全 文 ：雷公藤复杂提取物脂质体的制备及稳定性研究
李红茹 t o李淑芬 t3 o段宏泉 u
ktq天津大学 化工学院 绿色合成与转化教育部重点实验室 o天津 vssszu~
uq天津医科大学 药学院 o天津 vssszsl
≈摘要 目的 }对雷公藤复杂提取物进行脂质体包合 o探讨脂质体包合复杂物质的可行性 ∀方法 }采用薄膜 2
超声法制备脂质体 o考察工艺条件以及处方组成对主要成分包封率的影响以及脂质体储存过程中的稳定性 ∀结
果 }薄膜 2超声法制备的脂质体为小单室脂质体 o粒径在 vs ∗ xs ±°o主要成分雷公藤红素及雷公藤生物总碱的最大
包封率分别为 |{1tsh o{{1yvh o但是包封有复杂物质的脂质体混悬液长时间存放不稳定 ∀结论 }脂质体可以用于
包合复杂混合物 o但长期存放呈现一定的不稳定性 ∀
≈关键词 雷公藤 ~脂质体 ~包封率 ~稳定性
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlus2utu{2sw
≈收稿日期 ussz2st2us
≈基金项目 天津市科委攻关重点项目 kswvtswvttl
≈通讯作者 3 李淑芬 oר¯}ksuuluzwsuzusoƒ¤¬}ksuuluzwsuz
uso∞2°¤¬¯}¶«©¯¬ ·∏q §¨∏q¦±
雷公藤 Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι ²²®q©q属卫矛科
植物 o其根部提取物对多种自身免疫系统疾病如类
风湿性关节炎 !皮肤病 !器官移植排异等有效 ∀雷公
藤根部提取物成分为二萜类 !三萜类 !生物碱类 o另
外还含有少量烷酸 !烯酸等挥发性成分 ∀用雷公藤
根部提取物做成酊剂和贴膏用于治疗皮肤病 o除具
有较好的治疗作用外 o都有一定的皮肤刺激性等毒
副作用 ∀脂质体用于经皮给药系统 o可以减少药物
对皮肤的刺激性 o增强药物稳定性以及起到一定的
缓释作用 ≈t ∀本实验通过制备雷公藤提取物脂质
体并测定其中主要成分雷公藤红素以及雷公藤生物
总碱的包封率 o考察雷公藤复杂提取物用于制备脂
质体的可行性 o并对所得脂质体的稳定性进行考察 ∀
1 材料与方法
1q1 仪器与试剂
高效液相色谱仪 k¤¥¤¯ ¬¯¤±¦¨l~∂ p tyss型紫
外分光光度计 k北京瑞利分析仪器有限公司 l~∞
型透射电子显微镜 k日本电子 l~×pty型台式冷
冻离心机 k长沙湘仪离心机仪器有限公司 l~vx型
真空干燥箱 k天津市华北实验仪器有限公司 l~ ∞ p
xu型旋转蒸发器 k上海亚荣生化仪器厂 l~± p
uss⁄ƒ型超声波清洗器 k昆山市超声仪器有限公司 l∀
雷公藤提取物 k其中含量为雷公藤红素
vz1x{h o雷公藤生物总碱 uv1suh l~雷公藤红素对
照品 k天津医科大学提供 o纯度 |{1|zh l~生物碱单
体对照品卫矛碱 k天津医科大学提供 o纯度
|{1syh l~氢化大豆卵磷脂 k北京奥博生物技术有
限公司 o生化试剂 l~胆固醇 k天津市大茂化学试剂
厂 l~山梨酸甲酯 {sk׺¨¨ ±2{so天津大学江天化工
有限公司 l~硫酸鱼精蛋白 k≥¬ª°¤试剂公司 l~甲醇
为色谱纯 o其他试剂均为分析纯 ∀
1q2 脂质体的制备
采用薄膜超声法 ≈u 制备雷公藤提取物脂质体 ∀
称取一定量的雷公藤提取物 o氢化大豆卵磷脂和胆
固醇溶于氯仿中 o转移至 xss °茄形瓶 o旋转蒸发
掉有机溶剂成膜 o室温下于真空干燥箱中干燥 tu «o
加入 vs °含有一定浓度表面活性剂 ׺¨¨ ±2{s的
磷酸盐缓冲液 o充分溶胀后在一定功率下水浴超声
s1x «即得到带有乳光的脂质体 o于 w ε 冰箱中保
存 ∀
1q3 形态学考察
将新制备的脂质体混悬液用磷酸缓冲液稀释
ts倍后 o滴管吸取液体 o滴一滴于带有 ƒ²µ°µ¤µ膜的
铜网上 o滤纸吸掉边缘多余的液体 o自然干燥后 o加
uh磷钨酸负染色 o干燥后用透射电镜观察 o其形态
结构见图 to由薄膜 2超声法制备的脂质体均为小单
室脂质体 o粒径在 vs ∗ xs ±°∀
1q4 包封率测定方法的建立
由于雷公藤提取物成分复杂 o各成分含量相差
#{utu#
第 vu卷第 us期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
图 t 脂质体的电子透射显微镜照片 k ≅ ts万 l
很大 o故在本实验中只考察雷公藤提取物中含量相对
较高的雷公藤红素以及雷公藤生物总碱的包封率 ∀
1q4q1 检测方法的确定 采用高效液相色谱法 ≈v
测定雷公藤红素的含量 oµ²°¤¶¬¯2≤t{色谱柱 kw1y
°° ≅ uxs °°ox Λ°lo流动相甲醇 2th 醋酸 k{zΒ
tvlo流速 t °# °¬±pt o检测波长 wux ±°∀雷公藤
生物总碱采用柱色谱 2紫外分光光度法 ≈w 测定 o检测
波长 uyz ±°o与空白脂质体扫描曲线作比较 o证明
在该波长处药物辅料对生物碱的测定无影响 ∀
1q4q2 标准曲线的绘制 红素标准曲线的绘制 }精
密称取雷公藤红素对照品 x1s °ªo置 ux °量瓶
中 o用甲醇定容 o取此溶液 s1vos1xotouovowox °
分别定容至 x °o分别取 us Λ进样 o°≤分析 ∀
对红素浓度与峰面积作图 o得标准曲线方程 Ψ
w sys1xΞ p u yys1|kρ s1||| ylo线性范围 tu ∗
uss Λª# °pt ∀
雷公藤生物总碱标准曲线绘制 }精密称定卫矛
碱对照品 x1| °ªo置 ts °量瓶中 o|xh乙醇溶液
定容 o分别取 s1tos1uos1wos1yos1{ot1sot1uot1w
°至 ux °量瓶中 o用 s1t °²¯# pt的盐酸溶液定
容 o在 uyz ±°处测定吸光度 o对生物碱浓度与吸光
度作图 o回归出标准曲线方程为 Ψ s1ss{ yΞ n
s1sss ykρ s1||| ylo线性范围为 u1vy ∗ vv1sw Λª
# °pt ∀
1q4q3 包封率的测定 采用鱼精蛋白絮凝 2离心
法 ≈xoy 分离游离药物与脂质体 o取 t °脂质体混悬
液置离心管中 o加入 t °th鱼精蛋白溶液 o在 w ε
下离心 us °¬±o转速为 v sss µ# °¬±pt o因为卵磷脂
带有少量负电荷 o故带负电的脂质体在聚阳离子硫
酸鱼精蛋白的作用下发生絮凝并且密度增大 o离心
后沉淀于下层 o游离药物存在于上清液中 ∀取上清
液 o真空干燥 ∀对于游离雷公藤红素含量测定 o用少
量氯仿溶解上清液干燥后得到的残留物 o通过填料
为 tss °ª硅胶的固相萃取柱 o先用 t °氯仿洗脱 ∀
再用 w °氯仿 2甲醇 k|xΒxl混合液洗脱雷公藤红
素 o收集并挥干有机溶剂 o用甲醇定容 o°≤分析 o
为了校正雷公藤红素在分析中造成的热分解损失 ∀
脂质体中总红素的量也采用与游离红素相同的分析
方法 o只是不进行游离药物与脂质体的分离 ~对于游
离雷公藤生物总碱含量测定 o用少量氯仿溶解上清
液干燥后得到的残留物 o通过填料为 zss °ª中性氧
化铝的固相萃取柱 o用 z °氯仿 2丙酮 kuΒtl混合溶
剂洗脱 o收集洗脱液并挥干有机溶剂 o用 s1t °²¯ #
pt盐酸 2|xh乙醇 kuwΒtl混合液溶解 o于 uyz ±°处
测定其吸光度 ∀由于生物总碱热稳定性较好 o脂质
体中生物总碱总量则由浸膏中的含量以及加入的浸
膏质量计算得出 ∀测定结果带入下式计算包封率 ∀
包封率 kh l 脂质体中药物量 p游离药物量脂质体中药物总量 ≅ tssh
2 结果与讨论
2q1 成膜温度对包封率的影响
本组实验中 o保持卵磷脂约 uss °ªo胆固醇约
xs °ªo雷公藤提取物约 xs °ªo水化介质为 ³为
z1s的磷酸盐缓冲液 vs °o缓冲液中 ׺¨¨ ±2{s质
量浓度为 s1x °ª# °pt ∀考察成膜温度对雷公藤
红素以及总生物碱包封率的影响 o由表 t中结果可
知 o雷公藤红素很容易被脂质体包封 o并且其包封率
基本不受成膜温度的影响 ~而生物总碱则在成膜温
度为 ws ε 时包封率最高 o故选择成膜温度为 ws ε ∀
表 t 成膜温度对包封率的影响
成膜温度
rε
包封率 rh
红素 生物总碱
vs |{1u{ {z1w{
ws |{1ts {{1yv
xs |{1w{ z{1yz
2q2 水化介质 ³对包封率的影响
保持其他条件不变 o选择成膜温度 ws ε o改变
水化介质磷酸盐缓冲液的 ³ o考察 ³对包封率的
影响 o由表 u中结果可见 o较高的 ³利于雷公藤红
素的包封而生物碱在 ³ z1s时包封率较高 ∀综合
u种主要成分的包封率 o选择水化介质 ³为 z1s∀
表 u 水化介质 ³对包封率的影响
³
包封率 rh
红素 生物总碱
x1{ tu1uv zs1w|
y1y |w1w{ zx1sz
z1s |{1ts {{1yv
z1y |{1vw {x1uy
#|utu#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
2q3 胆固醇 !卵磷脂质量比对包封率的影响
其他条件不变 o水化介质 ³为 z1so保持脂质
总量 uxs °ª不变 o考察胆固醇与卵磷脂质量比对雷
公藤红素以及生物总碱包封率的影响 o由表 v中结
果可知 o雷公藤红素的包封率随着胆固醇与卵磷脂
质量比的增大而减少 ~而雷公藤生物总碱包封率的
变化较为复杂 o一般来说 o适量胆固醇的加入 o可以
增加膜稳定性 o使得分子较大的生物总碱包封率升
高 o胆固醇过多时 o会降低生物总碱包封率 o在该实
验中生物碱包封率在胆固醇 Β卵磷脂 s1x时包封
率出现反常的升高 o可能是由于红素包封率的降低
使得脂质双层膜中包封空间相应增大所致 ∀综合考
虑两种成分的包封率 o选择胆固醇与卵磷脂质量比
为 s1ux∀
表 v 胆固醇与卵磷脂质量之比对包封率的影响
胆固醇 Β卵磷脂
包封率 rh
红素 生物总碱
s ||1sw {w1tx
s1ux |{1ts {{1yv
s1vv |y1yz {t1zv
s1xs |s1uu {v1{t
2q4 提取物与总脂质质量比对包封率的影响
保持其他条件不变 o胆固醇 Β卵磷脂 s1ux时 o
雷公藤提取物分别取 xs °ª和 zs °ªo考察包封率的
变化 ∀由表 w可知 o提取物 Β脂材较大时 o雷公藤红
素以及雷公藤生物总碱的包封率均会下降 o并且被
包封药物的量过多 o还会使脂质双分子层变形 o从而
造成脂质体体系不稳定 o故选择提取物与脂材质量
之比为 s1us∀
表 w 提取物与脂材质量之比对包封率的影响
提取物 r脂材 包封率 rh红素 生物总碱
s1us |{1ts {{1yv
s1u{ |z1zx {y1tz
2q5 表面活性剂的浓度对包封率的影响
保持其他条件不变 o提取物 Β脂材 s1uso表面
活性剂 ׺¨¨ ±2{s在分散系中的含量分别取 sos1xo
t1s °ª# °pt o由表 x可知 o表面活性剂浓度增大 o
使得雷公藤红素的包封率降低 ∀表面活性剂的作用
为防止脂质体粒子之间发生膜的融合 o维持脂质体
体系的稳定 ∀在没有表面活性剂的情况下 o脂质体
体系粒径分布不均匀并且很容易发生凝聚现象 ∀当
表面活性剂过多时 o表面活性剂分子插入到脂质双
层膜中 o使双层膜上出现泄漏点 o导致包封率降低 ∀
故选择表面活性剂浓度为 s1x °ª# °pt时 o既有利
于分散系的稳定 o又不会造成药物明显的泄漏 ∀
表 x 表面活性剂浓度对包封率的影响
׺¨¨ ±2{s
r°ª# °pt
包封率 rh
红素 生物总碱
s tss1ss {u1ss
s1x |{1ts {{1yv
t1s {{1st zv1v{
2q6 脂质体稳定性考察
实验结果表明 o脂质体可以实现对复杂混合物
的包合 ∀当成膜温度为 ws ε !水化介质磷酸盐缓冲
液的 ³为 z1s!胆固醇 Β卵磷脂 ks1uxl!提取物与总
脂质质量比为 s1us!表面活性剂 ׺¨¨ ±2{s质量浓度
为 s1x °ª# °pt时 o雷公藤红素以及雷公藤生物总
碱的包封率分别为 |{1tsh和 {{1yvh ∀在该条件
下制备雷公藤提取物脂质体并在 w ε 恒温储存条件
下 o对其稳定性进行考察 ∀由图 u!表 y中结果可
见 o该脂质体的不稳定性表现为脂质体粒径的不稳
定和包封率的不稳定 ∀这主要是由脂质体膜的融合
以及成膜材料在放置过程中的氧化引起的 ∀由于雷
公藤提取物成分较复杂 o少量游离的药物与脂质膜
相互作用 o使得粒径较小的脂质体融合成为粒径大
的脂质体 o并且游离药物还能与若干个脂质体形成
大的团聚体 ∀另外 o脂质膜氧化会造成包封药物的
泄漏 o使包封率降低 o可以通过加入抗氧化剂 o如维
∞等来保护脂质膜 ∀
图 u 放置 v §后脂质体的电子透射显微镜照片
k ≅ vy sssl
表 y 脂质体包封率随时间的变化
τr§
包封率 rh
红素 生物总碱
s |{qts {{1yv
v |x1yv {u1{x
ts |u1y{ zy1{y
tx zy1xx zv1tw
3 结论
通过薄膜超声法所得脂质体为小单室脂质体 o
#svtu#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
粒径在 vs ∗ xs ±°o最佳条件下雷公藤红素以及雷
公藤生物总碱的包封率分别为 |{1tsh和 {{1yvh ~
所得脂质体在长时间放置过程中不稳定 o故需要进
一步对其保存方法进行研究 ∀
≈参考文献
≈t 董 平 q脂质体皮肤外用的研究进展 ≈ q广东医学 oussvouw
ktul}tv{sq
≈u 朱盛山 q药物新剂型 ≈ q北京 }化学工业出版社 oussv}wu{q
≈v 夏 焱 o王文燕 o张彦文 o等 q °≤法测定雷公藤及其片剂中
雷公藤红素 ≈ q中草药 oussxovyk{l}ttxwq
≈w 郑虎占 o董泽宏 o佘 靖 q中药现代化研究与应用 ≈ q北京 }
学苑出版社 ot||{}ww{yq
≈x ·²∞ o ¤¯¬³¶®¼ ≥o ±∏¬±± ≠ °o ·¨¤¯q °²¯¼k° ·¨«¤¦µ¼¯¬¦¤¦¬§l2
¬±§∏¦¨§ ¬¯³²¶²°¨¤ªªµ¨ª¤·¬²± ©²µ° ¤¨¶∏µ¬±ª§∏µª ±¨·µ¤³° ±¨·≈ q
±¤¯
¬²¦«¨ °o t||xouu|}tsyq
≈y 朱晓亮 o曾 抗 o李国锋 o等 q脂质体鬼臼毒素混悬液的制备及
包封率测定 ≈ q中国医院药学杂志 oussxouxkyl}xy|q
Πρεπαρατιον οφ λιποσοµ εσ χονταινινγ εξτραχτσ οφ Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι
ανδ εϖαλυατιον οφ ιτσσταβιλιτψ
²±ª2µ∏t o ≥«∏2©¨±t o ⁄²±ª2´ ∏¤±u
(t. Κεψ Λαβορατορψ φορΓρεεν Χηεµ ιχαλΤεχηνολογιεσ οφ τηε Μινιστρψ οφ Εδυχατιον, Σχηοολοφ
Χηεµ ιχαλΕνγινεερινγ ανδ Τεχηνολογψ, Τιανϕιν Υνιϖερσιτψ, Τιανϕιν vssszu, Χηινα;
u. Χολλεγε οφ Πηαρµ αχψ, Τιανϕιν ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Τιανϕιν vssszs, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ׫¨ ¬¯³²¶²° ¶¨¦²±·¤¬±¬±ª ¬¨·µ¤¦·¶²©Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι º µ¨¨ ³µ¨³¤µ¨§¤±§·«¨ ³²¶¶¬¥¬¯¬·¼ ²© ±¨·µ¤³2
° ±¨·²©¦²°³¯ ¬¨¦«¨ °¬¦¤¯¶¥¼ ¬¯³²¶²° ¶¨º µ¨¨ ¶·∏§¬¨§q Μετηοδ : ׫¨ ¬¯³²¶²° ¶¨¦²±·¤¬±¬±ª ¬¨·µ¤¦·¶²©Τ. ωιλφορδιι º µ¨¨ ³µ¨³¤µ¨§ ¥¼
·«¬±2©¬¯° §¬¶³¨ µ¶¬²± ° ·¨«²§o ·«¨ ©¨©¨¦·²©³µ²¦¨¶¶³¤µ¤° ·¨¨µ¶¤±§¦²°³²¶¬·¬²± ²©°¤·¨µ¬¤¯¶²± ·«¨ ±¨·µ¤³° ±¨·¨©©¬¦¬¨±¦¼ ²©·«¨ °¤¬± ¦²°2
³²± ±¨·¶º µ¨¨ ¶·∏§¬¨§q ׫¨ ¶·¤¥¬¯¬·¼ ²©·«¨ ¬¯³²¶²° ¶¨§¬¶³¨ µ¶¬²± º¤¶¤¯¶² √¨¤¯∏¤·¨§q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¬¯³²¶²° ¶¨°¤§¨ ¥¼ ·«¬±2©¬¯° §¬¶³¨ µ¶¬²±
° ·¨«²§º µ¨¨ °²¶·¯¼ ¶°¤¯¯∏±¬¯¤°¨¯ ¤¯µ√ ¶¨¬¦¯ ¶¨¤±§·«¨ ¬µ³¤µ·¬¦¯¨¶¬½¨ º¤¶vs ±° ∗ xs ±°q ׫¨ ²³·¬°∏° ±¨·µ¤³° ±¨·¨ ©©¬¦¬¨±¦¼ ²©·µ¬³·¨µ2
¬±¨¤±§·«¨ ·²·¤¯ ¤¯®¤¯²¬§¶º µ¨¨ µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ |{1tsh ¤±§{{1yvh ¥∏··«¨ ¬¯³²¶²° ¶¨§¬¶³¨ µ¶¬²± º¤¶∏±¶·¤¥¯¨º«¨ ± ®¨ ³·¤·w ε q Χον2
χλυσιον: ׫¨ ¦²°³¯ ¬¨¦«¨ °¬¦¤¯¶¦¤± ¥¨ ±¨·µ¤³³¨ §¥¼ ·«¨ ¬¯³²¶²° ¶¨o ¥∏·¬·¶¶·¤¥¬¯¬·¼ ±¨¨ §·² ¥¨ ¬°³µ²√ §¨©∏µ·«¨ µ¯¼q
[ Κεψ ωορδσ] Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι~ ¬¯³²¶²° ¶¨~ ±¨·µ¤³° ±¨·¨ ©©¬¦¬¨±¦¼~ ¶·¤¥¬¯¬·¼
≈责任编辑 鲍 雷
≈收稿日期 ussy2tu2ts
≈通讯作者 3奉建芳 o ר¯}ksutlxxxtwyss2tt{o∞2°¤¬¯}©¨±ª¬¤±2©¤±ª tyvq±¨ ·
盐酸青藤碱牛血清白蛋白微球的研究
邹凌燕 o奉建芳 3 o陈满仓
k上海医药工业研究院 制剂部 o上海 usswvzl
≈摘要 目的 }制备具有缓释作用的盐酸青藤碱牛血清白蛋白微球 ∀方法 }采用喷雾干燥法制备盐酸青藤碱
牛血清白蛋白微球 o并对其形态学性质 !载药量及体外释药进行考察 ∀结果 }通过优化工艺 o制得的微球粒径分布
范围为 t ∗ v Λ°o当改变药物与囊材的比例为 tΒuotΒt和 uΒt时 o获得的微球载药量分别为 vt1yh owz1zh 和
yz1|h o药物包封率均大于 |wh ∀体外释放试验表明 o该制品较原注射剂具有明显缓释作用 o且通过调整处方组成
及热变性条件可获得不同释药特性的微球 ∀结论 }喷雾干燥法是一种简单易行的白蛋白微球的制备方法 ∀制得的
微球载药量高 o具有明显缓释作用 ∀
#tvtu#
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