全 文 ：芙蓉菊化学成分对体外培养大鼠胰岛分泌
胰岛素作用的研究
邹磊１，２，３，吴琦１，杨秀伟１，傅德贤２
（１．天然药物及仿生药物国家重点实验室 北京大学 药学院 天然药物学系，北京 １００１９１；
２．中国科学院 过程工程研究所 生化工程国家重点实验室，北京 １０００８０；
３．中国医药研究开发中心有限公司，北京 １０２２０６）
［摘要］　目的：研究芙蓉菊化学成分在体外对培养的大鼠胰岛分泌胰岛素的作用。方法：体外培养大鼠胰岛，通过受试
化合物作用前后胰岛分泌胰岛素水平的比较，考察芙蓉菊化学成分艾菊素、万寿菊黄素３，６，７三甲醚、５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇、东
莨菪素和东莨菪苷对胰岛分泌胰岛素的作用，并与阳性对照药格列苯脲进行比较。结果：万寿菊黄素３，６，７三甲醚对胰岛分
泌胰岛素的促进作用约为空白对照组分泌水平的２倍。５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇对胰岛分泌胰岛素亦有促进作用，约为空白对照
组分泌水平的１５倍。但是，东莨菪素对胰岛分泌胰岛素有抑制作用，约比空白对照低１９倍。结论：对体外培养的大鼠胰岛
分泌胰岛素功能，艾菊素、万寿菊黄素３，６，７三甲醚和５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇有促进作用；东莨菪素有抑制作用。
［关键词］　芙蓉菊；万寿菊黄素３，６，７三甲醚；５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇；大鼠胰岛；胰岛素
［收稿日期］　２００８１２１０
［基金 项 目］　 国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 （９７３）项 目
（２００１ＣＢ５１００８）
［通信作者］　杨秀伟，Ｔｅｌ：（０１０）８２８０５１０６，Ｅｍａｉｌ：ｘｗｙａｎｇ＠ｂｊｍｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ
　　糖尿病已成为全球关注的健康问题，全球糖尿
病患者总量已超过２亿人。据世界卫生组织有关资
料，２０世纪８０年代中期，糖尿病患者总量在３０００
万人左右，至９０年代中期的１０年间，增长４倍，达
到１２亿人，２０００年达到１７１亿人，预计到２０３０年
全球糖尿病患者总量将达到３４亿人，年平均增长
率１０％左右［１］。因此，糖尿病防治药物的研究与开
发已成为国际热点问题之一。
芙蓉菊 Ｃｒｏｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｍａｋｉｎｏ是
菊科芙蓉菊属植物，又名玉芙蓉、蕲艾、千年艾和香
菊［２］，全草具有祛风除湿、散结消肿、镇惊、解毒的
功效［３］，广东民间有用水煎服治疗糖尿病的传统。
为探索其物质基础和寻找糖尿病防治新药先导化合
物，前报［４］曾报道芙蓉菊全草寡糖对体外培养的大
鼠胰岛分泌胰岛素有促进作用。嗣后，笔者对芙蓉
菊全草中小分子有机化合物进行了系统研究［５８］，以
期筛选促进胰岛素分泌活性物质。本研究报道离体
大鼠胰岛培养模型的建立和用于芙蓉菊化学成分对
大鼠胰岛分泌胰岛素影响的初步研究结果。
１　材料
１．１　动物　健康雄性３周龄ＳＤ系大鼠，由北京大学
医学部实验动物科学部提供，合格证号 ＳＣＸＫ（京）
２００２０００３。
１．２　药物　香豆素类化合物东莨菪素（ｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ，
１）及其葡萄糖苷东莨菪苷（ｓｃｏｐｏｌｉｎ，２）、倍半萜类
化合物艾菊素（ｔａｎａｃｅｔｉｎ，３）、黄酮类化合物万寿菊
黄素３，６，７三甲醚（ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，７ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅ
ｔｈｅｒ，４）和肌醇类化合物 ５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇（５Ｏ
ｍｅｔｈｙｌｍｙｏｉｎｏｓｉｔｏｌ，５）由前报制备［５８］，高效液相色
谱归一化法测定其纯度均大于９８％。
用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）将上述化合物１～５分
别配制成 ０１ｍｏｌ·Ｌ－１的储备液，－２０℃避光保
存。使用时用培养基稀释成 １０－４ｍｏｌ·Ｌ－１浓度。
此时，ＤＭＳＯ终浓度小于 ０５％，对胰岛功能无影
响［９］。阳性对照药物格列苯脲（ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ，Ｇ）
和盐酸二甲双胍（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ，Ｍ）按同样方法配制。
１．３　试剂　胎牛血清（ＦＢＳ）　（ＨｙＣｌｏｎｅＣｏ．，
ＵＳＡ）；ＲＰＭＩ１６４０培养基和胶原酶Ⅳ型（Ｇｉｂｃｏ
ＢＲＬＣｏ．，ＵＳＡ）；ＤＮａｓｅⅠ （ＲｏｃｈｅＣｏ．，Ｓｗｉｔｚｅｒ
ｌａｎｄ）；透明质酸酶、盐酸二甲双胍和格列苯脲（Ｓｉｇ
ｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，ＵＳＡ）；羟乙基哌嗪乙磺酸
（ＨＥＰＥＳ）（北京赛尔曼生物公司）；青霉素和硫酸链
霉素（华北制药股份有限公司）；双硫腙（ｄｉｔｈｉｚｏｎｅ）
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（北京化学试剂公司）；胰岛素放免检测试剂盒（中
国原子能科学研究院）。
１．４　试验溶液配制　磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）：ＮａＣｌ
８００ｇ，ＫＣｌ０２０ｇ，Ｎａ２ＨＰＯ４·Ｈ２Ｏ１５６ｇ，ＫＨ２ＰＯ４
０２ｇ，加超纯水至１０００ｍＬ。ＤＨａｎｋｓ缓冲液：ＮａＣｌ
８００ｇ，ＫＣｌ０４０ｇ，Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ０１３４ｇ，
ＫＨ２ＰＯ４００６ｇ，ＮａＨＣＯ３０３５ｇ，酚红００２ｇ，加超
纯水至１０００ｍＬ。Ｈａｎｋｓ缓冲液：ＮａＣｌ８００ｇ，ＫＣｌ
０４０ｇ，ＣａＣｌ２ ０１４ｇ，ＭｇＳＯ４· ７Ｈ２Ｏ ０２０ｇ，
Ｎａ２ＨＰＯ４·Ｈ２Ｏ００６ｇ，ＫＨ２ＰＯ４００６ｇ，ＮａＨＣＯ３
０３５ｇ，葡萄糖１ｇ，酚红００２ｇ，加超纯水至１０００
ｍＬ。胶原酶Ⅳ型：０１％，采用中性 ＰＢＳ配制，４℃
保存。透明质酸酶：０１％，采用中性ＰＢＳ配制，４℃
保存。ＤＮａｓｅⅠ：０１％，采用中性ＰＢＳ配制，４℃保
存。ＲＰＭＩ１６４０培养基在配制时补加ＮａＨＣＯ３２ｇ·
Ｌ－１，ＨＥＰＥＳ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，青霉素 １００Ｕ·ｍＬ－１，
硫酸链霉素１００ｍｇ·Ｌ－１；使用时再加１０％ 胎牛血
清。消化酶均用中性磷酸缓冲液（ＰＢＳ）配制成
０１％。玻璃器皿均经过硅烷化处理。
１．５　仪器　ＳＮ６９５Ｂ型γ计数器（上海原子核研究
所日环仪器厂）；９６孔板（ＣｏｒｎｉｎｇＩｎｃ．，ＵＳＡ）；ＪＪＴ
１３００型超净工作台（北京昌平长城空气净化公司）；
ＭＣＯ１５ＡＣ型ＣＯ２恒温培养箱（ＳａｎｙｏＥｌｅｃｔｒｉｃｓＣｏ．，
Ｇｕｎｍａ，Ｊａｐａｎ）；ＰＨＳ３型 ｐＨ计（北京创业仪器
厂）；ＨＺＳＨ型恒温水浴振荡器（哈尔滨市东联电子
技术开发有限公司）；ＺＤＸ３５Ｂ型座式自控电热压
力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；ＸＤＳ１倒置
显微镜（重庆光电仪器总公司）；ＴＤＬ５Ａ型低速台
式大容量离心机（上海安亭科学仪器厂）。
２　方法
２．１　胰岛细胞的原代培养　按已建立方法［４］稍加
改良，取３周龄 ＳＤ系大鼠，引颈处死后解剖大鼠
并钝性分离胰腺，用ＤＨａｎｋｓ平衡盐溶液清洗胰腺
３次，剪刀剪碎胰腺至１ｍｍ以下；用 Ｈａｎｋｓ平衡
盐溶液再清洗胰腺碎片３次，加入０１％胶原酶Ⅳ
型、０１％透明质酸酶和０１％ ＤＮａｓｅⅠ （其用量
分别为组织碎片体积的４，２，１倍），试管封盖后
于４℃冷消化２ｈ，然后３７℃热消化５ｍｉｎ；消化
终了后立即加入冷的 Ｈａｎｋｓ液，略吹打后过 ４００
μｍ细胞筛。收集滤液在６００ｒ·ｍｉｎ－１离心１ｍｉｎ，
去上清，再次用Ｈａｎｋｓ液洗涤并略吹打，如此反复
离心、洗涤、吹打３次。分离得到的细胞团以 ＲＰ
ＭＩ１６４０为培养基，于３７℃，５％ＣＯ２培养箱中培
养；培养１６～２４ｈ，待成纤维细胞贴壁、胰岛贴壁
不明显时，收集胰岛离心洗涤，获得较纯净的胰
岛，接种至９６孔板进行培养；转板４８ｈ后，显微
镜下观察，胰岛基本已单离贴壁时，可用于筛选试
验。每孔胰岛团数目约为１０～２０个。
２．２　胰岛的定性鉴别　配制１０ｇ·Ｌ－１的双硫腙储
备液，用２０倍体积分数培养基稀释后与胰岛培养液
按９∶１混合，轻微振荡温育１０ｍｉｎ，显微镜下观察染
色情况。
２．３　胰岛素浓度的测定　采用放射免疫法［１０］测定
胰岛素浓度。测定质量浓度为５～１６０ｍＵ·Ｌ－１的
胰岛素标准品的结合型抗原抗体复合物的沉淀读
数，绘制放射免疫检测胰岛素浓度的标准曲线。待
测样按同样的操作反应后，于标准曲线上得到相应
的胰岛素浓度。
２．４　胰岛素分泌水平的表达　由于每个胰岛所含细
胞数量不一样，试验时每孔所接种的胰岛数目也不相
等，试验中用胰岛素分泌的平均水平来反映胰岛的分
泌功能。以试验开始时一定葡萄糖浓度下某孔检测
到的２ｈ内胰岛素分泌量的绝对值为基准，以后该孔
的胰岛素分泌水平皆表示为在该试验条件下检测到
的２ｈ内胰岛素分泌量的绝对值与基准值的比值。
因此，本研究的胰岛素分泌水平无计量单位。
２．５　统计学分析　所有数据以 珋ｘ±ｓ表示，采用双
样本异方差进行组间 ｔ检验，以 Ｐ＜００５作为具有
统计学意义的标准。
３　结果
３．１　培养胰岛形态学观察　取消化体系悬液１滴，
在倒置显微镜下观察，可见胰岛细胞团被包裹在许多
透明的黏性物质中，随着热消化进行，透明的黏性物
质越来越稀薄；当多数胰岛团已分离时，中止消化反
应。如果继续消化，体系中的黏性物质并未减少，胰
岛细胞团却变得越来越分散，培养后观察不到单离胰
岛的清晰界膜。新鲜分离的胰岛大多形态不十分规
则，基本接近球形或椭球形，胰岛表面一般粘连有一
些其他细胞（图１）。在接种９６孔培养板２４ｈ后，这
些附着于胰岛表面的其他细胞皆基本从胰岛表面脱
离下来，显露出形态完整，界膜清晰的胰岛。混合于
胰岛分离体系中的成纤维细胞贴壁和增殖的速度非
常块，而胰岛细胞团的贴壁速度有限，在新鲜分离培
养２４ｈ后，成纤维细胞皆已贴壁，并且在短时间内大
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量增殖，消耗大量培养基和空间，影响了胰岛的贴壁
培养。新鲜分离培养２４ｈ内转板，可以有效剔除成
纤维细胞。本试验中，采取新鲜分离培养２４ｈ内轻
轻振荡，收集上清、离心、悬浮、重新转板，成功地剔除
了成纤维细胞。培养４８ｈ后，胰岛界膜清晰（图２）。
单离的胰岛团完全贴壁，随着培养时间的延长，胰岛
由形态规则的球形逐渐平铺，形成一个生长群落（图
３），直到２０ｄ后大部分群落仍然能够保持贴壁。
图１　不同视野（Ａ，Ｂ）新鲜分离的胰岛（×１２５）
图２　界膜清晰的胰岛（Ａ×２００，Ｂ×１２５）
图３　不同视野（Ａ，Ｂ）胰岛生长群落（×１２５）
３．２　胰岛的定性鉴别　双硫腙能特异性与胰岛 β
细胞含有的Ｚｎ＋结合，使胰岛呈现猩红色，而胰腺外
分泌细胞和导管以及一些其他的细胞则由于不含有
Ｚｎ＋而不被染色。本试验中，当将双硫腙溶液与胰
岛培养液混合，轻微振荡温育１０ｍｉｎ，显微镜下观察
可见猩红色染色，证明了胰岛的存在。
３．３　体外培养条件下胰岛分泌胰岛素功能　在一
般生理状态下，在体胰岛所处的环境为低糖环境
（约５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）。已有研究［１１］表明，ＲＰＭＩ１６４０
培养基的葡萄糖浓度为１１１ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，胰岛细
胞的活力最好，发生凋亡的细胞最少，功能最佳，是
体外胰岛细胞培养的最适葡萄糖浓度。本试验中采
用１１１ｍｍｏｌ·Ｌ－１葡萄糖浓度的 ＰＲＭＩ１６４０培养
基作为胰岛细胞的培养基；培养４８ｈ，单离的胰岛团
完全贴壁。对胰岛分泌功能进行检测：吸去原培养
基、稍洗涤，加入新鲜的培养基培养２ｈ（预试验结
果证明２ｈ为最佳时间），取培养基上清测定胰岛素
的绝对分泌量；然后吸去剩余培养基，继续加入新鲜
的培养基培养２ｈ，取培养基上清测定胰岛素的绝对
分泌量。结果表明：在每次检测中，每个孔的胰岛素
绝对分泌量不一致，与每个孔中的胰岛数目有关，但
对每个孔而言，前后２次的绝对分泌量基本不变。
即在前后的２ｈ培养过程中，胰岛能够保持较稳定
的胰岛素分泌，经过４８ｈ培养的胰岛能够用于考察
受试化合物对胰岛分泌胰岛素功能的影响。
３．４　受试化合物对胰岛分泌胰岛素的影响　胰岛
细胞接种到９６孔板后，于３７℃，５％ＣＯ２培养箱中
培养４８ｈ，观察到胰岛皆已单离贴壁，即可以用于进
行受试化合物对胰岛分泌胰岛素功能影响的试验。
用培养基轻微洗涤每个培养孔以除去贴附不好的胰
岛及残留的胰岛素。首先加入不含受试化合物的培
养基，于３７℃恒温稍微振荡培养２ｈ，培养结束后取
上清测定胰岛素含量。然后加入含受试化合物１×
１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１的培养基，于３７℃恒温稍微振荡培
养２ｈ，培养结束后取上清测定胰岛素含量。试验中
用格列苯脲和二甲双胍２种临床应用药物及前后均
未加入受试化合物的培养基作对照。２次所用培养
基皆事先于３７℃温育。受试５个化合物对胰岛分
泌胰岛素的影响如图４。
结果显示，未加受试化合物的空白对照组培养
２ｈ的胰岛素分泌水平为１０３１±０１９２，在前后的２
ｈ培养过程中，胰岛能够保持较稳定的胰岛素分
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１．东莨菪素；２．东莨菪苷；３．艾菊素；４．万寿菊黄素３，６，７
三甲醚；５．５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇；Ｇ．格列苯脲；Ｍ．二甲双胍；
与空白组比较Ｐ＜００５，Ｐ＜００１；与阳性药二甲双胍
组比较＃Ｐ＜００５。
图４　５个受试化合物对胰岛分泌胰岛素的影响
泌水平。东莨菪素和东莨菪苷对胰岛分泌胰岛素有
抑制作用。在３次平行试验中，加入后胰岛素的分
泌水平皆比加入前胰岛素分泌水平减少。加入后胰
岛 素 的 分 泌 水 平 分 别 为 ０５４９±０１１９和
０９３７±００６９，小于空白对照组的分泌水平。但仅
有东莨菪素的作用有统计学意义（Ｐ＜００５）。艾菊
素加入后的胰岛素分泌水平１３１８±０２３４比加入
前的胰岛素分泌水平高，但没有统计学意义。万寿
菊黄素３，６，７三甲醚对胰岛分泌胰岛素有促进作
用，加入后胰岛素的分泌水平２０７６±０２１４比加入
前胰岛素分泌水平升高，约为空白对照组分泌水平
的２倍，有统计学差异（Ｐ＜００１）；约为阳性对照药
二甲双胍 １４７１±００５３的 １４倍，有统计学差异
（Ｐ＜００５）。５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇对胰岛分泌胰岛素
亦有促进作用，加入后胰岛素的分泌水平１５１８±
００３６比加入前胰岛素分泌水平升高，高于空白对
照组的分泌水平约 １５倍，有统计学差异（Ｐ＜
００５）。
４　讨论
胰岛的原代分离和体外培养已有探索性研究，
分离胰岛和胰岛细胞的主要方法有胶原酶法［１２］、胶
原酶／透明质酸酶结合法［１３］、胰蛋白酶／ＥＤＴＡ／中性
蛋白酶消化法［１４］和胰蛋白酶／胶原酶结合消化
法［１５］等。所得胰岛和胰岛细胞呈贴壁性，在体外生
存时间可达几天到几个月，且在一定培养时间内对
葡萄糖刺激具有良好的反应。本研究建立了胶原
酶／透明质酸酶／ＤＮａｓｅⅠ相结合的消化酶体系，消
化方法采用冷消化和热消化相结合的消化模式。试
验中引入 ＤＮａｓｅⅠ去除消化过程中因部分细胞破
损而泄露于消化体系中的核酸类物质，减少了体系
的黏性。由于胰岛是分散排布在胰腺内分泌部的，
试验中在１０ｍｉｎ，３７℃热消化过程之前先进行了２
ｈ，４℃的冷消化处理，冷消化过程中酶分子扩散进
入组织块内部，热消化时组织块内外同步消化，有利
于得到结构完整的胰岛细胞团。本研究选取了２种
临床上常用的治疗糖尿病的药物格列苯脲和二甲双
胍作为阳性对照药。临床上认为格列苯脲主要的降
糖机制在于促进胰岛的胰岛素分泌，二甲双胍能够
增加胰岛对葡萄糖的敏感性而间接地促进胰岛素的
分泌，其对胰岛素分泌的促进作用弱于格列苯脲。
本试验中，格列苯脲和二甲双胍对胰岛素的分泌有
促进作用，其分泌水平为２５７６±０３６７和１４７１±
００５３，与空白对照组相比有统计学意义，分别为
Ｐ＜００１和Ｐ＜００５。格列苯脲的促胰岛素分泌水
平大于二甲双胍，这与临床数据基本一致［１７］，也验
证了本研究所建立的模型是成功的。在受试的５个
化合物中，万寿菊黄素３，６，７三甲醚促进大鼠胰岛
分泌胰岛素作用介于格列苯脲和二甲双胍之间，是
５个化合物中作用最强的。５Ｏ甲基ｍｙｏ肌醇的作
用强度接近二甲双胍的作用。文献［１６］报道从红豆
杉分离得到的西曲依醇（ｓｅｑｕｏｙｌｔｏｌ），即 ５Ｏ甲基
ｍｙｏ肌醇，能显著降低糖尿病模型高血糖、抑制肝糖
原分解和葡萄糖的吸收，保护胰岛β细胞；不降低正
常小鼠血糖，且毒性极低；可用于糖尿病及其并发症
的防治，还可用于与糖代谢紊乱有关的疾病（如高
血脂、脂肪肝和肥胖症等）的防治，以及用于改善自
由基代谢等。其作用机制与二甲双胍增加胰岛对葡
萄糖的敏感性而间接促进胰岛的胰岛素分泌作用机
制类似。本次结果提示芙蓉菊对糖尿病的防治作用
可能与其含有的万寿菊黄素３，６，７三甲醚和５Ｏ
甲基ｍｙｏ肌醇有关，为揭示芙蓉菊治疗糖尿病的药
效物质奠定了基础，值得进一步深入研究。
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ＥｆｅｃｔｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＣｒｏｓｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅｏｎ
ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎｒａｔｉｓｌｅｔｓｉｎｖｉｔｒｏ
ＺＯＵＬｅｉ１，２，３，ＷＵＱｉ１，ＹＡＮＧＸｉｕｗｅｉ１，ＦＵＤｅｘｉａｎ２
（１．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌ＆ＢｉｏｍｉｍｅｔｉｃＤｒｕｇｓ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，
ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｒｏｃｅｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８０，Ｃｈｉｎａ；
３．ＮａｔｉｏｎａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲ＆ＤＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆｔｈｅｗｈｏｌｅｈｅｒｂｓｏｆＣｒｏｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅｏｎ
ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎｒａｔｉｓｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｓｌｅｔｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒａｔｐａｎｃｒｅａｔａ，ｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ，ａｎｄｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｃｏｌｏｒｓｉｇｎａｌｓｏｆｄｉ
ｔｈｉｚｏｎｅｓｔａｉｎｅｄｄｉｇｅｓｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｉｓｌｅｔｓ．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｉｓｌｅｔｓｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｂｙｉｎｖｅｒｔｅｄ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｔｅｓｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ（１），ｓｃｏｐｏｌｉｎ（２），ｔａｎａｃｅｔｉｎ（３），ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，７ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（４）
ａｎｄ５Ｏｍｅｔｈｙｌｍｙｏｉｎｏｓｉｔｏｌ（５）ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｗｈｏｌｅｈｅｒｂｓｏｆＣ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ，ｏｎｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｎｇｌｅｖｅｌｆｒｏｍｉｓｌｅｔｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈｔｈｏｓｅｏｆｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅａｓａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ａｎｄｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｉｎｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｎｇｌｅｖｅｌｆｒｏｍｉｓｌｅｔｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｒｅｓ
ｅｎｃｅａｎｄａｂｓｅｎｃｅｏｆｔｅｓｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗａｓａｓｓａｙｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｄｉｆｅｒｅｎｃｅｉｎｂａｓａｌｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒ２ｈｉｎｃｕ
ｂａｔｉｏｎｐｅｒｉｏｄｏｆｒａｔｉｓｌｅｔｓ．Ｔｈｅｉｓｌｅｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，７ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒｈａｖｅａｂｏｕｔ２ｆｏｌｄｈｉｇｈｅｒｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｎｇｌｅｖｅｌ
（Ｐ＜００１）ｃｏｍｐａｒｅｄａｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｉｓｌｅｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ５Ｏｍｅｔｈｙｌｍｙｏｉｎｏｓｉｔｏｌｈａｖｅａｂｏｕｔ１５ｆｏｌｄｈｉｇｈｅｒｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅ
ｔｉｎｇｌｅｖｅｌ（Ｐ＜００５）ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏａｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｗｈｅｒｅａｓｔｈｅｉｓｌｅｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎｓｈｏｗａｂｏｕｔ１９ｆｏｌｄｌｏｗｅｒｂａｓａｌ
ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｎｇｌｅｖｅｌ（Ｐ＜００５）ｔｈａｎａｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆｉｓｏｌａｔｅｄ
ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｉｓｌｅｔｓｆｒｏｍｒａｔｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓａｋｉｎｄｏｆｉｓｌｅｔｂａｓｅｄｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｏｄｅｌｆｏｒｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｉｔｕｓｉｎｖｉｔｒｏ．Ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，７
ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒａｎｄ５Ｏｍｅｔｈｙｌｍｙｏｉｎｏｓｉｔｏｌｃｏｕｌｄｅｎｈａｎｃｅｒａｔｉｓｌｅｔｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎａｎｄｆｕｒｔｈｅｒｉｎｖｉｖｏｓｔｕｄｉｅｓａｒｅｎｅｅｄｅｄｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅ
ｎａｔｕｒｅｏｆｓｕｃｈａｎｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｓｃｏｐｌｅｔｉｎｓｕｐｐｒｅｓｓｒａｔｉｓｌｅｔｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｃｒｏｓｏｓｔｅｐｈｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅ；ｑｕｅｒｃｅｔａｇｅｔｉｎ３，６，７ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ；５Ｏｍｅｔｈｙｌｍｙｏｉｎｏｓｉｔｏｌ；ｒａｔｉｓｌｅｔ；ｉｎｓｕｌｉｎ
［责任编辑　古云侠］
·５０４１·
第３４卷第１１期
２００９年６月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１１
　Ｊｕｎｅ，２００９