全 文 ：鸡肝散黄酮类成分的水解条件
来奕刚，徐娟华，蒋惠娣，赵 昱
（浙江大学 药学院，浙江 杭州 ３１００５８）
［收稿日期］ ２００６０３３０
［通讯作者］ 徐娟华，Ｔｅｌ：（０５７１）８８２０８４５６，Ｅｍａｉｌ：ｐｈｎｏｓｙ＠
１２６．ｃｏｍ
鸡肝散又称四方蒿 ＥｌｓｈｏｌｔｚｉａｂｌａｎｄａＢｅｎｔｈ．，为
唇形科香薷属植物多年生草本植物。性味苦辛、凉，
具有清热解毒、消炎止痛的功效，民间常用于治疗感
冒、痢疾、肝炎等病症［１］。哈尼族用于治疗眼疾及
呼吸道感染，疗效甚佳。鸡肝散主要活性成分为挥
发油和黄酮类［２，３］，其中黄酮类成分具有良好的抗
心律失常和心肌缺血的作用［４，５］。为合理开发利用
其资源，作者采用正交试验法对药材中黄酮类成分
的水解条件进行考察，并测定了鸡肝散３种主要黄
酮苷元的含量，以期为该药材质量控制提供科学依
据。
１ 仪器和试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪、ＤＡＤ检测器、四
元泵、Ａｇｉｌｅｎｔ色谱工作站；木犀草素购于中国药品
生物制品检定所 （供含量测定，批号 １１１５２０
２００２０１）；芹菜素购于Ｓｉｇｍａ公司（批号 ０６４ｋ０６５３）；
５羟基６，７二甲氧基黄酮由本实验室自制，并经光
谱分析鉴定结构，纯度经 ＨＰＬＣ归一法检测大于
９８％；色谱纯甲醇，超纯水，其余试剂均为分析纯；鸡
肝散药材由云南金殿制药有限公司提供，原植物标
本由云南昆明大学李恒教授鉴定，并经浙江大学药
学院张水利和徐娟华等老师实地考察验证。药材经
干燥后打粉，过４０目筛，备用。
２ 方法和结果
２．１ 色谱条件
ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇０２％磷酸溶液（７０∶３０）；
流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长３５０ｎｍ；柱温３０℃；
进样量２０μＬ。色谱图见图１。
２．２ 对照品溶液制备及线性关系考察［６］
精密称取一定量经减压干燥至恒重的木犀草
素、芹菜素、５羟基６，７二甲氧基黄酮对照品，用甲
图１ 鸡肝散药材ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．木犀草素；２．芹菜素；
３．５羟基６，７二甲氧基黄酮
醇分别配制成８５４，１２０，９２０μｇ·ｍＬ－１的对照品储
备液。精密量取上述对照品储备液各５ｍＬ至同一
５０ｍＬ量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为混
合对照品溶液。
分别精密量取混合对照品溶液１０，３０，５０，
７０，１００ｍＬ分置于１０ｍＬ量瓶中，加流动相定容
至刻度，摇匀。各取２０μＬ进样分析，以峰面积为纵
坐标（Ｙ），溶液质量浓度为横坐标（Ｘ），绘制标准曲
线，得回归方程木犀草素：Ｙ＝９７４７Ｘ－４０９，ｒ＝
０９９９９，线性范围８５４～８５４μｇ·ｍＬ－１；芹菜素：
Ｙ＝９８９７Ｘ－１７０，ｒ＝０９９９９，线性范围 １２～１２
μｇ·ｍＬ－１；５羟基６，７二甲氧基黄酮：Ｙ＝２３３６Ｘ－
０３９，ｒ＝０９９９８，线性范围９２～９２μｇ·ｍＬ－１。
２．３ 水解条件的确定
２．３．１ 正交试验设计 选取盐酸浓度（指盐酸甲
醇溶液中的浓度）、甲醇含量（指盐酸甲醇溶液中的
含量）、水解温度、水解时间４个主要因素按 Ｌ９（３
４）
表进行考察，因素水平见表１。
表１ 因素水平
水平
Ａ
盐酸浓度
／ｍｏｌ·Ｌ－１
Ｂ
甲醇体积分数
／％
Ｃ
水解温度
／℃
Ｄ
水解时间
／ｈ
１ １ ５０ ７５ １
２ ２ ６０ ８５ ２
３ ３ ７０ ９５ ３
２．３．２ 样品溶液的制备和含量测定 精密称定药材
粉末２００ｍｇ，加入盐酸甲醇溶液３０ｍＬ，按表１进行
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第３２卷第３期
２００７年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
实验，水解液冷却至室温后用６ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶
液调节ｐＨ３～４，过滤，用５ｍＬ甲醇洗涤３次，合并滤
液，用流动相定容至５０ｍＬ，摇匀。用０４５μｍ滤膜
过滤，取续滤液２０μＬ进样测定，并计算含量。
２．４ 结果
５羟基６，７二甲氧基黄酮的含量基本不受水解
条件各因素的影响，而木犀草素和芹菜素则受到较
显著的影响。通过进一步方差分析等确定，其最佳
水解条件为盐酸浓度３ｍｏｌ·Ｌ－１、水解温度８５℃、
甲醇含量７０％、水解时间３ｈ，表２，３。
表２ 正交试验结果（ｎ＝２） ％
Ｎｏ． 木犀草素 芹菜素 ５羟基６，７二甲氧基黄酮
１ ０７２ ００５ １０８
２ １０５ ００９ １０８
３ １０３ ００９ １０９
４ １３１ ０１２ １０８
５ １１６ ０１１ １０７
６ １０９ ０１０ １０９
７ １３８ ０１２ １０７
８ １２２ ０１０ １０８
９ １３２ ０１１ １０９
表３ 方差分析表
指标成分 因素 偏差平方和 自由度 Ｆ Ｐ
木犀草素 Ａ ０１８１ ２ ４５２５ ＜００５
Ｂ ０００４ ２ １００ ＞００５
Ｃ ００９３ ２ ２３２５ ＜００５
Ｄ ００３８ ２ ９５０ ＞００５
误差 ０００４ ２
芹菜素 Ａ ２１６×１０－３ ２ ４９０１ ＜００５
Ｂ ４４０×１０－５ ２ １００ ＞００５
Ｃ ８５６×１０－４ ２ １９４６ ＜００５
Ｄ ３９１×１５－４ ２ ８８９ ＞００５
误差 ４４０×１０－５ ２
注：Ｆ００５（２，２）＝１９，Ｆ００１（２，２）＝９９
２．５ 验证试验
精密称取药材粉末２００ｍｇ共３份，按正交试验
所得的最佳水解条件测定３种黄酮苷元的含量，其
ＲＳＤ（ｎ＝３）分别为２５％，２６％，０９％，所得平均
质量分数分别为木犀草素１４３％、芹菜素０１２％、
５羟基６，７二甲氧基黄酮 １０８％。其中木犀草素
和芹菜素含量均高于或等于表２中的结果，５羟基
６，７二甲氧基黄酮与表中结果基本一致，说明由实
验得出的最佳水解条件是可靠的。
３ 讨论
从正交试验结果（表２）看，水解条件各因素对
鸡肝散药材中黄酮类成分的水解效率的影响是不同
的。其中对木犀草素和芹菜素的含量有显著的影
响，因这两者主要以苷的形式存在；而５羟基６，７
二甲氧基黄酮以苷元形式存在，基本不受水解条件
的影响。
通过对正交试验结果的方差分析可知，各因素
对木犀草素和芹菜素含量的影响大小均为 Ａ＞Ｃ＞
Ｄ＞Ｂ，其中盐酸浓度和水解温度有显著的影响，而
水解时间和甲醇含量影响不显著。通过对水解条件
进一步单因素试验可知，在盐酸浓度小于３ｍｏｌ·
Ｌ－１时，酸度越大，水解越完全；但盐酸浓度超过 ３
ｍｏｌ·Ｌ－１时，所得苷元的含量反而降低，可能由于酸
度越大，对苷元的破坏也越强，因此盐酸浓度以控制
在３ｍｏｌ·Ｌ－１以内为宜，这结果与文献［７］一致。
对于水解温度，单因素试验表明以８５℃时最佳，因
为温度过低时水解不完全，温度过高则可能影响苷
元的稳定性，故其最终得率下降。对于水解时间和
甲醇含量，两者均非主要影响因素，尽管水解时间越
长，甲醇含量越高，则水解越充分，但单因素试验也
表明，当其超过３ｈ和７０％时，对苷元的含量影响不
大，所以选择３ｈ和７０％。由此最终确定最佳水解
条件为Ａ３Ｂ３Ｃ２Ｄ３。
［参考文献］
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ｄｕｃｅｄｂｙｃｏｒｏｎａｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎｉｎｃａｎｉｎｅｓ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，
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［７］ ＪｕｓｔｅｓｅｎＵ，ＫｎｕｔｈｓｅｎＰ，ＬｅｔｈＴ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｌａｖｏ
ｎｏｌｓ，ｆｌａｖｏｎｅｓ，ａｎｄｆｌａｖａｎｏｎｅｓｉｎｆｒｕｉｔｓ，ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓａｎｄｂｅｖｅｒａｇｅｓ
ｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅａｒａｙ
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７９９：１０１．
［责任编辑 鲍 雷］
·０７２·
第３２卷第３期
２００７年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７