００
７５ ９４０ ６０
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２．２ 供试品溶液的制备
精密称取供试品粉末１０ｇ（过４号筛），置１００
ｍＬ具塞锥形瓶中，精密加入７０％甲醇５０ｍＬ，称重，
超声处理 ３０ｍｉｎ（５００Ｗ，５０Ｈｚ），取出，放冷，用
７０％甲醇补足减失质量，滤过，滤液摇匀，取滤液适
量，以０４５μｍ微孔滤膜滤过，即得。
２．３ 参照物溶液的制备
精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解制成
５０ｍｇ·Ｌ－１的溶液，作为参照物溶液。以０４５μｍ
微孔滤膜滤过，即得。
２．４ 方法学考察
２．４．１ 精密度试验 取Ｙｓ１号供试品溶液，按２１
项下色谱条件，连续进样６次，记录色谱图，计算其
各共有峰相对保留时间、相对峰面积的ＲＳＤ均小于
３％，表明精密度良好，符合对指纹图谱的要求。
２．４．２ 稳定性试验 取Ｙｓ１号供试品溶液，按２１
项下色谱条件，每隔３ｈ进样１次，共６次，记录色
谱图，计算其各共有峰相对保留时间、相对峰面积的
ＲＳＤ均小于３％，表明这段时间内供试品溶液的成
分稳定，符合对指纹图谱的要求。
２．４．３ 重复性试验 精密称取６份 Ｙｓ１号供试品
粉末（过４号筛），每份１０ｇ，按照上述供试品溶液
的制备方法平行得到６份供试品溶液。按２１项下
色谱条件进样，记录色谱图，计算其各共有峰相对保
留时间、相对峰面积的ＲＳＤ均小于３％，表明实验重
复性良好，符合对指纹图谱的要求。
２．５ 样品测定
取１０批丹皮炭供试品，按２２项下方法制备供
试品溶液，在２１项下的色谱条件下依次进样检测，
记录色谱图。对照品溶液ＨＰＬＣ图，见图１，１０批牡
丹皮炭品的ＨＰＬＣ色谱叠加图，见图２。
２．６ 指纹图谱的建立
图１ 丹皮酚对照品ＨＰＬＣ图
Ｓ１Ｓ１０．１０批丹皮炭饮片；Ｒ．丹皮酚。
图２ １０批样品高效液相指纹图谱
２．６．１ 参比峰的选择 将丹皮酚对照品色谱图与
样品图谱中相应位置的色谱峰进行比较，其相对保
留时间和紫外光谱与对照品一致，故样品图谱中 Ｒ
号特征峰为丹皮酚。在各批次样品图谱中丹皮酚的
色谱峰分离良好，峰位居中，峰面积较大且为所有样
品共有，所以确定丹皮酚为参照峰。
２．６．２ 指纹图谱的建立及相似度评价 将所得的
１０批丹皮炭的ＨＰＬＣ图谱以ＡＩＡ格式依次导入《中
药色谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ版》（研究
版）软件，以Ｙｓ１号药材谱图作为参照谱进行指纹
匹配，确定了１１个共有峰，建立了丹皮炭饮片指
纹图谱的共有模式，见图 ３，并进行了相似度计
算，１０批样品的相似度分别为 ０９７０，０９９１，
０９９０，０９８４， ０９６０， ０９８２， ０９３７， ０９８６，
０９８６，０８０３。并且以丹皮酚为参照物（Ｒ号峰），
其保留时间和峰面积为 ｌ，计算其它各共有峰的相
对保留时间和相对峰面积，得出１１个共有峰的相
对保留时间的平均值分别为 ０１４３，０１６９，
０２０６，０２３９， ０３４５， ０６６０， ０７８８， ０９０２，
１０００，１１２６，１２８４；１１个共有峰的相对峰面积
的 ＲＳＤ分别为 ２５４４６％，３５７３０％，４０５６４％，
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３０８７６％， ２１３６４％， ２６７２３％， ４０１６２％， ４３９１３％，０，３７００４％，３３５４４％。
１１１．特征峰；Ｒ．丹皮酚。
图３ 丹皮炭饮片对照指纹图谱
３ 讨论
３．１ 提取溶剂和方法的选择
本实验对提取溶剂的考察结果表明，在所比较
的六种提取溶剂：甲醇、７０％乙醇、三氯甲烷、乙酸乙
酯、７０％甲醇、无水乙醇中，以７０％甲醇的提取液出
峰个数较多，且基线较平整，故提取溶剂选择７０％
甲醇。对索氏提取、超声提取及回流提取等３种不
同提取方法的考察结果表明，３种提取方法提取率
相当，考察到超声操作较简便，故提取方法选择超
声。对不同的提取时间：１５，３０，４５，６０ｍｉｎ的考察结
果表明３０ｍｉｎ后各时间点的提取效率基本一致，故
选择超声时间为３０ｍｉｎ。所以确定用７０％甲醇超
声３０ｍｉｎ为提取方法。
３．２ 色谱条件的选择
本实验对甲醇水、甲醇三氟乙酸水、乙腈水、乙
腈三氟乙酸水、甲醇乙腈（１∶１）三氟乙酸水５个系
统的流动相考察结果发现甲醇乙腈（１∶１）三氟乙酸
水作为流动相系统，各峰的保留时间适中，分离度较
好，且基线稳定，有利于指纹图谱的分析，因此采用甲
醇乙腈（１∶１）三氟乙酸水作为流动相系统。
３．３ 扫描波长选择
本实验使用 Ｗａｔｅｒｓ的 ＰＡＤ检测器进行紫外区
全波长扫描，波长设置为 ２１０～４００ｎｍ，在 ２５８ｎｍ
波长下，色谱图基线噪音较低，色谱峰信息较完全，
综合比较后，选择２５８ｎｍ为本实验的检测波长。
３．４ 本实验建立了丹皮炭饮片的指纹图谱
对各批样品的提取条件，色谱条件进行了考察
后用ＨＰＬＣ进行检测，并采用《中药色谱指纹图谱相
似度评价系统２００４Ａ版》对不同批次的丹皮炭饮片
的ＨＰＬＣ指纹图谱进行相似度评价，结果表明其指
纹图谱相互间较为吻合，由于药材的来源及炒炭时
温度的控制和受热是否均匀等方面的影响，各个批
次间的丹皮炭饮片所含的有效成分含量有一定的差
别，但各成分间的相对比例却相似，整体轮廓均符合
共有特征，对相似度影响不大。同时从饮片的整体
色谱图入手，选取了１１个较明显且分离度较好的共
有峰构成了丹皮炭饮片的指纹图谱，以共有模式作
为研究丹皮炭饮片的炮制工艺及原理的参考依据，
能提供更全面的质量控制信息。实验证明该方法操
作性强，重现性好，可为丹皮炭饮片的内在质量控制
提供科学的依据。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：１１９．
［２］ 姜潇，张君仁．牡丹皮 ＨＰＬＣ指纹图谱的研究［Ｊ］．齐鲁药事，
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［３］ 周立艳，梁生旺，王淑美，等．牡丹皮高效液相色谱“药效指纹
图谱”研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００８，１９（６）：１３３７．
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［Ｊ］．中国中药杂志，２００７，３２（１１）：１０５４．
［５］ 赵良，贺浪冲，杜升旗．丹皮药材指纹图谱定性和有效成分定
量分析方法研究［Ｊ］．西安交通大学学报，２００４，２５（６）：６１７．
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ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆＣｏｒｔｅｘＭｏｕｔａｎＣａｒｂｏｎｉｓａｔｕｍ
ＬＩＰｅｎｇ，ＺＨＡＯＸｕｅｌｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＬｉ，ＤＩＮＧＡｎｗｅｉ
（ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＭｏｄｅｒｎＲｅｓｅａｒｃｈｏｆ
ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅｏｆＪｉａｎｇｓｕ，ｎａｎｊｉｎｇ２１００４６Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＣｏｒｔｅｘＭｏｕｔａｎＣａｒｂｏｎｉｓａｔｕｍａｎｄａｃｃｏｒｄ
ｉｎｇｌｙｏｆｅｒｔｈｅｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｃａｒｂｏｎｉｚｅｄｃｏｒｔｅｘｍｏｕｔａｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｅｎｂａｔｃｈｅｓｏｆＣｏｒｔｅｘＭｏｕｔａｎ
ＣａｒｂｏｎｉｓａｔｕｍｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＨＰＬＣｗｉｔｈＰａｅｏｎｏｌａｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｕｂｓｔａｎｃｅａｎｄｔｈｅＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＨｅｄｅｒａＯＤＳ
３ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃＣｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），ｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌｔｏＡｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（１∶１）ａｎｄ０５‰ ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄｓｏｌｕｔｉｏｎ
ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｍｏｄｅａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２５８ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｃｏｍｍｏｎｍｏｄｅｏｆｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ
ｗｅｒｅｓｅｔｕｐ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１１ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｉｎｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｅｎｓａｍｐｌｅｓ，ａｎｄｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｄｅｇｒｅｅｓｔｏｔｈｅｔｅｎｂａｔｃｈｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ
０８３００９９１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｈａｄａｇｏｏｄｒｅａｐｔａｂｉｌｉｔｙ．ＡｎｄｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＣｏｒｔｅｘＭｏｕｔａｎＣａｒｂｏｎｉｓａ
ｔｕｍｃａｎｂｅｃｏｎｔｒｏｌｅｄｅｆｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＣｏｒｔｅｘＭｏｕｔａｎＣａｒｂｏｎｉｓａｔｕｍ；ｐａｅｏｎｏｌ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ；ＨＰＬＣ
［责任编辑 周 驰］
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