全 文 ：组织培养法生产石牌广藿香及其质量分析
莫小路，汪小根，邱蔚芬，袁 亮，陈瑜珍
（广东省中药研究所，广东 广州 ５１０５２０）
［收稿日期］ ２００６１２１８
［通讯作者］ 莫小路，Ｔｅｌ：（０２０）２２８４６３９０，Ｅｍａｉｌ：ｍｏｘｌ＠ｇｄｙｚｙ．
ｅｄｕ．ｃｎ
广藿香Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ（Ｂｌａｎｃｏ）Ｂｅｎｔｈ．为唇
形科刺蕊草属植物，我国南方多省均有引种栽培，
其干燥地上部分为中药广藿香，是广东省主要的道
地药材之一，具有芳香化浊、开胃止呕、发表解暑的
功效［１］。
广藿香因产地的自然环境、种植习惯等条件的
不同，其形态、气味、质量有所差异，药材经营上一般
将其分为石牌藿香、高要藿香和海南藿香３种，其中
产于广州市郊石牌地区的石牌藿香质量最佳［１］。
广藿香的药用成分主要为挥发油，有研究认为广藿
香可按其挥发油的组分分为酮型和醇型２个化学
型，前者以石牌广藿香为代表，后者以海南广藿香为
代表［２］。有关研究也证实了石牌藿香和海南藿香
在外观形态及内部化学成分上都有较明显的差
异［３，４］。
广藿香在广东地区极少见开花，主要通过扦插
繁殖。原产于石牌的广藿香，由于城市的发展、耕地
的减少以及植物病害影响，己濒临灭绝，现仅在东圃
黄村及罗岗有少量种植供科研之用。为保护广藿香
的种质资源，作者对石牌广藿香进行了组织培养并
获得了成功，本实验对组织培养法获得的再生植株
中挥发油含量及成分进行分析，并与扦插繁殖的石
牌广藿香进行比较。
１ 材料
１．１ 组培石牌广藿香
实验用石牌广藿香采自本所药用植物标本园，
经本所南药研究室蔡岳文主任中药师鉴定为广藿香
Ｐ．ｃａｂｌｉｎ．（Ｂｌａｎｃｏ）Ｂｅｎｔｈ．。取幼嫩叶片，用７０％
乙醇进行表面消毒 ３０ｓ，无菌水清洗 ３次，然后用
０１％ ＨｇＣｌ２消毒１３ｍｉｎ，无菌水洗涤５次，用滤纸
吸干叶片表面水分，在无激素的 ＭＳ培养基上预培
养７ｄ后，将无菌叶片外植体切成１ｃｍ２左右的小
块，置于愈伤组织诱导培养基上，（２８±１）℃，黑暗
培养。愈伤组织诱导培养基：ＭＳ基本培养基附加
００５ｍｇ·Ｌ－１的２，４Ｄ和０５ｍｇ·Ｌ－１的 ＫＴ，参照
文献方法［５］。愈伤组织２０ｄ左右继代培养１次，继
代１～２次后的愈伤组织转移至含１ｍｇ·Ｌ－１ＢＡ的
ＭＳ培养基上，诱导成苗，无菌苗经２０ｄ左右的蛭石
育苗床练苗后，移栽至地里，生长３个月后，苗高达
到４０～５０ｃｍ，收获，自然晾干备用，记为“组培石牌
广藿香”。
１．２ 扦插石牌广藿香
取生长约７个月的石牌广藿香植株上部１０～
１５ｃｍ高的一段（含顶芽），扦插于蛭石育苗床１个
月，生根后，移栽至地里，生长３个月后，苗高５０～
６０ｃｍ，收获，自然晾干备用，记为“扦插石牌广藿香
Ａ”。生长１０个月的苗高７０～８０ｃｍ，收获晾干，记
为“扦插石牌广藿香Ｂ”。
１．３ 前处理方法
上述实验材料全草经自然干燥４８ｈ，切成１～２
ｃｍ长短的小段，备用。
２ 仪器与方法
２．１ 仪器与试剂
ＴＲＡＣＥＧＣ气相色谱仪，Ｘｃａｌｉｂｕｒ色谱工作站
（美国Ｆｉｎｎｉｇａｎ公司）；１／１０万电子天平（德国Ｓａｒｔｏ
ｒｉｕｓ公司）。内标物：正十八烷（ＳＩＧＭＡ公司）；广藿
香醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号７７２
２００００３），广藿香酮（自制，经高效液相色谱法检验，
纯度达９９５８％）。
２．２ 色谱条件
ＤＢ－１毛细管柱 （０２５ｍ×３０ｍｍ，０２５μｍ），
ＦＩＤ检测器，进样口温度和检测器温度均为２３０℃，
程序升温：初始温度１００℃，停留１ｍｉｎ后以１０℃
·ｍｉｎ－１的速度升至１８０℃；载气为高纯氦气，流速
１ｍＬ·ｍｉｎ－１，分流进样，分流比５０∶１，进样量１μＬ。
２．３ 挥发油测定方法
按《中国药典》２００５年版一部附录ＸＤ操作。
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第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
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２．４ 对照品溶液的制备
取正十八烷适量，精密称定，加无水乙醇制成
４０ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，作为内标溶液。另精密称取
广藿香醇和广藿香酮对照品适量，分别加无水乙醇
制成５０ｍｇ·ｍＬ－１对照品的溶液，分别精密吸取对
照品溶液 ０５ｍＬ，内标溶液 ０４ｍＬ置 ２ｍＬ量瓶
中，加无水乙醇至刻度，摇匀。分别吸取以上溶液各
１μＬ，注入气相色谱仪，连续进样３次，以平均峰面
积计算广藿香醇和广藿香酮的校正因子。广藿香醇
和广藿香酮的校正因子测定结果分别为 １１４６和
１９１６。
２．５ 供试品溶液的制备［６］
２．５．１ 测定广藿香醇供试品的制备 分别精密吸
取组培石牌广藿香、扦插石牌广藿香 Ａ和 Ｂ３种挥
发油５０，１０，１０μＬ，内标溶液０４ｍＬ置２ｍＬ量瓶
中，无水乙醇定容，摇匀。精密吸取以上３种供试品
各１μＬ，注入气相色谱仪，测定广藿香醇的含量。
２．５．２ 测定广藿香酮供试品的制备 分别精密吸
取组培石牌广藿香、扦插石牌广藿香 Ａ和 Ｂ３种挥
发油２，１０，１０μＬ，内标溶液０４ｍＬ置 ２ｍＬ量瓶
中，无水乙醇定容，摇匀。精密吸取以上３种供试品
各１μＬ，注入气相色谱仪，测定广藿香酮的含量。
３ 结果
３．１ 组培石牌广藿香形态特点
组织培养获得的石牌广藿香在试管苗阶段，其
形态与海南广藿香试管苗相似，而移栽至地里２个
月后，植株的外形就呈现了石牌广藿香的特点：株型
较散生，茎的下部叶片脱落，叶片集中在枝端；茎木
质化，叶色老化，叶面皱缩、叶脉深陷，叶肉向上凸
（图１）。
图１ 组培石牌广藿香形态特点
Ａ．愈伤组织；Ｂ．芽的分化Ｃ．试管苗；Ｄ．移栽２个月后
３．２ 组培石牌广藿香与扦插石牌广藿香的挥发油
含量比较
比较组培与扦插的石牌广藿香，其挥发油的含
量差异较大，组培石牌广藿香中的挥发油质量分数
为１４％ ，是相同生长时间的扦插石牌广藿香Ａ（挥
发油质量分数为０３％）的４６倍，是生长１０个月
的扦插石牌广藿香 Ｂ（挥发油质量分数为０８４％）
的１７倍。
３．３ 组培石牌广藿香与扦插苗中的挥发油成份的
比较
对组培和扦插的石牌广藿香挥发油成份分析的
结果显示，３个样品挥发油中的广藿香酮的含量均
高于广藿香醇的含量，其中，生长１０个月的扦插石
牌广藿香中的广藿香酮含量最高，是广藿香醇的
８８倍；组培石牌广藿香的广藿香酮含量最低，但含
有很高的广藿香醇（表１）。
计算各样品每克干重生药中的广藿香酮含量
（每克干重生药中的挥发油含量 ×挥发油中广藿香
表１ 组培与扦插的石牌广藿香挥发油成分比较
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３） ｍｇ·ｍＬ－１
样品 广藿香 广藿香酮
组培 ２３１９３±００３ ３７５７６±０１２
扦插 ２０４８７±０８７ ４１０３０±２０５
扦插 ６８３１±１３６ ６０４０９±１４８
酮的含量），结果表明，组培的广藿香每克干重生药
中所含的广藿香酮为５２６ｍｇ，高于相同生长时间
的扦插石牌广藿香Ａ（１２３ｍｇ）和生长１０个月的扦
插石牌广藿香Ｂ（５０７ｍｇ）。
４ 讨论
罗集鹏等对广藿香的精油组分进行分析研究的
结果，产于广州市郊石牌地区的广藿香挥发油中含
有较高的广藿香酮，而广藿香醇的含量很低［２］；本
单位标本园中种植的原产于石牌的广藿香的挥发油
测定结果也表现出了这个规律。本研究通过组织培
养技术获得的该广藿香的再生植株在外部形态上与
原植物保持了一致的特性，但挥发油的含量大大超
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中 国 中 药 杂 志
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
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过同样生长时间的扦插石牌广藿香，并比生长了１０
个月的扦插广藿香还高０７倍，因此，尽管组培的广
藿香挥发油中的广藿香酮含量没有扦插繁殖的高，
但按每克干重生药计算，还是组培的石牌广藿香中
所含的广藿香酮和醇最高。植物组织培养技术应广
泛应用到药用植物的生产中，有人认为组织培养获
得的再生植株中，次生代谢物的含量可能会减少，而
本研究的结果显示，组织培养技术所提供的石牌广
藿香不仅保留了原植物的形态特点，还提高了其中
的次生代谢物含量，组培石牌广藿香中每克干重生
药中的广藿香酮和广藿香醇的含量约为扦插繁殖的
４倍，从栽培生产上来说，组培苗比传统的扦插苗具
有更高的经济效益。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２０００：３３．
［２］ 罗集鹏，刘玉萍，冯毅凡，等．广藿香的两个化学型及产地与采
收期对其挥发油成分的影响［Ｊ］．药学学报，２００３，３８（４）：３０７．
［３］ 李 薇，潘超美，徐 良，等．不同产地广藿香特征的观察和比
较［Ｊ］．中药材，２００２，２５（７）：４６３．
［４］ 罗集鹏，曾梅华．广藿香的形态组织学鉴别研究［Ｊ］．中药材，
２００２，２５（３）：１６６．
［５］ 张家明，郑学勤，孙雪飘．广藿香体细胞培养植株再生的研究
［Ｊ］．热带作物学报，１９９４，１５（１）：７３．
［６］ 汪小根，邹玉繁，王玉生．ＧＣＭＳ联用技术测定广藿香油中广
藿香酮的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２００５，２５（５）：５８２．
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００７０９２７
［通讯作者］ 吕爱平，Ｔｅｌ：（０１０）６４０６７６１１，Ｅｍａｉｌ：ｌａｐ６４０６７６１１＠
１２６．ｃｏｍ
灵芝提取物对 Ｈ２２荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究
赵宏艳１，张皖东２，吕 诚３，谭 勇３，鞠大宏１，陈士林４，杨大坚４，
陈新滋４，吕爱平３，４
（１．中国中医科学院 中医基础理论研究所，北京 １００７００；
２．安徽中医学院 第一附属医院，安徽 合肥 ２３００３１；
３．中国中医科学院 中医临床基础医学研究所，北京 １００７００；
４．深圳市中药药学及分子药理学研究重点实验室，广东 深圳 ５１８０５７）
近年来，从真菌及其代谢产物中提取了多种有
效成分，其抗肿瘤活性已得到国际公认。灵芝是我
国传统的补益中药，具有扶正固本、延年益寿之功
效。大量临床及实验研究表明，灵芝及其提取物具
有抗肿瘤，抗血栓及免疫调节等作用［１４］。本实验以
Ｈ２２荷瘤小鼠作为研究对象，主要从免疫系统的角
度，初步探讨灵芝提取物（ＧＬＥ）的抗肿瘤机制。
１ 材料
１．１ 动物及细胞株 昆明远交系清洁级小鼠，雄
性，体重为１８～２２ｇ，由中国中医科学院实验动物研
究中心提供。Ｈ２２肝癌细胞株由本院中药研究所王
金华赠送。
１．２ 药物 灵芝粗提取物（ＧＬＣＥ，绿谷制药有限公
司，配成１０２ｍｇ·ｍＬ－１的混悬液。此药物浓度是按
人日用临床剂量，经人小鼠体表面积比值折算成相
当于成人临床剂量的２倍），灵芝细提取物（ＧＬＲＥ，
上海中药现代化研究中心），环磷酰胺（ＣＴＸ，上海华
联制药有限公司）。
１．３ 试剂及仪器 ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８抗体（ｅＢｉｏ
ｓｃｉｅｎｃｅ公司），１６４０培养液（ＧＩＢＣＯ公司），胎牛血
清（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ，Ａｍｒｅｓｃｏ
公司）；酶标仪（芬兰Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ公司），ＥＰＩＣＳＸＬ流
式细胞仪（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司）。
２ 方法
２．１ ＧＬＲＥ对 Ｈ２２细胞体外增殖的影响 调整
Ｈ２２细胞２×１０６个／ｍＬ，以０２ｍＬ接种于小鼠腹腔
接种传代。６～８ｄ后无菌抽取小鼠腹水，ＰＢＳ洗涤
后转入培养瓶培养，每２ｄ更换新培养基，取第２代
细胞用于实验。调整为３×１０４个／ｍＬ，以１００μＬ／孔
接种于９６孔培养板，加入１００μＬ不同质量浓度的
·２４８·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８