全 文 ：桃仁脂肪酸 ＧＣＭＳ指纹图谱研究
裴瑾１，颜永刚２，万德光１，莫书蓉１
（１．成都中医药大学 药学院，四川 成都 ６１００７５；
２．陕西中医学院，陕西 咸阳 ７１２０４６）
［摘要］ 目的：对桃仁脂肪酸进行气相色谱指纹图谱研究，为桃仁的质量评价提供依据。方法：利用毛细管气相色谱对
桃仁脂肪酸进行分析，并利用ＧＣＭＳ技术确认指纹图谱中的特征指纹信息，进行系统聚类和相似度分析。结果：对３４批不同
产地、品种的桃仁进行了测定，获得了较为理想的包含特征信息的桃仁ＧＣ指纹图谱。结论：本方法重复性好，所建立的指纹
图谱为桃仁药材的质量控制提供了有效手段。
［关键词］ 桃仁；ＧＣＭＳ；指纹图谱
［收稿日期］ ２００９０１２７
［基金项目］ 四川省中医药管理局科研项目
［通信作者］ 裴瑾，副教授，主要从事中药品质与资源研究，
Ｅｍａｉｌ：ｐｅｉｘｊｉｎ＠１６３．ｃｏｍ
桃仁为活血化瘀要药，临床功效卓著。来源于
蔷薇科Ｒｏｓａｃｅａｅ植物桃Ｐｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａ（Ｌ．）Ｂａｔｓｃｈ．
或山桃Ｐｄａｖｉｄｉａｎａ（Ｃａｒ．）Ｆｒａｎｃｈ．的干燥成熟种
子。其功效为活血祛瘀，润肠通便。用于经闭，痛
经，瘕痞块，跌扑损伤，肠燥便秘［１］。在血府
逐瘀汤（《医林改错》）、生化汤（《傅青主女科》）、桂
枝茯苓丸（《金匮要略》）、桃核承气汤（《伤寒杂病
论》）等医家名方中均重用桃仁。课题组对桃仁石
油醚提取物不经甲酯化采用 ＧＣＭＳ联用技术进行
了分析，发现脂肪酸的含量最高，又以油酸、亚油
酸最为突出［２］。现代研究发现不饱和脂肪酸具有
抗氧化、抗自由基、抗肿瘤、增强免疫、降低高密
度脂蛋白血清胆固醇的作用，进而减少高血压、心
脏病及中风等疾病的发病率［３］。《中国药典》（２００５
年版）桃仁药材质量指标仅有性状、显微鉴别、酸
败度检查，这种质量控制的标准远远不能反映桃仁
药材的内在质量。本研究以不同产地、品种的桃仁
样品为研究对象，在明确桃仁脂肪酸成分的基础
上，建立了桃仁脂肪酸气相色谱指纹图谱，为桃仁
的质量评价提供依据。
１ 仪器与试药
岛津气相色谱仪 ＧＣ２０１０，ＦＩＤ检测器，ＧＣ
ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ工作站。岛津气相色谱质谱联用仪 ＧＣ
ＭＳＱＰ２０１０。
桃仁由课题组自采和各地大型药材市场收购，
共３４批样品，经成都中医药大学万德光教授鉴定
（表１）。棕榈酸、油酸、亚油酸对照品（中国药品生
物制品检定所，批号 ２００６０７０８，１１１６２１２００６０２，
１１１６２２２００３０１），所用试剂甲醇、氢氧化钾、正己烷、
乙醚均为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）。
表１ 桃仁样品及来源
Ｎｏ． 来源 产地 Ｎｏ． 来源 产地
１ 陕西西安市售 陕西铜川 ２０ 自采 陕西延安
２ 陕西西安市售 陕西延安 ２１ 自采 陕西旬邑
３ 陕西西安市售 陕西旬邑 ２２ 自采 陕西咸阳
４ 陕西西安市售 陕西南天 ２３ 甘肃兰州市售 甘肃
５ 自采 陕西南泥湾 ２４ 重庆市售 新疆
６ 自采 甘肃郑宁 ２５ 安徽亳州市售 新疆昌吉
７ 甘肃兰州市售 甘肃兰州 ２６ 新疆乌鲁木齐 新疆
８ 四川成都市售 四川成都 ２７ 自采 山西汾阳
９ 自采 四川北川 ２８ 河北安国市售 山东
１０ 自采 四川北川 ２９ 河北安国市售 河北
１１ 自采 新疆乌鲁木齐 ３０ 河北安国市售 北京
１２ 河北安国市售 山西 ３１ 安徽亳州市售 贵州
１３ 河北安国市售 山西 ３２ 安徽亳州市售 江西
１４ 安徽亳州市售 山西荆州 ３３ 四川成都市售 西藏
１５ 安徽亳州市售 山东 ３４ 广西玉林市售 广西
１６ 河北安国市售 河北
１７ 安徽亳州市售 河北
１８ 安徽亳州市售 安徽
１９ 安徽亳州市售 江西
注：１～１９号样品为Ｐｒｕｎｕｓｄａｖｉｄｉａｎａ，２０～３４为Ｐ．ｐｅｒｓｉｃａ。
２ 方法与结果
２．１ 桃仁脂肪酸组分的确定
２．１．１ 供试溶液的制备及甲酯化 分别将３４批桃
仁样品于４０℃下恒温干燥２４ｈ，称取５ｇ，捣碎，置
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具塞锥形瓶中，加石油醚２５ｍＬ，在不高于３５℃条
件下超声提取４５ｍｉｎ，经旋转蒸发仪回收溶剂和用
无水硫酸钠脱水干燥，得桃仁油。取０１ｍＬ桃仁油
置５ｍＬ量瓶中，加乙醚溶解并稀释至刻度，备用。
取０４ｍＬ桃仁油乙醚溶液置１０ｍＬ具塞试管中，加
入２０ｍＬ５％氢氧化钾甲醇溶液，摇匀，于６０℃恒
温水浴３０ｍｉｎ，冷却至室温后，加入１０ｍＬ１４％三
氟化硼甲醇溶液，摇匀，于６０℃恒温水浴２ｍｉｎ，冷
却至室温后，加入２ｍＬ正己烷，摇匀，取上层溶液用
于气相色谱分析。
２．１．２ ＧＣＭＳ分析条件 色谱条件岛津 ＧＣＭＳ
ＱＰ２０１０；ＦＦＡＰ毛细管色谱柱（０３２ｍｍ×３０ｍ，０２５
μｍ）；升温程序：８０℃保持 ０５ｍｉｎ，以 ４０℃·
ｍｉｎ－１升温速率升至２２０℃，保持１１ｍｉｎ；进样口温
度２６０℃；载气（Ｈｅ）流速为０６ｍＬ·ｍｉｎ－１，尾气流
速１３ｍＬ·ｍｉｎ－１，分流比１００∶１；进样量２μＬ。电
子轰击（ＥＩ）离子源，离子能量 ７０ｅＶ，离子源温度
２００℃，质量扫描范围３０～５００。
２．１．３ 脂肪酸组分的确定 对所得的桃仁脂肪油
的ＧＣＭＳ图谱，根据 ＮＩＳＴ标准质谱图库进行检
索，并参考有关文献，对各分离组分进行峰的确认。
同时还采用棕榈酸、油酸和亚油酸的对照品进行对
照（图１）。
１．１８冠６；２．棕榈酸甲酯；３．十六碳烯酸甲酯；４．硬脂酸甲酯；
５．油酸甲酯；６．亚油酸甲酯。
图１ 桃仁样品１～６（山桃仁），２０～２７（桃仁）ＧＣＭＳ
指纹图谱
２．２ ＧＣ指纹图谱的建立
２．２．１ 精密度试验 取同一样品（第９号样品），
相同色谱条件下连续进样６次，考察色谱峰保留时
间和色谱峰面积的一致性，上述６个色谱峰保留时
间的ＲＳＤ＜０３０％，色谱峰面积的ＲＳＤ＜３１％。
２．２．２ 重复性试验 取同一样品（第９号样品）６
份，按样品制备方法进行制备，在所建立的测定条件
下测定，实验结果得出谱图中６个共有色谱峰保留
时间的ＲＳＤ＜０８９％，峰面积的ＲＳＤ＜４０％。
２．２．３ 稳定性试验 取同一样品（第９号样品），
在所建立的测定条件下，分别于０，１，４，１６，２４，４８ｈ
进行测定，考察６个主要色谱峰相对保留时间和峰
面积，结果表明共有色谱峰保留值较稳定，保留时间
的ＲＳＤ＜１２％，峰面积的ＲＳＤ＜４４％，说明样品溶
液在４８ｈ内稳定。
２．２．４ 样品色谱指纹图谱 将收集的３４批样品，
按建立的供试品溶液制备方法以及测定分析条件进
行实验，记录指纹图谱。ＧＣ图谱共有６个共有峰，
占总峰面积９５％以上，选择亚油酸甲酯（６号峰）为
参照峰，计算各共有峰的相对保留时间。
２．３ 系统聚类分析
系统聚类分析是一种无管理、无指导的模式识
别方法，根据所测样品的色谱指纹图谱特征，对样品
进行分类［４］。本研究应用 ＳＰＳＳ１３０软件，采用组
间均联法（ｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓｌｉｎｋａｇｅ），夹角余弦（ｃｏ
ｓｉｎｅ）为测度。聚类分析将３４批样品分为３类。样
本４，３０，１４，２３归为第１类，占总样本量的１１７６％，
其总峰面积最大，表明油酸、亚油酸含量最高，质量
最好；样本１８，２９，１１，２１，３，１９，１３，１５，３２，３４，２０，１，
３３，５，２８，９，３１，１０，２６，１７，２７归为第２类，占总样本
量的６１７６％，其总峰面积次之；样本２，８，２４，７，１６，
６，１２，２２，２５归为第３类，占总样本量的２６４７％，其
总峰面积最小，表明油酸、亚油酸含量最低，质量
较差。
２．４ 相似度分析
相似度可以定量描述指纹图谱，本研究采用相
似度计算方法对样品进行比较，以定量、客观地对样
品进行评价。结合聚类分析结果，去除脂肪酸含量
最高的第１类样本和含量最低的第３类样本，因为
第一类样本只占总样本量的１１７６％，不具代表性，
而认为第３类样本质量较差。从第２类２１批桃仁
药材中选取１０批（１８，１９，２１，１３，１５，３４，２８，１０，２６，
２７）有代表性的合格药材，以亚油酸甲酯（６号峰）为
参照峰，建立桃仁药材脂肪酸的气相色谱指纹图谱
共有模式，然后采用夹角余弦、相关系数、相似性比
为测度［５］，计算样品与共有模式之间的相似度，来
判断样品质量。
３ 讨论
药材指纹图谱各主要色谱峰的保留时间、峰面
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积、各峰之间的相对比例是指纹图谱的重要参数，在
此基础上进行指纹图谱的评价。此次收集的３４批
桃仁样品，从相对保留时间看，各产地、品种桃仁脂
肪酸气相色谱指纹图谱相似，共有６个主要色谱峰，
主要成分相同，以不饱和脂肪酸油酸甲酯、亚油酸甲
酯为主，其相对含量达９０％以上，其次是棕榈酸甲
酯、硬脂酸甲酯、１８冠６、十六碳烯酸甲酯。
由于桃仁脂肪酸以油酸、亚油酸为主，因此二
者对指纹图谱的贡献率最高，其峰面积与比值对指
纹图谱相似性分析的结果有着较大的影响，对色谱
峰峰面积进行的系统聚类结果与相似度分析结果即
表现出了一定的差异。聚类分析将３４批样品聚为
３类，主要体现为色谱峰的总峰面积的变化，提示
了药材脂肪酸含量的差异，如第１类样本总峰面积
大，脂肪酸含量高；第２类样本总峰面积较小，为
第１类的６９３３％；第３类样本总峰面积最小，仅
为第１类的 ４７４８％。经相似度分析，夹角余弦、
相关系数、相似性比３种测度所得结果趋势一致，
主要体现了桃仁脂肪酸中油酸甲酯／亚油酸甲酯的
比值差异。所建共有模式中油酸甲酯／亚油酸甲酯
的比值为３４８±０２２，但是第２类９号样本中油酸
甲酯／亚油酸甲酯为５６，油酸含量远高于亚油酸，
１号、３３号样本的油酸甲酯／亚油酸甲酯为２０８，
２０４，表现出与共有模式较低的相似性 （相似性
比仅为 ０８１和 ０７９）；而第 １类样本 ２３号、３０
号，第３类样本２号、１６号的油酸甲酯／亚油酸甲
酯的比值接近共有模式，因此表现为与共有模式较
高的相似性，相似性比均高于０９８。
在ＧＣ指纹图谱中，指纹信息量（主要是指色谱
峰的数目）大，但重复性较差，尤其是不同批次的中
药材就更难于重复，本实验将桃仁石油醚提取物甲
酯化后，重点检测桃仁中的脂肪酸类成分，不仅简化
ＧＣ图谱信息，提高重复性，并且突出了有效成分不
饱和脂肪酸油酸及亚油酸量的特征变化，建立了桃
仁脂肪酸ＧＣ指纹图谱。
对中药样品，高分辨能力、高分析速度、高灵敏
度的毛细管气相色谱柱较之填充气相色谱柱有不可
比拟的优势，因此选择毛细管柱。另采用等温洗脱
时分析速度慢，且分离不好，所以采用程序升温，实
验过程中曾预试了梯度升温程序，比较了升温速率
４，８，１０℃·ｍｉｎ－１、终止温度的维持时间５，１０，１５，
２０ｍｉｎ，阶梯程序（一阶、二阶、三阶、四阶），最后选
定的条件，分离、重复性均较好。
桃仁产地多，来源广泛，主要有桃 Ｐｐｅｒｓｉｃａ和
山桃Ｐｄａｖｉｄｉａｎａ２个品种。桃仁中主要含脂质体、
氰苷、氨基酸和蛋白质、挥发油、甾体和黄酮及其糖
苷类化合物和微量元素［６］，其主要成分苦杏仁苷
（ａｍｙｇｄａｌｉｎ），在日本汉方制剂规格试验法中，被规
定为制剂质量评价的指标成分［７］，有报道采用
ＨＰＬＣ法测定不同品种、不同产地、不同炮制品桃仁
中苦杏仁苷的含量［８１０］。本研究以３４批不同品种、
不同产地的桃仁药材为研究对象，进行药材脂肪酸
ＧＣＭＳ指纹图谱研究，以６个共有峰的色谱峰峰面
积，得到３４×６阶的数据矩阵，对其分别进行系统聚
类分析和相似度分析，从而实现对桃仁质量的分类
评价。桃仁无显著的产地和种间差异，其主要成分
相同，样品间的差异体现在主成分油酸与亚油酸的
含量及比值的变化。
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ＧＣＭＳｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎａｌｙｓｅｓｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｐｅａｃｈｓｅｅｄ
ＰＥＩＪｉｎ１，ＹＡＮＹｏｎｇｇａｎｇ２，ＷＡＮＤｅｇｕａｎｇ１，ＭＯＳｈｕｒｏｎｇ１
（１．ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｍｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉａｎｙａｎｇ７１２０４６，Ｃｈｉｎａ）
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ｍｅｎｔｏｎｐｅａｃｈｓｅｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｃａｐｉｌａｒｙｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗａｓａｐｐｌｉｅｄｉｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆａｔｙａｃｉｄｓｉｎｐｅａｃｈｓｅｅｄ，ａｎｄｔｈｅｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅｉｎ
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ｔｉｎｃｔｉｖｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｐｅａｃｈｓｅｅｄｓｆｒｏｍ３４ｖａｒｉｅｔｉｅｓａｎｄｏｒｉｇｉｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＷｉｔｈＧｏｏｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉ
ｔｙ，ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｐｅａｃｈｓｅｅｄｓｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ．
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［责任编辑 王亚君］
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