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Vol. 34,Issue 1
January,2009
第 34卷第 1期
2009年 1月
HPLC评价远志种质资源及炮制品的质量
房敏峰,付志玲,滕红梅,张文娟,王世祥,赵桂仿*
(西北大学 生命科学学院 西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,陕西 西安 710069)
[摘要] 目的:评价远志种质资源及炮制品质量。方法:以 20个不同产地野生、5个主产区栽培一至三年生和不同商品
等级及部位的远志药材为研究对象,甲醇超声提取,10%盐酸水解,高效液相色谱法测定其中远志皂苷元含量并进行 t检验。
结果:不同产地野生远志皂苷元含量沿陕西、山西、河北、东北渐次降低;5个主产区三年生栽培远志含皂苷元 0.44%~0.49%;
远志根部皂苷元含量 0.44%~0.65%,芦头 0.03%~0.09%;远志、制远志和蜜远志依次为 0.49%,0.35%,0.24%。结论:野生
远志皂苷元含量与生态环境具有一定相关性,三年生栽培品皂苷元含量比较一致,部位含量差别较大,经炮炙后含量降低。
远志皂苷元可以作为质量控制指标,但应规定含量上下限。该研究为远志药材及其饮片的质量控制和评价提供依据。
[关键词] 远志;种质资源;炮制品;远志皂苷元
8远志为大宗常用药材,临床应用以炮制品为
主 [1],是目前中药市场的热点品种之一。远志主
要分布于东北、华北、西北等地,常生于北方海拔
400~1 000 米向阳山坡草地、林缘、和田埂路旁等
处[2]。有安神、祛痰、消肿作用,含皂苷、口山酮和
寡糖酯等成分,其中皂苷类为其主要活性成分[3-4]。
刘友平等[5]测定了不同产地远志总皂苷的含量;赵
云生等[6-7]测定了晋产远志皂苷元和多糖的含量;裴
瑾等[8]测定了远志及地上部分多糖的含量,为探索
远志的资源评价提供了方法参考。作者在此基础
上,以远志皂苷元为对照品,对全国远志野生及栽
培种质资源及临床常用炮制品的质量进行了初步
研究。
1 仪器与试药
岛津LC-10AT vp高效液相色谱仪(SPD-10A vp
紫外检测器,SHIMADZU CBM-102色谱工作站,
日本 Shimadzu Corporation); FA2004型 1/1万电
子天平(中国上海良平仪器仪表有限公司);远志
皂苷元对照品(批号 111572-200301,供薄层扫描
法含量测定用,面积归一化法得纯度为 98.1%,购
[收稿日期] 2008-06-30
[基金项目] 陕西省重大科技专项基金资助项目(2006ZK10-G3);
陕西省教育厅产业化培育项目(07JC17)
[通信作者] *赵桂仿,Tel:(029)88305207,E-mail:gfzhao@nwu.
edu.cn
[作者简介] 房敏峰,从事中药炮制与资源研究,Tel:(029)88302686,
E-mail:fff885@126.com
自中国药品生物制品检定所)。
野生远志分别采自陕西省合阳县北顺村、山西
省新降县阳王镇北池村、平遥县朱坑乡北汪湛村和
河北省涞源县石佛乡张家峪村等地,野生及栽培远
志药材均系作者到产地实际调查采集,除去须根及
泥沙后晒干而得;远志一级筒、二级筒、三级筒、
远志棍、芦头、地上和木心分别购自陕西省合阳县
水车头村、山西省运城正北庄、新降县阳王镇北池
村和平遥县朱坑乡北汪湛村。远志经西北大学王玛
丽副教授鉴定为远志科植物远志 Polygala
tenuifolia 、的干燥根。甘草和蜂蜜均购自西安市药
材公司,经西安市药品监督检验所谢志民研究员鉴
定,甘草为豆科植物胀果甘草 Glycyrrhiza inflate
Bata 的根茎,蜂蜜为生槐花蜜(批号 20070901),
用前炼制成中蜜;乙腈为色谱纯,水为重蒸水。其
他试剂均为分析纯。
远志:取原药材,除去杂质,略洗,润透,切
段,干燥。制远志:取甘草,加适量水煎煮 2次,
合并煎液浓缩至甘草量的 10 倍,再加入净远志,
用文火煮至汤被吸尽,取出,干燥。每 100 kg远志
段,用甘草 6 kg。炮制得率为 100.05%。
蜜远志:取炼蜜,加入少许开水稀释后,淋
于远志段中,稍闷,用文火炒至蜜被吸尽,药色
深黄,略带焦斑,疏散不粘手为度,取出,放凉。
每 100 kg 远志段,用炼蜜 25 kg,炮制得率为
124.95%[9]。
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2 方法
2.1 色谱条件 SHIMADZU VP-ODS色谱柱(4.6
mm×150 mm,5 μm),流动相乙腈-0.05%磷酸溶液
(pH 3.2)(40∶60);流速 1.0 mL·min-1;检测波长
205 nm;柱温 30 ℃;进样量 20 μL。此条件下,远
志对照品及样品色谱图见图 1。
A.对照品;B.样品;1.远志皂苷元。
图1 远志盐酸水解产物HPLC图
2.2 线性关系考察 远志皂苷元减压干燥至恒重。
精密称取 0.005 0 g,置 25 mL量瓶中,加甲醇溶解
并稀释至刻度,摇匀,即得 0.20 g·L-1 的对照品储
备液。
分别精密量取对照品储备液稀释成系列对照
品溶液。在拟定色谱条件下进样测定,将峰面积 Y
与质量浓度 X进行回归,得线性回归方程 Y=6 761
718.89X-10 734.34(r=0.999 1),远志皂苷元在
0.02~0.2 g·L-1呈现良好的线性关系。
2.3 精密度试验 取合阳三年生栽培远志棍样品
的供试品溶液,连续进样 5次,进行色谱分析。测
得峰面积的 RSD 0.55%。
2.4 溶液稳定性试验 取合阳三年生栽培远志棍
样品的供试品溶液,室温放置,在拟定色谱条件下
于 0,2,4,6,8 h分别进样。测得峰面积的 RSD
0.86%。
2.5 重复性试验 取合阳三年生栽培远志棍样品,
按供试品溶液制备方法平行制备 5份,进样分析。
测得远志皂苷元含量的 RSD 0.81%。
2.6 加标回收率 取合阳三年生栽培远志棍样品
粉末约 0.5 g,5份,分别加入 0.2 g·L-1的对照品溶
液各 1 mL,按供试品溶液制备方法制备所需溶液,
在拟定色谱条件下进行测定,测得其回收率为
98.85%,RSD 1.96%。
2.7 样品测定[10] 取远志药材及炮制品,粉碎,过
60目筛。精密称取粉末约 1 g,置锥形瓶中,精密
加入甲醇 10 mL;密塞后超声振荡 30 min,放置过
夜。精密吸取上清液 2 mL加入 3倍量乙醚,13 000
r·min-1离心使其完全沉淀,倾去上清液,加 10%盐
酸 10 mL使之溶解,并转入圆底烧瓶中,沸水浴回
流 2 h,过滤得褐色沉淀于滤纸上,用甲醇少量多
次洗滤纸,使沉淀溶解并过滤于 10 mL量瓶中,用
甲醇定容即得样品溶液。取样品溶液,在拟定色谱
条件下进样测定,计算远志皂苷元含量。
3 结果
3.1 不同产地野生远志药材中远志皂苷元含量
调查了分布区内 11个省(自治区)和 20个县
(市)的野生远志资源状况,每个产地采挖 50 株
以上全草,剪取根部,干燥。平行 3份,测定结果
见表 1。
表1 不同产地野生远志药材中远志皂苷元质量浓度(n = 3)
No. 产地
远志皂
苷元/%
No. 产地
远志皂
苷元/%
1 陕西合阳 0.48 11 河北围场 0.25
2 陕西长安 0.37 12 河北涞源 0.31
3 陕西商州 0.51 13 辽宁北票 0.24
4 山西平遥 0.26 14 辽宁锦州 0.30
5 山西新绛 0.30 15 黑龙江肇东 0.13
6 山西永济 0.34 16 内蒙古呼市 0.28
7 山西平顺 0.34 17 内蒙古包头 0.28
8 河南卢氏 0.43 18 宁夏盐池 0.46
9 河南辉县 0.31 19 四川茂县 0.45
10 山东费县 0.34 20 安徽萧县 0.22
由表 1可见,陕西渭北远志道地产区合阳、关
中长安和陕南山区商州,远志皂苷元含量差别明
显,在所测定样品中处于较高水平;与陕西毗邻的
河南卢氏、宁夏盐池和四川茂县等地皂苷元水平偏
高,而山西、河北和东北从南到北远志皂苷元含量
逐渐降低,内蒙与山西北部接近。在 4个商品远志
主要收购地,陕西合阳产远志的皂苷元含量明显高
于山西新绛、平遥和河北涞源。
3.2 主产区栽培远志中远志皂苷元含量 远志
Polygala tenuifolia Willd.在山西、陕西、河北、内
蒙、甘肃和河南等地均有栽培,但市场药材基本来
源于山西、陕西和河北三省。陕西合阳和山西新绛
是国家级远志种植基地,主要供应远志肉和远志
棍,二年半或三年生。本研究选择远志主产区用自
产种子连续栽培六年以上(含间歇轮作)的种植点,
采集一、二、三年生全株 50~80 株,剪取根部,
阴干。平行 3份,测定结果见表 2。
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表2 主产区栽培远志药材中远志皂苷元质量分数(n = 3)%
栽培产区 一年生 二年生 三年生
陕西合阳 0.38 0.32 0.49
山西运城 0.42 0.40 0.48
山西新绛 0.44 0.33 0.44
山西平遥 0.52 0.35 0.48
河北安国 - 0.42 0.45
注:“-”表示未采到样品。
表 2提示,主产区栽培远志药材中三年生远志
皂苷元含量基本一致,二年生远志皂苷元含量最
低,t 检验结果与三年生和一年生远志皂苷元含量
有显著差异(P<0.05)。
3.3 不同等级及部位中远志皂苷元含量 将栽培
三年生远志挖出后,首先分成地上部分和根(含芦
头)两部分,分别阴干。根部阴到半干时,剪取芦
头,得远志棍,或抽取芦头和木心,分别得到远志
筒、芦头和木心,干燥。远志筒按大小分出一级筒、
二级筒和三级筒。平行 3份测定,结果见表 3。
表3 远志不同等级及部位中远志皂苷元含量
(3年生,n=3)
远志皂苷元/%
样 品
陕西合阳 山西运城 山西新绛 山西平遥
一级筒 0.59 0.45 0.39 0.46
二级筒 0.64 0.48 0.44 0.51
三级筒 0.65 0.53 0.46 0.52
远志棍 0.49 0.48 0.44 0.48
芦头■ 0.09 0.09 0.05 0.03
地上■ 0 0 0 0
木心■ 0 0 0 0
种子■ 0 0 0 0
表 3可见,陕西合阳产远志筒中皂苷元含量明
显高于远志棍(P <0.01),而其他 3个产地远志筒
和远志棍中皂苷元含量无显著差异;芦头中皂苷元
含量远低于根部;传统非药用部位中未检出皂苷
元。按照商品质量等级,一级筒中皂苷元含量低于
二、三级筒。
3.4 远志炮制品中远志皂苷元的含量测定 远志
临床常用远志、制远志和蜜远志3种饮片规格。炮
炙后有明显的增效减毒效果。本研究参照《全国中
药炮制规范》(1988年版)以合阳产三年生远志棍
(含远志皂苷元0.49%)为原料制备炮制品,测定
其中皂苷元含量,结果见表4。
表 4 远志炮制品中远志皂苷元的测定(n = 3) %
远志皂苷元 远志皂苷元
No.
测得值 实际值
No.
测得值 实际值
1 0.36 0.36 11 0.31 0.25
2 0.29 0.29 12 0.31 0.25
3 0.35 0.35 13 0.40 0.32
4 0.42 0.42 14 0.25 0.20
5 0.35 0.35 15 0.29 0.23
6 0.40 0.40 16 0.27 0.22
7 0.30 0.30 17 0.31 0.25
8 0.35 0.35 18 0.26 0.21
9 0.38 0.38 19 0.31 0.25
10 0.25 0.25 20 0.29 0.23
平均 0.35 0.35 平均 0.30 0.24
注:1~10号样品为制远志,11~20号样品为蜜远志;炮制品中远
志皂苷元实际值(%)=测得值/得率×100%。
由表 4 可见,远志皂苷元含量为:生远志
0.49%,制远志 0.35%,蜜远志 0.24%。远志经炮制
后皂苷元含量明显下降(P < 0.01),其中甘草制远
志下降 20.57%,蜜远志下降 51.02%。蜜远志下降
幅度大于甘草制远志。
4 讨论
陕西渭北远志道地产区合阳、关中长安和陕南
山区商州,远志皂苷元含量差别明显,在所测定样
品中处于较高水平;与陕西毗邻的河南卢氏、宁夏
盐池和四川茂县等地皂苷元水平偏高,从山西、河
北到东北远志皂苷元含量逐渐降低,说明皂苷元含
量与其生长环境关系密切。
陕西合阳野生远志皂苷元质量分数为 0.48%,
栽培为 0.49%;山西运城野生为 0.34%,栽培为
0.48%;平遥野生为 0.26%,栽培为 0.49%;新绛野
生为 0.30%,栽培为 0.44%;河北野生为 0.25% ~
0.31%,栽培为 0.45%,表现出同一产地野生远志皂
苷元含量低于三年生栽培远志;目前芦头被作为低
档远志普遍使用,而其中皂苷元含量远低于根部,
仅为 0.03%~0.09%;在传统非药用部位即地上茎叶、
木心和种子中未检出皂苷元;炮炙后远志皂苷元含
量明显低于生品。上述实验结果提示:皂苷元含量
与远志临床疗效和毒性作用关系密切,含量高毒性
作用大,含量低则临床疗效差,这与远志皂苷类成
分既是有效成分又是有毒成分有关。因此,皂苷元
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可以作为远志药材及其饮片的质量控制指标,但应
规定含量上下限。
远志经炮炙后皂苷元含量明显下降,且蜜制下
降幅度大于甘草制,提示皂苷元的变化与远志临床
毒副作用之间有一定关系,对此尚需进行相关构效
关系研究。
远志中皂苷元含量与产地、生长年限、采收时
间、根粗细、加工方法及干燥程度等均有密切关系,
本研究样品采于 2007年 7月 20日至 8月 28日,
晾干,未去心,药材相当于市场统货,所购等级药
材为产地 2007 年 7 月采挖。各地远志总皂苷及其
酸解产物含量差异较大,其原因有待进一步研究。
根据刘友平[5]等对 7 省 12 个不同产地远志总皂苷
(质量分数 2.5%~4.4%)的测定结果,预测远志皂
苷元质量分数在 0.4% ~ 0.7%,与本研究测定结果
基本一致。而柯文彬[11]测得远志肉中总皂苷含量为
9.8%~13.1%,按此预测皂苷元含量应在 1.6%~
2.1%,与杨国红等[10]的测定结果比较接近。
[参考文献]
[1] 金世元,王 琦.中药饮片炮制研究与临床应用[M]. 北京:化学工
业出版社,2004:349.
[2] 中国药材公司,中国测绘科学研究院. 中国药材资源地图集[M].
北京:科学出版社,1995:48.
[3] 傅 晶,张东明,陈若芸. 远志属植物的皂苷类成分及其药理作
用研究进展[J]. 中草药,2006,37(1):144.
[4] 田 徽,武 云,王 建,等. 生远志中总皂苷、生物碱、口山酮、
脂肪油的急性毒性研究[J]. 中药药理与临床,2005,21(4):50.
[5] 刘友平,万德光,刘 涛,等. 分光光度法测定不同产地远志总皂
甙的含量[J]. 成都中医药大学学报,2000,23(2):46.
[6] 赵云生,李占林,张丽萍,等. 晋产远志种质资源皂苷元含量测
定[J]. 世界科学技术——中医药现代化,2006,8(4):68.
[7] 赵云生,严铸云,李占林,等. 晋产远志品种资源多糖含量测定
[J]. 时珍国医国药,2005,16(9):867.
[8] 裴 瑾,万德光,杨 林. 苯酚-硫酸比色法测定远志及地上部分
多糖的含量[J]. 华西药学杂志,2005,20(4):337.
[9] 中华人民共和国药政管理局.全国中药炮制规范[S].北京:人民卫
生出版社,1988:57.
[10] 杨国红,孙晓飞.反相高效液相色谱法测定远志中远志皂苷元的含
量[J]. 药物分析杂志,2001,21(4):260.
[11] 柯文彬. 远志不同炮制方法的探讨[J]. 基层中药杂志,1994,8
(1):1.
Germplasm resources of Polygala tenuifolia and determination of presenegenin
in processing products
FANG Minfeng,FU Zhiling,TENG Hongmei,ZHANG Wenjuan,WANG Shixiang,ZHAO Guifang*
(Key Laboratory of Resource Biology and Biotechnology in Western China,Ministry of Education,The College of Life
Sciences,Northwest University,Xi’an710069,China)
[Abstract] Objective:To research the germplasm resources and the contents of senegenin in processing products of Polygala
tenuifolia. Method:The contents of senegenin in wild Polygala tenuifoli and cultivated samples of Polygala tenuifolia. were
determined by RP-HPLC,and compared. Result:The contents of senegenin in wild reduce gradually along Shaanxi,Shanxi,Hebei
to Dongbei.The contents of senegenin in culticated three-year samples of three year polygala tenuifoli from five main place was
similar,0.44%-0.49%, The content of senegenin were 0.44%-0.64% in the wand and 0.03%-0.09% in the residual part of stem, and
the content of senegenin in Polygala tenuifolia was more than that in processing products. Conclusion:There is a correlation
between the content of senegenin in Polygala tenuifolia and ecology environment that show a is inverse proportion with the quality
grade,and the contents in the processing products were decreased. Senegenin can be used as a characteristic marker in range. This
research provides a reference for search a index for quality control of Radix polygala and its processing products.
[Key words] Polygala tenuifolia;germplasm resource;processing product;senegenin
[责任编辑 鲍 雷]