全 文 ：灵芝中灵芝多糖的含量测定研究
戚雁飞
k浙江省药品检验所 o浙江 杭州 vtssswl
≈收稿日期 ussy2st2ux
≈通讯作者 戚雁飞 oר¯ }ksxztl{ywyuszx
灵芝为多孔菌科真菌赤芝 Γανοδερµα λυχιδυµ
k¨¼¶¶1 ¬¨ ƒµ1l¤µ¶·1 或紫芝 Γανοδερµα σινενσε «¤²1
÷∏ ·¨«¤±ª的干燥子实体 ∀其化学成分复杂 o目前
已知主要含有多糖k肽l类 !三萜类 !核苷类等≈t ∀灵
芝多糖类具有抗肿瘤作用 !免疫调节作用 !降血糖 !
降血脂 !抗氧化和抗衰老等作用 o被认为是灵芝扶正
固本的重要有效成分≈u ∀本研究建立了灵芝多糖的
含量测定方法 ∀本实验采用分光光度法 o以葡萄糖
为对照品 o经硫酸蒽酮显色后测定其吸收度 ∀通过
方法学验证 o重复性良好 o经药典会审批 o本方法已
被收入5中国药典6ussx年版一部灵芝项下 ∀
1 仪器与试药
岛津 ∂ p uys分光光度计 ~蒽酮 !硫酸 !乙醇等
试剂均为分析纯 ∀葡萄糖对照品由中国药品生物制
品检定所提供 ∀灵芝样品共 {批 o分别来自浙江 w
批 !广西 u批 !四川 !福建各 t批 o经浙江省药品检验
所郭增喜副主任中药师鉴定 ∀
2 方法与结果
211 灵芝多糖的提取 取药材粉末 u ªo精密称定 o
置索氏提取器中 o加水 |s °o加热回流提取至提取
液无色 o将提取液转移至 tss °量瓶中 o加水稀释
至刻度 o摇匀 o精密吸取 ts °o加入乙醇 txs °o摇
匀 ow ε 放置 tu «o取出 o离心 o弃去上清液 o沉淀加
水溶解并定量转移至 xs °量瓶中 o用水稀释至刻
度 o摇匀 ∀
212 条件的选择
21211 最大吸收波长的选择 分别取经硫酸蒽酮
显色后的无水葡萄糖对照品液和灵芝供试品液 o于
wss ∗ zss ±°扫描 o结果对照品液和供试品液均在
yux ±°处有最大吸收 ∀故选择 yux ±°为测定波长 ∀
21212 另对加入硫酸蒽酮的量和反应时间进行了
比较 o显示此二者对结果影响不大 o最终选择加入 y
°o反应 tx °¬±∀
213 标准曲线的绘制 精密称取 tsx ε 干燥至恒
重的葡萄糖对照品适量 o加水制成每 t °含 s1t °ª
的溶液 o作为对照品溶液 ∀分别精密吸取对照品溶
液 s1u os1w os1y os1{ ot1s ot1u °置 ts °具塞试管
中 o加水至 u1s °o精密加入硫酸蒽酮溶液k精密称
取蒽酮 s1t ªo加 {s h的硫酸溶液 tss °使溶解 o即
得ly °o摇匀 o置沸水浴中加热 tx °¬±o取出 o放入
冰浴中冷却 o以相应的试剂为空白 o在 yux ±°的波
长处测定吸收度 o以吸收度为纵坐标 o含量为横坐
标 o绘制标准曲线 ∀其回归方程为 }Ψ u1zuw { Ξ n
s1sst t oΡu s1||| v ∀
214 测定方法 精密量取灵芝提取液 u °o置 ts
°具塞试管 o照标准曲线制备项下的方法 o自/精密
加入硫酸蒽酮溶液 y °0起同法操作 o测定吸收度 ∀
215 显色稳定性 取同一灵芝的提取液 o按上述测
定法显色后 o每隔一定时间测定吸收度 o结果表明在
tt «内稳定 ∀
216 显色重复性 取同一灵芝的提取液 o按上述方
法分别显色 y份 o测定吸收度 o ≥⁄t1u h ∀
217 重复性实验 取同一批样品 o按前文所述方法
分别提取 y份 o显色后测定多糖含量 o结果多糖的平
均含量为 s1z{ h o ≥⁄u1v h k ν yl ∀
218 样品测定 结果见表 t ∀
表 t 灵芝多糖含量
样品编号 产地 含量r h
t 福建 s1{w
u 广西 s1xy
v 广西南宁 s1yy
w 四川 t1ss
x 浙江中医学院饮片厂 s1{s
y 浙江凯仑 s1y{
z 浙江杭州中药饮片厂 s1yy
{ 浙江龙泉 s1z{
3 结果与讨论
311 灵芝多糖的提取曾比较了沸水浴回流和索氏
提取 o经醇沉后 o回流提取的多糖沉淀极少 o故选择
索氏提取至提取液无色以使多糖提取完全 ∀此外还
对醇沉时不同的乙醇含量进行了考察 o结果显示乙
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第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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醇含量达到 |x h时多糖沉淀最多 o乙醇含量为 |s h
时沉淀的多糖与之接近k偏差小于 u1s h l o为节省
溶剂 o选择后者 ∀本方法因无多糖对照品而以葡萄
糖为对照品 ∀多糖提取采用水提醇沉方法 o葡萄糖
用乙醇无法使其沉淀 o故未进行回收率考察 ∀
312 灵芝中的三萜类成分因未找到合适的灵芝酸
对照品 o未测定其含量 ∀核苷类是有广泛活性的一
类水溶性成分≈v o故又测定了核苷类中腺苷和尿苷
的含量 o结果表明其含量在各批间差异较大 o且与赤
芝和紫芝的性状无必然的联系 o而多糖的含量较为
接近 o故认为采用灵芝多糖作为含量测定的指标 o用
于灵芝的质量控制更为合理 ∀
≈参考文献
≈t 邓海林 o吴佩颖 o王建新 1 灵芝的研究进展 1 时珍国医国药 o
ussx otyksul }twt1
≈u 单卫华 1灵芝菌发酵液制剂中灵芝多糖及总糖含量测定 1 时
珍国医国药 ousss ottk|l }z|z1
≈v 肖培根 1 新编中药志 1 第三卷 1 北京 }化学工业出版社 o
ussu1{zw1 ≈责任编辑 李 禾
≈收稿日期 ussy2su2s|
≈通讯作者 杨锁成 oר¯ }ksv|wl{uz|zzs
正交试验在胃肠炎类中药复方筛选中的应用
杨锁成
k河南省周口市中医院 o河南 周口 wyysssl
中药复方的配伍组合是医生根据病人的病情 o
随证加减 o谴药组方 ∀但组方全凭医生的经验 o带有
很大的随意性 o临床上常常出现相同的病证因医生
不同 o组方差异很大 ∀作者采用正交试验 o通过能代
表中医病症的药理指标 o对治疗肠胃炎的中药处方
进行研究 o筛选和验证药物在处方中的必要性和重
要性 o以及最佳配伍用量 o从而为临床用药和中药复
方新药的开发提供能验证处方有效性的方法 ∀
1 材料
动物 }昆明种小鼠 o购于河南医科大学实验动物
中心 ∀药物 }将所选处方中的黄芪 !补骨脂 !黄连 !地
榆 !金银花 !煨木香等 y味药物各设计 v个临床剂量
水平 o按 z因素 v水平 t{kvzl正交表设计 t{个试
验 o制备 t{个方药的水煎液 o制备的条件参数相同 o
比重均为 tΒt ∀水平因素见表 t ∀致炎剂k二甲苯l ∀
电子天平k日本日立公司l ~人白细胞 !°≥k脂多糖l !
2{k白介素 {l试剂盒 ∀
2 方法与结果
211 给药途径及剂量 灌胃给药 o每组均按临床生
药用量的 tx倍计算 o模型对照组给予同体积的蒸馏
水 ∀
212 耳肿胀实验≈t 取健康雄性小鼠 u{x只 o按体
表 t 因素水平
水平
Α
黄芪
rª
Β
补骨脂
rª
Χ
黄连
rª
∆
地榆
rª
Ε
金银花
rª
Φ
煨木香
rª
t us tx tu us us tu
u tx ts | tx tx |
v ts x y ts ts y
重随机分为 t|组 o每组 tx只 o每天按人日服总量的
tx倍 o给予正交试验各组方药 o对照组给予相同体
积的蒸馏水 o连续给药 x §o每日 t次 o在末次给药 t
«后 o以二甲苯涂于小鼠左耳的前后 u面ktss h二
甲苯 s qsu °r鼠l o隔 w «后颈椎脱臼处死 o沿耳廓
基线剪下两耳 o用 | °°直径的打孔器分别在同一
部位打下耳片 o用电子天平称重 o以每鼠打下的左耳
片重减去右耳片重为肿胀度 o以肿胀度除去右耳重
为肿胀率 o进行统计学处理 ∀
213 体外实验 方法与步骤 }人血白细胞 n °≥ n
药物 ) ψ 共同孵育一定时间 ) ψ 收集上清 o用
∞≥法测上清中 2{的含量 ∀并计算抑制率 ∀
抑制率k h l 对照样品 2{含量 p样品 2{含量对照样品 2{含量 ≅ tss h
214 正交试验结果 见表 u ∀
215 统计分析 根据本研究目的 o指标 Ψu要比 Ψt
重要 o权重系数宜分别取 s qy和 s qw o为了在统一标
准下加权评比 o分别把两项最好的指标定为 tss分 o
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