全 文 ：ｂｅｔｗｅｅｎ３０ｃｍａｎｄ５０ｃｍｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｄｉｓｔａｎｃｅｗａｓｎｏｔｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ．Ｔｈｅｙｉｅｌｄｐｅｒｕｎｉｔａｒｅａｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｄｅｎｓｉｔｙｉｎｃｒｅａｓｅ，ａｎｄｔｈｅ
ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎａｌｄｅｎｓｉｔｉｅｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．ＴｈｅｙｉｅｌｄｐｅａｋｗａｓｉｎｔｈｅｌａｓｔｔｅｎｄａｙｏｆＡｕｇｕｓｔ．Ｔｈｅｂｅｓｔｌｅａｖｅｓａｒｅａｉｎｄｅｘｗａｓ１．４
ａｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｐｅａｋｔｉｍｅ．ＴｈｅｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｃｏｎｔｅｎｔｒｅａｃｈｅｄｐｅａｋｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｔｈｅｌａｓｔｔｅｎｄａｙｏｆＪｕｎｅａｎｄＡｕｇｕｓｔ，ｂｕｔｔｈｅｐｅａｋｉｎ
ｌａｓｔｔｅｎｄａｙｏｆＡｕｇｕｓｔｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｏｎｅｏｆｙｉｅｌｄｐｅｒｕｎｉｔａｒｅａ，ａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌａｓｈｅｓｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｇｒｏｗｔｈｄｅｎｓｉｔｙｉｓ１０ｃｍｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｄｉｓｔａｎｃｅｏｎｔｈｅ６０ｃｍｂｒｅａｄｔｈｒｉｄｇｅ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｈａｒｖｅｓｔｔｉｍｅｉｓｉｎｔｈｅ
ｌａｓｔｔｅｎｄａｙｏｆＡｕｇｕｓｔ．Ｔｈｅｙｉｅｌｄｐｅｒｕｎｉｔａｒｅａｉｓ１４００～２０００ｋｇ·ｈｍ－２．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｔｒｉｂｕｌｕｓｔｅｒｅｓｔｒｉｓ；ｆｉｔｉｎｇｇｒｏｗｔｈｄｅｎｓｉｔｙ；ｂｅｓｔｈａｒｖｅｓｔｔｉｍｅ
［责任编辑　张宁宁］
［收稿日期］　２００６０１１９
［通讯作者］　孙启时，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６４６８，Ｆａｘ：（０２４）２３９８６４６８，Ｅ
ｍａｉｌ：ｓｕｎｑｉｓｈｉ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
ＲＰＨＰＬＣ测定大叶紫珠中桦木酸的含量
潘　萍，贾凌云，孙启时
（沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］　目的：建立云南民间常用药大叶紫珠中桦木酸的含量测定方法。方法：采用ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（４６
ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ），以乙腈０１％磷酸溶液（６３∶３７）为流动相，２０５ｎｍ为检测波长。结果：大叶紫珠中桦木酸与
其他成分能得到很好的分离，考察３个不同来源的大叶紫珠叶中桦木酸的含量，不同来源桦木酸含量差异较大，其
中云南大叶紫珠叶中桦木酸含量最高。测定线性范围为００１６６～０３３２ｍｇ·ｍＬ－１，ｒ＝０９９９８，平均回收率为
９８５％。结论：该法便捷、灵敏、准确，重复性好，可以控制该药材的质量。
［关键词］　大叶紫珠；桦木酸；反相高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ２８４．１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１５３０２（２００８）０７０７５３０３
　　大叶紫珠为马鞭草科紫珠属植物 Ｃａｌｉｃａｒｐａ
ｍａｃｒｏｐｈｙｌａＶａｈｌ．，以根、茎、叶入药，具有散瘀止血，
消肿止痛的功效［１］，主要分布于广东、广西、湖南、
贵州、云南等省。大叶紫珠中含有三萜、黄酮、甾醇
类等成分，其中三萜酸类成分具有一定的镇痛活
性［２］。本研究从大叶紫珠茎中分离得到桦木酸等
三萜酸类成分，桦木酸为羽扇豆烷型三萜酸类化合
物，具一定的镇痛活性，此外桦木酸还具有抗 ＨＩＶ
病毒［３］、抗黑色素瘤［４］及较强的抗癌活性［５］。大叶
紫珠在云南民间长期用作镇痛药，现在多种制剂中
均有使用。由于国内外对大叶紫珠化学成分研究较
少，且化学成分的含量测定方法在国内外尚未见报
道，因此难以控制大叶紫珠药材及其制剂质量。本
研究采用乙腈０１％磷酸溶液等度洗脱，首次以高
效液相色谱法测定桦木酸的含量，并以此作为大叶
紫珠质量控制的一个方法。
１　材料
１．１　样品来源　大叶紫珠叶采自云南西双版纳、湖
南会同、广东清平，经沈阳药科大学药用植物教研室
孙启时教授鉴定为大叶紫珠Ｃ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌａ。
１．２　仪器与试剂　日本岛津 ＬＣ－１０ＡＴ高效液相
色谱仪，甲醇、乙腈均为色谱纯，天津市康科德科技
有限公司水（娃哈哈纯净水，杭州娃哈哈集团）。其
他为分析纯。桦木酸对照品，自制，纯度９８５％以
上。
２　方法与结果
２．１　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱 Ｋｒｏｍａ
ｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈
０１％磷酸溶液（６３∶３７），检测波长２０５ｎｍ，流速１０
ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为室温，进样量为２０μＬ，理论塔板
数按桦木酸计算应不低于５０００，此条件下，样品中
桦木酸（ｔＲ＝１４６ｍｉｎ）与相邻峰分离度大于 １５。
见图１。
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第３３卷第７期
２００８年４月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　７
Ａｐｒｉｌ，２００８
图１　桦木酸对照品及样品ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．桦木酸
２．２　对照品溶液的制备　精密称取干燥至恒重的
桦木酸对照品适量，加甲醇制成每１ｍＬ含０８３ｍｇ
的对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　精密称取药材粉末（过
５０目筛）５０ｇ，置于具塞锥形瓶中加２００ｍＬ乙醚浸
泡过夜，超声提取２次，每次４５ｍｉｎ，合并提取液，回
收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，移置１０ｍＬ量瓶中，
加甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液经０４５μｍ微
孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
２．４　测定波长的选择　取一定量已知浓度的桦木
酸甲醇溶液，于１９０～７００ｎｍ扫描，在２０５ｎｍ处有
最大吸收，确定２０５ｎｍ为测定波长。
２．５　线性关系考察　分别精密量取桦木酸对照品
溶液（０８３ｍｇ·ｍＬ－１）０２，０４，１０，２０，４０ｍＬ置
１０ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色
谱条件测定，以浓度 Ｘ为横坐标，峰面积值 Ｙ为纵
坐标，绘制标准曲线，得回归方程（ｎ＝５）为 Ｙ＝
２３６８×１０５Ｘ－４６７９，ｒ＝０９９９８。表明桦木酸在
００１６６～０３３２ｍｇ·ｍＬ－１线性关系良好。
２．６　精密度试验　精密吸取对照品溶液的稀释液
（００３３２ｍｇ·ｍＬ－１），按上述色谱条件连续进样５
次，桦木酸峰面积的 ＲＳＤ２４％（ｎ＝５），表明仪器
精密度良好。
２．７　重复性试验　精密称取同一批样品（批号
０５０９１００２），按上述供试品溶液的制备方法制备 ５
份样品，按上述色谱条件进样测定，桦木酸含量的
ＲＳＤ１５％（ｎ＝５）。
２．８　稳定性试验　取同一供试品溶液，在上述色谱
条件下，分别于０，２，４，８，１０，１２ｈ进样测定，桦木酸
峰面积的ＲＳＤ０９％，表明供试品溶液在１２ｈ内稳
定。
２．９　加样回收率试验　精密称取已知桦木酸含量
的药材（湖南会同）粉末９份，每份２５ｇ，分别精密
加入桦木酸对照品溶液，按上述供试品溶液的制备
方法配成低、中、高３个浓度的供试品溶液，并按上
述色谱条件进行测定其含量，计算回收率，平均回收
率为 ９７３％（ｎ＝９）。见表１。
表１　大叶紫珠样品加样回收率
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
００４１４ ００３３２ ００７３５ ９６７ ９５４ ０４
００４１４ ００３３２ ００７３７ ９７３ 　 　
００４１４ ００３３２ ００７２０ ９２２ 　 　
００３１５ ００６６４ ００９６１ ９７３ ９７４ ０８
００３１５ ００６６４ ００９５７ ９６７ 　 　
００３１５ ００６６４ ００９６７ ９８２ 　 　
００３４０ ００９９６ ０１３４２ １００６ ９９０ １４
００３４０ ００９９６ ０１３２１ ９８５ 　 　
００３４０ ００９９６ ０１３１５ ９７９ 　 　
２．１０　样品测定　按上述测定方法对３个不同来源的
大叶紫珠样品进行测定，以外标法计算。见表２。
表２　大叶紫珠中桦木酸的质量分数（ｎ＝３）
ｍｇ·ｇ－１
产地 批号 桦木酸
广州清平　　 ０５０９０１０１ ０１５９
　 ０５０９０１０２ ０１７６
湖南会同　　 ０５０９１００１ ００５８
　 ０５０９１００２ ００４６
　 ０５０９１００３ ００１８
云南西双版纳 ０５０８２５０６ ０２８４
　 ０５０８２５０７ ０２６０
　 ０５０８２５０８ ０２５３
　 ０５０８２５０９ ０２７１
３　讨论
３．１　提取条件的选择　根据测定目标化合物桦木
酸的理化性质和文献［６，７］，分别考察提取溶媒
（９５％乙醇、８０％乙醇、氯仿、乙醚）、提取方式（索
提、热回流、超声提取）、溶剂量、提取时间、提取次
数，确定最佳提取条件为：以４０倍量乙醚超声提取
２次，每次２００ｍＬ，每次４５ｍｉｎ。此方法简便易行，
测定时干扰少。且三萜酸类成分紫外吸收差，制备
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供试品溶液浓度应尽量大。
３．２　分离条件的选择　根据文献资料［６，８，９］，对桦
木酸的含量测定未见报道，借鉴普遍存在植物中的
三萜酸类成分乌苏酸和齐墩果酸的含量测定方法。
选择了 ３种色谱柱：①ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２００
ｍｍ，５μｍ，天津天和；②ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ（４６ｍｍ×２００
ｍｍ，５μｍ，大连依利特）色谱柱；③Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ（钻
石）Ｃ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，迪马公司）色谱
柱；流动相考察：桦木酸为三萜酸类化合物，紫外末
端吸收，用甲醇水系统基线漂移，比较乙腈水（６３∶
３７）和乙腈０１％磷酸溶液（６３∶３７），桦木酸呈酸
性，加入磷酸改善峰形，故选择后者为流动相基线平
稳。进行系统适用性试验，试验结果表明在色谱条
件：ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ）色谱柱，
乙腈０１％磷酸溶液（６３∶３７）为流动相，流速 １０
ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为室温，检测波长２０５ｎｍ，供试品
中桦木酸得到较好分离，理论塔板数不低于５０００，
分离度大于１５。
３．３　对３个不同来源的大叶紫珠样品中桦木酸含
量进行比较　其中云南西双版纳大叶紫珠叶中桦木
酸含量普遍高于广东清平、湖南会同药材。
大叶紫珠作为云南民间常用药，缺乏系统的化
学成分、药理活性及质量控制研究。鉴于文献报
道［２］紫珠中三萜酸类成分有较好的镇痛活性，暂将
桦木酸含量作为药材品质评价指标之一。也为大叶
紫珠药材及制剂质量控制提供依据。
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ｐｈｅｒｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅｃｈｅｍｉｃａｌｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ（ｔａｎｄｅｍ）ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
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ＲＰＨＰＬＣｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄｉｎＣａｌｉｃａｒｐａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ
ＰＡＮＰｉｎｇ，ＪＩＡＬｉｎｇｙｕｎ，ＳＵＮＱｉｓｈｉ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃｉａ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄｉｎＣａｌｉｃａｒｐａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ，ａｃｏｍ
ｍｏｎｌｙｕｓｅｄｈｅｒｂａｌｉｎＹｕｎｎａｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ）ａｎｄａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆａｃｅｔｏｎｉ
ｔｒｉｌｅ０．１％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ（６３∶３７）ｗｅｒｅｕｓｅｄ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１ａｎｄｔｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｏｒｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２０５ｎｍ．Ｒｅ
ｓｕｌｔ：ＢｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄｗａｓｗｅｌｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｏｔｈｅｒｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎＣ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌａ．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄｉｎＣ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌａｆｒｏｍ
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ｃｏｖｅｒｙｏｆｂｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄｗａｓ９８．５％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙ
ｃｏｎｔｒｏｌｏｆＣ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌａ．
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