全 文 ：０４６％，表明样品在２４ｈ内稳定。
２．８ 回收率试验 精密称取已知含量的样品０１３
ｇ５份，各加入一定量的黄芩苷对照品，依法测定含
量并计算回收率，结果见表１。
表１ 黄芩苷回收率（ｎ＝５）
取样量
／ｇ
样品中含量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０１３１ ３６９８ ５６６４ ９９４
０１３１ ３６９８ ５６２４ ９８７
０１３３ ３７５５ ５７１４ ９９３ ９９２ ０３２
０１３４ ３７８３ ５７５４ ９９５
０１３７ ３８６８ ５８２６ ９９３
注：加入量均为２０００ｍｇ
２．９ 样品测定 取样品，按样品溶液的制备方法，
每个批号平行制备 ３份；同法制备对照品溶液，测
定，记录色谱图，按外标法计算含量，结果见表２。
表２ 样品中黄芩苷含量（ｎ＝３）
批号 含量／ｍｇ／片 ＲＳＤ／％
０７０２１３ ８４２ ０９５
０７０２１５ ８５５ ０２６
０７０２１７ ８４３ ０９２
３ 讨论
方中蒲公英虽为君药，但主要有效成分咖啡酸
含量很低，且在光照、湿热环境下不稳定，建立其为
指控标准难度较大；方中黄芩为臣药，用量较大，其
主要有效成分为黄芩苷，含量高。现代药理研究表
明［２］，黄芩苷有抗菌消炎等作用，为蒲地蓝消炎片
中的有效成分之一，故将黄芩苷作为该制剂的质量
控制指标。
在提取溶剂的选择上，分别对６０％，７０％，８０％
的甲醇、乙醇进行了比较。结果证实，７０％的甲醇提
取效率最高，因此本实验选择其为黄芩苷的提取溶
剂。
超声提取的时间选择上，考察了２０，３０，４０，５０
ｍｉｎ，结果证实，超声提取４０ｍｉｎ与５０ｍｉｎ差异不
大，因此本文选择４０ｍｉｎ为最佳超声提取时间。
［参考文献］
［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准·中药成
方制剂．第３册［Ｓ］．１９９１：１８７．
［２］ 张建春，张 华，施 瑛，等．黄芩苷的研究近况［Ｊ］．时珍国医
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［责任编辑 李 禾］
［收稿日期］ ２００７１１１３
［基金项目］ 国家自然科学基金重点资助项目（２０４３２０３０）
［通讯作者］ 白焱晶，Ｔｅｌ：（０１０）８２８０１５９２，Ｅｍａｉｌ：ｎｍｅｃｈｅｍ
＠ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
高效液相测定不同产地鸡血藤药材中黄酮类化合物的含量
郑 岩１，王 １，王京丽２，赵玉英１，白焱晶１
（１北京大学 药学院 天然药物学系，北京 １０００８３；
２总参管理保障部 北极寺老干部服务管理局 门诊部药房，北京 １０００９１）
鸡血藤ＣａｕｌｉｓＳｐａｔｈｏｌｏｂｉ为豆科密花豆属植物密
花豆ＳｐａｔｈｏｌｏｂｕｓｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓＤｕｎｎ的干燥藤茎，冬、秋二
季采收，切片，晒干，是《中国药典》２００５年版收载的
中药，具有补血、活血、舒筋活络的功效。用于治疗月
经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪，风湿痹痛等症［１］。现代
药理研究表明密花豆具有使红细胞、血红蛋白和白细
胞上升，扩张外周血管、增加器官血流量，延长血凝时
间，抑制血小板凝聚和降血压的作用；对免疫系统具
有双向调节作用，还具有降低血脂、抗动脉粥样硬化
作用［２５］。文献报道密花豆属植物主要含有黄酮、香
豆素、蒽醌和三萜类化合物［６１０］。作者从中分离得到
了３羟基９甲氧基紫檀烷、芒柄花素、大豆苷元、７，
４′二羟基３′甲氧基异黄酮和奥洛波尔等化合物。但
《中国药典》（２００５年版）一部收载的鸡血藤质量控制
方法只有以芒柄花素为对照品，采用 ＴＬＣ方法进行
品种鉴定的内容。有文献报道以表儿茶素为对照品
进行鸡血藤药材ＨＰＬＣ含量测定［１１］。本研究建立了
ＨＰＬＣ测定３羟基９甲氧基紫檀烷和芒柄花素的方
法，比较了不同产地的鸡血藤中这两个化合物的含
量，为鸡血藤的质量评价提供了更为可靠的依据，为
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第３３卷第１５期
２００８年８月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １５
Ａｕｇｕｓｔ，２００８
新版《中国药典》建立规范的鸡血藤中药材质量标准
提供参考。
１ 材料
ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－１０ＡＴ液相系统，ＳＰＤ－Ｍ１０Ａ
二极管阵列检测器，ＳＣＬ－１０Ａ系统控制器，ＣＴＯ－
６Ａ柱温箱。１／１万电子分析天平（美国 Ｄｅｎｖｏｒ），
１／１０万电子分析天平（美国Ｄｅｎｖｏｒ）。
对照品３羟基９甲氧基紫檀烷和芒柄花素均
从鸡血藤中分离纯化，经 ＵＶ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ鉴
定其结构，经过ＨＰＬＣ测定，面积归一化法计算纯度
大于 ９８％［１２］。色谱甲醇（天津市西华特种试剂
厂），磷酸（北京化工厂）。中性氧化铝固相萃取柱
（１５０目，０１７ｇ·ｍＬ－１）为美国ＡＧＥＬＡ公司产品。
药材收集于全国不同地区，详见表１，药材由北
京大学药学院陈虎彪及郑俊华教授鉴定，为豆科密
花豆属植物密花豆Ｓ．ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ的藤茎。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＲＰ１８色谱柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相 甲醇０１％磷酸水溶液
（５３∶４７）；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３０℃；检测波长３
羟基９甲氧基紫檀烷２８０ｎｍ，芒柄花素２５０ｎｍ。
２．２ 供试品溶液的制备 精确称量过４０目筛的鸡
血藤粉末１０００ｇ，１００ｍＬ甲醇为溶剂，浸泡０５ｈ，回
流提取２次，每次１ｈ，提取液滤过后回收至１０ｍＬ，加
水２０ｍＬ，再回收溶剂至２０ｍＬ，每次用等体积（２０
ｍＬ）醋酸乙酯萃取，萃取３次，合并醋酸乙酯层，回收
溶剂至干，将其用２ｍＬ醋酸乙酯甲醇（１∶１）溶解，后
经中性氧化铝固相萃取柱，用４０ｍＬ甲醇洗脱，洗脱
液回收溶剂至干，用甲醇四氢呋喃（４∶１）定容至２
ｍＬ，０４５μｍ滤膜滤过，作为供试品溶液。
２．３ 对照品溶液的制备 精确称取３羟基９甲氧
基紫檀烷对照品２５０ｍｇ，用色谱甲醇溶解，定容至
２５ｍＬ量瓶中，浓度为１０ｍｇ·ｍＬ－１，作为储备液。
精确称取芒柄花素对照品５００ｍｇ，色谱甲醇溶解，
定容至５ｍＬ量瓶中，质量浓度为１０ｍｇ·ｍＬ－１，作
为储备液。
２．４ 标准曲线的制备 将３羟基９甲氧基紫檀烷
储备液逐级稀释为０８，０５，０２５，０１，００１，０００２，
０００１ｇ·Ｌ－１的对照品溶液，分别吸取对照品溶液
各２０μＬ进样，依照２．１项下色谱条件测定，以对照
品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得到３羟基
９甲氧基紫檀烷对照品的标准曲线，其回归方程为
Ｙ＝１２１×１０６Ｘ＋１４０×１０５，Ｒ２＝１０００，线性范围
００４～２０μｇ。将芒柄花素储备液逐级稀释为０８，
０５，０２５，０１，００８，００５，００２，００１，０００８，
０００５，０００１，００００５，００００１ｇ·Ｌ－１的对照品溶
液，分别吸取对照品溶液各２０μＬ进样，依照２．１项
下色谱条件测定，对照品进样量为横坐标，以峰面积
为纵坐标，得到芒柄花素对照品的标准曲线，其回归
方程为 Ｙ＝５７９９５×１０６Ｘ＋２３０１３×１０５，Ｒ２＝
０９９９９，线性范围为００２～１０μｇ。
２．５ 精密度试验 按２．２项下操作制备１份供试品
溶液，日内精密度连续进样５次，日间精密度每天进
样１次，连续３ｄ，每次２０μＬ，依照２．１项下测定，３
羟基９甲氧基紫檀烷日内精密度ＲＳＤ１０％，日间精
密度ＲＳＤ２７％；芒柄花素日内精密度ＲＳＤ２２０％，
日间精密度ＲＳＤ３０％，表明本方法精密度较好。
２．６ 重复性试验 按２．２项下操作制备５份供试
品溶液，分别进样２０μＬ，依照２．１项下测定，３羟
基９甲氧基紫檀烷含量 ＲＳＤ３０％，芒柄花素 ＲＳＤ
２６％，表明该方法重复性良好。
２．７ 稳定性试验 按２．２项下操作制备供试品溶
液，分别在供试品制备后 ０，２，４，８，１２，２４，４８ｈ进
样，每次进样２０μＬ，依照２．１项下方法测定，３羟
基９甲氧基紫檀烷 ＲＳＤ１４％，芒柄花素 ＲＳＤ
２６％，表明供试品溶液稳定性良好。
２．８ 加样回收率试验 精密称取已知含量的鸡血
藤药材 ０５０００ｇ，分别加入约药材含量的 ５０％，
１００％，１５０％对照品溶液，按２．２项下操作制备供试
品溶液，每个浓度平行３份，依照２．１项下方法测
定，３羟基９甲氧基紫檀烷的平均回收率１０２３％，
ＲＳＤ５５％，芒柄花素的平均回收率 ９８５％，ＲＳＤ
９１％，符合含量测定中对加样回收率的要求，实验
结果见表１。
表１ ３羟基９甲氧基紫檀烷和芒柄花素加样回收率（ｎ＝３）
对照品
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
ＲＳＤ
／％
３羟基９甲氧基紫檀烷 ０６８５ ０３２５ １０２７ １０５５ ４４
０６８５ ０６５０ １３６０ １０４０
０６８５ １０００ １６５８ ９７３
芒柄花素 ００６１ ００３０ ００９１ １０２８ ５５
００６１ ００６０ ０１２１ １００５
００６１ ００９０ ０１４４ ９２４
２．９ 样品的测定 分别取不同产地的鸡血藤药材，
按照２．２项下方法制备供试品溶液，分别吸取 ２０
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μＬ，按照２．１项下方法检测；分别吸取０２５ｇ·Ｌ－１
的３羟基９甲氧基紫檀烷对照品溶液和 ０１ｇ·
Ｌ－１的芒柄花素对照品溶液各２０μＬ，用同样的高效
液相色谱条件检测。根据测得的样品中各对照品的
峰面积，采用外标一点法，计算得到各样品所含对照
品的含量，结果见表２，色谱见图１，２。
表２ １９个地区鸡血藤药材３羟基９甲氧基紫檀烷和
芒柄花素质量分数
Ｎｏ 购买／产地
质量分数／％
３羟基９甲氧
基紫檀烷
芒柄花素
１ 广西（采集） ００１８３ ０００３７
２ 北京／广西 ００１４１ ０００５６
３ 云南／云南腾冲 ０００６４ ０００２９
４ 山东临沂 ００２４７ ０００３９
５ 重庆 ００２３３ ０００４７
６ 郑州／广西 ００７２１ ０００６７
７ 江苏济源 ００２５６ ０００３２
８ 江西 ００４３９ ０００６６
９ 安徽芜湖 ００３４０ ０００８９
１０ 新疆乌鲁木齐 ００２４６ ００１０７
１１ 山西安国 ００２３０ ０００４７
１２ 江西南昌／安徽毫州 ００１２５ ０００２２
１３ 江西吉安／广西 ００２４４ ０００２６
１４ 广西桂林 ０００６７ ０００５４
１５ 广西南宁 ００１９８ ０００４６
１６ 湖北武汉 ０００４２ ０００２０
１７ 广西防城大?乡 ００２７０ ０００２４
１８ 广西金秀县六巷乡 ０１１２２ ００１１９
１９ 北京／广西 ００２０４ ０００３５
Ａ对照品；Ｂ样品；１３羟基９甲氧基紫檀烷；
图１ ３羟基９甲氧基紫檀烷对照品
与样品ＨＰＬＣ图（２８０ｎｍ）
Ａ对照品；Ｂ样品；１芒柄花素
图２ 芒柄花素与样品ＨＰＬＣ图（２５０ｎｍ）
３ 讨论
芒柄花素为异黄酮类化合物，３羟基９甲氧基
紫檀烷为紫檀素类化合物，其紫外吸收不同，若选择
相同波长进行检测，则不能准确测定２个化合物的
含量，故根据２个化合物吸收峰的不同选择了双波
长进行检测。分析ＨＰＬＣ二极管阵列紫外全波长扫
描图谱以及参考对照品的紫外光谱，确定２５０ｎｍ为
芒柄花素吸收峰的检测波长，２８０ｎｍ为３羟基９甲
氧基紫檀烷吸收峰的检测波长。
检测结果表明，芒柄花素含量不高，含量范围约
为０００２０％ ～００１１９％；３羟基９甲氧基紫檀烷
含量范围约为０００６４％～０１１２２％，含量较高，稳
定性好，且为特征性成分，所以采用该化合物作为质
量控制用对照品是较好的选择。
作者曾探索同时测定３羟基９甲氧基紫檀烷、
芒柄花素和表儿茶素３个化合物的含量，但不可行，
探索试验结果表明，如供试样品用回流方法制备，表
儿茶素由于对热不稳定，含量特低，但如用室温短时
间超声提取，３羟基９甲氧基紫檀烷和芒柄花素由
于结构中有甲氧基，提取效率极低。
［参考文献］
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［责任编辑 王亚君］
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第３３卷第１５期
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