全 文 ：Εφφεχτ οφ Σηενσυψιν ον τηε εξπρεσσιον οφ τολλ2λικε ρεχεπτορσανδ τηε
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(Τανγ ΧεντερφορΗερβαλΜεδιχινε Ρεσεαρχη, Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα, Χηινα Αχαδεµ ψ οφ
Χηινεσε ΜεδιχαλΣχιενχεσ, Βειϕινγ tsszss, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨¶²©≥«¨ ±¶∏≠¬± ·² • „• uyw1z ²± ·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©×• vo ׏• w ¤±§·«¨
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[ Κεψ ωορδσ] ≥«¨ ±¶∏¼¬±~ §µ∏ª¶¨µ∏°~ °¤¦µ²³«¤ª¨ ~ ׏• v~ ׏• w ≈责任编辑 古云侠  
叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制研究
裴迎新 tou o衡正昌 t3 o段广才 u o张遵真 t o王明臣 v o胡婵丽 v o高冬玲 v
ktq四川大学 华西公共卫生学院 o四川 成都 ytsswt~
uq郑州大学 公共卫生学院 o河南 郑州 wxssxu~vq郑州大学 基础医学院 o河南 郑州 wxssxul
≈摘要   目的 }探讨叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制 ∀方法 }∞≤|zsy细胞在 • ° Œ培养液 k含
tsh小牛血清 l中进行常规传代培养 ∀常规条件下培养 uw «后 o用叶黄素处理 o同时设溶剂对照组和 x2氟尿嘧啶
kx2ƒ∏l阳性对照组 ∀采用流式细胞术观察叶黄素对细胞凋亡的影响 o并用免疫组织化学方法检测其对凋亡调节蛋
白 …¤¬和 …¦¯2u表达的影响 ∀结果 }在实验条件下 otss Λª# °pt叶黄素处理细胞 |y «可促进细胞凋亡 ∀免疫组化
分析结果表明 o同样条件下 o叶黄素可抑制抗凋亡蛋白 …¦¯2u的表达并促进促凋亡蛋白 …¤¬的表达 ∀结论 }叶黄素
具有促进 ∞≤|zsy细胞凋亡的作用 o此作用可能是通过调节凋亡相关蛋白 …¦¯2u和 …¤¬而实现的 ∀
≈关键词   叶黄素 ~食管癌细胞 ∞≤|zsy~凋亡
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlsw2svvu2sw
≈收稿日期   ussy2s{2uv
≈基金项目   河南省医学科技攻关项目 kussyssz{l
≈通讯作者   3 衡正昌 oר¯}ksu{l{xxstu|{o∞2°¤¬¯}«¨ ±ª¯¬∏ƒ
«∏¤¬¬qº¦∏°¶q §¨∏q¦±
叶黄素 k ∏¯·¨¬±l又名植物黄体素 o存在于蔬菜 !
花卉 !水果 !玉米 !蛋黄与某些藻类中 o万寿菊中含量
尤为丰富 ∀流行病学研究表明 }叶黄素在预防视黄
斑退化 !肿瘤的发生与发展 !心血管疾病和增强机体
免疫力等方面有着广泛的生物学活性 ≈tou  ∀本课题
组前一阶段的研究证明 o叶黄素在体外能明显抑制
人食管癌细胞 ∞≤|zsy的增殖和诱导分化 o但是关
于叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制尚
不清楚 ∀从细胞生物学角度来看 o增殖与凋亡有着
密切的关系 ∀肿瘤细胞与其他活细胞一样 o具有增
殖 !分化 !细胞周期阻滞和凋亡的潜能 o其每一阶段
都具有特异性的代谢表型 ∀凋亡是由多基因控制的
一种主动性细胞自杀过程 ≈v  o与肿瘤的发生 !发展
与转归等病理生理过程有密切关系 ∀因此 o本研究
#uvv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
拟在前期工作的基础上 o检测叶黄素对 ∞≤|zsy细
胞凋亡 o以及对细胞凋亡调节蛋白 …¤¬和 …¦¯2u表
达的影响 o探讨其对食管癌 ∞≤|zsy细胞诱导凋亡
的效应及其机制 ∀
1 材料
1q1 试剂与仪器 • ° Œ tyws培养基 kŠ¬¥¦²公
司 lo标准胎牛血清 k中国医学科学院生物工程研究
所 lo胰酶 k美国 ≥¬ª°¤公司 lo…¤¬和 …¦¯2u免疫组化
试剂盒 k北京中杉金桥生物技术有限公司 l∀倒置
显微镜 k’≠ °˜≥lo酶联免疫检测仪 k×∞≤„‘ „2
xs{uo„∏¶·µ¬¤lo∞³¬¦¶p ÷型流式细胞仪 k… ¦¨®°¤±
≤²∏¯·¨µlo图象分析软件 ∂ t1yk上海山富科学仪器有
限公司 l∀
1q2 药物与细胞株 叶黄素由加拿大 ƒ²²§ • 2¨
¶¨¤µ¦« °µ²ªµ¤°o „ªµ¬¦∏¯·∏µ¨ i „ªµ¬2ƒ²²§提供 ox2氟
尿嘧啶为上海旭东制药厂产品 ∀人食管鳞癌细胞
∞≤|zsy由中国医学科学院肿瘤研究所惠赠 ∀
2 方法
2q1 细胞培养 ∞≤|zsy细胞在 • ° Œtyws培养液
k含 tsh小牛血清 l中 o采用开放式单层贴壁培养 ∀
培养条件为 vz ε oxh ≤’u o饱和湿度 ∀细胞呈贴壁
状态 o每 u ∗ v天传一代 o全部实验均用指数生长期
细胞 ∀
2q2 分组 设溶剂对照组 k二甲基亚砜 o⁄ ≥’ l}
体积含量比为 s1sth ~x2氟尿嘧啶阳性对照组 }终含
量 uxs Λª# °pt ~叶黄素组 }终含量为 tss Λª#
°pt ∀叶黄素用 ⁄ ≥’溶解后加入培养液中备用 ∀
2q3 流式细胞仪检测细胞凋亡 将 ∞≤|zsy细胞
接种于 u{ ¦°u培养瓶 o培养 uw «待细胞贴壁后 o加
入叶黄素 tss Λª# °pt处理 |y «o用胰酶消化收集
细胞 o充分吹打 o制成单细胞悬液 o离心固定后 °Œ染
色 o以未加受试物者为对照组 ∀用流式细胞仪在
w{{ ±°波长下观察亚二倍体细胞所占比例 ∀
2q4 免疫组化检测 …¤¬和 …¦¯2u蛋白的表达 将
细胞接种于 u{ ¦°u培养瓶内 o叶黄素 tss Λª# °pt
s1sth二甲基亚砜溶剂对照组 ~x2氟尿嘧啶阳性对
照组 uxs Λª# °pt ∀分别处理 |y «后 o胰蛋白酶消
化 o收集细胞 o调细胞为 t ≅ tsy个 r°pt o滴加细胞
于预处理的载玻片上 kus ˏr片 lo自然干燥 owh多
聚甲醛固定 us °¬±os1th ×µ¬·²±2tss作用 x °¬±后
按操作程序说明书作免疫组化染色 ∀用图象分析软
件 ∂ t1y对结果进行半定量分析 o测定平均积分吸
光度值 kΑlo积分吸光度值越高 o表明免疫反应产物
的颜色越深 o即表达越多 ∀
2q5 统计学分析 用 ≥°≥≥ tu1s正版软件对结果
进行统计分析 o各组均数的比较采用单因素方差分
析和 τ检验 ∀凋亡率的检验用 ≤«¬2¶´∏¤µ¨进行分析 o
数据均以 cξ ? σ表示 ∀
3 结果
3q1 对细胞凋亡的影响 流式细胞仪分析结果显
示 o叶黄素可明显促进细胞的凋亡作用 o食管癌细胞
出现明显的亚二倍体峰 o与对照组比较 o差异有显
著意义 kΠ s1stlo见表 t∀
表 t 叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响 kcξ ? σ, ν € yl
组别 剂量 rΛª# °pt 细胞凋亡率 rh
对照 p t1|y ? s1syw
叶黄素 tss v1t| ? s1szytl
注 }与对照组相比 tl Π  s1st
3q2 对 …¤¬o…¦¯2u蛋白表达的影响 图 tou显示 o以
及用图象分析软件 ∂ t1y对结果进行半定量分析 o见
表 u∀表明在实验浓度条件下 o与溶剂对照组相比 o
叶黄素和 x2氟尿嘧啶 kx2ƒ∏l对 ∞≤|zsy细胞处理 |y «
后 o能够显著抑制 …¦¯2u的表达 kΠ  s1stlo促进 …¤¬
蛋白的表达 kΠ s1stlo结果具有统计学意义 ∀此结
果提示叶黄素通过影响 …¦¯2u和 …¤¬的表达而实现对
∞≤|zsy细胞增殖和凋亡的调节 ∀
图 t 叶黄素对 ∞≤|zsy细胞 …¦¯2u蛋白表达的影响 k ≅ wssl
#vvv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ w
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图 u 叶黄素对 ∞≤|zsy细胞 …¤¬蛋白表达的影响 k ≅ wssl
表 u 叶黄素对 ∞≤|zsy细胞 …¦¯2u和 …¤¬蛋白
表达的 kΑl比较 kcξ ? σ, ν € yl
组别
剂量
rΛª# °pt
ν …¦¯2u ν …¤¬
对照 p uw{ yx1x{ ? w1uy uxv xz1|v ? z1xt
叶黄素 tss vs| yv1xy ? x1tttl ust yw1xy ? z1vwtl
x2ĸ ts vxy ys1s| ? x1sytl uyt {x1yx ? y1tytl
注 }与对照组相比 tl Π  s1 st
4 讨论
叶黄素又名 /植物黄体素 0o是一种性能优异的
抗氧化剂 o抗氧化能力与其分子中的共轭双键紧密
相关 o具有抵御自由基在人体内造成的细胞与器官
损伤 o从而可防止过氧化物引发的心血管硬化 !冠心
病和肿瘤等疾病 ≈w  ∀
本课题研究叶黄素在体外对人食管鳞癌细胞
∞≤|zsy凋亡的影响 o并对其可能的机制进行探讨 ∀
结果表明 o叶黄素在 tss Λª# °pt的剂量具有促进
∞≤|zsy细胞凋亡作用 ∀ …¦¯2u是一个抑制细胞凋亡
的基因 o而 …¤¬是一个细胞增殖 !促进细胞凋亡的抑
癌基因 o并对 …¦¯2u的功能有重要调节作用 ∀即 …¤¬
和 …¦¯2u构成一个反馈调节因子 o两者的平衡是决
定细胞死亡或存活的重要因素 ≈xo y  o因此 …¤¬o…¦¯2u
蛋白表达比例有重要的生理意义 ∀该研究结果表
明 o在检测浓度范围内 o叶黄素能增强 …¤¬蛋白的表
达 o同时下调 …¦¯2u蛋白的表达 ∀叶黄素通过对 …¤¬
和 …¦¯2u蛋白表达的调节 o改变二者的比例 o从而促
进 ∞≤|zsy细胞凋亡 ∀
≈参考文献  
≈t  Šµ¤¶¶°¤±± q × µ¨³¨ ±²¬§¶¤¶³¯¤±·¤±·¬²¬¬§¤±·¶≈ q ∂ ¬·¤° ‹²µ°o
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±²°¤≈ q ‘¤·¯≤¤±¦¨µŒ±¶·o ussyo|{kzl}w{uq
≈v   ¤µ·¬± ½¨2„µµ¬¥¤¶ƒo ‘∏± ½¨2∂ ¬¯¯¤µ o ∏¦¤¶„ • o ·¨¤¯q Œ°2°∏2
±²©¯∏²µ²° ·¨µ¬¦¶·∏§¼ ²©…¦¯2u ¤±§…¤¬ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ¬± ¦¯¬±¬¦¤¯ ©µ¨¶«
·∏°²µ¶¤°³¯ ¶¨©µ²° ¥µ¨¤¶·¦¤±¦¨µ³¤·¬¨±·¶≈ q „±·¬¦¤±¦¨µ• ¶¨o
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≈w  孙 震 o姚惠源 q叶黄素的抗癌作用及其研究现状 ≈ q生物技
术通讯 oussxotyktl}{wq
≈x  ײ°¥²µ…o • ∏±§¨ ¯¯ Žo ’ ·¯√¤¬q …¦¯2u ³µ²°²·¨¶³µ¨°¤·∏µ¨ ¶¨± ¶¨2
¦¨±¦¨ ¬±§∏¦¨§¥¼ ²±¦²ª¨ ±¬¦≈ q • ¤¶…¬²¦«¨ ° …¬²³«¼¶• ¶¨≤²°2
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≈y  ‹ ·¨½ ≤o … µ¨±¤¶¦²±¬°oƒ¬¶«¨ µo ·¨¤¯q °µ²¤³²³·²·¬¦…¤¬ ¤±§…¤®
°²§∏¯¤·¨ ·«¨ ∏±©²¯§¨ §³µ²·¨¬± µ¨¶³²±¶¨ ¥¼ ¤§¬µ¨¦·¬±·¨µ¤¦·¬²± º¬·«
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Εφφεχτσανδ µ εχηανισµ οφ λυτειν ον αποπτοσισ οφ
εσοπηαγεαλχαρχινοµ α ΕΧ|zsy χελλσ
°∞Œ≠¬±ª2¬¬±tou o ‹∞‘Š «¨ ±ª2¦«¤±ªt o ⁄˜„‘Š∏¤±ª2¦¤¬u o ‹ „‘Š ∏±2½«¨ ±t o
• „‘Š  ¬±ª2¦«¨ ±v o ‹˜ ≤«¤±2¯¬v o Š„’ ⁄²±ª2¯¬±ªv
(t. Ηυαξι Σχηοολοφ Πυβλιχ Ηεαλτη, Σιχηυαν Υνιϖερσιτψ, Χηενγδυ ytsswt, Χηινα;
u. Σηοολοφ Πυβλιχ Ηεαλτη, Υνιϖερσιτψ οφ Ζηενγζηου, Ζηενγζηου wxssxu, Χηινα;
v. Χολλεγε οφΜεδιχαλΣχιενχε, Ζηενγζηου Υνιϖερσιτψ, Ζηενγζηου wxssxu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²© ∏¯·¨¬± ²± ¤³²³·²¶¬¶¤±§¬·¶° ¦¨«¤±¬¶°q Μετηοδ : ׫¨ ¦¨ ¯¯¶²©«∏°¤± ¶¨²³«¤ª¨ ¤¯
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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s1{th ∀
2q6 稳定性试验 取提取的同一样品溶液 o依标准
曲线制备方法 o于 sotouovowouwozu «o分别测定峰
面积 o试验结果表明 o样品溶液在 zu «内测定 o色谱
峰面积无明显变化 o• ≥⁄为 t1zuh o表明样品在 zu
«内稳定 ∀
2q7 加样回收率试验 精密吸取已知含量样品稀
释液 s1x °共 w份及 s1x °不同含量的麦角甾醇
对照品液于离心管中 o依标准曲线制备方法测定含
量 o计算其回收率均值为 tst1zuh o• ≥⁄为 u1xuh ∀
2q8 麦角甾醇的提取 称取赤灵芝粉末 x ªo‘¤’‹
u ªo加入 |xh乙醇相应的体积于 {s ∗ |s ε 回流皂
化 o冷却后过滤 o用 |xh乙醇充分洗涤 o收集滤液 o
浓缩干燥 o再用一定量的正己烷 2水 ktΒtl混合液萃
取 o其中正己烷 ts °o振摇后 o置于室温下 us °¬±
分层 o吸取正己烷层 u °o用乙醇溶解并定容 ts
°o待测 ∀按上述试验条件分别进行试验 o正交试
验结果如表 u∀
表 u | kvw l正交实验结果 °ª# ªpt
‘²q 麦角甾醇 ‘²q 麦角甾醇
t s1y|t y s1{s{
u s1v|w z s1zxu
v s1yss { s1yyz
w s1x{u | s1yty
x s1xus
3 分析和结论
根据表 v直观分析可知 ov因素对实验结果影
响的程度为 Χ  Β  Αo即回流的次数影响最大 o其
次是回流的时间 o最后是溶剂的用量 ∀结合各因素
Κ值的大小可知最优的工艺条件是 Χt Βv Αv o即加入
ts倍的溶剂量 o在 {s ε 回流状态下 o每次 t1x «o提
取 v次 ∀由方差分析可知 o在本实验的考察范围内 o
v因素对麦角甾醇的提取都有显著影响 ∀
本实验利用 ‹°≤测定麦角甾醇的含量 o方法
稳定可靠 o准确性高 o操作简单 ∀并且通过正交试验
确立了最优的工艺条件 o为进一步的工业生产提供
了参考 ∀
≈参考文献  
≈t  赵东旭 o杨新林 o王帮武 o等 q灵芝研究的若干进展 ≈ q食用菌
学报 ot|||oykvl}|q
≈u  章灵华 o肖培根 q近十年灵芝研究的进展 ≈ q西北药学杂志 o
t||vo{ktl}v q¯
≈v  张昭明 o潭天伟 q麦角固醇的市场前景 ≈  q精细与专用化学
品 oussuouu}|q
≈w  吴 克 q Τριχηοδερµ α ϖιριδε菌生物量测定及其纤维素酶合成特
征 ≈ q食品与发酵工业 oussuou{k{l}|q
≈x  谢和金 q高效液相色谱法测定酵母中麦角固醇含量 ≈ q生物
工程进展 ousssouskwl}zxq
≈y  °¬µ­²  ¤·¬¯¤o „±±¤2 ¤¬­¤¤°³¬o • ¬¬·¤ • ²±®¤¬± ±¨o ·¨¤¯q ≥·¨µ²¯
¤±§√¬·¤°¬± ⁄u ¦²±·¨±·¶¬± ¶²°¨ º¬¯§ ¤±§ ¦∏¯·¬√¤·¨§ °∏¶«µ²²°¶
≈ q ƒ²²§≤«¨ °o ussuozy}u|vq
≈责任编辑 鲍 雷  
k上接第 vvw页 l
¦¤µ¦¬±²°¤∞≤|zsy º µ¨¨ ªµ²º± ¬± • ° Œ° §¨¬∏° ¦²±·¤¬±¬±ªtsh ¥²√¬±¨¶¨µ∏° ¤±§º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§º¬·« ∏¯·¨¬± ¤·tss Λª# °pt ¦²±¦¨±2
·µ¤·¬²±q ƒ ²¯º ¦¼·²° ·¨µ¼ º¤¶ °¨³¯²¼¨ §·² ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²© ∏¯·¨¬± ²± ¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶²©∞≤|zsy ¦¨¯¯¶q ‹¬¶·²¦«¨ °¬¶·µ¼ º¤¶³¨ µ2
©²µ° §¨·² §¨ ·¨µ°¬±¨¤³²³·²¶¬¶2µ¨ ¤¯·¨§³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¬²±q Ρ εσυλτ: ƒ ²¯º ¦¼·²° ·¨µ¼ ¤±¤¯¼¶¨¶µ¨√ ¤¨¯ §¨ ·«¤·¯∏·¨¬± ¬±¦µ¨¤¶¨§ ∞≤|zsy ¦¨¯¯
¤³²³·²¶¬¶µ¤·¬² º«¨ ± ·µ¨¤·¨§º¬·« ∏¯·¨¬± tss Λª# °pt ¤·|y «q ∏·¨¬± §¨ ¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©…¦¯2u ³µ²·¨¬± ¤±§¬±¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¬¨2
³µ¨¶¶¬²± ²©…¤¬³µ²·¨¬± ¬± ∞≤|zsy ¦¨¯¯¶q Χονχλυσιον: ∏·¨¬± ¦²∏¯§¬±«¬¥¬·°¬·²¶¬¶¤±§¶·¬°∏¯¤·¨ ¤³²³·²¶¬¶²©∞≤|zsy ¦¨ ¯¯¶q ׫¨ ¤³²³2
·²·¬¦ ©¨©¨¦·°¤¼ µ¨¶∏¯·©µ²° ·«¨ §²º±2µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©…¦¯2u ¤±§∏³2µ¨ª∏¯¤·¬²± ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©…¤¬q
[ Κεψ ωορδσ] ∏¯·¨¬±~ ∞≤|zsy ¦¨¯¯¶~ ¤³²³·²¶¬¶
≈责任编辑 古云侠  
5中国中药杂志 6发表的论文 /基于地理信息系统的苍术道地药材气候
生态特征研究 0k作者 }郭兰萍 o黄璐琦 o阎 洪 o等 lo被评为 /第四届中国科
协期刊优秀学术论文 0 ∀
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