全 文 ：·研究报告·
ＨＰＬＣＥＬＳＤ法测定痰热清注射液中黄芩苷、熊去氧胆酸、
鹅去氧胆酸３种成分的含量
娄玉霞１，聂桂华２，刘乃强２
（１．河南中医学院，河南 郑州 ４５０００３；
２．河南省食品药品检验所，河南 郑州 ４５０００３）
［摘要］ 目的：建立痰热清注射液中黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法：采用ＨＰＬＣＥＬＳＤ，色谱柱
ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相０５％三氟乙酸水溶液（Ａ）乙腈（Ｂ），线性梯度洗脱；体积流量０５ｍＬ·
ｍｉｎ－１；检测器载气流量２５Ｌ·ｍｉｎ－１，漂移管温度９５℃。结果：黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的线性范围分别为０６１～
４２７，０９３～６５１，０１５～１０５μｇ。平均回收率分别为１００２％，１０１０％，９８７％。结论：此法简便、准确、重复性好，可以用于
痰热清注射液的质量控制。
［关键词］ 痰热清注射液；黄芩苷；熊去氧胆酸；鹅去氧胆酸；含量测定；ＨＰＬＣＥＬＳＤ
［收稿日期］ ２００９０３２５
［通信作者］ 聂桂华，主任药师，主要从事中药质量标准研究。
Ｔｅｌ：（０３７１）６３３８８１６８，Ｅｍａｉｌ：ｈｎｙｊ１１１１＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
痰热清注射液由黄芩、熊胆粉等５味中药组成。
具有清热、解毒、化痰之功效。用于呼吸道感染所致
的急性支气管炎、急性肺炎。方中以清热燥湿，泻火
解毒的黄芩为君药，清热、镇静的熊胆为臣药，助君
药黄芩达清热、解毒之目的。黄芩苷和熊去氧胆酸
有生物活性，而鹅去氧胆酸则对肝脏有一定毒性，故
需要对黄芩苷、熊去氧胆酸进行含量测定，对鹅去氧
胆酸则需限度控制。痰热清注射液中熊去氧胆酸和
鹅去氧胆酸的含量测定未见文献报道。由于该品种
生产工艺复杂，成分较多，鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸
的ＨＰＬＣ含量测定采用紫外检测器干扰严重，笔者
用ＥＬＳＤ检测器测定痰热清注射液中黄芩苷、熊去
氧胆酸、鹅去氧胆酸，为该注射剂提供了一种可靠、
实用的质量控制方法。
１ 材料
Ｗａｔｅｒｓ２６９０四元梯度自动进样色谱系统；Ａｌ
ｔｅｃｈ２０００型ＥＬＳＤ检测器。Ｅｍｐｏｗｅｒ化学工作站。
黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸（中国药品生
物制品检定所，批号分别为 １１０７１５２００２１２，０７５５
９００３，１１０８０６２００３０３）。甲醇、乙腈、三氟乙酸均为
色谱纯；丙二醇为分析纯；水为超纯水。痰热清注射
液均由上海凯宝药业有限公司提供。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件
ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８分析柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ）；流动相０５％三氟乙酸水溶液（Ａ）乙腈（Ｂ），
线性梯度洗脱，０～２４ｍｉｎ，流动相Ａ的比例从９０％递
减到５８％；２４～３０ｍｉｎ，流动相Ａ的比例从５８％递减
到２６％；３０～４０ｍｉｎ，流动相Ａ的比例从２６％递减到
１０％；体积流量０５ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测器参数：载气流
量２５Ｌ·ｍｉｎ－１，漂移管温度９５℃。
２．２ 对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷对照品、熊去氧胆酸对照品、鹅
去氧胆酸对照品各适量，加甲醇和丙二醇各适量，超
声２ｍｉｎ使溶解，用甲醇制成每１ｍＬ含黄芩苷０５０
ｍｇ，熊去氧胆酸０６０ｍｇ，鹅去氧胆酸０１０ｍｇ的混
合对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备
精密吸取供试品２ｍＬ，置２５ｍＬ量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，即得。
２．４ 方法学考察
２．４．１ 线性关系的考察 精密吸取黄芩苷、熊去氧
胆酸和鹅去氧胆酸混合对照品溶液（含黄芩苷０６１
ｇ·Ｌ－１，熊去氧胆酸０９３ｇ·Ｌ－１，鹅去氧胆酸０１５
ｇ·Ｌ－１）１，２，３，４，５，６，７μＬ，注入液相色谱仪，测定
峰面积，以各样品质量浓度的对数为横坐标，以相应
的峰面积积分值的对数为纵坐标，得回归方程，分别
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２００９年７月
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为黄芩苷 Ｙ＝５８４２２＋１４９３５Ｘ（ｒ＝０９９８２）；熊
去氧胆酸 Ｙ＝６０２２８＋１４３１８Ｘ（ｒ＝０９９８７）；鹅
去氧胆酸Ｙ＝６３３５７＋１６３０４Ｘ（ｒ＝０９９９７）。
２．４．２ 方法专属性考察 取方中除黄芩、熊胆粉外
其余药物，按工艺分别制备缺黄芩和缺熊胆粉的阴
性对照药，按供试品溶液制备方法分别制成缺黄芩
和缺熊胆粉的阴性对照溶液。分别吸取黄芩苷、熊
去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合对照品溶液、供试品溶
液及阴性对照溶液各５μＬ，注入液相色谱仪，按上
述条件分析，结果供试液色谱中，在与黄芩苷、熊去
氧胆酸和鹅去氧胆酸对照品色谱相对应的保留时间
有吸收峰，而缺黄芩、熊胆粉阴性对照溶液则在相对
应的保留时间无吸收峰出现，见图１。
Ａ黄芩苷对照品；Ｂ缺黄芩阴性对照；Ｃ熊去氧胆酸对照；Ｄ
鹅去氧胆酸对照；Ｅ缺熊胆粉阴性对照；Ｆ痰热清注射液供试
品。
图１ 痰热清注射液的ＨＰＬＣ图
２．４．３ 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液，
连续进样６次，测定各峰峰面积值，计算黄芩苷、熊去
氧胆酸和鹅去氧胆酸ＲＳＤ分别为１０％，１４％，３１％。
２．４．４ 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分
别在制备后的１，２，３，４，５，６ｈ进样分析，测定各成
分峰面积，计算黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸
ＲＳＤ分别为０５％，１０％，３４％。结果表明供试品
溶液中这３种成分在６ｈ内稳定。
２．４．５ 重复性试验 取样品（批号０７１００６）６份，
制备供试品溶液，按含量测定方法要求测定其含量，
结果黄芩苷、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸质量分数的
ＲＳＤ分别为１０％，１１％，３０％。
２．４．６ 回收率试验 精密吸取样品（批号０７１００１）
１ｍＬ，置２５ｍＬ量瓶中，精密加入混合对照品甲醇
溶液（黄芩苷０５００９ｇ·Ｌ－１；熊去氧胆酸０６００６ｇ
·Ｌ－１；鹅去氧胆酸０１００９ｇ·Ｌ－１）１０ｍＬ，加甲醇稀
释至刻度，按正文下方法进行试验，结果见表１～３。
表１ 黄芩苷加样回收率
测得量／ｍｇ 回收率／％ 平均值／％ ＲＳＤ／％
１０１３０ ９５７９
１０１３７ ９５９２
１０５６１ １０４４０
１００２ ３７
１０４５２ １０２２２
１０３０８ ９９３５
１０５０２ １０３２１
注：样品中量均为５３３２ｍｇ；加入量均为５００９ｍｇ。
表２ 熊去氧胆酸加样回收率
测得量／ｍｇ 回收率／％ 平均值／％ ＲＳＤ／％
１１４６３ ９９４９
１１２７６ ９６３７
１１６５４ １０２６７
１０１０ ３４
１１７５７ １０４３８
１１３８２ ９８１４
１１７７６ １０４７０
注：样品中量均为５４８８ｍｇ；加入量均为６００６ｍｇ。
表３ 鹅去氧胆酸加样回收率
测得量／ｍｇ 回收率／％ 平均值／％ ＲＳＤ／％
２１１０ ９９７０
２０６０ ９４７５
２１４１ １０２８０
９８７ ２７
２１１０ ９９７０
２０９１ ９７８５
２０８８ ９７５４
注：样品中量均为１１０４ｍｇ；加入量均为１００９ｍｇ。
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２．５ 样品测定
精密吸取混合对照品溶液２，６μＬ和供试品溶
液５μＬ，对６批痰热清注射液进行测定，用外标两
点法计算含量，测定结果见表４。
表４ ６批样品质量浓度 ｇ·Ｌ－１
批号 黄芩苷 熊去氧胆酸 鹅去氧胆酸
０７１００１ ５３３２ ５４８８ １１０４
０７１００２ ５５００ ５９４７ １１８１
０７１００３ ５４９２ ５９９７ １０４９
０７１００４ ５５５８ ６２８２ １１７２
０７１００５ ５３８５ ６２７１ １１８９
０７１００６ ５４４４ ６２２３ １０４８
３ 讨论
黄芩苷的含量测定方法文献报道多为高效液相
色谱法［１］，熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸由于在紫外区
无吸收，过去复方中药制剂中二者含量测定方法多
为薄层扫描法［２］，但近年随着高效液相色谱蒸发光
散射检测法的应用，也有采用此法［３］，本研究所建
立的ＨＰＬＣＥＬＳＤ方法，可以同时测定上述 ３种成
分，方法简便、准确、重复性好，可以控制痰热清注射
液的质量。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：２１１．
［２］ 张启明，蒋及年，严克东，等．薄层扫描法测定引流熊胆中熊云
氧胆酸和鹅云氧胆酸的含量［Ｊ］．药物分析杂志，１９９０，１０（２）：
１０２．
［３］ 冯芳，马永建，陈明，等．反相高效液相色谱———蒸发光散射检
测法同时测定人工牛黄中多组分含量［Ｊ］．药学学报，２０００，３５
（３）：２１６．
［责任编辑 周 驰］
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