全 文 ：防风色原酮成分群的分离制备及其含量分析
张 村，肖永庆，李 丽，逄 镇，李桂柳
（中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：以６种色原酮类成分的含量比较研究防风色原酮有效部位的分离、纯化方法。方法：ＨＰＬＣ梯
度洗脱法同时测定６种色原酮类成分的含量，色谱柱为 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱，流动相为甲醇０１％磷酸水梯度洗脱，检
测波长２５４ｎｍ，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３５℃。结果：６个成分在测定范围内线性关系较好（ｒ＞０９９９５），平均回
收率均大于９７％，ＲＳＤ均小于５％。各样品含量差异显著。结论：所建立的方法准确、可靠，防风色原酮成分群的
制备方法以水煎醇沉树脂分离结合硅胶纯化法较好。
［关键词］ 防风；色原酮成分群；分离制备；ＨＰＬＣ；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２３２７６１０４
［收稿日期］ ２００８０７０３
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０５７２３１８）
［通讯作者］ 肖永庆，Ｔｅｌ：（０１０）８４０４０２２１，Ｅｍａｉｌ：ｘ．ｈｅｑｉ＠
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防风为治风之通用药、治疗痹证之常用药，来源
于伞形科植物防风Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａｄｉｖａｒｉｃａｔａ（Ｔｕｒｃｚ．）
Ｓｃｈｉｓｃｈｋ．的干燥根，始载于《神农本草经》，列为上
品，具有解表祛风，胜湿止痉的作用。以防风组方的
“大防风汤”、“独活寄生汤”等治疗风湿痹证效果良
好，在临床上应用广泛。
现代研究表明以升麻苷为代表的防风色原酮及
其苷类成分为防风的主要活性成分，防风提取物及
某些成分具有很好的抗炎、镇痛、解热及抗凝等作
用；特别是以升麻苷和５Ｏ甲基维斯阿米醇苷为主
的色原酮类成分群具有较强的抗炎消肿及解热镇痛
生理活性［１］；Ｏｋｕｙａｍａ等［２］通过研究亦认为防风中
止痛作用最强的是色原酮类。因此，作者进行了防
风色原酮有效部位的提取分离以及纯化方法研究，
并对不同部位中６种色原酮成分的含量进行了测定
分析，为阐明防风的药效物质基础、并为色原酮成分
群的研制开发及其配伍提供实验依据。
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ２６９５Ｓｅｐａｒａ
ｔｉｏｎｓＭｏｄｕｌｅ，Ｗａｔｅｒｓ２９９６ＰＡＤ检测器，Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ３２
数据处理软件）；超声清洗器ＫＱ－５００ＤＢ（昆山市超
声仪器有限公司）；ＥＹＥＬＡ旋转蒸发器；Ｄ－１０１为
天津市海光化工有限公司出品，乙腈为色谱纯，水为
纯净水，使用前均经０４５μｍ滤膜滤过；其他试剂
均为分析纯。
对照品防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷及其苷元、防风
色原酮Ⅱ葡萄糖苷及其苷元、防风色原酮Ⅲ葡萄糖
苷及其苷元（分别记作ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ，ｆ）为本研究室自
防风中分离、鉴定，经 ＨＰＬＣ面积归一化法测定，纯
度达９８％以上，可供含量测定用。
防风采自黑龙江省杜尔伯特蒙古族自治县，经
本所黄璐琦研究员鉴定。
２ 方法与结果
２．１ 防风色原酮有效部位的提取、分离和纯化 ①
防风饮片的含量测定：取防风饮片０５ｇ，精密称定，
置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，密塞，称定
质量，超声提取２０ｍｉｎ，放冷，密塞，再称定质量，用
甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔
滤膜（０４５μｍ）滤过，即得，作为样品 Ａ。②水煎
法：取防风饮片５０ｋｇ，加水煎煮３次（１０倍×１ｈ×
２次，８倍×０５ｈ×１次），滤过，合并３次滤液，浓
缩至适量，作为样品 Ｂ。③醇提树脂纯化法：取防
风饮片５０ｋｇ，以９５％乙醇渗漉提取，提取液浓缩
后，以适量水稀释，上 Ｄ１０１大孔吸附树脂柱
（１０ｃｍ×１２０ｃｍ），先以水洗脱至无色后，继以５０％
乙醇、９５％乙醇洗脱，收集５０％乙醇洗脱部分，减压
浓缩至适量，作为样品 Ｃ。④水煎树脂纯化法：按
②法浓缩水煎液以适量水稀释，上 Ｄ１０１大孔吸附
树脂柱（１０ｃｍ×１２０ｃｍ），先以水洗脱至无色后，继
以５０％乙醇、９５％乙醇洗脱，收集５０％乙醇洗脱部
分，减压浓缩至适量，作为样品 Ｄ。⑤水煎醇沉树
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脂纯化法：按②法水煎液浓缩至适量后，加乙醇使成
７５％乙醇溶液，放置过夜，上清液减压浓缩至适量后
以水溶解，上 Ｄ１０１大孔吸附树脂柱（１０ｃｍ×１２０
ｃｍ），先以水洗脱至无色后，继以５０％乙醇、９５％乙醇
洗脱，收集５０％乙醇洗脱部分，减压浓缩，作为样品
Ｅ。⑥水煎醇沉树脂分离硅胶纯化法：按⑤法收集
５０％乙醇洗脱部分，减压浓缩至浸膏，以适量硅胶拌
匀后，进行硅胶柱色谱，以氯仿甲醇（６∶１）洗脱，收集
Ｆｒ．５～５０流份，挥去溶剂，减压抽干，作为样品Ｆ。
２．２ 供试品溶液的制备 精密称取以上各样品适
量，分别以５０％甲醇溶解配制成不同浓度的溶液，
以微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，供测定分析用。
２．３ 对照品溶液的制备 精密称取防风色原酮Ⅰ
葡萄糖苷及其苷元、防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷及其苷
元、防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷及其苷元等６种对照品
各适量，分别加甲醇制成００４１０，００２９２，００４３８，
０００１８，００２０２，０００３６ｇ·Ｌ－１的溶液，作为对照
品溶液。
２．４ 色谱条件 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇（Ａ）０１％磷酸水（Ｂ）
梯度洗脱，０～１０ｍｉｎ，３５％Ａ，１０～２０ｍｉｎ，３５％～５５％
Ａ，２０～３０ｍｉｎ，５５％Ａ，３０～３２ｍｉｎ，５５％～８０％Ａ，
３２～４５ｍｉｎ，８０％ ～１００％Ａ，４６～５５ｍｉｎ，３５％Ａ；检
测波长 ２５４ｎｍ，柱温 ３５℃；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１。
在此条件下防风样品中防风色原酮Ⅰ等６种对照品
与其他组分均能达到基线分离（图１）。
ａ．防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷；ｂ．防风色原酮Ⅰ；
ｃ．防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷；ｄ．防风色原酮Ⅱ；
ｅ．防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷；ｆ．防风色原酮Ⅲ
图１ 防风色原酮有效部位不同纯化方法ＨＰＬＣ图
２．５ 线性关系考察 精密吸取上述６种对照品溶
液１，５，１０，１５，２０，２５μＬ，注入液相色谱仪中，依法
测定，以进样量（μｇ）为横坐标，峰面积为纵坐标绘
制标准曲线，并计算回归方程，结果见表１。
表１ ６种对照品标准曲线
对照品 线性范围／μｇ 回归方程 ｒ
防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷 ００４１０～１０２５ Ｙ＝１８６３３４９３１Ｘ－１６３３０４８ ０９９９９
防风色原酮Ⅰ ００２９２～０７３０ Ｙ＝３４０８８２８２７Ｘ－９３１４６２ ０９９９９
防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷 ００４３８～１０９５ Ｙ＝２２０１５３２１７Ｘ－１０７９７３８ ０９９９９
防风色原酮Ⅱ ０００１８～００４５ Ｙ＝５９８１１８５０４Ｘ＋４３２３１ ０９９９６
防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷 ００２０２～０５０５ Ｙ＝２９１６１９０３９Ｘ－４１２６０８ ０９９９７
防风色原酮Ⅲ ０００３６～００９０ Ｙ＝５２８４３６４１３Ｘ＋３０１４９４ ０９９９６
２．６ 精密度试验 精密吸取供试品溶液５μＬ，重
复进样５次，依法测定，结果各对照品峰面积积分值
的ＲＳＤ均小于２０％。
２．７ 稳定性试验 精密吸取上述供试液溶液 ５
μＬ，间隔一定时间进样共６次，由峰面积值统计结
果可见样品溶液在２４ｈ内保持稳定。
２．８ 重复性试验 取样品Ａ５份，各约０５ｇ，精密
称定，制备成供试品溶液，依法测定并计算含量，结
果各对照品５次测定值的ＲＳＤ均小于２０％。
２．９ 加样回收试验 精密称定已知含量的样品 Ａ
适量，共５份，分别精密加入各对照品适量，按供试
品溶液制备及测定法操作，进行色谱分析，见表２。
以上方法学考察结果表明，本法简便、准确，重
复性好，可用于样品的含量测定。
２．１０ 不同样品含量分析 精密吸取６种对照品溶
液和防风不同样品溶液各５～１０μＬ，注入液相色谱
仪依法分析测定，结果见表３，图１。
结果防风不同的纯化方法所得样品 Ａ～Ｆ中色
原酮成分的含量差异较大，经树脂柱分离后所得样
品Ｃ、样品Ｄ的含量稍有提高，经醇沉后，色原酮成
分总含量大幅上升，进一步以硅胶柱纯化，所得样品
Ｆ中色原酮成分总含量提高了近５０倍。
３ 讨论
本研究以ＨＰＬＣ首次同时测定防风不同提取分
离工艺中６种色原酮类成分的含量，对检测波长、色
谱流动相等进行了考察，方法学考察结果表明该
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表２ ６种成分加样回收试验
对照品 样品中含量／ｍｇ 加入量／ｍｇ 测得量／ｍｇ 回收率／％ 平均值／％ ＲＳＤ／％
防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷 １７０９４ １６９７６ ３３４８９ ９６６ ９７１ １６
１７１８９ １６９７６ ３３５４９ ９６４
１７１８３ １６９７６ ３３７２３ ９７４
１６９９９ １６９７６ ３３９１０ ９９６
１７０４７ １６９７６ ３３２７６ ９５６
防风色原酮Ⅰ ０１５６２ ０１５２０ ０３０７０ ９９２ ９７５ １７
０１５７２ ０１５２０ ０３０２７ ９５７
０１５７１ ０１５２０ ０３０４８ ９７２
０１５５４ ０１５２０ ０３０６５ ９９４
０１５５８ ０１５２０ ０３０２０ ９６２
防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷 ０６５２１ ０６３８０ １２８９１ ９９８ ９８５ １３
０６５５７ ０６３８０ １２８９５ ９９３
０６５５５ ０６３８０ １２７３１ ９６８
０６４８５ ０６３８０ １２７１０ ９７６
０６５０３ ０６３８０ １２８１０ ９９０
防风色原酮Ⅱ ００１５８ ００１４６ ００２９７ ９５２ ９７５ ２１
００１５９ ００１４６ ００３０１ ９７３
００１５９ ００１４６ ００３０２ ９８０
００１５７ ００１４６ ００２９９ ９６６
００１５８ ００１４６ ００３０５ １００７
防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷 ０２３９９ ０２４１０ ０４７６０ ９８０ ９９１ ０７３
０２４１２ ０２４１０ ０４７９１ ９８７
０２４１１ ０２４１０ ０４８０５ ９９３
０２３８６ ０２４１０ ０４７９２ ９９８
０２３９２ ０２４１０ ０４７８７ ９９４
防风色原酮Ⅲ ００１２８ ００１３０ ００２５３ ９６２ ９７８ ２０４
００１２９ ００１３０ ００２５８ ９９２
００１２９ ００１３０ ００２５９ １０００
００１２７ ００１３０ ００２５５ ９８５
００１２８ ００１３０ ００２５２ ９５４
表３ 防风不同部位样品含量测定（ｎ＝２） ％
样品
浸膏量
／ｇ
生药
／浸膏１）
含水量
／％
防风色原酮／％
ａ ｂ ｃ ｄ ｅ ｆ
总量
／％
折算后
总量／％
Ａ － － ８１３ ０６９７７ ００６３４ ０２５８９ ０００６５ ００９４２ ０００５４ １１２６１ １２２５８
Ｂ ２７０２７ １８５ ４６８７ ０６５４３ ００９５９ ０３４２３ ０００６４ ００９６２ ０００２７ １１９７８ ２２５４４
Ｃ ７６３３６ ６５５ １１８５ ０５１９９ １０２１６ ０５４８５ ０１０１２ ０２９１７ ０２２５６ ２７０８５ ３１５９４
Ｄ ８２３７２ ６０７ ２５６９ ００１８０ １４９６２ ０９２４４ ０１２９０ ００１５２ ０１３６２ ２７１９０ ３６５９
Ｅ ２９４９９ １６９５ ６８７５ ３７１０９ １７８６６ ３５５７０ ００９８４ ０７２１６ － ９８７４５ ３１５９８４
Ｆ ７９１５ ６３１７ ８５５ ２３３６５９ ８１４３７ １６７５５８ ０１７１７ ４１８９２ － ５２６２９３ ５７５５００
注：１）每克浸膏相当于原生药量（ｇ），均以５０ｋｇ计算
方法灵敏可靠、重现性好，可用于防风色原酮类成分
有效部位不同样品的含量比较测定。
防风色原酮及其苷类成分为防风的主要活性成
分，该类成分群以防风色原酮Ⅰ及其葡萄糖苷、防风
色原酮Ⅱ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷含量较
高，多为水溶性成分。因此，本研究首先采用水煎煮
法提取，结合大孔树脂纯化与醇提法进行比较，从测
定结果来看（表３），以水煎煮法较高。同时对树脂
纯化的不同浓度乙醇（５０％，７５％，９５％）进行了考
察，结果以５０％乙醇洗脱部位防风色原酮成分群含
量最高，故确定了大孔树脂的３个洗脱部位。
由于水煎法多糖类、蛋白等成分的溶出较多，为
了进一步纯化有效部位，水煎煮液以７５％乙醇沉淀
后再进行大孔树脂分离，结果该方法６个色原酮类
成分总含量有大幅度提高，较未醇沉前提高了近１０
倍；再以硅胶柱纯化，该部位６个色原酮类成分总含
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量大于５７％。
防风的止痛作用是其多种化合物共同作用的结
果，其各种成分含量的改变，尤其是在方剂中与其他
药物的不同配伍，会使其止痛作用发生质变和量变。
本研究结果为阐明防风色原酮类成分群的药效物质
基础提供了实验依据。
［参考文献］
［１］ 薛宝云，李 文，李 丽，等．防风色原酮苷类成分的药理活性
研究［Ｊ］．中国中药杂志，２０００，２５（５）：２９７．
［２］ ＥｍｉＯｋｕｙａｍａ，Ｔｅｔｓｕｙａｈａｓｅｇａｗａ，ＴａｋａｍｉｔｓｕＭａｔｓｕｓｈｉｔａ，ｅｔａｌ．
ＡｎａｌｇｅｓｉｃｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＳａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａＲｏｏｔ（Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａｄｉｖａｒ
ｉｃａｔａ）［Ｊ］．ＣｈｅｍＰｈａｒｍＢｕｌ，２００１，４９（２）：１５４．
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｈｒｏｍｏｎｅｓｆｒｏｍ
Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａｄｉｖａｒｉｃａｔａ
ＺＨＡＮＧＣｕｎ，ＸＩＡＯＹｏｎｇｑｉｎｇ，ＬＩＬｉ，ＰＡＮＧＺｈｅｎ，ＬＩＧｕｉｌｉｕ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭａｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｃｈｒｏｍｏｎｅｓｉｎｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｒｏｍＳａｐｏｓｈ
ｎｉｋｏｖｉａｄｉｖａｒｉｃａｔａ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｓｉｘｃｈｒｏｍｏｎｅｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｂｙＨＰＬＣｏｎａＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎａｔ３５
℃ ｗｉｔｈｔｈｅｍｅｔｈａｎｏｌ０１％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈｒａｓｅ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２５４ｎｍａｎｄ
ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔ：Ａｌｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｃｏｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｏｆｔｈｅｓｉｘｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗａｓｏｖｅｒ０９９９５ａｎｄｔｈｅａｖ
ｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅｎｏｔｌｅｓｓｔｈａｎ９７％ （ＲＳＤ＜５％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅｐｒｏ
ｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｂｅｔｅｒｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｉｓｗａｔｅｒｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄｅｔｈａｎｏｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｗｉｔｈｒｅｓｉｎｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｓｉｌｉｃａ
ｇｅｌｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａｄｉｖａｒｉｃａｔａ；ｃｈｒｏｍｏｎｅｓ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００８０３１１
［通讯作者］ 聂黎行，Ｔｅｌ：（０１０）６７０９５３１３，Ｅｍａｉｌ：ｎｉｅｌｉｘｉｎｇ＠
１６３．ｃｏｍ
４种中药注射液中重金属及有害元素残留量
检测方法研究
聂黎行，金红宇，王钢力，田金改，林瑞超
（中国药品生物制品检定所，北京 １０００５０）
［摘要］ 目的：建立了４种中药注射液中重金属及有害元素的残留量的测定方法。方法：采用石墨炉原子吸
收分光光度法测定铅、镉、铜，原子荧光法测定砷、汞。对样品的前处理方法进行了优化。结果：５种重金属元素的
回收率在９１％～１１２％，精密度＜２％。铅、镉、铜、砷、汞的检出限分别为０２８，００１４，０４９，０１９，００６１μｇ·Ｌ－１。
结论：方法简便、灵敏、准确、可靠，值得推广。
［关键词］ 重金属及有害元素；中药注射液；原子吸收分光光度法；原子荧光法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２３２７６４０４
中药作为天然药物，因毒副作用小、疗效好而受
到人们的青睐，但由于中药在栽培、贮存、炮制等过
程中可能不同程度受到有毒有害物质的污染，其安
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第３３卷第２３期
２００８年１２月
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