全 文 ：分析，使中成药分析方法与国际医药市场标准接轨，
适应了中药现代化的需要。
［参考文献］
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ＡｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕｉｃｋａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｎｄｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄ
ｉｎＦｕｆａｎｇＤａｎｓｈｅｎｔａｂｌｅｔｓｂｙＡＯＴＦＮｅａｒｉｎｆｒａｒｅｄｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ
ＷＡＮＧＮｉｎｇ，ＣＡＩＳｈａｏｓｏｎｇ２，ＷＥＩＨｏｎｇ１，ＤＯＮＧＨａｉｐｉｎｇ２
（１ＳｈａｎｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｊｉ＇ｎａｎ２５０００２，Ｃｈｉｎａ；２Ｊｉ＇ｎａｎＧｏｌｄｅｎｐｒｏＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｊｉ＇ｎａｎ２５０１００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｅｗｍｅｔｈｏｄｕｓｉｎｇＡＯＴＦＮｅａｒｉｎｆｒａｒｅｄｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＮＩＲＳ）ｆｏｒｑｕｉｃｋｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｎｄｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢｉｎＦｕｆａｎｇＤａｎｓｈｅｎｔａｂｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＨＰＬＣｗａｓｕｓｅｄａｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎ
ｔｅｎｔｓｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｎｄｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢｉｎＦｕＦａｎｇＤａｎＳｈｅｎｔａｂｌｅｔｓ．ＭｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｓｂａｓｅｄｏｎＰＬＳ１ａｌｇｏｒｉｔｈｍ
ｗｅｒｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｔｏｃｏｒｅｌａｔｅｔｈｅｓｐｅｃｔｒａａｎｄｔｈｅｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｖａｌｕｅｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＲＭＳＥＣＶ（ｒｏｏｔ
ｍｅａｎｓｑｕａｒｅｅｒｏｒｏｆｃｒｏｓｓｖａｌｉｄａｔｉｏｎ）ｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｓｆｏｒｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｎｄｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢｗｅｒｅ０．０１０３ａｎｄ０．１８６８ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｔｈｅｃｏｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｓｗｅｒｅ０．９８７３ａｎｄ０．９８３２ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｅｘｔｅｒｎａｌｖａｌｉｄａｔｉｏｎｗｉｔｈｅｘｔｅｒｎａｌｖａｌｉｄａｔｉｏｎ
ｓａｍｐｌｅｓｐｒｏｖｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｏｆｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｖａｌｕｅａｎｄｔｈｅｔｒｕｔｈｖａｌｕｅｗｅｒｅＲ２＝０．９７４３ａｎｄＲ２＝０．９８８６ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，
ｗｉｔｈｍｅａｓｕｒｅｄｒｅｃｙｃｌｅｒａｔｅｓｏｆ１０３．０％ ａｎｄ９９．０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＮＩＲＳｃａｎｂｅｕｓｅｄｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｎｄｓａｌｖｉ
ａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢ，ｗｈｉｃｈｓｅｔｓｕｐｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｄｕｃｔｌｉｎｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆＦｕａｎｇＤａｎｈｅｎｔａｂｌｅｔｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ａｃｏｕｓｔｏｐｔｉｃｔｕｎａｂｌｅｆｉｌｔｅｒ；ｎｅａｒｉｎｆｒａｒｅｄｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；ＦｕｆａｎｇＤａｎｓｈｅｎｔａｂｌｅｔｓ；ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ；ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄ
Ｂ；ＰＬＳ１ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ［责任编辑 鲍 雷］
［收高日期］ ２００７０３１２
［基金项目］ 上海市经委课题（２００３Ｂ０１０）
［通讯作者］ 徐德生，Ｔｅｌ：（Ｆａｘ）：（０２１）５１３２２４９１，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｄｅｓ１９５３＠１２６．ｃｏｍ
聚酰胺大孔树脂联用富集益母草总黄酮
余丹妮１，徐德生２，冯 怡２，卫洪昌２
（１．中国药科大学，江苏 南京 ２１０００９；２．上海中医药大学 中药学院，上海 ２０１２０３）
［摘要］ 目的：寻找一种有效富集益母草总黄酮的方法并对工艺条件进行初步摸索。方法：样品液以聚酰胺
吸附，水洗除杂。将除杂后的聚酰胺加于大孔吸附树脂柱顶部，以乙醇洗脱富集总黄酮 。结果：聚酰胺与Ｄ１０１树
脂联合应用能很好的富集益母草总黄酮。最佳工艺条件为：药材与聚酰胺比为５∶１，药材与树脂比为１∶３，树脂径
高比为１∶７时，以５０％乙醇洗脱，收集洗脱液７ＢＶ。富集物总黄酮纯度可达２３％，黄酮转移率为６９％。结论：该方
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第３３卷第３期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ３
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法优于目前常用黄酮富集方法且工艺简单，树脂再生容易，具有良好的运用前景。
［关键词］ 益母草；总黄酮；富集工艺；聚酰胺大孔树脂结合法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０３０２６４０５
益母草 ＬｅｏｎｕｒｕｓｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓＳｗｅｅｔ为唇形科益
母草属植物，是中医常用药。历代本草记载，益母草
具有活血化瘀，利尿消肿的功效，常用于妇科疾病和
肾炎水肿的治疗，现代逐步将其应用于心脑血管疾病
的防治，临床效果较好，疗效甚至超过复方丹参注射
液［１，２］。益母草活血化瘀、治疗心脑血管疾病的有效
成分是生物碱［３］，作者在实验中研究发现，益母草黄
酮也具有良好的抗冠心病心肌缺血作用，且与生物碱
联合用药比单独用药效果更好［４，５］。目前，还未有将
益母草生物碱和黄酮联合用药的报道，因此，通过工
艺研究，富集黄酮有效成分，使之与生物碱协同用药
将会开辟益母草心脑血管治疗的全新途径。作者对
６个产地益母草药材进行的含量测定表明：药材中黄
酮含量普遍偏低，最高仅为０３２７％。这使黄酮的纯
化富集难度增大，而目前传统的纯化方法很难达到要
求。作者首次对聚酰胺大孔树脂联用技术进行了探
讨，取得较好效果，富集物纯度提高近２００倍，远优于
目前常用黄酮纯化技术。
１ 仪器与材料
益母草（产地安徽，购自上海康桥中药饮片有
限公司，批号０５０５１７）经上海中医药大学生药教研
室周秀佳教授鉴定符合《中国药典》２００５年版一部
要求。Ｄ１０１，ＮＫＡ－Ⅱ，Ｘ－５，ＡＢ－８，ＮＫＡ，Ｈ１０２大
孔吸附树脂（天津南开大学化工厂）；柱色谱用聚酰
胺（８０～１００目，浙江台州路桥四清生化材料厂）；芦
丁对照品（含量测定级，购自上海标准化中心）；所
用试剂均为分析纯。７５２－Ｎ型紫外分光光度计（上
海分析仪器厂）；ＢＰ２１１Ｄｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平。
２ 方法与结果
２．１ 分析方法的建立
２．１．１ 对照品溶液的制备及线性方程 取１０５℃
干燥至恒重的芦丁对照品约２５ｍｇ，精密称定，置
２５ｍＬ量瓶中，以 ６０％乙醇溶解定容成 ０１ｍｇ·
ｍＬ－１的溶液，即得。
分别吸取上述对照品溶液０，０５，１０，１５，２，
２５，３０ｍＬ置于 １０ｍＬ量瓶中，各加入 ０１
ｍｏｌ·Ｌ－１ＡｌＣｌ３溶液１ｍＬ，以６０％乙醇定容，摇匀，
放置１５ｍｉｎ后，以１号样品为空白，于波长４１２ｎｍ
处测定吸收值。以吸光度为纵坐标，芦丁对照品液
质量浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程
为Ｙ＝２５０８９Ｘ＋００１５３；ｒ＝０９９９６，表明二者在
４８～２９０μｇ·ｍＬ－１有良好线性关系。
２．１．２ 供试品溶液的制备及测定方法 精密量取
提取液适量，置蒸发皿中，水浴蒸干。残渣加少量
５０％乙醇溶解，水浴挥去１／３体积，加水至原体积，
混悬。将混悬液过聚酰胺柱（８０～１００目，１ｇ，内径
１ｃｍ，湿法装柱）。以２０ｍＬ水冲洗，弃去水液，再以
２０％乙醇１５ｍＬ冲洗，弃去２０％醇洗脱液。最后，
以７０％乙醇洗脱，检视黄酮类黄色色带的移动，当
色带到达柱下部时收集洗脱液，将洗脱液收集入２５
ｍＬ量瓶中，约收集 ２４ｍＬ，收集液以 ５０％乙醇定
容，摇匀，作为供试品溶液。
精密吸取上述供试品溶液２ｍＬ置 １０ｍＬ量瓶
中，测定总黄酮含量。
２．２ 大孔吸附树脂预处理
取大孔吸附树脂适量，９５％乙醇浸泡２４ｈ后，
用２ＢＶ９５％乙醇过柱，洗至流出液与水（１∶５）无浑
浊停止。再以２ＢＶ５％盐酸浸泡２～４ｈ后洗柱，水
洗至中性，最后以２ＢＶ２％氢氧化钠浸泡２～４ｈ后
洗柱，水洗至中性备用。
２．３ 聚酰胺大孔树脂联用富集法
２．３．１ 上柱供试液的制备 取益母草药材适量，加
７０％乙醇１０倍量回流提取２次，每次１ｈ，提取液回
收乙醇至含醇量为５０％，置４℃冰箱静置过夜，滤
过，取上清液。药液回收乙醇至含生药为 １ｇ·
ｍＬ－１，作为上柱供试液。
２．３．２ 聚酰胺洗脱分析 取上柱供试液 １０ｍＬ，
拌和入２ｇ干燥的聚酰胺粉末，挥去溶剂后置于小
渗漉筒中，用水，２０％，４０％，６０％，８０％乙醇依
次洗脱，分别收集洗脱液１５ＢＶ，将洗脱液干燥后
称重计算洗脱液含固体量，并测定洗脱物中总黄酮
量，计算总黄酮纯度及收率：纯度 （％） ＝ （洗
脱液中所含总黄酮量／洗脱液含固体量） ×１００％；
收率 （％） ＝（洗脱液中所含总黄酮量／上柱前药
液所含总黄酮量） ×１００％。
另取上柱前供试液干燥称重，并测定其相应指
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标。结果见表１。
表１ 聚酰胺洗脱分析
样品
洗脱液
含固体
量／ｍｇ
总固体
得率
／％
总黄酮
量
／ｍｇ
总黄酮
纯度
／％
总黄酮
收率
／％
上柱前药液 ３８６４ １００ １０６７ ２７６ １００
水洗脱液 ８９．６ ２３１９ ０．４８ ０５４ ５０６
２０％乙醇洗脱液 ３８．２ ９８９ ４．４０ １１５２ ４１２４
４０％乙醇洗脱液 ５９．９ １５５０ ４．５０ ７５１ ４２１７
６０％乙醇洗脱液 ８４．５ ２１８７ ０．１５ ０１８ １４０
８０％乙醇洗脱液 １０３．２ ２６７１ － － －
可见，药液以聚酰胺吸附而聚酰胺用量较少时，
通过分段洗脱，黄酮可得到初步富集，其中，干扰性杂
质主要集中在水洗脱和 ８０％乙醇洗脱部分，
２０％～６０％乙醇洗脱液中可回收８５％的总黄酮而总
固体得率降至４７％。因此，作为初步精制手段，药液
经聚酰胺吸附，先以水洗脱除去大量水溶性杂质，再
以２０％～６０％乙醇洗脱富集黄酮，考虑到总黄酮的收
率，洗脱用乙醇浓度选择４０％～６０％为宜。
２．３．３ 大孔树脂型号筛选（动态洗脱） 取等量不
同型号的大孔树脂，预处理后装柱（４０ｃｍ×１５
ｃｍ）。供试溶液６等份分别拌和入相同量的聚酰胺
粉末（经计算上样液中所含总黄酮量均小于预试验
中各树脂吸附量），挥去溶剂后置于小渗漉筒中，以
等量的水洗脱至流出液近无色。将水洗脱后的聚酰
胺分别置于大孔树脂柱上部，再以６０％乙醇洗脱，
收集醇洗脱液５ＢＶ。测定洗脱液中总黄酮含量及
固体量，计算黄酮纯度和得率。总黄酮得率 ＝洗脱
液所含总黄酮量／上样供试品溶液相对应的药材量。
结果见表２。
表２ 几种型号的大孔树脂对益母草总黄酮洗脱的影响
树脂
型号
规格
洗脱液
含固体
量／ｍｇ
总黄酮
量
／ｍｇ
总黄酮
纯度
／％
总黄酮
得率
／ｍｇ·ｇ－１
Ｄ１０１ 非极性 ５３．９ ９．２０ １７．０７ ０．９２
ＮＫＡ－Ⅱ 极性 ３４．８ ２．６９ ７．７３ ０．２７
Ｘ－５ 非极性 ５８．３ ９．２０ １５．７８ ０９２
ＡＢ－８ 弱极性 ５６．５ ９．３２ １６．５０ ０９３
ＮＫＡ 非极性 ５３．７ ８．８１ １６．４０ ０８８
Ｈ１０２ 弱极性，大孔径 １３．４ ２．１９ １６．３４ ０２２
利用大孔树脂吸附和分子筛的双重作用，经聚
酰胺初步精制的供试溶液进入大孔树脂柱后将得到
进一步分离纯化。树脂的极性和孔径，对有效组分
的保留影响较大，由表２可以看出，非极性及弱极性
树脂黄酮富集程度较高，而大孔径树脂会降低黄酮
的富集程度。６种树脂中 Ｄ１０１在富集物总黄酮含
量及总黄酮得率方面效果最好，因此，选用 Ｄ１０１树
脂为试验优选树脂。
２．３．４ 大孔吸附树脂洗脱溶剂的选择 取 Ｄ１０１
树脂１０ｇ预处理后装柱 ，上柱供试液１０ｍＬ拌合入
２ｇ聚酰胺粉末，水洗至流出液近无色后置于树脂柱
上部，依次以２０％，４０％，６０％，８０％乙醇洗脱，分别
收集洗脱液５ＢＶ，将洗脱液干燥后称重计算洗脱液
含固体量，并测定洗脱物中总黄酮量，计算总黄酮纯
度及收率，另取上柱供试液干燥称重测定相应指标。
结果见表３。
表３ Ｄ１０１树脂洗脱分析（梯度洗脱）
样品
洗脱液
含固体
量／ｍｇ
总固体
得率
／％
总黄酮
量
／ｍｇ
总黄酮
纯度
／％
总黄酮
收率
／％
上柱前药液 ３８０．２ １００ １０７０ ２８１ １００
２０％乙醇洗脱液 ８．７ ２２９ ＜０００２＜００２ ＜００２
４０％乙醇洗脱液 ３５．６ ９３６ ７．００ １９６７ ６５４
６０％乙醇洗脱液 ３６．２ ９５２ １．８１ ５００ １６９２
８０％乙醇洗脱液 ３１．２ ８２１ ０．０２ ００６ ０１９
可见，供试液经聚酰胺初步精制后再通过大孔树
脂柱，２０％ ～６０％乙醇洗脱部分总固体得率仅为
２１１７％，而总黄酮收率达８２％，总黄酮洗脱在４０％
乙醇洗脱部分富集程度最高。进一步筛选结果表明，
洗脱效果：５０％乙醇＞４０％乙醇＞６０％乙醇。
同上操作，分别用 ４０％，５０％，６０％乙醇洗脱，
制备各乙醇洗脱液样品。测定结果见表４。
表４ 不同洗脱剂洗脱效果
样品
洗脱液
含固体量
／ｍｇ
总黄酮
量
／ｍｇ
总黄酮
纯度
／％
总黄酮
收率
／％
４０％乙醇洗脱液 ３４．７ ６．８５ １９．７２ ６４０２
５０％乙醇洗脱液 ４０．０ ７．８３ ２０．０８ ７３１１
６０％乙醇洗脱液 ６０２ ８８０ １４．６１ ８２２７
２．３．５ 药材与聚酰胺用量比分析 称取等量的已
处理好的 Ｄ１０１树脂各１０ｇ，湿法装柱。分别量取
１０ｍＬ上柱供试液，各供试液拌合以相应量的聚酰
胺粉末，使供试液所对应药材聚酰胺用量比分别为
５∶１，７∶１，１０∶１，相同量水洗脱后，置树脂柱上部，以
５０％乙醇洗脱，收集醇洗脱液５ＢＶ，测定洗脱液中
相应指标。结果见表５。
由表５可知，随着药材聚酰胺用量比的增大，
洗脱液总黄酮纯度增加，而收率明显降低。这可能
是由于聚酰胺用量减少后，对黄酮和杂质的吸附和
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表５ 聚酰胺用量分析
药材
聚酰胺
洗脱液含
固体量／ｍｇ
总黄酮量
／ｍｇ
总黄酮纯度
／％
总黄酮收率
／％
５∶１ ３８３ ７７５ ２０．２１ ７２．０３
７∶１ ３４１ ７１１ ２０．８４ ６６．０７
１０∶１ ２５４ ５５０ ２１．６３ ５１．１２
截留同时减少，使在水洗脱除杂的过程中，大量黄酮
流失所致。综合考虑纯度和收率，将药材和聚酰胺
比暂定为５∶１。
２．３．６ 正交试验 根据黄酮理化性质和大孔树脂
洗脱特性，考察了药材树脂比例、色谱柱径高比、洗
脱液收集量３因素，并结合树脂常用参数，设置３水
平，因素水平见表６，根据因素水平表，以益母草总
黄酮纯度和收率为综合评价指标，采用 Ｌ９（３
４）安排
试验，取一定量的 Ｄ１０１型大孔树脂，装于４０ｃｍ×
１５ｃｍ的小柱中，并使上样药液所含药材量与聚酰
胺用量比保持为５∶１，按表７进行试验。测定洗脱
液总黄酮含量，计算纯度和收率。
表６ 总黄酮富集工艺正交优选因素水平
水平 药材树脂比 色谱柱径高 比洗脱液收集量／ＢＶ
１ １∶１ １∶３ ３
２ １∶３ １∶５ ５
３ １∶５ １∶７ ７
表７ 总黄酮富集纯化工艺正交试验结果 ％
Ｎｏ． 纯度 收率 （收率＋纯度）／２
１ １４０４ ７２０５ ４３０４
２ １４１３ ８１２６ ４７７０
３ １３４７ ８５６０ ４９５４
４ １０３９ ８８２７ ４９３３
５ １１０５ ９１５２ ５１２８
６ １４０７ ８７５１ ５０７８
７ ７５０ ９０９６ ４９２３
８ １０２８ ８３６０ ４６９４
９ ９０５ ９３７７ ５１４１
表８ 方差分析
因素 离差平方和 自由度 Ｆ Ｐ
药材树脂比 ２１．２５ ２ ２５．３９ ＜００５
径高比 １７．２３ ２ ２０．５８ ＜００５
洗脱液量 １６．４３ ２ １９．６３ ＜００５
误差 ０．８４ ２ １．００
注：Ｆ００１＝１９００
由表７可以看出，总黄酮纯度和收率数值存在
一定交叉性，通常，判断富集工艺的成败需要均衡考
虑两者的数值，因此，在此直观分析和方差分析中，
作者将收率和纯度和的平均值作为综合评价指标。
按此指标分析结果表明，益母草总黄酮富集工艺影
响因素为：药材树脂比 ＞径高比 ＞洗脱液量，三者
均有显著性差异，最优组合为 Ａ２Ｂ３Ｃ３。故工艺优选
条件为：树脂适量装柱，使径高比为１∶７，上样相当
于１／３树脂重量的生药，以 ５０％乙醇洗脱，收集 ７
ＢＶ洗脱液较好。
２．３．７ 验证试验 按最佳纯化工艺重复实验３次，
结果３批样品总黄酮收率分别为６９５１％，７０２４％，
６８５７％，纯度分别为２３０７％，２３１３％，２２８０％。
结果表明：聚酰胺大孔树脂联用分离纯化益母
草黄酮的工艺稳定可行。初步确定益母草总黄酮的
富集纯化工艺为：采用 Ｄ１０１树脂，湿法装柱，使径
高比为１∶７。取适量药材提取液，置水浴蒸至近干，
加少量９５％乙醇与１／５药材用量的聚酰胺粉拌合，
水浴挥去溶剂。将聚酰胺置底部铺有棉花的小渗漉
筒中，水洗脱至流出液为无色，取出，上铺于填充了
３倍于药材用量的大孔树脂柱上，以５０％乙醇洗脱，
收集洗脱液７ＢＶ，水浴蒸干，即得总黄酮富集物。
２．４ 总黄酮富集方法比较
将本方法与目前常用的６种黄酮富集方法进行
了比较，以总黄酮纯度和得率为评价指标，结果见表
９。聚酰胺大孔树脂联用法较其他方法相比，总黄
酮纯度得到明显提高，相对于药材，黄酮纯度提高近
２００倍。在纯度提高的同时，得率也保持较高水平，
这使其在低浓度黄酮富集方面显示出极大的优势。
表９ 总黄酮富集方法比较（以芦丁计）
富集方法
总黄酮纯度
／％
总黄酮得率
／ｍｇ·ｇ－１
水提酸沉碱溶法 ０．１１ ０００２６
醇提酸沉碱溶法 ３．０３ ００７４７
酸沉热水溶解经大孔吸附树脂精制 １０．１８ ０１８０７
醋酸乙脂萃取经大孔吸附树脂精制 １３．４８ ０３１３５
大孔吸附树脂精制 ６．４５ １．１８８７
聚酰胺精制 ８．９３ １．００９３
聚酰胺大孔吸附树脂结合法 ２２．３８ ０．８５３０
注：药材中总黄酮为１２４ｍｇ·ｇ－１
３ 讨论
聚酰胺、大孔吸附树脂是分离黄酮类物质的常
用材料，由于其吸附机理不同，两者在分离纯化中各
有优缺点。在实验中发现，将聚酰胺与大孔吸附树
脂联用可充分发挥两者优势，弥补不足。如表９实
验结果，益母草经２种填料富集纯度分别为９％和
６４５％，而两者结合使用，富集物纯度可达２２％。
聚酰胺与大孔树脂联用技术报道较少，目前仅限
于以混合装柱、串联装柱［６，７］，及将提取液经聚酰胺吸
附后直接填于大孔吸附柱顶部方式［８］，以上这些方式
均不适合益母草药液的分离纯化。作者选择以聚酰
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第３３卷第３期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
胺作吸附剂，一方面，经水洗可除去大部分水溶性杂
质。另一方面，经过一定浓度醇洗脱后，聚酰胺对叶
绿素及部分脂溶性成分仍保持较好的截留，减轻了对
大孔树脂柱的污染和负担。经初步分级的上柱液再
经大孔树脂纯化，再利用树脂吸附和分子筛作用即可
极大的提高产物的纯度。这种方法，操作简单，柱再
生方便，黄酮富集率高，具有广阔的市场运用前景。
影响聚酰胺、大孔树脂纯化效果的因素很多，当
两者联用时，工艺考察的条件应作相应调整，如在树
脂的筛选中，６０％乙醇洗脱下来的部分通过树脂柱，
有效成分是在水与乙醇、乙醇与乙醇交界的环境下
发生吸附与解吸及依靠分子大小的筛选作用，这与
单独在水作用下大孔树脂纯吸附不同，因此，试验未
作树脂的静态吸附和洗脱考察，而是依靠动态洗脱
效果筛选参数。其次，洗脱用乙醇浓度的选择，是依
据聚酰胺洗脱分析确定的，对某些大孔树脂来说，
６０％乙醇浓度有可能不是其最佳黄酮洗脱浓度，如
Ｈ１０２树脂，但从减少柱污染，工业运用简单的角度
作者仍然采用６０％以下乙醇洗脱。再次，聚酰胺加
入后，减缓了洗脱流速，因此，洗脱速度对柱分离的
影响变得较难控制。这种对条件参数的选择是否正
确还值得商榷。同时，由于时间关系未对聚酰胺拌
合方式、上柱前样品液的理化性质、聚酰胺用量与洗
脱流速的影响、水洗脱用量、低浓度乙醇除杂效果等
因素进行考察，部分工作有待今后进一步研究。
实验中还发现，由于益母草生物碱存在于聚酰胺
水洗脱部分，而这部分洗脱液经传统生物碱富集工艺
精制后，生物碱纯度更高，极大地提高了益母草药材
的使用率，为合理运用药材打下良好基础。
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ＥｎｒｉｃｈｉｎｇｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＨｅｒｂａＬｅｏｎｕｒｉｗｉｔｈ
ｐｏｌｙａｍｉｄｅａｎｄｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ
ＹＵＤａｎｎｉ１，ＸＵＤｅｓｈｅｎｇ２，ＦＥＮＧＹｉ２，ＷＥＩＨｏｎｇｃｈａｎｇ２
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ｒｅｓｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｓｅｖｅｎｅｎｒｉｃｈｉｎｇａｎｄｐｕｒｉｆｙｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｙｉｅｌｄａｎｄｐｕｒｉｔｙａｓｉｎｄｅｘｅｓ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｅｎｒｉｃｈｉｎｇ
ｗｉｔｈｐｏｌｙａｍｉｄｅａｎｄｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｒｅｓｉｎｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄａｎｄｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｐｕｒｉｆｙｉｎｇｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎＲｅｓｕｌｔ：Ｄ１０１
ｒｅｓｉｎｉｓｐａｃｋｅｄｂｙｗｅｔｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｄｉａｍｅｔｅｒｔｏｈｅｉｇｈｔｉｓ１∶７．Ａｆｔｅｒｍｉｘｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｌｉｑｕｉｄｓ，ｔｈｅｗｅｉｇｈｔｏｆｗｅｔｒｅｓｉｎｉｎ
ｃｒｅａｓｅｄｔｏ３ｔｉｍｅｓｏｆｔｈｅｄｒｙｒｅｓｉｎ．Ｅｖａｐｏｒａｔｅｄｔｈｅｗｅｔｒｅｓｉｎｔｏｄｒｙｎｅｓｓ，ｍｉｘｅｄｗｅｌｗｉｔｈａｌｉｔｌｅｏｆ９５％ ｅｔｈａｎｏｌａｎｄｄｒｙｐｏｌｙａｍｉｄｅ
ｐｏｗｄｅｒ，ｅｖａｐｏｒａｔｅｄｔｈｅｍｔｏｄｒｙｎｅｓｓａｇａｉｎ．Ｅｌｕｔｅｗｉｔｈｄｅｉｏｎｉｚｅｄｗａｔｅｒｕｎｔｉｌｔｈｅｅｆｌｕｅｎｔｂｅｉｎｇｃｏｌｏｕｒｌｅｓｓ，ｔｈｅｎｌｏａｄｅｄｉｔｏｎｔｈｅｍａｃｒｏ
ｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｖｅｒｅｓｉｎ，ｅｌｕｔｅｗｉｔｈ５０％ ｅｔｈａｎｏｌ，ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｅｆｌｕｅｎｔｓｗａｓｃｏｌｅｃｔｅｄｔｏ７ｔｉｍｅｓｏｆｔｈｅｃｏｌｕｍｎｖｏｌｕｍｅ．Ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆ
ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｒｅａｃｈｅｄｔｏ２３％，ｗｈｉｌｅｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｆｒｏｍｒａｗＨｅｒｂａＬｅｏｎｕｒｉｗａｓｔｏ６９％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄ
ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｎｉｓｅａｓｙ，Ｗｈｉｃｈｈａｓａｇｏｏｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｅｇｒｏｕｎｄ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨｅｒｂａＬｅｏｎｕｒｉ；ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｎｒｉｃｈｉｎｇｍｅｔｈｏｄ；ｐｏｌｙａｍｉｄｅ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ
［责任编辑 鲍 雷］
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