全 文 ：苦豆子总碱对急性期溃疡性结肠炎小鼠
血清 :F5
!
$:F5& 的影响
王晓娟! 姜斌+! 李丽君! 姚晖! 邓虹珠!
f南方医科大学 中医药学院! 广东 广州 $%
+f南方医科大学 珠江医院! 广东 广州 $#
$摘要%!目的&观察苦豆子总碱!@/@BVBV[BV/RU /T7I88致急性期溃疡性结肠炎!_<小鼠的作用及对血清:F5
!
$:F5& 水平的影响( 方法# <%MF=<小鼠随机分为 # 组#对照组%
模型组%总碱高%中%低剂量组%柳氮磺吡啶组( gI88 水溶液自由饮用 ( U 以产生小鼠急性期 _<模型同时灌服相应药物(
观察小鼠一般活动状态及大便性状%潜血便血情况$结肠大体形态学及组织病理学改变$进行疾病活动指数评分!URSQBSQB.@Rc5
R@6R2UQ7$ I4:$酶联免疫吸附法!HF:84法检测小鼠血清:F5
!
$:F5& 的水平( 结果#苦豆子总碱能显著改善I88致结肠炎小
鼠的一般状态$减轻其结肠组织病理学损伤( 模型组小鼠结肠黏膜I4:比正常组明显增高!9l$f$( 而各给药组较模型组
I4:均有不同程度的降低!9l$f$( :F5
!
与模型组相比均有不同程度的降低!9l$f$$而:F5& 在数值上与模型组相比有
所升高$但不具有统计学意义( 结论#N484对_<小鼠急性期损伤的大肠黏膜有明显的修复作用$可能通过抑制肠道免疫反
应$减少促炎因子的过度表达$调节促炎因子与抗炎因子间的平衡而发挥其抗炎作用(
$关键词%!溃疡性结肠炎)苦豆子总碱):F5
!
):F5&)疾病活动指数!I4:
$稿件编号%!+$$*$%+$$$(
$基金项目%!广州市科技计划项目!+$$#a+5H$)
$通信作者%!!邓虹珠$教授$博士生导师$NQV#!$+$#+%(*$%
$作者简介%!王晓娟$硕士研究生$NQV#!$+$#+%(*$#
!!溃疡性结肠炎!WV.QCB@RcQ./VR@RS$ _<是一种原
因未明的非特异性肠道炎症性疾病$在我国发病率
不断升高*+ $但缺乏特异性治疗手段( 豆科槐属植
物苦豆子 7毒%祛风燥湿%止痛杀虫等作用$民间常用于菌痢%肠
炎*++ ( 苦豆子总碱!N484是从苦豆子中提取的总
生物碱$前期研究发现 N484能显著改善三硝基苯
磺酸!N;M8诱导的_<大鼠结肠炎症反应$是苦豆
子治疗 _<的主要活性部位*)5&+ $本实验成功建立
I88致小鼠急性期 _<模型$进一步明确 N484对
_<急性期的疗效$并通过观察其对_<小鼠血清中
促炎因子:F5
!
和抗炎因子:F5& 含量的影响来探讨
其可能抗炎机制$为N484治疗_<提供理论依据(
!材料与仪器
]!动物!雄性<%MF=<小鼠 #$ 只$体重 ( j++
D$南方医科大学动物中心提供$合格证号 8!粤+$$#5$$(
]!药品与试剂!右旋葡聚糖硫酸钠!I88$上海
西宝生物有限公司$批号 OJ+($*4)苦豆子总碱
!宁夏盐池制药厂$批号 $)$)柳氮磺吡啶肠溶
片 ! 848G$ 上 海 三 维 制 药 有 限 公 司$ 批 号
+$$($*$$))大便隐血试剂盒!南京建成生物工程
研究所) :F5
!
$:F5& HF:84试剂盒!武汉博士德生
物工程有限公司( 其他试剂均为分析纯(
]&!仪器! GF5)$) 型电子天平!瑞典9Q@VQCN/VQ5
U/公司)F&+$ 台式低速自动平衡离心机!长沙湘
仪离心机仪器有限公司)Ib5(4I型电子恒温水浴
箱%b5(4I型电热恒温水槽!上海一恒科学仪器有
限公司)倒置显微镜!:H:<4I9:>M)酶标仪!8RD5
0B公司(
!方法
]!I88 溶液配制!I88 溶于蒸馏水配制成 g
I88水溶液$即配即用(
]!动物模型制作及分组!#$ 只雄性小鼠适应性
喂养 % U后$随机分为对照组$模型组$848G!+$ 0D
-[D
d
$N484高%中%低剂量组!($$&$$+$ 0D-
[D
d
$每组 $ 只$正常喂养( 参照文献方法并稍作
调整后*+ $除对照组外$其余各组小鼠均自由饮用
gI88溶液连续 ( U$建立小鼠急性期 _<动物模
-%%-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
型( 造模开始分别按上述灌胃给药$正常组和模型
组给予等量生理盐水(
]&!症状%体征观察及评分! 每日观察小鼠进食%
饮水%活动等一般情况$称量体重$观察粪便性状%大
便隐血及便血情况$参照 行疾病活动指数!URSQBSQB.@RcR@6R2UQ7$I4:评分$
评估结肠黏膜的炎症程度(
]Y!标本的制备及组织病理学观察!造模 ( U 后$
眼球取血分离血清$ d+$ h保存( 处死小鼠$迅速
剖开腹腔$观察各组小鼠结肠的大体形态( 距肛门
.0处取长约 .0的结肠组织$&g中性福尔马林
固定$石蜡包埋切片$进行 JH染色$光镜下观察肠
黏膜损伤情况(
]$!炎症因子 :F5
!
和 :F5& 的检测!采用酶联免
疫吸附法!HF:84$按试剂盒说明书检测血清 :F5

!
$:F5& 水平(
][!统计学分析!采用 8G88)f$ 统计软件包分
析$试验数据用
$
8k$表示( 采用单因素方差分析及
检验$9l$f$ 为差异具有显著性(
&!结果
&]!小鼠的一般情况和 I4:评分!对照组小鼠大
便正常$毛色光泽$活动自如$体重增加( 模型组小
鼠在饮用I88后 + U 开始出现黏液稀便$第 & 天或
第 天逐渐加重$隐血实验阳性$第 j% 天均出现
不同程度的肉眼血便$ 周左右可见脓血便%体重减
轻%毛发无光泽%饮食明显减少%懒动等( 各给药组
小鼠毛色%精神及活动度较模型组健康$其腹泻%便
血症状及I4:有不同程度的减轻( I4:评分显示模
型组小鼠 I4:显著高于正常组$差异具有统计学意
义!9l$f$$各治疗组I4:均低于模型组$具有显
著地统计学差异!9l$f$$但各治疗组间无统计
学差异( 评分标准和结果见表 $+(
表 !I4:评分
体重下降=g 大便性状 大便隐血=肉眼血便 计分
$ 正常 正常!! $
j 正常 正常!!
j$ 松散 隐血阳性 +
$ j 松散 隐血阳性 )
n 稀便 肉眼血便 &
&]!结肠组织病理学观察!小鼠处死后$打开腹
腔$模型组全结肠充血%水肿$严重者肠腔内有大量
血性分泌物$与对照组相比结肠明显缩短$肠壁增
!!
表 +!各组I4:和炎症评分的比较!
$
8k$$-e$
组别 剂量=0D-[Dd I4:
对照!!! d $f$$ k$f$$
模型!!! d
(f$ k$f(&

柳氮磺嘧啶 +$
&f+$ kf*)
+
总碱!!! ($
&f&$ kf)
+
&$
&f$ kf(
+
+$
&f%$ kf&+
+
!!注# 与对照组比较9l$f$)与模型组比较+9l$f$!表 )
同(
厚$肠腔狭窄$各给药组结肠轻度水肿$部分盲肠段
可见稀便( 光镜下观察对照组小鼠结肠黏膜完整连
续$腺体排列整齐规则结构清楚$无炎细胞浸润和溃
疡形成( 而模型组小鼠结肠黏膜破损$广泛的糜烂%
出血%大面积深层溃疡$呈明显的急性炎症反应$上
皮脱落$大部分腺体被破坏$水肿$排列紊乱$黏膜及
黏膜下层大量炎性细胞浸润$有的区域腺体完全丧
失$炎细胞浸润全层( 各给药组镜下明显改善症状$
结肠黏膜完整$无明显充血水肿$局部有少量炎性细
胞浸润$肠腺排列基本规则$结构清楚$见图 (
&]&!血清 :F5
!
$:F5& 的表达!模型组血清 :F5
!
水平比对照组显著升高!9l$f$( 各治疗组 :F5

!
水平较模型组显著下降!9l$f$ $但仍略高于
对照组$具有显著统计学差异!9l$f$$各给药组
间比较无统计学差异( 模型组血清 :F5& 水平较对
照组显著降低!9l$f$( 各给药组:F5& 水平在数
值上与模型组相比升高$但无统计学差异( 各给药
组间比较差异无统计学意义( 各给药组均能显著降
低血清:F5
!
水平$有提高血清 :F5& 水平趋势( 结
果见表 )(
Y!讨论
溃疡性结肠炎以腹泻%腹痛和里急后重%黏液脓
血便等为主要症状$慢性起病$反复发作$被世界卫
生组织列为现代难治病之一$其发病机制尚未完全
阐明$主要与遗传%免疫%环境等因素有关( 近年来$
肠黏膜免疫功能紊乱所引起的肠道炎症日益受到人
们的重视$其对溃疡性结肠炎的发病有重要作用$而
促炎细胞因子与抗炎细胞因子之间的平衡失调是导
致肠黏膜免疫功能紊乱的重要因素$因此$细胞因子
在溃疡性结肠炎发生过程中的作用不容忽视( :F5

!
是由单核巨噬细胞产生的$在炎症和免疫中均发
挥重要生物学活性的细胞因子( 研究发现$_<患者
-(%-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
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9B6$ +$$
!!
4f正常组)Mf模型组)图 !各组小鼠结肠组织病理学改变!JH$ i$$
表 )!各组小鼠血清中:F5
!
$:F5& 含量的比较!
$
8k$$-e$
组别 剂量=0D-[Dd :F5! :F5&
对照!!! d )f&% k#f# +&f) k%f(
模型!!! d
+&f+$ k+$f*

*f+$ k)f*

柳氮磺嘧啶 +$
&&f$$ k$f&)
+
)f) k*f)
总碱!!! ($
&&f( k&f$$
+
*f+) k#f*)
&$
&$f+% k+f$&
+
)f+( k*f)
+$
&f%# k+f#
+
$f## k(f+
血清 :F5
!
明显高于正常对照者$ 且受累黏膜的
:F5
!
显著高于未受累黏膜$随着病情的缓解$:F5
!
水平又随之降低*#+ $刘颖等运用 N;M8 致大鼠 _<
急性期病变模型中大鼠血清的 :F5
!
亦有升高*%+ $
说明:F5
!
一方面作为抗炎因子介导 _<急性期过
程*$+ $在_<发生发展的初始阶段发挥重要活性$
另一方面$它还可反馈性的促进巨噬细胞和 N淋巴
细胞产生 :F5+$:E;5
%
等表达来加速炎症反应( 而
:F5& 是一种重要的抗炎细胞因子$主要由激活的 N
淋巴细胞分泌$它能够抑制单核巨噬细胞产生的:F5

!
和N;E5
$
并能下调活化的单巨噬细胞分泌氧自
由基的能力*(+ $从而维持正常的肠道免疫( 在机体
正常状态下$人体肠黏膜会自发分泌一些抗炎细胞
因子如 :F5& 来维持肠道免疫$:F5
!
则少分泌或不
分泌$二者处于动态平衡状态( 当受到各种病原刺
激后$这种平衡被打破$促炎细胞因子活性升高而抗
炎细胞因子活性降低$从而导致肠炎的发生**+ (
苦豆子总碱是从中药苦豆子中提取的总生物
碱$具有抗炎%抗肿瘤%免疫调节等作用( 前期研究
发现$苦豆子总碱可显著改善 N;M8 诱导的大鼠结
肠炎一般症状和体征$为进一步研究苦豆子总碱治
疗_<的作用机制$复制了 I88 致小鼠 _<急性期
模型( I88是一种相对分子质量为 $$$ 的硫酸多
聚糖$通过给予 <%MF=<小鼠不同浓度和周期的
I88自由饮用可分别诱导出与人类病理相似的 _<
不同时期发病过程*+ $本实验根据 经典方法并加以改进后$gI88 给予小鼠 ( U 诱发
_<急性期模型$并同时给予 N484高中低剂量灌
胃$造模后模型组小鼠均有不同程度的脓血便%毛色
不光%食欲和体重下降等表现$而总碱各组可有效缓
解_<急性期炎症状态$改善小鼠一般状态$缓解结
肠炎症对肠黏膜的病理损伤( 通过 HF:84法检测
发现$模型组:F5
!
表达与正常组相比明显升高$而
各给药组则较模型组明显降低$差异具有统计学意
义!9l$f$)模型组 :F5& 表达较正常组显著降低
!9l$f$$而给药组浓度较模型组略有升高$但不
具有统计学差异$说明苦豆子总碱可能通过抑制促
炎因子表达来调节肠道免疫$抑制炎症反应的( 有
研究发现*++ $_<患者受累黏膜 :F5& 表达较未受累
黏膜升高$且经药物治疗后$缓解组与未缓解组间
:F5& 水平无差别$表明处于缓解期的患者仍旧存在
免疫系统的不平衡$本实验中各给药组 :F5& 水平虽
有升高但与模型组相比不具有统计学差异$与该报
道结果一致$这说明总碱可能是通过直接抑制:F5
!
-*%-
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!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
等促炎细胞因子的产生来调节抗炎与促炎细胞因子
之间的平衡$从而发挥其治疗溃疡性结肠炎的作用(
$参考文献%
* +!XRB2DPF$ R2 * + +!江苏新医学院f中药大辞典*9+f上海# 上海科技出版社$
*%%# +*)f
* ) +!陈建国$ 邓虹珠 f苦豆子总碱对大鼠实验性结肠炎 8OI$
9I4$ ;O$ 9GO表达的影响*X+f中国中药杂志$ +$$#$ )
!&# )+)f
* & +!周毅$ 邓虹珠$ 邓子华$ 等f苦豆子总碱对大鼠实验性结肠
炎复杂志$ +$$#$ $!&%# (*f
* +!8$ Q@BVfS@WU6/TUQ7@CB2 SWVTB@QS/URW0Q7AQCR0Q2@BV0WCR2Q./VR@RS*X+-
FB] :2cQS@$ **)$ #*!+# +)(f
* # +!张志军$ 刘懿$ 王磊$ 等fNF>&04]预防干预 I88诱导小鼠
急性期溃疡性结肠炎中对促炎因子N;E5
!
$:E;5
;
$:F5
!
的影
响*X+f复旦学报# 医学版$ +$$($ )!+# %#f
* % +!刘颖$ 王莹$ 齐正$ 等f甘草酸二铵抗大鼠溃疡性结肠炎作
用及相关机制研究 *X+f中国新药杂志$ +$$%$ # !+&#
+$+%f
* ( +!FR2Q?B2 XI$ b/VR/SL$ \BVB@BS\$ Q@BVf:00W2/0/UWVB@/C6.65
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*$+!黄国栋$ 游宇$ 黄强$等f美珍颗粒剂配合结肠灌洗机治疗
溃疡性结肠炎 &$ 例疗效观察*X+f中药材$ +$$*$ )+!+#
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$责任编辑!张宁宁%
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