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Studies on cyclodextrin inclusion complexes of Dragon‘s blood and its tablets preparation

龙血竭-环糊精包合作用研究及其片剂的研制



全 文 :温度时,制得的粒子中丹参酮ⅡA的含量随着改变。
[参考文献]
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MechanismofparticlecoatinggranuluLationwithRESSprocessin
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PreparationofmicropaticlesofSCFCO2extractionof
SalviamiltiorrhizabyRESS
HEShuai1,LEIZhengjie1,HUANGDongyi2,ZHANGZhongyi
(DepartmentofPharmacy,ZhujiangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510282,China)
[Abstract] Objective:Applicationofrapidexpansionofsupercriticalsolution(RESS)inpreparingmicropaticlesofSCFCO2
extractionofSalviamiltiorhiza.Method:ThemixturewhichwascomposedofβcyclodextrinandSCFCO2extractionofSmiltiorhiza
withproportion8∶1byweight,wasgranulatedbyRESS.Thecharacteristicsoftheresulultingparticleswerestudiedbyscanningelec
tronmicroscopy(SEM)andtheassayofsalviolⅡAinparticleswhichwasdeterminatedbyHPLC.Result:Theresultingparticles
werejacinthandphotomicrographproducedbySEMshowedthatthemorphologyweresilkinessandrugosityglobular,thesizedistribu
tionbetween2and80μm,andthecontentsofsalviolⅡAwas054%.Conclusion:TheRESSmethodisapplicableforpreparingmi
croparticlesofSCFCO2extractionofSmiltiorhizaandlowoperatingtemperature,simpleprocessing,andnoenvironmentalpolution,
andnoresidualsolvent.
[Keywords] SCFCO2;RESS;Salviamiltiorhiza;microparticles [责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080222
[基金项目] 江苏省科技发展计划项目(BM2007205)
[通讯作者] 任勇,Email:renyongphd@126.com
龙血竭环糊精包合作用研究及其片剂的研制
韩彬彬1,裴会娜1,孙海松2,宁劝奎3,任 勇1
(1.江苏省医药超分子材料及应用重点实验室,江苏 南京 210046;
2.南京师范大学 新药研究中心,江苏 南京 210046;
3.云南滇虹药业,云南 昆明 650000)
[摘要] 目的:运用环糊精包合作用,提高龙血竭的溶解度,研制龙血竭片剂。方法:通过测定龙血竭与 β环
糊精、羟丙基β环糊精、磺丁基β环糊精不同条件下的表观包合常数,筛选工艺并制备包合物,以差示热分析法对
包合物进行鉴定,动物试验检验包合物活性。制备龙血竭包合片并测定溶出度。结果:表观包合常数显示龙血竭
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与各种环糊精均存在较强包合作用,制备成包合物后,龙血竭溶解度提高1375~16839倍,活性也显著提高。包
合片溶出度达7869%。结论:龙血竭包合物溶解度高,药理活性显著,用量少。龙血竭包合片溶出速率快、溶出
度高。
[关键词] 龙血竭;包合物;环糊精
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18206604
  龙血竭(dragon'sblood)是百合科植物剑叶龙血
树的含脂木材经提取得到的树脂。其主要含有挥发
油、黄酮、酚类、强心苷、多糖等成分,具有活血散瘀、
定痛止血、敛疮生肌等功效,与进口血竭在药理和临
床疗效上基本一致,可作为进口血竭的代用品[13]。
目前市售的龙血竭产品主要是经过粉碎直接灌
装的胶囊剂。由于龙血竭水溶性极差,生物利用度
低,严重影响了其疗效的发挥。本实验研究了常见
药用环糊精在不同条件下对龙血竭的包合作用,制
备了水溶性好,药理活性强的包合物,并将包合物与
其他药用辅料制成片剂,取得了良好的效果。
1 材料
龙血竭(云南滇虹药业);β环糊精(安徽山河
药用辅料有限公司,纯度≥98%);羟丙基β环糊精
(江苏泰兴一鸣化工厂,DS=55);磺丁基β环糊精
(本实验室自制,DS=64);无水乙醇(无锡亚盛化
工有限公司,分析纯)。
紫外扫描仪UV2450(岛津);超声波清洗器(江
苏昆山);磁力搅拌器(浙江乐清);智能药物溶出仪
(天津大学无线电厂);单冲压片机(TDP,上海第一
制药机械厂);CDR-4P型差动热分析仪(上海精
科);溶出仪(天津天大天发科技有限公司)。
2 方法与结果
2.1 包合强度的测定(包合常数)
水溶液中,龙血竭在270~290nm有较弱的紫
外吸收。龙血竭中有多种成分,根据文献报道的方
法[45],通过环糊精浓度与龙血竭的紫外吸收强度变
化的定量关系,测定龙血竭多组分混合的表观包合
常数。实验测定 β环糊精、羟丙基β环糊精、磺丁
基β环糊精与龙血竭在不同溶液环境下的表观包
合常数(284nm)结果见表1。
表1结果所示,β环糊精、羟丙基β环糊精与龙
表1 不同环糊精与龙血竭的表观包合常数(Ka) mol·L
-1
类型 pH60 pH70 pH90 pH100 10%乙醇
β环糊精 29612 40689 127981 150446 7277
羟丙基β环糊精 32469 40376 139338 158834 18260
磺丁基β环糊精 115224 104930 19139 10255 82480
血竭的Ka随pH的增加而增大,磺丁基β环糊精与
龙血竭的Ka,随pH的增加而显著减小。10%乙醇
溶液条件下,3种环糊精与龙血竭的Ka均较小。
较大的表观包合常数表明,β环糊精、羟丙基
β环糊精、磺丁基β环糊精与龙血竭存在强包合作
用,能够形成稳定的包合物。
2.2 包合物的制备
将龙血竭研磨成细粉和β环糊精以质量比1∶4
投料,常温下加适量水(约环糊精质量3倍),用磁力
搅拌器搅拌半小时,加热,60℃下滴加稀NaOH溶液
至pH10,继续保温搅拌1h,冷却至室温,缓慢滴加稀
酸至中性,继续搅拌数小时,50℃以下减压除水,室
温真空干燥得红色龙血竭β环糊精包合物。
同上方法,制备了龙血竭羟丙基β环糊精包合
物;中性条件下研磨法制备了龙血竭磺丁基β环糊
精包合物。
2.3 包合物的鉴定(差示热分析)
称取龙血竭、环糊精、龙血竭与环糊精的物理混
合物、龙血竭环糊精包合物50mg,进行差示扫描
热分析:Al2O3参比,量程 ±50μV,升温范围30~
400℃,升温速率10℃·min-1,得DTA图谱。以β
环糊精为例,差示热分析图见图1。
β环糊精图中75~80℃为β环糊精典型的脱
水吸热峰,220~230℃有一特征相变,固体 β环糊
精280℃ 开始相变吸热,315℃后快速放热分解;龙
血竭在80~90℃是脱水吸热峰及脱除少量低分子
组分峰,330℃是熔融分解峰;物理混合物保持了β
环糊精和龙血竭的吸热峰,基本上是各化合物的叠
加;而在包合物图中45~100℃吸热峰变宽而强度
明显减弱,表明样品含微量包合水及脱除少量低分
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a.龙血竭/β环糊精包合物;b.物理混合物;
c.龙血竭;d.β环糊精
图1 差示热分析图
子组分,220~230℃的 β环糊精特征相变峰消失,
包合物在300℃快速熔融分解而无各自原料物相的
吸热再分解的特征峰型,说明新的物相已经形成。
2.4 包合物溶解度测定
2.4.1 标准曲线的绘制 精密称取龙血竭20mg
于100mL量瓶中,无水乙醇溶解定容,得02g·
L-1试液,以水稀释成0003922~0033333g·L-1
系列溶液,284nm下测定紫外吸收A,以A对质量浓
度 C(g· L-1)作图绘制标准曲线,得 C=
00409A+00006(r=09995)。
2.4.2 溶解度测定
纯净水加过量龙血竭或龙血竭环糊精包合物,
(37±1)℃振荡24h达溶解平衡,过滤,移取滤液
适量,纯净水稀释,284nm处测定紫外吸光度,依标
准曲线得龙血竭环糊精包合物37℃下溶解度。各
包合物溶解度见表2。
表2 龙血竭/环糊精包合物的溶解度
包合用环糊精 溶解度/g·L-1 增溶倍数
- 01707 -
β环糊精 23473 1375
羟丙基β环糊精 33199 1944
磺丁基β环糊精 287515 16839
2.5 包合物活性试验
龙血竭环糊精包合物的药理活性是评价该包
合物的重要指标之一,作者以龙血竭β环糊精包合
物为例,进行如下药理活性试验。
2.5.1 龙血竭及其β环糊精包合物对ADP引起小
鼠突然死亡的保护作用 样品:龙血竭及龙血竭/β
环糊精包合物(龙血竭含量约为20%)。
各组动物分别灌胃,1次/日,共3日,于末次给
药后1h,将700mg·kg-1二磷酸腺苷(ADP)于小
鼠尾尖静脉注射,注射毕30min内,计数各组小鼠
的存活数,以χ2检验进行统计学处理。实验结果见
表3。
表3 龙血竭与龙血竭/β环糊精包合物对ADP引起
小鼠突然死亡的影响(珋x±s,n=16)
药物 剂量/mg·kg-1 死亡数/总数 死亡率/%
阿司匹林 10 4/16 251,2)
β环糊精 200 14/16 875
龙血竭 50 8/16 501)
包合物 250(龙血竭50mg) 5/16 31251,2,3)
  注:与阿斯匹林组比较1)P<005,2)P<001;与龙血竭组比
较3)P<005(表4~6同)
结果龙血竭对 ADP注入小鼠尾静脉引起的突
然死亡具有明显保护作用。等剂量条件下,龙血竭
β环糊精包合物作用显著优于未包合的龙血竭。
2.5.2 龙血竭与龙血竭β环糊精包合物体外对兔
血小板聚集的影响[6] 样品:龙血竭及龙血竭β环
糊精包合物(龙血竭含量约为20%)。
Born氏比浊法进行兔血小板聚集性测定,血小
板聚集抑制率按下式计算。结果见表4~6。
抑制率(%)=(1-给药管聚集率/对照管聚集率)×
100%
表4 龙血竭与龙血竭β环糊精包合物体外对
AA诱导的兔血小板聚集的影响(珋x±s,n=8)
组别 剂量/mg·L-1 血小板聚集抑制率/%
对照 - 0
阿司匹林 30 965±311,2)
β环糊精 2000 0±26
龙血竭 313 43±11
  625 366±471)
  125 578±341)
  250 789±331,2)
  500 866±251,2)
包合物 313 180±351)
  625 589±311,3)
  125 739±241,3)
  250 881±261,2,3)
  500 995±381,2,3)
表5 龙血竭与龙血竭/β环糊精包合物体外对
ADP诱导的兔血小板聚集的影响(珋x±s,n=8)
组别 剂量/mg·L-1 血小板聚集抑制率/%
对照 - 0
阿司匹林 30 18±04
β环糊精 2000 05±15
龙血竭 313 75±24
  625 77±28
  125 185±321)
  250 365±311)
  500 556±351,2)
包合物 313 64±45
  625 220±361,3)
  125 554±351,3)
  250 700±241,3)
  500 990±071,2,3)
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表6 龙血竭与龙血竭/β环糊精包合物体外对
PAF诱导的兔血小板聚集的影响(珋x±s,n=8)
组别 剂量/mg·L-1 血小板聚集抑制率/%
对照 等容N.S 0
阿司匹林 30 22±06
β环糊精 2000 16±21
龙血竭 313 56±26
  625 84±44
  125 159±211)
  250 454±291)
  500 726±321,2)
包合物 313 78±33
  625 157±381,3)
  125 420±641,3)
  250 621±391,3)
  500 993±061,2,3)
  结果龙血竭/β环糊精包合物与龙血竭对 AA,
ADP,PAF诱导的兔血小板聚集均呈明显的浓度依
赖性抑制作用。但龙血竭/β环糊精包合物的效果
明显优于龙血竭。
2.6 片剂的制备
龙血竭/β环糊精包合物(龙血竭含量约为
20%)与常用辅料按表5比例混合,过100目筛混
匀,75%乙醇制软材,20目筛湿法制粒,60℃烘箱干
燥5h,20目筛整粒,干颗粒中加入处方量的硬脂酸
镁(200筛)混2~3min,7kg左右压力压片,制备龙
血竭包合片。龙血竭包合片剂(龙血竭 =50mg/
片)制备处方见表7。
表7 龙血竭包合片剂处方
物料 质量比/%
包合物   73
微晶纤维素 177
预胶化淀粉 5
羧甲淀粉钠 38
硬脂酸镁  05
2.7 片剂的溶出度测定
龙血竭包合片6片,市售龙血竭胶囊6粒,依照
溶出度测定法[7]以纯水作为溶出介质,测定45min
溶出度。结果龙血竭包合片45min平均溶出度为
7869%,而市售龙血竭胶囊的平均溶出度为
717%。
3 讨论
本实验探讨了各种环糊精在不用溶剂体系下与
龙血竭的表观包合常数,表明碱性条件有利于 β环
糊精、羟丙基β环糊精包合,易制备出龙血竭环糊
精包合物。加入乙醇的水溶液中,各种环糊精的表
观包合常数都显著降低,提示乙醇不利于环糊精的
包合,尤其是不利于β环糊精对龙血竭的包合。
采用酸碱法制备了龙血竭β环糊精及羟丙基
β环糊精的包合物。研磨法制备龙血竭/磺丁基β
环糊精包合物。增溶试验显示经环糊精包合后龙血
竭水溶性明显提高。其中磺丁基β环糊精增溶效
果最佳,达16839倍。药理活性试验显示龙血竭/
β环糊精包合物的药理活性明显高于龙血竭。体外
对兔血小板聚集的影响试验中,达同等效果时,所需
包合物的剂量约为龙血竭的1/2;同等剂量时,包合
物在体内外抗血小板聚集和抗血栓的药效均强于未
经包合的龙血竭。生物活性实验验证龙血竭在制备
成包合物后,生物利用度和药理活性均显著提高。
龙血竭由于水溶性极差,但易溶于碱液、乙醇,因
此溶出度的测定一般是以稀碱液或者乙醇水溶液作
为溶出介质。本实验研制的龙血竭包合片以纯水作
为溶出介质,溶出度较胶囊剂有明显提高,有利于增
强龙血竭的口服利用度。研制的龙血竭包合物及其
片剂,水溶性增强,药理活性提高。不仅可以节约我
国龙血竭资源,又为患者提供一种很好的医药产品。
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StudiesoncyclodextrininclusioncomplexesofDragon'sbloodand
itstabletspreparation
HANBinbin1,PEIHuina1,SUNHaisong2,NINGQuankui3,RENYong1
(1.JiangsuKeyLaboratoryforSupramolecularMedicinalMaterialsandApplications,Nanjing210046,China;
2.CenterofDrugDiscovery,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,China;
3.YunnanDihonPharmaceuticalCo.Ltd.,Kunming650000,China)
[Abstract] Objective:TostudythecyclodextrininclusioncomplexesofDragon'sbloodforimprovingthedrugsolubilityandthe
preparation.Method:Theinclusioncomplexeswerepreparedwithβcyclodextrin,HPβcyclodextrin,SBEβcyclodextrinandcon
firmedbyDTA.Theactivityoftheinclusioncomplexwastestedbyanimalexperiments.Inclusioncomplexestabletswerepreparedand
thedissolutiontestwasperformed.Result:Thesolubilityofinclusioncomplexeswasincreasedto137516839times.Theactivityof
theinclusioncomplexwasmarkedlyimproved,anddissolutionratewas7869%.Conclusion:Thecyclodextrininclusioncomplexesof
Dragon'sbloodhaveagoodsolubility,dissolutionrateandpharmacologicalactivity.
[Keywords] Dragon'sblood;inclusion;cyclodextrin
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080516
[基金项目] 河南省重大科技攻关项目(0422030700)
[通讯作者] 周刚,Tel:(010)68585566442,Email:zhoug@
cde.org.cn
牡丹皮不同部位有效成分含量测定及
指纹图谱化学成分研究
周 刚1,吕庆红2
(1.国家食品药品监督管理局 药品审评中心,北京 100038;
2.河南中医学院 第一附属医院,河南 郑州 450000)
[摘要] 目的:对牡丹皮不同部位进行化学成分研究,为牡丹皮的最佳产地加工方法提供依据。方法:采用高
效液相色谱法,测定牡丹皮各部位中丹皮酚、芍药苷的含量,并进行指纹图谱分析。结果:栓皮部与韧皮部比较,其
丹皮酚的含量约高出1倍,木心部中的含量接近韧皮部的1/2;栓皮部与韧皮部比较,其芍药苷的含量约高出35
倍,木心部中的含量约高出韧皮部的1倍;指纹图谱中,韧皮部中有效成分的含量较高。结论:产地加工时可以不
去皮而只去心,既能简化产地加工的繁琐程序又能提高样品中有效成分的含量。
[关键词] 牡丹皮;不同部位;化学成分;产地加工
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18207004
  牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹 Paeoniasuf
fruticosaAndr.的根皮。性微寒,味苦、辛。归心、
肝、肾经。具有清热凉血、活血化瘀之功效。洛阳的
牡丹皮产量很大,在当地占有很大的市场份额。
《中国药典》2005年版一部中“牡丹皮”项下中指出
其加工方法为:秋季采挖牡丹的根部,除去细根和泥
沙,剥取根皮,晒干[1]。目前市场上的牡丹皮加工
品有刮丹皮、熏丹皮和连丹皮,刮丹皮是取鲜根剪掉
须根,剪开分枝,趁鲜用玻璃片刮掉外表皮,抽出木
质部,晒干。熏丹皮是鲜根去掉须根、剪开分枝后,
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