全 文 ：马钱子碱隐形脂质体的药剂学性质考察
陈 军１，２，王 玮１，蔡宝昌２，胡 巍，王立杰２
（１．南京中医药大学 药学院，江苏 南京 ２１００２９；
２．江苏省中药炮制重点实验室，江苏 南京 ２１００２９）
［摘要］ 目的：制备马钱子碱隐形脂质体并与普通脂质体比较体外性质。方法：采用硫酸铵梯度法制备了
０９ｇ·Ｌ－１马钱子碱隐形脂质体及普通脂质体，并比较了两者的包封率、粒径、释放度、稳定性等药剂学性质。结
果：马钱子碱隐形脂质体和普通脂质体的包封率分别为（８０７±０５）％，（８０５±０３）％，粒径分别为１０３５，１６９４
ｎｍ。无论加血浆与否，马钱子碱隐形脂质体的释放度均显著低于普通脂质体。隐形脂质体更加稳定。结论：作为
抗肿瘤药物载体，马钱子碱隐形脂质体的体外性质比普通脂质体更加理想。
［关键词］ 马钱子碱；隐形脂质体；释放度；稳定性
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１７２１０００５
［收稿日期］ ２００７１２１７
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０７０１１１１）；江苏省“六
大人才高峰”项目（２００４１８Ｃ）
［通讯作者］ 蔡宝昌，Ｔｅｌ：（０２５）８６７９８２８１，Ｅｍａｉｌ：ｂｃｃａｉ＠
ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
马钱子又名番木鳖，始载于《本草纲目·卷十
八》，是马钱科植物马钱ＳｔｒｙｃｈｎｏｕｎｕｘｖｏｍｉｃａＬ的干
燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿之功效，马钱
子碱（ｂｒｕｃｉｎｅ）、士的宁（ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ）等吲哚类生物碱
成分是其主要的有效成分。
马钱子具有确切的抗肿瘤作用，目前的研究表
明，在马钱子生物碱中，马钱子碱的抗肿瘤活性显著
高于士的宁、马钱子碱氮氧化物、异士的宁等其他生
物碱成分［１］；而采用脂质体作为载体能够显著提高
马钱子碱的抗肿瘤效果［２］。
隐形脂质体（ｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅ），又称为长循环脂
质体，是利用二硬脂酰乙醇胺聚乙二醇 ２０００
（ＤＳＰＥＰＥＧ２０００）对脂质体进行表面修饰，显著提
高脂质体表面的亲水性，通过有效避免网状内皮系
统（ＲＥＳ）巨噬细胞的摄取，显著延长在体内循环系
统中停留的时间，增加药物向非ＲＥＳ部位和肿瘤中
的分布，从而提高药物的肿瘤靶向性以改善药
效［３］。目前国外上市的抗肿瘤药物脂质体制剂如
阿霉素脂质体等都应用了隐形脂质体技术，并证实
能进一步减毒增效。因此，在马钱子碱脂质体研究
的基础上开展了马钱子碱隐形脂质体的研究，并系
统比较了马钱子碱隐形脂质体与普通脂质体的体外
药剂学性质。
１ 材料
ＨＰ１１００Ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ
公司）；７５２型紫外分光光度计（上海菁华科技仪器
有限责任公司）；ＲＥ－５２ＡＡ旋转蒸发仪（上海亚荣
生化仪器厂）；ＢＳ１２４Ｓ电子天平（德国赛多利斯公
司）；ＪＹ９２－Ⅱ超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科
技股份有限公司）；ＲＹＪ－６Ａ型药物透皮扩散仪（上
海黄海药检仪器厂）；ＰＣＳ３０００纳米粒径测定仪
Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（英国马尔文公司）。
马钱子碱对照品（中国药品生物制品检定所，
批号１１０７０６２００５０５）；马钱子碱（日本和光纯药工
业株式会社，批号 ０５９１７）；大豆磷脂（德国 Ｌｉｐｏｉｄ
公司，批号７９０５４９１）；胆固醇（分析纯，中国慧兴生
化试剂有限公司）；二硬脂酰乙醇胺聚乙二醇２０００
（ＤＳＰＥＰＥＧ２０００，纯度 ＞９８％，德国 Ｌｉｐｏｉｄ公司，批
号８８２０１２１）；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司，进
口分装）；其他试剂均为分析纯。
２ 方法
２．１ 脂质体的制备
２．１．１ 隐形脂质体 按摩尔比５５∶４５∶５称取磷脂、
胆固醇和ＤＳＰＥＰＥＧ２０００，加入无水乙醇，适当超声
使其溶解，以５ｍＬ·ｍｉｎ－１的速度注入磁力搅拌的
硫酸铵溶液中，减压蒸发除去乙醇，探头超声匀化
后，用ｐＨ７４ＰＢＳ溶液透析除去外水相硫酸铵，制
得空白隐形脂质体。取空白隐形脂质体加入等体积
·００１２·
第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
１８ｇ·Ｌ－１马钱子碱ＰＢＳ溶液，恒温磁力搅拌，即得
０９ｇ·Ｌ－１马钱子碱隐形脂质体。
２．１．２ 普通脂质体 除了膜材中没有 ＤＳＰＥ
ＰＥＧ２０００外，其余同２．１．１项下操作，即得０９ｇ·
Ｌ－１马钱子碱普通脂质体。
２．２ 含量测定
２．２．１ 对照品溶液 精密称取２５０ｍｇ马钱子碱
对照品，置于２５０ｍＬ的量瓶中，用ｐＨ７４ＰＢＳ定容
至刻度，得１００ｍｇ·Ｌ－１的马钱子碱对照品溶液。
２．２．２ 标准曲线的制备 精密量取马钱子碱对照
品溶液０３，０７，１１，１５，１９，２３，３１ｍＬ置于 ７
个１０ｍＬ的量瓶中，用ＰＢＳ定容至刻度，摇匀，配成
一系列浓度水平的溶液，以 ＰＢＳ作为空白，在 ２６４
ｎｍ处测定吸光度 Ａ，以 Ａ与浓度 Ｃ作线性回归得
标准曲线。
２．２．３ 精密度试验 取上述３，１５，３１ｍｇ·Ｌ－１低、
中、高３个浓度的马钱子碱标准溶液重复测定５次，
计算ＲＳＤ值。
２．２．４ 回收率试验 分别精密量取１００ｍｇ·Ｌ－１
马钱子碱对照品溶液０３，１５，３１ｍＬ，每份平行３
份，置于 ９个 １０ｍＬ量瓶中，每个量瓶中加入 ０５
ｍＬ空白隐形脂质体，再用 ＰＢＳ定容至刻度，摇匀，
从中精密量取４ｍＬ置刻度试管中，加入４ｍＬ破膜
剂无水乙醇异丙醇（１∶４）后，混匀，即得供试品溶
液。以空白隐形脂质体供试品溶液为空白，在２６４
ｎｍ处测定供试品溶液吸光度并计算回收率。
２．２．５ 含量测定 分别测定３批马钱子碱隐形脂
质体和普通脂质体的含量。
２．３ 包封率的测定
２．３．１ 洗脱曲线的绘制 精密吸取马钱子碱隐形
脂质体、马钱子碱脂质体各１０ｍＬ分别上Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ－５０柱（１ｃｍ×２７ｃｍ）用ｐＨ７４ＰＢＳ洗脱，流速１
ｍＬ·ｍｉｎ－１，每份２ｍＬ，共收集１８份；每份加破膜剂
２ｍＬ，混匀，以 ＰＢＳ液∶破膜剂（１∶１）的混合溶液为
空白，在２６４ｎｍ处测定吸光度，绘制洗脱曲线。另
取０９ｇ·Ｌ－１马钱子碱游离溶液１ｍＬ按上述操作，
绘制马钱子碱游离溶液洗脱曲线。
２．３．２ 上柱回收率的测定 精密吸取马钱子碱隐
形脂质体、马钱子碱脂质体各１０ｍＬ分别上柱洗脱
后收集含药脂质体和游离药物，测定两部分洗脱液
的药物总量，以两者之和与上柱前脂质体中的总药
量相比计算回收率。
２．３．３ 包封率的测定 精密吸取马钱子碱隐形脂
质体、马钱子碱普通脂质体各１０ｍＬ，上柱洗脱，依
据洗脱曲线含药脂质体的洗脱液和游离药物的洗脱
液，取同一批次空白脂质体同法操作作为空白校正。
分别测定两部分洗脱液的吸光度，计算其相应的脂
质体中药物含量和游离药物含量，并计算包封率。
包封率（％）＝脂质体中药物量／（脂质体中药物量 ＋游
离药物量）×１００％
２．４ 粒径的测定
取脂质体混悬液，用重蒸水稀释至适宜浓度，用
Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ测定仪测定脂质体的粒径。分别测定载药
前后隐形脂质体和普通脂质体的粒径。
２．５ 释放度考察
２．５．１ 色谱条件 汉邦 Ｃ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈００１ｍｏｌ·Ｌ－１庚烷磺酸钠
与００２ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾等量混合（用１０％磷
酸调ｐＨ２８）（２４∶７６），检测波长２６４ｎｍ，流速１０
ｍＬ·ｍｉｎ－１，进样量２０μＬ，柱温３０℃。
２．５．２ 标准曲线 取马钱子碱对照品溶液用ＰＢＳ分
别稀释到０５，１，２５，５，１０，１５ｍｇ·Ｌ－１，ＨＰＬＣ测定峰
面积，以峰面积Ａ对浓度Ｃ进行回归得标准曲线。
２．５．３ 精密度 取１，５，１５ｍｇ·Ｌ－１马钱子碱对照
品溶液分别进样测定５次，计算ＲＳＤ。
２．５．４ 释放度实验 取 ０９ｇ·Ｌ－１的马钱子碱隐
形脂质体和普通脂质体各１５ｍＬ，装于透析袋内，
两端夹好后置于两个盛有１００ｍＬ等渗ｐＨ７４ＰＢＳ
的三角瓶中，于透皮仪上恒温磁力搅拌，温度（３７±
０５）℃，转速为３００ｒ·ｍｉｎ－１，于不同时间点取样１
ｍＬＨＰＬＣ测定浓度计算累积释放率，并立即补充
ＰＢＳ１ｍＬ。实验重复３次。
为了考察血浆对脂质体释放度的影响，在透析
袋中加入１５ｍＬ新鲜大鼠血浆和１５ｍＬ脂质体后
重复上述释放度实验。
２．６ 沉降稳定性
取马钱子碱隐形脂质体和普通脂质体各２ｍＬ，
４０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１５ｍｉｎ，观察沉淀情况。
２．７ 存放稳定性
分别取马钱子碱隐形脂质体和普通脂质体于４
℃保存，于不同时间点取样测定包封率。
３ 结果
３．１ 含量测定
３．１．１ 标准曲线 回归方程 Ａ＝００２８２Ｃ＋
·１０１２·
第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
０００１３（ｒ＝０９９９４），可见马钱子碱在３～３１ｍｇ·
Ｌ－１与吸收度呈现良好的线性关系。
３．１．２ 精密度 ３，１５，３１ｍｇ·Ｌ－１马钱子碱对照品
溶液的ＲＳＤ分别为０５６％，０１３％，００７％。
３．１．３ 回收率 ３，１５，３１ｍｇ·Ｌ－１３个浓度的回收
率分别为（９９５±３８）％，（９８４±０７）％，（９７９±
０４）％（ｎ＝３）。
３．１．４ 含量测定 最终制得的马钱子碱隐形脂质
体和普通脂质体的浓度均为０９ｇ·Ｌ－１，磷脂浓度
为１２ｇ·Ｌ－１，载药量为００７５ｇ·ｇ－１。
３．２ 包封率的测定
３．２．１ 洗脱曲线 马钱子碱隐形脂质体、普通脂质
体和溶液上ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱后的洗脱曲线如图１
所示。可见①马钱子碱隐形脂质体和普通脂质体的
洗脱曲线基本相同；②脂质体和未包封的游离药物
可以实现完全分离，第 １～７管为含药脂质体，第
８～１６管为游离药物；③采用浓度与脂质体相同的马
钱子碱溶液上柱后出峰位置仍然在第８～１６管，说
明本法的分离效果可以得到保证。
图１ 马钱子碱隐形脂质体凝胶柱洗脱曲线
３．２．２ 上柱回收率的测定 隐形脂质体和普通脂
质体的上柱回收率分别为（９５７±２２）％，（９９１±
４１）％（ｎ＝３）。说明凝胶柱对脂质体没有吸附作
用。
３．２．３ 包封率的测定 测定３批马钱子碱隐形脂
质体和马钱子碱普通脂质体的包封率分别为
（８０７±０５）％，（８０５±０３）％。可见隐形材料的
加入不会影响脂质体对马钱子碱的包封效果。
３．３ 粒径的测定
隐形脂质体载药前后的平均粒径分别为
１０２３，１０３５ｎｍ，多分散系数（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ）分别为
０２１，０２２。普通脂质体载药前后的平均粒径分别
为１６９０，１６９４ｎｍ，多分散系数分别为０１５，０１３。
可见：①主动载药过程对脂质体的粒径没有影响；②
隐形脂质体的粒径明显小于普通脂质体，已经基本
达到纳米级。
３．４ 释放度实验
３．４．１ 标准曲线 Ａ＝２９２０９Ｃ－６９１５４，ｒ＝
０９９９５。
３．４．２ 精密度 １，５，１５ｍｇ·Ｌ－１马钱子碱对照品
溶液连续进样的 ＲＳＤ分别为 ０９４％，５５４％，
０９６％。
３．４．３ 释放度实验 如图２所示。未加血浆组，马
钱子碱隐形脂质体和普通脂质体１０ｈ的累积释放
度分别为（２３７±０７）％，（３９３±１６）％（ｎ＝３）；
加入血浆组，两者分别为（１５９±０５）％，（２６１±
１１）％（ｎ＝３）。可见，无论加血浆与否，马钱子碱
从隐形脂质体中的释放均明显慢于普通脂质体。
Ａ．不含血浆；Ｂ．含血浆
图２ 马钱子碱脂质体的释放曲线（ｎ＝３）
３．５ 沉降稳定性
离心后，马钱子碱隐形和普通脂质体均未观察
到有沉淀产生。
３．６ 存放稳定性
不同时间点马钱子碱隐形和普通脂质体包封率
的经时变化如图３所示。可见，隐形脂质体在存放
期间（７０ｄ）的稳定性很好，包封率甚至还有所提高，
而普通脂质体的包封率迅速下降，说明隐形脂质体
的稳定性远胜于普通脂质体。
图３ 马钱子碱隐形脂质体和普通脂质体的存放稳定性
·２０１２·
第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
４ 讨论
隐形脂质体作为抗肿瘤药物的载体可以显著提
高药物的治疗指数并已经在临床实践中得到应用，
因此在普通脂质体研究的基础上进一步研究采用隐
形脂质体作为马钱子碱抗肿瘤应用的载体。此前，
尝试采用ＰＥＧ对马钱子碱脂质体进行修饰来实现
隐形的效果［４］，但由于 ＰＥＧ亲水性太强，不能在亲
脂性的脂质体表面牢固结合达到理想的修饰效果，
因此改用目前公认的隐形材料 ＤＳＰＥＰＥＧ进行修
饰，以期解决这一问题。
研究结果表明，①隐形材料的加入不会影响马
钱子碱的包封率，所制得的马钱子碱隐形脂质体和
普通脂质体的药脂比为 １∶１３且包封率达到药典
８０％的要求，与前文［４］药脂比１∶３０的结果相比，载
药效率显著增加。②所制备的马钱子碱隐形脂质体
粒径显著减小到约１００ｎｍ，达到抗肿瘤药物脂质体
的理想粒径范围［５］。③释放度实验结果表明，无论
在血浆中还是在等渗 ＰＢＳ中，马钱子碱隐形脂质体
的释放度均明显低于普通脂质体，提示其体内稳定
性更高，能够更有效地将药物送达靶部位。④马钱
子碱隐形和普通脂质体的沉降稳定性良好，存放稳
定性前者显著优于后者。
游离马钱子碱能够快速通过透析袋达到浓度平
衡，因此可以采用透析法来测定释放度［４］。值得注
意的是，２种马钱子碱脂质体的体外释放度在９０～
１８０ｍｉｎ存在一个突然加速释放的过程（见图 ２）。
主动载药法制备马钱子碱脂质体的机制是脂质体膜
内外存在ｐＨ梯度，马钱子碱在外水相中性条件下
主要以分子型存在，在浓度差驱使下通过脂质体双
分子层进入内水相，由于内水相是酸性的，因此成盐
而转变为离子型，极性增强而不能再回到外水相。
而在释放度实验中，采用 ｐＨ７４等渗 ＰＢＳ作为介
质，在释放过程中，在外界中性 ｐＨ长时间的作用
下，脂质体内的ｐＨ很可能会升高，导致被包封的部
分离子型马钱子碱转化为非极性更强的分子型，在
内外浓度差的驱使下进入外水相，产生一个加速释
放的现象。
血浆的加入由于血浆蛋白与脂质体之间存在脂
交换作用往往会破坏脂质体的稳定性从而加速释
放［６］。但本研究的结果却与之相反，虽然加入血浆
后马钱子碱隐形脂质体的释放仍然显著低于普通脂
质体，但与未加入时相比，两者的释放度反而有所降
低，这提示马钱子碱有可能具有较强的血浆蛋白结
合能力，从而延缓了通过透析袋的速度。
文献［７］有采用测定４０００ｒ·ｍｉｎ－１离心前后
在７００ｎｍ吸光度计算稳定常数来评价脂质体沉降
稳定性的报道。由于此条件下离心不能使马钱子碱
２种脂质体产生沉淀，无法准确测定稳定常数的值，
因此本文仅报道了定性观察的结果。该方法能否用
于小单室脂质体的稳定性评价值得商榷。
研究结果表明，与普通脂质体相比，隐形脂质体
的粒径更小、释放更慢、稳定性更好，这可能都于隐
形脂质体表面 ＰＥＧ化修饰后亲水性大幅度改善有
关。以释药为例，隐形脂质体表面被亲水的 ＰＥＧ链
覆盖，亲水层的存在无疑显著降低了非极性较强的
马钱子碱的通过速度。
［参考文献］
［１］ ＤｅｎｇＸｕｋｕｎ，ＹｉｎＷｕ，ＬｉＷｅｉｄｏｎｇ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒ
ｅｆｅｃｔｓｏｆａｌｋａｌｏｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅｓｅｅｄｓｏｆｓｔｒｙｃｈｎｏｓｎｕｘｖｏｍｉｃａｏｎ
ＨｅｐＧ２ｃｅｌｓａｎｄｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，
２００６，１０６：１７９．
［２］ 邓旭坤，蔡宝昌，吕晓宇，等．马钱子碱及其脂质体对移植性荷
瘤小鼠抗肿瘤作用的对比研究［Ｊ］．中草药，２００６，２７（３）：
３８９．
［３］ ＣｅｈＢ，ＷｉｎｔｅｒｈａｌｔｅｒＭ，ＦｒｅｄｅｒｉｋＰＭ，ｅｔａｌ．Ｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：
ｆｒｏｍｔｈｅｏｒｙｔｏｐｒｏｄｕｃｔ［Ｊ］．ＡｄｖＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖ，１９９７，２４：
７５．
［４］ 王 琳，蔡宝昌，李伟东，等．马钱子碱长循环脂质体的制备和
质量评价［Ｊ］．中国药学杂志，２００６，４１（１８）：１３９７．
［５］ ＮａｇａｙａｓｕＡ，ＵｃｈｉｙａｍａＫ，ＫｉｗａｄａＨ．Ｔｈｅｓｉｚｅｏｆｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：ａ
ｆａｃｔｏｒｗｈｉｃｈａｆｅｃｔｓｔｈｅｉｒｔａｒｇｅｔｉｎｇｅｆｉｃｉｅｎｃｙｔｏｔｕｍｏｒｓａｎｄｔｈｅｒａ
ｐｅｕｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｌｉｐｏｓｏｍａｌａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓ［Ｊ］．ＡｄｖＤｒｕｇ
ＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖ，１９９９，４０：７５．
［６］ 陈 军，平其能，郭健新，等．９硝基喜树碱脂质体的释放度研
究［Ｊ］．中国药学杂志，２００６，４１（１８）：１３９３．
［７］ 熊 非，朱家壁，汪 豪，等．灯盏花素前体纳米脂质体的质量
评价［Ｊ］．中国药科大学学报，２００４，３５（６）：５１３．
·３０１２·
第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓ
ＣＨＥＮＪｕｎ１，２，ＷＡＮＧＷｅｉ１，ＣＡＩＢａｏｃｈａｎｇ２，ＨＵＷｅｉ２，ＷＡＮＧＬｉｊｉｅ２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２．ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＰｒｏｃｅｓｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｐｒｅｐａｒｅｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓａｎｄｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗｉｔｈｂｒｕｃｉｎｅｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ
ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓａｎｄｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗｅｒｅｂｏｔｈｐｒｅｐａｒｅｄｂｙａｍｍｏｎｉｕｍｓｕｌｆａｔｅｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ
ｇｒａｄｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ，ｉｎｖｉｔｒｏｒｅｌｅａｓｅｐｒｏｆｉｌｅｓａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅ
ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓａｎｄｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗｅｒｅ（８０７±０５）％，ａｎｄ（８０５±０３）％，ｒｅｓｐｅｃ
ｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｍｅａｎｐａｒｉｃｌｅｓｉｚｅｓｗｅｒｅ１０３５ｎｍａｎｄ１６９４ｎｍ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｗｈｅｔｈｅｒｒａｔｐｌａｓｍａｗａｓａｄｄｅｄｏｒｎｏｔ，ｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｒａｔｅａｎｄ
ｄｅｇｒｅｅｏｆｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓｗｅｒｅｍｏｒｅ
ｓｔａｂｌｅｔｈａｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｓｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｕｒｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｂｒｕｃｉｎｅｓｔｅａｌｔｈ
ｌｉｐｏｓｏｍｅｓａｒｅｍｏｒｅｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｔｈａｎｔｈｅｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｂｒｕｃｉｎｅ；ｓｔｅａｌｔｈｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；ｒｅｌｅａｓｅｐｒｏｆｉｌｅ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ［责任编辑 鲍 雷］
超临界 ＣＯ２萃取灵芝子实体中的三萜类成分
宋师花１，２，贾晓斌１，陈 彦１，２，陈 斌１，王丽静２，赵呈雷１
（１．江苏省中医药研究院 中药新型给药系统应用技术重点研究室，江苏 南京 ２１００２８；
２．江苏大学，江苏 镇江 ２１２０１３）
［摘要］ 目的：筛选超临界ＣＯ２萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件。方法：采用ＲＰＨＰＬＣ测定灵
芝酸Ｂ的含量、可见分光光度法测定灵芝总三萜含量，设计正交试验优化超临界 ＣＯ２萃取灵芝子实体中三萜类成
分的工艺条件。结果：超临界ＣＯ２萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件：萃取压力为２５ＭＰａ，萃取温度为
４５℃，萃取时间为１５ｈ，夹带剂（９５％乙醇）用量为３ｍＬ·ｇ－１。结论：超临界 ＣＯ２萃取灵芝子实体中三萜类成分
具有萃取效率高、萃取时间短、操作简单等优点，其方法可靠，切实可行。
［关键词］ 灵芝；超临界ＣＯ２萃取；正交试验；灵芝总三萜；灵芝酸Ｂ；ＲＰＨＰＬＣ
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１７２１０４０４
［收稿日期］ ２００８０２０８
［基金项目］ 江苏省公益专项（ＢＭ２００７７０１）
［通讯作者］ 陈 彦，Ｔｅｌ：（０２５）８５６３７８０９，Ｅｍａｉｌ：ｙｃｈｅｎ２０２＠ｙａ
ｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
灵芝是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，药用部
位为子实体、孢子体、菌丝体，２００５年版《中国药典》
收载的作为药材灵芝来源的是赤芝 Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉ
ｄｕｍ（Ｌｅｙｓｓ．ｅｘＦｒ．）Ｋｒａｓｔ．和紫芝 ＧｓｉｎｅｎｓｅＺｈａｏ，
ＸｕｅｔＺｈａｎｇ的干燥子实体［１］，具有补气安神，止咳
平喘之功效。现代药理研究表明，灵芝中主要有效
成分灵芝三萜具有抗肿瘤、抗突变、抗氧化、清除自
由基、提高机体免疫力等作用［２３］。该类化合物的传
统提取方法主要有氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂提
取［４５］，其提取效率较低，有溶剂残留，毒性较大。超
临界ＣＯ２萃取具有萃取效率高，有机残留少，绿色无
污染等优势，是一种很有发展前景及潜力的方法，但
文献报道以该法萃取灵芝孢子中三萜类成分居
多［６７］，而以该法萃取灵芝子实体中三萜类成分的报
道较少，其考察方法也多采用紫外分光光度法测定
灵芝总三萜的含量［８］，而用ＲＰＨＰＬＣ测定灵芝酸Ｂ
·４０１２·
第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８