全 文 ：发酵虫草菌粉对细胞色素 Ｐ４５０酶的影响研究
贾海，许爱霞，袁继勇，高湘，高俊
（甘肃省人民医院，甘肃 兰州 ７３００００）
［摘要］　目的：研究发酵虫草菌粉对大鼠细胞色素Ｐ４５０酶 ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４，ＣＹＰ２Ｅ１的影响。方法：用 Ｃｏｃｋｔａｉｌ探针药
物法，将Ｗｉｓｔａｒ大鼠按体重随机分２组，灌胃给予３３ｇ·Ｌ－１的虫草菌粉生理盐水混悬液给药组，生理盐水对照组，灌胃体积为
８５ｍＬ·ｋｇ－１。诱导１０ｄ后静脉注射给予３种探针药物咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗，股动脉插管取血浆，通过ＨＰＬＣ检测各探
针药物的代谢以评价各组ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４，ＣＹＰ２Ｅ１亚型酶的活性；药动学计算采用 ＤＡＳ２０软件完成。结果：给予发酵虫
草菌粉组的大鼠，咖啡因、氨苯砜代谢均加快，ｔ１／２分别为（２９０±０４７）ｈ，（４８３±０６０）ｈ；氯唑沙宗ｔ１／２与对照组无显著差异。
结论：发酵虫草菌粉对大鼠ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４有诱导作用，对ＣＹＰ２Ｅ１的作用不明显。
［关键词］　Ｃｏｃｋｔａｉｌ；细胞色素Ｐ４５０；咖啡因；氨苯砜；氯唑沙宗；发酵虫草菌粉
［收稿日期］　２００８１１１０
［通信作者］　许爱霞，主任药师，主要研究方向为药代动力学。
Ｔｅｌ：（０９３１）８２８１７７７，Ｆａｘ：（０９３１）８２８１３４５，Ｅｍａｉｌ：ｘｕａｉｘｉａ１１０＠ｓｉｎａ．
ｃｏｍ
　　中药大多数是通过细胞色素Ｐ４５０酶（ＣＹＰ４５０）
代谢的，同时一些药物又可能会通过抑制或诱导使
ＣＹＰ４５０活性发生改变，从而导致药物间的相互作
用［１］。这种酶活性的抑制或诱导影响着与其合用
药物的体内浓度、代谢过程，从而对药物的有效性和
安全性产生影响。研究中药对ＣＹＰ的影响，对预测
有关中药西药或中药中药相互作用，提高中药的
有效性和安全性及应用价值具有重要意义。
发酵虫草菌粉为金水宝胶囊的主要成分，临床
用于慢性支气管炎、慢性肾功能不全、高脂血症、肝
硬化等引起的久咳虚喘、神疲乏力、不寐健忘、腰膝
酸软、月经不调、阳痿早泄等，不良反应轻微，成为老
年及体弱患者的常用药之一，这些人往往同时合用
其他临床药物。本实验采用 Ｃｏｃｋｔａｉｌ探针药物
法［２３］评价了发酵虫草菌粉对ＣＹＰ４５０的影响，探针
药物包括咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗，用它们来分别
检测 ＣＹＰ４５０酶系的 ３种主要代谢酶 ＣＹＰ１Ａ２，
ＣＹＰ３Ａ４，ＣＹＰ２Ｅ１的活性，从而得知发酵虫草菌粉
对这３种特异性酶的诱导或抑制作用，以促进临床
合理用药。
１　材料
１．１　仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公
司，Ｇ１３１２Ａ二元泵，Ｇ１３１５Ｂ二极管阵列检测器
ＤＡＤ）；ＡｇｉｌｅｎｔＧ２１７０ＡＡ色谱工作站；ＥｃｌｉｐｅｓＸＤＢ
Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５０μｍ）；ＡＰ０１真空泵；
ＡＢ２０４Ｎ电子天平（梅特勒托利多仪器上海有限公
司）；ＴＧＬ１６Ｃ高速冷冻离心机，ＴＧＬ１６Ｃ离心机
（上海安亭科学仪器厂）；ＸＫ９６Ａ快速混匀器（江苏
姜堰市新康仪器厂）。
１．２　药品与试剂
咖啡因（ｃｏｆｉｎｅ）、氨苯砜（ｄａｐｓｏｎｅ）、氯唑沙宗
（ｃｈｌｏｒｚｏｘａｚｏｎｅ）均为 ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ公司试剂，纯度
均大于９８％；安替比林（ＡＴＲ，分析纯）为天津市光
复精细化工研究所试剂；乙腈、甲醇均为色谱纯；发
酵虫草菌粉 Ｃ５４（江西济民可信金水宝制药厂，批
号０６１２１２）；水为重蒸水，由甘肃省人民医院制剂中
心制备。
１．３　动物
健康雄性 Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重（２４０±２０）ｇ，ＳＰＦ
级，购于兰州大学实验动物中心，动物合格证号
ＳＣＸＫ（甘）２００５０００７。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
ＥｃｌｉｐｅｓＸＤＢＣ１８色谱柱，流动相乙腈水（２５∶
７５），流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２８０ｎｍ；柱温室
温；进样量２０μＬ。内标为ＡＴＲ（２０ｍｇ·Ｌ－１）。
２．２　发酵虫草菌粉灌胃液的制备
取发酵虫草菌粉，研至足够细的粉末，加生理盐
水适量浸泡并研磨，制成３３ｇ·Ｌ－１的虫草菌粉生理
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盐水混悬液。
２．３　分组及给药方法
将Ｗｉｓｔａｒ大鼠按体重随机分组，分为给药组和
空白组，每组８只。给药组每天清晨一次给予发酵
虫草菌粉生理盐水混悬液，给药体积为 ８５ｍＬ·
ｋｇ－１，给药剂量相当于０２８ｇ·ｋｇ－１的原药（以临床
常用剂量换算为大鼠等效剂量）［４］，空白对照组给
予相同体积的生理盐水，诱导１０ｄ。
２．４　血浆样品的处理与测定
大鼠在发酵虫草菌粉诱导的第１０天晚上８点
禁食，于次日早８点在乙醚麻醉下，于左侧股动脉处
做插管手术［５］，待动物苏醒后注射给予 Ｃｏｃｋｔａｉｌ探
针药物咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗。咖啡因、氨苯砜、
氯唑沙宗，分别按１０，１０，２０ｍｇ·ｋｇ－１的剂量加入少
量聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯研磨再加生理盐水
制成乳浊液注射给药，并分别于给药后的 ０１７，
０５，０８３，１１７，１５，２０，２５，３０，５０，８０，１２０ｈ
由插管处取出约 ０２５ｍＬ血液，立即以 ８０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，准确取出１００μＬ血浆，加入 ＡＴＲ
工作液２０μＬ混匀后，再加入５００μＬ氯仿，充分震
荡２ｍｉｎ，以６０００ｒ·ｍｉｎ－１离心８ｍｉｎ，取有机相氯
仿４００μＬ，挥干，加流动相 １００μＬ溶解，取 ２０μＬ
进样。
２．５　药代动力学参数计算及分析方法
药动学计算采用ＤＡＳ２０软件完成，由于分析
结果不符合房室模型，故选用非房室模型统计矩分
析结果。
２．６　统计方法
数据以 珋ｘ±ｓ形式表示，统计采用 ＳＰＳＳ１５０软
件分析，经过正态分布及齐性检验后用 ｔ检验进行
两组数据的比较。
３　结果
３．１　色谱行为
以空白血浆加入安替比林内标，血浆直接加入
咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗以及静脉注射咖啡因、氨
苯砜、氯唑沙宗血浆样品进行色谱行为比较。由图
１可见３种探针药物与内标的分离良好，空白血浆
实验也未见干扰。
Ａ．加内标的空白血浆；Ｂ．直接加入探针药物血浆；Ｃ．体内注射探针药物血浆；１．咖啡因；２．安替比林（内标）；３．氨苯砜；４．氯唑沙宗。
图１　３种探针药物及内标的液相色谱图
３．２　标准曲线
取空白血浆１００μＬ，加入３种探针药物，使血
浆中咖啡因的质量浓度分别为 ０５，１０，２０，４０，
８０，１２０，１６０ｍｇ·Ｌ－１；氨苯砜的质量浓度分别为
０２５，０５，１０，２０，４０，８０，１２５ｍｇ·Ｌ－１；氯唑沙
宗的质量浓度分别为０５，１０，２０，４０，８０，１６０，
２５０ｍｇ·Ｌ－１，按２．４中血浆样品处理方法处理，以
探针药物和内标峰面积之比Ｓ对探针药物的浓度Ｃ
（ｍｇ·Ｌ－１）作线形回归，得回归方程，咖啡因：Ｓ＝
０４０７９Ｃ＋００６８，ｒ＝０９９９９；氨苯砜：Ｓ＝１４０６６
Ｃ－０２４８１，ｒ＝０９９９８；氯唑沙宗：Ｓ＝０３０６９Ｃ－
０００３９，ｒ＝０９９７１。最低定量限分别为：０５，
０２５，０５ｍｇ·Ｌ－１。
３．３　精密度和回收率
配制低、中、高３种质量浓度：咖啡因１０，４０，
１６０ｍｇ·Ｌ－１，氨苯砜０５，２０，１２５ｍｇ·Ｌ－１，氯唑
沙宗１０，４０，２５０ｍｇ·Ｌ－１的血浆模拟样品各５份
照血浆样品处理方法处理，计算日内精密度；连续测
定５ｄ，计算日间精密度，３种探针药物的日内、日间
精密度的ＲＳＤ值均小于５６０％。
取低、中、高 ３种质量浓度：咖啡因 １０，４０，
１６０ｍｇ·Ｌ－１，氨苯砜０５，２０，１２５ｍｇ·Ｌ－１，氯唑
沙宗１０，４０，２５０ｍｇ·Ｌ－１的血浆模拟样品各 ５
份，测得加样回收率，分别为：咖啡因（１０３７０±
２９５），（１０１３３±１２２），（９９９１±１１４）％，氨苯砜
（１０７３９±４４２），（９６２６±４７８），（１００４５±
１４８）％，氯唑沙宗（１０５７２±３２５），（９５６９±
３０８），（１０２２０±１８５）％。
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３．４　药动学研究
３．４．１　３种探针药物的药时曲线　对照组、发酵
虫草菌粉给药组的大鼠分别注射３种探针药混合物
后，各时间点采血，测得３种探针药物的血药浓度
时间曲线如图２。
Ａ．咖啡因；Ｂ．氨苯砜；Ｃ．氯唑沙宗；
◆生理盐水对照组；■发酵虫草菌粉组。
图２　３种探针药物体内药时曲线图
３．４．２　３种探针药物药动学参数　咖啡因、氨苯
砜、氯唑沙宗的药动学数据采用 ＤＡＳ２０程序，由
于房室模型分析结果数据不符合房室模型，ＡＩＣ值
大，参数异常，所以将不同时间内血浆浓度数据对时
间进行拟合，采用更合理的统计矩方法计算药动学
参数，参数采用ｔ检验，用 ＳＰＳＳ１５０软件分析见表
１。结果显示，发酵虫草菌粉组与对照组比较，咖啡
因、氨苯砜代谢均加快，ｔ１／２缩短；氯唑沙宗的 ｔ１／２也
缩短，但无统计学意义。表明发酵虫草菌粉对
ＣＹＰ４５０酶ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４具有诱导作用。
４　讨论
本实验采用Ｃｏｃｋｔａｉｌ探针药物法评价了发酵虫
草菌粉对 ＣＹＰ４５０的影响。探针药物包括咖啡因、
氨苯砜、氯唑沙宗，分别检测ＣＹＰ４５０酶系的３种主
要代谢酶ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４，ＣＹＰ２Ｅ１的活性。通过
ＤＡＳ软件分析判断发酵虫草菌粉的药动学分析方
法适合用非线性统计矩方法分析，结果显示发酵虫
草菌粉使 ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４相应探针药物代谢加
快，具有酶诱导作用。
肝药酶ＣＹＰ１Ａ２，ＣＹＰ３Ａ４的作用底物除了有药
物外还有内外源性激素［６７］，如睾酮和雌二醇，笔者
认为当此两种肝药酶活性增加时除了对外源性药物
代谢增加外还会增加内源性激素的代谢，通过调整
激素内分泌水平，达到保肺益肾的作用，关于发酵虫
草菌粉补肺益肾功效的作用机制还需进一步深入研
究。另外当发酵虫草菌粉与其他通过 ＣＹＰ１Ａ２，
ＣＹＰ３Ａ４酶代谢的药物合用时，需密切留意合用药
物血药浓度的变化，根据药动学参数调整给药方案
以达到药物应有的临床疗效。
表１　大鼠血浆中的３种探针药物药动学参数（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
分组
ｔ１／２
／ｈ
ＡＵＣ０ｔ
／ｍｇ·Ｌ－１·ｈ－１
ＡＵＣ０∞
／ｍｇ·Ｌ－１·ｈ－１
ＭＲＴ０ｔ
／ｈ
ＭＲＴ０∞
／ｈ
ＣＬ
／Ｌ·ｈ－１·ｋｇ－１
Ｖ
／Ｌ·ｋｇ－１
咖啡因　　对照 ３３１±０２２ ４５３７±５１６ ４９２８±５７４ ３５１±０２３ ４５６±０３４ ０２１±００２ ０９８±００９
　　　　　给药 ２９０±０４７１） ４５３５±１０２３ ４８４３±１１４５ ３３９±０４１ ４１５±０６１ ０２２±００５ ０８９±０１４
氨苯酚　　对照 ８４７±１０２ １８０６±２８７ ２６１５±５４２ ３８２±０３５ １００２±１６１ ０４０±００８ ４８２±１００
　　　　　给药 ４８３±０６０１） ２６８８±４６５ ３０１２±５０９ ２６７±０４５ ４４３±０５０ ０３４±００７ ２３６±０４４
氯唑沙宗　对照 ４６６±０５８ ７７８６±１５０９ ８９７８±２０２８ ３３８±０４８ ５３５±０８０ ０２３±００５ １５５±０２９
　　　　　给药 ４１３±０５１ ５９９５±１３８３ ６６１６±１４５７ ２６６±０５０ ４０５±０８３ ０３２±００８ １８７±０３９
　　注：与对照组相比１）Ｐ＜００５。
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志，２００７，２３（６）：４５７．
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｅｎｚｙｍｅｓａｆｔｅｒｒｅｃｅｉｖｉｎｇｆｅｒｍｅｎｔ
ｐｏｗｄｅｒｃａｔｅｒｐｉｌａｒｆｕｎｇｕｓ
ＪＩＡＨａｉ，ＸＵＡｉｘｉａ，ＹＵＡＮＪｉｙｏｎｇ，ＧＡＯＸｉａｎｇ，ＧＡＯＪｕｎ
（ＴｈｅＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｆｅｒｍｅｎｔｐｏｗｄｅｒｃａｔｅｒｐｉｌａｒｆｕｎｇｕｓｏｎｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｉｓｏｚｙｍｅｓＣＹＰ１Ａ２，
ＣＹＰ３Ａ４ａｎｄＣＹＰ２Ｅ１．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆＣｏｃｋｔａｉｌｐｒｏｂｅｄｒｕｇｓｗｅｒｅｕｓｅｄ．Ｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．
Ｏｎｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｆｅｒｍｅｎｔｐｏｗｄｅｒｃａｔｅｒｐｉｌａｒｆｕｎｇｕｓｏｎｃｅｄａｉｌｙｏｒａｌｙｆｏｒｔｅｎｄａｙｓ．Ａｎｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐｒｅｃｅｉｖｅｄｏｒａｌｙｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅｏｎｅ
ｄａｉｌｙａｓｔｈｅｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌ．Ａｆｔｅｒｔｅｎｄａｙｓｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｇｉｖｅｎｐｒｏｂｅｄｒｕｇｓｏｆｃｏｆｉｎｅ，ｄａｐｓｏｎｅａｎｄｃｈｌｏｒｚｏｘａｚｏｎｅａｎｄｔｈｅ
ｂｌｏｏｄｗａｓｔａｋｅｎｏｕｔｂｙｆｅｍｏｒａｌｃａｔｈｅｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．ＴｈｅｐｌａｓｍａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｂｅｄｒｕｇｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．Ｄａｔａｏｆｐｌａｓｍａ
ｄｒｕｇｌｅｖｅｌｔｉｍｅｗｅｒｅｄｉｓｐｏｓｅｄｗｉｔｈＤＡＳＶｅｒ２０．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｃａｆｅｉｎｅａｎｄｄａｐｓｏｎｅｓｐｅｅｄｅｄｕｐａｆｔｅｒｒｅｃｅｉｖｉｎｇｆｅｒｍｅｎｔ
ｐｏｗｄｅｒｃａｔｅｒｐｉｌａｒｆｕｎｇｕｓ，ｂｕｔｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｃｈｌｏｒｚｏｘａｚｏｎｅｗａｓｈａｒｄｌｙｃｈａｎｇｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｔｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｆｅｒｍｅｎｔｐｏｗｄｅｒｃａｔ
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