全 文 :·研究论文·
药用菊花不同栽培类型总黄酮动态积累研究
郭巧生,汪 涛,程俐陶,王桃银,梁迎暖
(南京农业大学 中药材研究所,江苏 南京 210095)
[摘要] 目的:研究药用菊花总黄酮花期动态积累,为药用菊花总黄酮资源合理利用及最佳采收期确定提供
依据。方法:测定不同栽培类型药用菊花花期不同时期的总黄酮含量,确定其总黄酮成分动态积累过程。结果与
结论:药用菊花在舌状花开放50%管状花开放30%或者舌状花开放70%管状花开放50%,不同栽培类型药用菊花
总黄酮积累普遍达到较高的水平。只有少数类型在舌状花、管状花全部开放时总黄酮积累达到最高值。
[关键词] 药用菊花;总黄酮;动态积累
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)11123703
[收稿日期] 20070524
[基金项目] 国家科技攻关计划项目(2004BA721A20);国家
科技支撑计划项目(2006BAI06A1211)
[通讯作者] 郭巧生,Tel:(025)84396591,Email:gqs@njau.
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药用菊花为菊科菊属多年生草本植物菊 Chrys
anthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序,味甘、
性寒,具有疏风、清热、明目、解毒功效[1]。我国有
八大主流药用菊花[2],其中《中国药典》2005年版一
部收载了滁菊、亳菊、贡菊和杭菊[3],其主要化学成
分包括黄酮类、挥发油类、绿原酸类等[4],并把绿原
酸含量作为指标性成分。从药用菊花中分离得到的
一些黄酮类化合物还具有抗艾滋病、抗癌[5]等作
用,因此药用菊花黄酮类成分具有极高的开发利用
价值。杨俊等[6]曾研究延迟采摘其化学成分的变
化,郭巧生等[712]对药用菊花不同栽培类型内在质
量、新品种选育、以及我国主要药用菊花类型间的亲
缘关系等多方面进行了研究,但系统地对不同栽培
类型药用菊花中总黄酮成分在花期动态变化比较分
析的报道很少。
本实验通过对南京农业大学药用菊花种质圃中
18个不同栽培类型菊花总黄酮动态积累含量进行
比较分析,以期为药用菊花的质量评价和遗传多样
性研究提供依据,为合理采集药用菊花、高效利用其
黄酮类化合物提供理论基础。
1 材料
2005年9月起,从南京农业大学药用菊花种质
圃中分花期不同开放程度5次分别采摘18个不同
栽培类型的药用菊花,备用。所有供试材料均经过
南京农业大学中药学系郭巧生教授鉴定为菊科菊属
菊C.morifolium的18个不同栽培类型。具体开放
程度标准为:A.舌状花、管状花都未开放;B.舌状花
开放30%、管状花未开放;C.舌状花开放50%、管状
花开放 30%;D.舌状花开放 70%、管状花开放
50%;E.舌状花、管状花全部开放。
756CRT型紫外可见分光光度计(上海精密科
学仪器有限公司),KQ250B型超声仪(昆山市超声
仪器公司);芦丁对照品(中国药品生物制品检定
所,批号100080200306);所用试剂皆为分析纯。
2 方法
2.1 供试液制备及测定 分别精密称取样品各1
g,置于锥形瓶中,加70%乙醇30mL,在60℃水温
恒温萃取黄酮30min,取出,抽滤,洗涤至100mL量
瓶中,加70%乙醇至刻度,振荡摇匀,备用[4,13]。
精密吸取供试样品溶液3mL于10mL量瓶中,
用30%乙醇定容至刻度,分别精密吸取2mL于10
mL试管中,加5%亚硝酸钠溶液03mL,振荡摇匀,
放置6min,加10%硝酸铝03mL,振荡摇匀,放置
6min,再加4%氢氧化钠4mL,振荡摇匀,用30%乙
醇定容至刻度,振荡摇匀,放置15min后置比色皿
中在510nm处测定吸光值。以30%乙醇溶液放入
比色皿中作为空白对照。
2.2 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品102
mg,置50mL量瓶中,用70%乙醇并使其溶解,定容
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至刻度,振荡摇匀,配制成0204mg·mL-1的对照
品溶液,备用。
2.3 标准曲线绘制 精密吸取芦丁对照液10,20,
30,40,50mL,分别置10mL量瓶中,加5%亚硝酸
钠溶液03mL,振荡摇匀,放置6min,加10%硝酸铝
03mL,振荡摇匀,放置6min,再加4%氢氧化钠4
mL,振荡摇匀,用30%乙醇定容至刻度,振荡摇匀,放
置15min后采用分光光度法[《中国药典》一部附录
(VB)]置比色皿中在510nm处测定吸光值,以对照
品量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,得回归方程为
Y=10805X+00071(R2=09993)。表明芦丁在
0204~1020mg呈良好的线形关系。
2.4 精密度试验 取供试品溶液重复测定5次,结
果精密度好,RSD178%。
2.5 重复性试验 取样品粉末按2.1项方法制成
供试品溶液5份,依法测定,结果重复性好,总黄酮
含量为642%,RSD234%。
2.6 稳定性试验 取供试品溶液于室温放置24h
后依法测定,结果稳定,RSD183%(n=5)。
2.7 加样回收率试验 称取一定量的供试品,分别
加入35,24,27,40,31mg芦丁对照品,按2.1
供试品制备项测定,芦丁加样回收率 988% ~
1024%,平均加样回收率997%,表明方法稳定。
2.8 样品含量测定 样品按 2.1项制成供试品溶
液,依法测定。
3 结果分析
绝大部分药用菊花在各自花期的不同阶段,总
黄酮含量的动态积累存在一个由低到高再降低的过
程,但异种大白菊花、小亳菊在花期的整个过程中存
在例外,总黄酮含量始终保持由低到高的上升趋势。
大洋菊、小汤黄、晚贡菊、大亳菊、怀小黄菊、射阳大
白菊总黄酮含量在舌状花开放 50%、管状花开放
30%总黄酮含量达到最高值;早小洋菊、晚小洋菊、
早贡菊、滁菊、怀大白菊、射阳小白菊、射阳红心菊、
射阳长瓣菊、射阳黄菊及射阳大黄菊在舌状花开放
70%、管状花开放50%总黄酮含量达到最高值;异
种大白菊和小亳菊在舌状花、管状花都全部开放时,
总黄酮含量达到最高值。
不同栽培类型药用菊花在同一时期进行纵向比
较,发现在同一时期内,药用菊花总黄酮含量存在显
著差异。在A(舌状花、管状花都未开放)时期,晚小
洋菊总黄酮最高为095%,大亳菊最低为027%;在
B(舌状花开放30%、管状花未开放)时期,射阳大黄
菊总黄酮最高为608%,小亳菊最低为078%;在C
(舌状花开放50%、管状花开放30%)时期,大洋菊总
黄酮最高为836%,早小洋菊最低为109%;在 D
(舌状花开放70%、管状花开放50%)时期,晚小洋菊
总黄酮最高为901%,射阳红心菊最低为152%;在
E(舌状花、管状花都全部开放)时期,射阳小白菊总黄
酮最高为541%,射阳红心菊最低为131%(表1)。
表1 不同栽培类型药用菊花花期总黄酮质量分数(珋x±s,n=3) %
栽培类型
花期不同开放程度
A B C D E
早小洋菊 088±003dbc 098±002cdmn 109±002cl 537±013af 497±007bbcd
晚小洋菊 095±004ea 142±004dk 317±004ci 901±018aa 485±017bcd
大洋菊 066±002ef 181±005di 836±012aa 721±008bd 330±002ch
异种大白菊 089±002eb 120±002dl 147±005ck 209±004bjk 512±015ab
小汤黄 089±002eb 108±004dm 453±010af 213±022cjk 367±023bg
早贡菊 084±002dc 518±008bb 576±010ae 407±002ci 413±018cef
晚贡菊 031±001dj 506±011bc 773±021ab 445±006ch 432±006ce
滁菊 089±004eb 237±003adg 385±008ch 542±014af 508±019bbc
小亳菊 049±002eg 078±002do 190±006cj 235±021bj 397±005af
大亳菊 027±002ej 089±003dno 322±006ai 205±007bk 158±003cl
怀大白菊 053±002eg 369±017de 407±012cg 554±017af 482±012bd
怀小黄菊 047±003eh 313±012cf 785±009ab 547±010bf 237±008dk
射阳小白菊 086±003ebc 205±008dh 576±011be 774±035ac 541±024ca
射阳红心菊 049±002eg 080±002do 111±002cl 152±004al 131±003bm
射阳大白菊 086±002dbc 135±002ck 725±019ac 500±013bg 493±007bbcd
射阳长瓣菊 036±002di 398±010bd 396±011bgh 441±011ah 290±008ci
射阳黄菊 072±001ee 164±004dj 778±015bb 802±031ab 263±006cj
射阳大黄菊 080±002ed 608±005ca 642±010bd 663±015ae 267±011dj
注:置信区间P=95%,表中字母表示P<005差异显著性,上标为横向比较,下标为纵向比较
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4 小结与讨论
不同栽培类型药用菊花在花期的不同时期,总
黄酮的积累状况各不相同。其中大洋菊、小汤黄、晚
贡菊、大亳菊、怀小黄菊、射阳大白菊总黄酮动态积
累曲线在舌状花开放50%、管状花开放30%、达到
峰值,动态曲线呈倒正态分布型;早小洋菊、晚小洋
菊、早贡菊、滁菊、怀大白菊、射阳小白菊、射阳红心
菊、射阳长瓣菊、射阳黄菊及射阳大黄菊动态积累曲
线在舌状花开放70%、管状花开放50%、达到峰值,
动态积累曲线呈倒“7”字型;只有异种大白菊和小
亳菊的总黄酮动态积累曲线在舌状花、管状花全部
开放时达到峰值,动态积累曲线呈递增型。即绝大
多数药用菊花在花期的 C(舌状花开放50%、管状
花开放30%),D(舌状花开放、管状花开放50%)时
期总黄酮积累达到一个较高的水平,在此时期采摘
能够保证药用菊花的总黄酮成分得到最大限度的利
用。当然药用菊花的利用还要考虑其他成分的综合
因素,在以后的研究中将综合更多因素进行探讨。
[参考文献]
[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].下册.上海:上海科技出版
社,1997:2008.
[2] 何先元,郭巧生,徐文斌,等.道地药材菊花形成的原因[J].
中国中医药信息杂志.2005,12(10):54.
[3] 中国药典[S].一部.2005:218.
[4] 徐文斌,郭巧生,李彦农,等.药用菊花不同栽培类型内在质
量的研究[J].中国中药杂志,2005,30(21):1645.
[5] HuCQ.Antiaidsagents,10acacetin7OβDgalactopyrano
side,anantiHIVprinciplefromChrysanthemummorifoliumand
astructureactivitycorelationwithsomerelatedflavoids[J].J
NatProd,1994,57(1):42.
[6] 杨 俊,蒋惠娣,戈 震,等.杭白菊绿原酸及其他成分的含量在
采摘期中的动态变化[J].中国药学杂志,2003,38(11):833.
[7] 郭巧生,何先元,刘 丽,等.药用白菊花4个栽培类型内在
质量的比较研究[J].中国中药杂志,2002,27(12):896.
[8] 郭巧生,何先元,刘 丽,等.药用白菊花新品种选育研究
[J].中国中药杂志,2003,28(1):28.
[9] 刘 丽,郭巧生,安 琼,等.药用白菊花4个栽培类型农药
与重金属残留的比较研究[J].中国中药杂志,2003,28(8):
711.
[10] 汪 涛,郭巧生,沈学根.杭菊不同栽培类型内在质量比较研
究[J].中国中药杂志,2007,32(9):849.
[11] 徐文斌,郭巧生,王长林.药用菊花遗传多样性的RAPD分析
[J].中国中药杂志,2006,31(1):18.
[12] 何先元,郭巧生,徐文斌,等.不同药用白菊花栽培品种田间
试验研究[J].安徽农业大学学报,2005,32(3):25.
[13] 兰昌云,周崇松,范必威,等.超声波法提取槐花中黄酮的最
佳工艺研究[J].天然产物研究与开发,2005,17(1):55.
Studyondynamicaccumulationofflavoneinvarious
Chrysanthemummorifoliumformedicine
GUOQiaosheng,WANGTao,CHENGLitao,WANGTaoying,LIANGYingnuan
(InsitituteofChineseMedicinalMaterials,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)
[Abstract] Objective:TostudythedynamicaccumulationofflavonoidsinChrysanthemummorifoliuminordertochosetheop
timalharvesttime.Method:TheflavonoidcontentwasdeterminedinvariousC.morifoliumandindiferentperiods.ResultandCon
clusion:TheaccumulationofflavonoidinvariousChrysanthemumreachedahighlevelwhenlingulateflowerswerein50% blossomand
tubeonesin30% orlingulateflowerswerein70% blossomandtubeonesin50%.OnlyfewofC.morifoliumreachedahighlevelof
flavonoid,whenlbothingulateandtubeflowersblossomedfuly.
[Keywords] Chrysanthemummorifoliumformedicine;totalflavone;dynamicaccumulation
[责任编辑 张宁宁]
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