全 文 ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｉｓｏｍｅｒｓｉｎ
ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａｂｙＨＰＬＣＭＳａｎｄＨＰＬＣ１ＨＮＭＲ
ＷＡＮＧＹｉｎｇｈｏｎｇ１，ＬＩＬｅｉ２，ＺＨＡＮＧＨｏｎｇｇｕｉ２，ＱＩＡＯＹａｎｊｉａｎｇ２
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅＢｅｉｊｉｎｇ１０００５０，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｉｓｏｍｅｒｓｉｎＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙ
ＨＰＬＣＭＳｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈＨＰＬＣ１ＨＮＭＲ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｆｏｕｒｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｉｓｏｍｅｒｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓａｓｔｉｌｂｉｎ，ｎｅｏａｓｔｉｌ
ｂｉｎ，ｉｓｏａｓｔｉｌｂｉｎ，ｎｅｏｉｓｏａｓｔｉｌｂｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄｒａｐｉｄｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｉｎＳ．
ｇｌａｂｒａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａ；ｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ；ＨＰＬＣＭＳ；ＨＰＬＣ１ＨＮＭＲ
［责任编辑 王亚君］
［收稿日期］ ２００７０５１６
［基金项目］ 辽宁省教育厅科研基金项目（０２２００９５３）
［通讯作者］ 李发胜，Ｔｅｌ：（０４１１）８６１１０３９１，Ｅｍａｉｌ：ｌｆｓ９２０＠
ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
漏芦多糖的提取、单糖组分分析及含量测定
李发胜，徐恒瑰，燕小梅，李明阳，刘 辉
（大连医科大学 检验医学院，辽宁 大连 １１６０４４）
［摘要］ 目的：提取漏芦多糖，分析其单糖组分并测定其质量分数，为以后漏芦多糖研究提供参考。方法：水
提醇沉法提取粗多糖，Ｓｅｖａｇ法除蛋白，高效阴离子交换色谱脉冲安培检测（ＨＰＡＥＣＰＡＤ）法测定其单糖组成，苯
酚硫酸法测定多糖质量分数。结果：漏芦多糖的单糖组成为葡萄糖、阿拉伯糖和果糖，其摩尔比为１∶１６１∶２２１。
以单糖混合物为对照品测得漏芦多糖中总糖的质量分数为９５７８％。结论：ＨＰＡＥＣＰＡＤ法具有样品不用衍生、灵敏
度高、精密度好等优点，适合多糖类样品中单糖的分析；苯酚硫酸法实验操作简便，准确可靠，可用于多糖含量测定。
［关键词］ 漏芦；多糖；高效阴离子交换色谱；脉冲安培检测；苯酚硫酸法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１１１２８４０３
漏芦为菊科植物Ｒｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍ（Ｌ．）ＤＣ
的干燥根，始载于《神农本草经》，列为上品。味苦、
咸，性寒，入胃、大肠经。具有清热解毒、消痈排脓、
通乳的功效。药理研究表明，漏芦提取液具有较好
的抗动脉粥样硬化［１］、抗缺氧和益智作用［２，３］。作
者对漏芦免疫调节的有效成分研究表明，漏芦多糖
有很好的免疫上调作用［４］，并采用高效阴离子交换
色谱脉冲安培检测（ＨＰＡＥＣＰＡＤ）法测定其单糖
组成，苯酚硫酸法测定多糖质量分数，为漏芦的综
合利用和质量评价提供科学的依据。
１ 仪器、试剂与药材
ＨＰＬＣ，５８２型泵、５４２型自动进样器、Ｃｏｕｌｏｃｈｅｍ
Ⅱ安培脉冲检测器及 ＣｏｕｌＡａｒｙｆｏｒｗｉｎｄｏｗｓ色谱工
作站；ＣａｒｂｏＰａｃＰＡ１０色谱柱（２ｍｍ×２５０ｍｍ，Ｄｉ
ｏｎｅｘ公司，美国）；ＵＶ－７５４型分光光计（上海第三
分析仪器厂）。单糖对照品：Ｄ葡萄糖、Ｌ阿拉伯糖、
Ｄ果糖（Ｍｅｒｃｋ公司，美国），ＮａＯＨ（Ａｃｒｏｓ公司，比利
时）；其他试剂均为国产分析纯。试验用水为超纯
水（ＷａｔｅｒＰｒｏＰｓ９０００６０２型，美国 Ｌａｂｃｏｎｃｏ公司）。
漏芦Ｒ．ｕｎｉｆｏｒｕｍ购于大连国药大药房，经大连药品
检验所郭月秋主任药师鉴定。
２ 方法与结果
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第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８
２．１ 漏芦多糖提取纯化
漏芦多糖提取参照文献［５］进行，主要过程如
下：称取已干燥的漏芦２５０ｇ，加入适量８０％乙醇过
夜，回流提取３ｈ脱脂，药渣挥尽乙醇后，沸水提取２
次，每次２ｈ，合并提取液，浓缩至２００ｍＬ，加９５％乙
醇使醇含量达到８０％，于４℃冰箱中醇沉过夜，抽
滤，滤渣依次用无水乙醇、丙酮洗涤，得到粗多糖。
将粗多糖溶于水，用Ｓｅｖａｇ法除蛋白，反复进行至无
蛋白，流水透析后，蒸发浓缩至２００ｍＬ，加９５％乙醇
使醇含量达到８０％，于４℃冰箱中醇沉过夜，抽滤，
滤渣依次用无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，即得漏
芦多糖，提取率为５６％。
２．２ 漏芦多糖的单糖组分分析
２．２．１ 单糖对照品溶液的配制 精密称取１０５℃
干燥至恒重的葡萄糖、阿拉伯糖、果糖对照品各
１００ｍｇ，分别置于３个２５０ｍＬ量瓶中，加超纯水至
刻度，得到４０ｍｇ·Ｌ－１的各单糖标准储备液。分别
吸取个单糖标准储备液 ０，１０，２０，３０，４０，５０，６０，８０
μＬ置于１０ｍＬ量瓶中，用超纯水定容至刻度，得到
单糖的系列标准溶液。
２．２．２ 多糖水解时间的考察 分别取漏芦多糖
１０ｍｇ于３支具塞试管中，在每支中加入２ｍｏｌ·
Ｌ－１Ｈ２ＳＯ４２ｍＬ，封管于１００℃恒温水解 ２，４，６ｈ，
对其水解样品进行分析发现，２ｈ水解样品谱图分
离完全，可按标准谱图定位，表明多糖已水解完全；
水解４ｈ和６ｈ后，阿拉伯糖、果糖的峰面积相对有
下降趋势，且该趋势随水解时间的延长而加剧，表明
可能伴有单糖的降解或氧化等损失过程。故选择水
解时间为２ｈ。
２．２．３ 多糖水解样品的制备 取漏芦多糖 １０
ｍｇ，加入 ２ｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ２ＳＯ４２ｍＬ，封管１００℃恒温
水解２ｈ，冷却后用 ＢａＣＯ３完全中和，放置过夜，
３０００ｒ·ｍｉｎ－１离心 ５ｍｉｎ，以超纯水稀释到 ３０
ｍＬ，得样品液。
２．２．４ 色谱条件 ＣａｒｂｏＰＡＣＰＡｌ０糖色谱柱（２
ｍｍ×２５０ｍｍ），流动相为１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＯＨ，流
量１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，进样量１０μＬ，柱温３０℃。扫描
电位用三电位波形，工作条件为：工作电位Ｅ１为２００
ｍＶ，正清洗电位 Ｅ２为 ７００ｍＶ，负清洗 Ｅ３为 －９００
ｍＶ；间隔时间ｔ１为３００ｍｓ，ｔ２为１００ｍｓ，ｔ３为１００ｍｓ。
２．２．５ 对照品、样品的测定 对照品及样品经
０４５μｍ微孔滤膜滤过后，进样１０μＬ，在２．２．４项
下色谱条件下进行分析。漏芦多糖水解样品色谱图
见图 １。漏芦多糖样品中含有葡萄糖 ２３３μｇ·
ｍＬ－１、阿拉伯糖３１３μｇ·ｍＬ－１和果糖５１５μｇ·
ｍＬ－１，摩尔比１∶１６１∶２２１。
图１ 漏芦多糖水解样品色谱图
１．阿拉伯糖；２．葡萄糖；３．果糖
２．２．６ 精密度和加标回收率 称取１０ｍｇ漏芦多
糖样品７份，按２．２．３项水解处理后，０４５μｍ微孔
滤膜过滤，进样分析，考察方法的精密度。称取１０
ｍｇ漏芦多糖样品９份 ，分别加入适量葡萄糖、阿拉
伯糖、果糖对照品，水解处理后，０４５μｍ微孔滤膜
过滤，进样分析，测定其回收率。
结果表明：同一单糖的保留时间误差在 ０２０
ｍｉｎ以内，峰面积的 ＲＳＤ（ｎ＝７）１８４％ ～４９５％。
３种单糖的加标回收率９４７％ ～１０８４％。说明各
种单糖的测定均具有良好的准确度，分析方法可靠。
２．３ 多糖质量分数测定（苯酚硫酸法）
２．３．１ ５％苯酚溶液的配制 取分析纯苯酚 ２００
ｍＬ，蒸馏收集１８２℃馏分，准确称取１２５ｇ苯酚馏
分，加水稀释至２５０ｍＬ溶液，置棕色瓶内，放４℃冰
箱中备用。
２．３．２ 样品溶液的制备 精密称取漏芦多糖２００
ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶中，加蒸馏水至刻度 ，放入４℃
冰箱中备用。
２．３．３ 标准曲线的制备 分别精密称取１０５℃干
燥至恒重的葡萄糖（４４ｍｇ）、阿拉伯糖（５９ｍｇ）和
果糖对照品（９７ｍｇ），置于１００ｍＬ量瓶中，加蒸馏
水至刻度，配制成单糖混合对照品溶液（质量浓度
为０２ｍｇ·ｍＬ－１）。精确移取此溶液 １０，２０，
４０，５０，６０，８０，１００ｍＬ，分别置于 ５０ｍＬ量瓶
中，稀释至刻度摇匀，配成系列标准溶液。分别准确
移取１ｍＬ系列标准溶液于具塞试管中，以１ｍＬ蒸
馏水作空白，每管加入１ｍＬ５％苯酚溶液，再垂直
快速加入浓 Ｈ２ＳＯ４，摇匀，放置５ｍｉｎ，沸水加热１５
ｍｉｎ，之后用流水速冷至室温，于４９０ｎｍ处测定吸光
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第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８
度值，以质量浓度（Ｃ）为横坐标，吸光度（Ａ）为纵坐
标，得回归方程 Ａ＝５４５×１０－３Ｃ＋０００７６，ｒ＝
０９９９１，线性范围５～４０μｇ·ｍＬ－１。
２．３．４ 精密度试验 精密吸取混合单糖对照品系
列标准溶液中２０μｇ·ｍＬ－１的溶液１ｍＬ，按２．３．３
项下方法测定吸光度，连续测定５次，ＲＳＤ１２％。
２．３．５ 回收率试验 精密吸取样品溶液５ｍＬ，置
５０ｍＬ量瓶中，加蒸馏水至刻度 ，使质量浓度为２０
μｇ·ｍＬ－１，分别吸取此溶液１ｍＬ于５支具塞试管
中，再分别吸取对照品溶液（质量浓度分别为４，８，
１６μｇ·ｍＬ－１）各１ｍＬ于具塞试管中，按２．３．３项
下方法测定吸光度，结果回收率 ９９１４％，ＲＳＤ
２９％。
２．３．６ 样品测定 吸取样品溶液３ｍＬ（５份），分
别置于５０ｍＬ量瓶中，蒸馏水定容，吸取１ｍＬ置于
试管中，按２．３．３项下方法测定吸光度，多糖质量分
数平均为９５７８％。
３ 讨论
ＨＰＡＥＣＰＡＤ法是近年发展起来的分析糖类的
方法［６］，用强碱为淋洗液可使弱酸性的糖类化合物
（ｐＫａ＞１１）离子化，以阴离子的形式存在。根据不
同糖类化合物 ｐＫａ的差异引起的离子交换作用的
差异以及某些糖类与阴离子交换树脂之间的疏水性
相互作用的不同，实现糖类化合物的高效阴离子交
换分离。然后根据羟基在电极表面发生氧化反应产
生的电流大小实现简单糖类、胺基糖类和糖酸的检
测。该方法具有不用衍生、操作方便、灵敏度高、不
使用有毒化学试剂和有机溶剂的优点，对糖类的检
出限可以达到１０－９ｍｏｌ数量级［７］。
本实验用ＣａｒｂｏＰａｃＰＡ１０色谱柱分离，ＮａＯＨ强
碱性溶液为淋洗液，脉冲安培三电位波形检测糖类，
在６ｍｉｎ内快速分离并测定漏芦多糖水解液中３种
单糖，确定了漏芦多糖组分。按照漏芦多糖中各单
糖的摩尔比制作混合标准曲线，苯酚硫酸法测漏芦
多糖质量分数，测定结果更接近真实值。
［参考文献］
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实验研究［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００３，２０（２）：１３９．
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的影响及其可能机制［Ｊ］．中国中药杂志，２００７，３２（５）：４３３．
［５］ 方积年．多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定［Ｊ］药
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［６］ ＣａｉＹＱ，ＬｉｕＪＳ，ＳｈｉＹＬ，ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｅｖｅｒａｌｓｕｇａｒｓ
ｉｎｓｅｒｕｍｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈ
ｐｕｌｓｅｄａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＣｈｒｏｍａＡ，２００５，１０８５（１）：
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［７］ 梁立娜，张 萍，蔡亚岐，等．高效阴离子交换脉冲安培检测同
时分析单糖和糖醛酸［Ｊ］．分析化学，２００６，３４（１０）：１３７１．
Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍＲｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍ
ＬＩＦａｓｈｅｎｇ，ＸＵＨｅｎｇｇｕｉ，ＹＡＮＸｉａｏｍｅｉ，ＬＩＭｉｎｇｙａｎｇ，ＬＩＵＨｕｉ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＤａｌｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０４４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍＲｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍ，ｄｅｔｅｒ
ｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｏｍｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｗａｓ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈｐｕｌｓｅｄａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＨＰＡＥＣＰＡＤ）．Ｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｕｒｉｃ
ａｃｉｄｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａ
ｒｉｄｅｓｆｒｏｍＲ．ｕｎｉｆｏｒｕｍａｒｅｇｌｕｃｏｓｅ，ａｒａｂｏｎｏｓｅａｎｄｆｒｕｃｔｏｓｅ．Ｔｈｅｉｒｍｏｌａｒｒａｔｉｏｓａｒｅ１∶１６１∶２２１．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｓ
９５７８％，ｔａｋｉｎｇｔｈｅｍｉｘｔｕｒｅｏｆｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｓｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＨＰＡＥＣＰＡＤｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏａｎａ
ｌｙｚｅｔｈｅｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗｉｔｈｈｉｇｈｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｃｏｎ
ｖｅｎｉｅｎｔａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｒｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｐｕｌｓｅｄａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；ｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ ［责任编辑 王亚君］
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