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不同产地独一味中苯乙醇苷类的含量测定与品质评价



全 文 :[1] 娄志红,王喜军,孟祥才,等.多倍体防风的质量和产量研究
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[责任编辑 王亚君]
不同产地独一味中苯乙醇苷类的含量测定与品质评价
张 凤1,孙连娜2,陈万生1
(1.第二军医大学 附属长征医院 药学部,上海 200003;
2.第二军医大学 药学院 生药学教研室,上海 200433)
[收稿日期] 20071009
[基金项目] 上海SK研究与发展基金(2004007t)
[通讯作者] 陈万生,Tel:(021)6361010973711,Email:
chenws@vnet.citiz.net
  独一味Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo为唇
形科独一味属植物,主要分布于西藏、青海等省,为
藏族和蒙古族等民间传统常用草药[1]。具有消炎
止痛,活血化瘀等功效,用于治疗跌打损伤,外伤出
血,筋骨疼痛,骨质疏松等症[2]。独一味主要含有
黄酮类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类等成分[3]。目前
尚未见有关独一味中苯乙醇苷类含量测定方法的报
道。作者建立了独一味中苯乙醇苷类的HPLC含量
测定方法,并且分别对不同产地的独一味药材进行
了苯乙醇苷类的含量测定和比较,为药材的选优及
临床用药提供一定的参考依据。
1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱(HPLC)仪(包括二
元泵系统,自动进样器,可变波长检测器(VWD),
Agilent1200色谱工作站);Sartorius电光分析天平
(最大载荷210g,分度值001mg);粉碎机(DJ-
04B灵巧型,上海淀久中药机械公司)。毛蕊花糖苷
和连翘酯苷(由本课题组从独一味中分离纯化,经
光谱学和波谱学分析鉴定其结构,液相色谱鉴定纯
度分别为993%和999%);甲醇为色谱纯;水为双
蒸水。
独一味药材采自6个不同产地,经第二军医大
学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定为唇形科植
物独一味L.rotata。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Aglilent1200HPLC系统,Diamon
silC18色谱柱(46mm×250mm,5μm)。流动相为
甲醇27%醋酸水溶液(30∶70),流速为10mL·
min-1。VWD检测器,检测波长为320nm。柱温为
30℃,检测时间为30min。进样量为20μL。
2.2 样品的制备 独一味6种样品各自取全草适
量,于60℃烘干48h,粉碎,过60目筛。
2.3 对照品溶液的配制 精密称取对照品毛蕊花
糖苷,连翘酯苷各10mg分别置10mL量瓶中,以甲
醇溶解并定容,配制成102,106mg·mL-1的对照
品储备液,4℃保存。
2.4 样品溶液的配制 取独一味6种样品各10g,
精密称定,放入 500mL圆底烧瓶中,加入 200mL
70%甲醇溶液,加热回流3次,每次回流时间分别为
2,15,15h,合并回流液,过滤,减压回收适度,移
入100mL量瓶中,70%甲醇溶液定容,4℃保存。
各样品1mL用045μm微孔滤膜过滤,精密量取
续滤液05mL于1mL量瓶中,加70%甲醇稀释至
刻度,静置4℃保存,作为样品待测。对照品与样品
的色谱图见图1。
2.5 线性关系考察 将对照品储备液分别稀释得
到25,50,100,250,500μg·mL-1的对照品溶液,按
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第33卷第11期
2008年6月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 11
June,2008
  
图1 对照品与样品色谱图
A对照品;B样品;1连翘酯苷;2毛蕊花糖苷
2.1色谱条件进样分析,记录图谱及色谱参数,以峰
面积为纵坐标(Y),对照品质量浓度为横坐标(X),
得回归方程分别为:Y1=36008X1-31505,r1=
09996;Y2=24445X2-22876,r2=09996。结
果表明二者在25~500μg·mL-1线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液,重复
进样6次,毛蕊花糖苷、连翘酯苷峰面积的 RSD分
别为070%,145%。
2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液,室温
放置24h,分别于0,2,4,6,8,24h进样分析,记录
峰面积,其RSD分别为140%,323%,表明样品溶
液在24h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一独一味样品粉末(甘肃
玛曲)10g,5份,精密称定,按供试品溶液处理,进
行含量测定,测得的毛蕊花糖苷和连翘酯苷含量的
RSD分别为075%,104%。
2.9 加样回收率试验 取同一独一味样品粉末
(甘肃玛曲)10g,6份,精密称定,分别精密加入对
照品毛蕊花糖苷、连翘酯苷,按供试品溶液处理,进
行含量测定,计算毛蕊花糖苷回收率9521%,RSD
164%;连翘酯苷回收率为9820%,RSD053%。
表明二者回收率良好。
2.10 样品含量测定 按2.1色谱条件,对供试品
溶液进行含量测定,结果见表1。
3 结果与讨论
《中国药典》(2005年版一部)以木犀草素含量
作为独一味药材质量评价指标,作者的研究初步表
明,独一味中的苯乙醇苷类成分具有镇痛活性。因
此,在参照药典考察木犀草素含量的基础上,本试验
采用HPLC法测定了6个产地独一味全草毛蕊花糖
苷和连翘酯苷的含量,以其含量为指标,考察不同产
  表1 不同来源独一味中毛蕊花糖苷和连翘酯苷含量
(n=3)
编号 来源 毛蕊花糖苷/% 连翘酯苷/%
1C 四川石渠 0165 0206
2C 四川理塘 0025 0030
3C 青海久治 0152 0104
4C 青海玛沁 0152 0129
5C 西藏拉萨 0125 0120
6C1) 甘肃玛曲 0803 0625
  注:1)为使6C的测定结果落在线性范围之内,将6C稀释5倍
后进行含量测定
地独一味的品质差异。这也是首次测量苯乙醇苷类
成分含量的报道。
本研究考察了3种常用的提取方法的效果。结
果表明,冷浸、超声提取、热回流3种方法所得的滤
液中,在同样的色谱条件下分析得到的峰面积,后者
明显大于前两者,故试验采取热回流法。
含量测定结果显示,不同产地独一味中毛蕊花
糖苷和连翘酯苷的含量也存在较大差异,且二者含
量存在一致性,其中四川理塘含量最低,甘肃玛曲含
量最高。独一味的生长环境独特,生长于海拔3000
m以上的高原或高山上强风化的碎石滩中或生长在
盘山冰峰脚下的石质高山草甸、河滩草地等,分布于
我国西藏、青海、云南、四川、甘肃等省区。本试验所
用药材采自不同产地,含量差异可能与产地的不同
等因素有关。
目前随着奇正炎痛贴、独一味片、胶囊及颗粒剂
等的大量生产,独一味药材已供不应求[4]。对独一
味化学成分的研究表明其主要含有黄酮类、环烯醚
萜类、苯乙醇苷类等化合物,但未见有关于镇痛活性
的物质基础研究报道。目前《中国药典》(2005年版
一部)只以木犀草素含量作为不同产地独一味的品
质评价指标,试验提示,以多种成分为指标并结合药
材的外观性状、产量及当地自然环境条件建立药材
的质量评价标准才更具科学性。
[参考文献]
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[责任编辑 王亚君]
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第33卷第11期
2008年6月
         
    中 国 中 药 杂 志
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Vol.33,Issue 11
June,2008