全 文 ：丹参素在 ≤¤¦²2u细胞单层模型中的跨膜转运研究
朱狄峰 t o赵筱萍 tou o程翼宇 t3
kt1浙江大学 药物信息学研究所 o浙江 杭州 vtssuz~ u1浙江医学高等专科学校 o浙江 杭州 vtssxvl
≈摘要   目的 }研究丹参素在 ≤¤¦²2u细胞模型中的跨膜转运机制 ∀方法 }通过研究丹参素在模型中的双向转
运 o考察时间 !药物浓度及转运蛋白抑制剂对丹参素吸收的影响 ∀用液相 2质谱联用法检测药物浓度 o计算其表观渗
透系数 ∀结果 }表观渗透系数 Π¤³³值随时间延长而增大 o到一定时间趋向饱和状态 o并随丹参素浓度的增加而逐渐
减小 ∀双向转运的 Π¤³³比值即 Πµ¤·¬²均大于 t1x∀在加入 °2ª³转运蛋白抑制剂维拉帕米后 o丹参素 Π¤³³o„2…值显著增
大 o而 Π¤³³o…2„值显著降低 ∀结论 }丹参素在 ≤¤¦²2u细胞模型中的转运可能主要是由 °2ª³转运蛋白介导的主动转
运 ∀
≈关键词   丹参素 ~ ≤¤¦²2u细胞模型 ~主动转运
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt{2txtz2sx
≈收稿日期   ussx2tu2us
≈基金项目   浙江省自然科学基金资助项目 k≠uswwt{l
≈通讯作者   3 程翼宇 oר¯}ksxztl{z|xttv{o∞2°¤¬¯}¦«¨ ±ª¼¼
ƒ ½­∏1 §¨∏1¦±
丹参素 ≈∆( n )Βkvow2二羟基苯基 l乳酸  是活
血化瘀中药丹参 Σαλϖια µ ιλτιορρηιζα …∏±ª¨的主要有
效成分之一 ≈t  o具有良好的抗氧化 !抗凝及抗血栓 !
抗心肌缺血和调节血脂代谢等作用 ∀丹参素在体内
的药物动力学研究已有报道 ≈uov  o但其在体内吸收
转运方式却并不清楚 ∀
≤¤¦²2uk«∏°¤± ¦²¯²± ¤§¨ ±²¦¤µ¦¬±²°¤ ¦¨¯¯ ¬¯± ¶¨l
细胞模型在近年来国外广泛用于药物摄入 !排放及
跨膜转运等吸收机制的研究 o到目前为止仍是用来
研究外源化合物肠道吸收和毒性的最好体外模
型 ≈w  ∀本实验用 ≤¤¦²2u细胞模型研究丹参素吸收
机制 o考察时间 !药物浓度以及转运蛋白抑制剂对丹
参素转运的影响 o试图揭示丹参素的跨膜转运机制 ∀
1 仪器与材料
„ª¬¯¨ ±·ttss ≤ p  ≥⁄ 系统 o Štvtu„ 泵 o
Štvtv„自动进样器 oŠtvtx…二极管阵列检测器 o
Štvty„柱温箱 ∀  ¬¯¯¬¦¨¯¯ p ∞• ≥跨膜电阻仪 k ¬¯¯¬2
³²µ¨o美国 l~ ×µ¤±¶º¨¯ ׯ培养板 k ≤²µ±¬±ªo美国 l~
⁄≥‹ pvss多用途水浴恒温振荡器 k江苏太仓市实
验设备厂 l~∞÷{ss酶标仪 k…¬²× ®¨o美国 l∀
丹参素纯度 ∴ |{1sh k上海医科大学 l~≤¤¦²2u
细胞株 k中国医学科学院基础医学研究所细胞中
心 l~甲醇 !乙腈均为色谱纯 k  µ¨¦®公司 o德国 l~
⁄ ∞ 培养基 k §∏¯¥¨ ¦¦²π¶°²§¬©¬¨§∞¤ª¯ 𨶰 §¨¬∏°o
Š¬¥¦²公司 l~胎牛血清 k ‹¼¦¯²±¨公司 l~荧光黄
k∏¦¬©¨µ¼¨ ¯¯²º ≤‹ o ≥¬ª°¤公司 l~‹ ³¨¨ ¶kΝ2u2羟乙
基哌嗪 2Νχ2u2乙磺酸钠盐 o南京昊天公司 l~硫酸链
霉素 k华北制药有限公司 l~青霉素钠 k江西东风药
业股份有限公司 l~高氯酸 k杭州华东医药股份有限
公司 l~三蒸水 ∀
2 方法
211 细胞单层模型建立 ≈xoy 
≤¤¦²2u细胞培养于 ⁄ ∞培养液中 o含胎牛血
清 kƒ…≥l tsh o非必需氨基酸 k‘∞„„lth o谷氨酰
胺 kΛ2ª¯∏·¤°¬± l¨th o青霉素 ktss ˜ # °pt l2链霉
素 ktss Λª# °pt l双抗液和 ‹ ³¨¨ ¶ux °°²¯# pt o
在 vz ε 的 xh ≤’u恒温培养箱中培养 ∀隔天换 t次
培养液 o每 w天按 tΒv的比例传代 ∀将对数生长期
细胞按 t ≅ tsx # °pt接种到 ×µ¤±¶º¨¯ ׯ培养板上 o
接种后隔天换液 t次 oz §后每日换液 o培养至 ut §∀
检测荧光黄的透过 o丹参素表观渗透系数 Π¤³³o„2… 
s1x ≅ tspy ¦°# ¶pt符合要求 ~用跨膜电阻仪检测跨
膜电阻 o各孔跨膜电阻  vxs ≅ ¦°u o亦符合实验要
求 ∀
212 丹参素对 ≤¤¦²2u细胞活性和增殖的影响
通过  ××法检测药物细胞毒性试验来确定药
物最大毒性剂量 ∀取对数生长期 ≤¤¦²2u细胞 o调节
细胞为 t ≅ tsw # °pt o接种于 |y孔平底细胞培养
板 o每孔加入 tzs ˏ培养液培养 uw «∀分组为实验
#ztxt#
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∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t{
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
孔和空白对照孔 o实验孔加入不同浓度丹参素 ts
ˏo使最终丹参素浓度分别为 x1s ≅ tspv ot ≅ tspv o
x ≅ tspw ot ≅ tspw ox ≅ tspx ot ≅ tspx ox ≅ tspy ot ≅
tspy °²¯# pt o空白对照孔加入无菌的 °…≥ ts ˏo
每组设 x个平行孔 ∀培养 w{ «后 o每孔加入 x1s ª
# pt的  ×× us ˏo再培养 w « o离心 o倾去上清
液 o每孔加入二甲基亚砜 tss ˏo微量振荡器振荡 o
待蓝色结晶完全溶解后 o用酶标仪在波长 xzs ±°处
读取吸光度 kΑ)∀取 x孔 Α值的均数 o按下式求出
细胞存活率 kŒ≤l}
Œ≤kh l € k实验孔 Α均值 /对照孔 Α均值 l ≅ tssh
求出 |{h 的细胞存活所对应的药物浓度
kŒ≤|{ lo作为丹参素的最大毒性剂量 ∀转运实验选
择低于此剂量的浓度 ∀
213 丹参素的跨膜转运实验
用 ‹…≥≥缓冲液 k含 ux °°²¯# pt «¨ ³¨ ¶l配制
浓度低于最大毒性剂量的丹参素溶液浓度为 x ≅
tspx ot ≅ tspx ox ≅ tspy ot ≅ tspy °²¯# pt o除菌后 o
用 vz ε 预热的 ³‹ z1w的 ‹…≥≥洗生长有 ≤¤¦²2u的
×µ¤±¶º¨¯ ׯ板 o再加入预热的 ‹…≥≥ovzε oxh ≤’u
条件下培养 us °¬±~吸弃 o再加入预热的 ‹…≥≥o
vzε oxh ≤’u条件下培养 us °¬±o吸弃 ‹…≥≥∀对于
从细胞绒毛面 „³¬¦¤¯k„l到基底面 …¤¶²¯¤·¨µ¤¯ k…l
的转运 }将药物溶液 s1x °加到 „侧作为供给池 o
同时 …侧加入空白 ³‹ z1w的 ‹…≥≥ t1x °作为接
受池 ~对于从 …侧到 „侧转运 }将药物溶液 t1x °
加到 …侧作为供给池 o空白 ³‹ z1w的 ‹…≥≥ s1x °
加到 „侧作为接受池 o把 ×µ¤±¶º¨¯ k¯培养板置于转
速为 ys µ# °¬±pt的 vz ε 水浴恒温振荡器 o分别在
vsowxoyso|sotusotxsot{s °¬±吸取接收室的转运
液 s1x °k„ ∗ …los1ux °k… ∗ „lo同时补加相应
vz ε 空白 ³‹ z1w ‹…≥≥液 ∀
≤¤¦²2u细胞在 ×µ¤±¶º¨¯ ׯ板中培养 ut §后 o在
„侧加入 t ≅ tspx °²¯ # pt丹参素溶液 o其中一组
含 t ≅ tspx °²¯# pt维拉帕米 o对照组不加维拉帕
米 o每组平行 w份 ∀置于转速为 ys µ# °¬±pt的 vz
ε 水浴恒温振荡器 o分别在 vsowxoyso|sotusotxso
t{s °¬±吸取 …侧的转运液 s1x °∀在 …侧进行相
同操作收集 „侧转运液 o冷藏备用 ∀
214 分析方法建立
21411 液质联用分析条件 色谱柱 }²µ¥¤¬ ≤t{柱
kw1y °° ≅ txs °°ov Λ°l ~流动相 „为含 s1th醋
酸的乙腈 o…为含 s1th醋酸的水 o以 yh „及 |wh …
洗脱 ts °¬±~流速 t1s °# °¬±pt ~柱温 vx ε ~进样
量 us ˏow °¬±后进质谱 ∀离子化方式 }∞≥Œk p lo
雾化汽压 u|s ®°¤o毛细管电压 v xss ∂ o毛细管温度
vxs ε o鞘气 k‘u l流速为 | # °¬±pt ∀
21412 样品处理 取样品溶液加入等体积 yh高
氯酸沉淀蛋白 o然后 { sss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o吸
取上清液 o低温冷冻干燥后 o加水 xs ˏ充分溶解 ot
万 µ# °¬±pt离心 ts °¬±后 o进样 o建立标准曲线 o计
算回收率及精密度等 ∀
215 数据处理 按 „µ·∏µ¶¶²±和 Ž¤µ¯¶²±≈z 于 t||t
年报道的药物透过 ≤¤¦²2u细胞单层的表观渗透系
数 Π¤³³k¤³³¤µ¨±·³¨ µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ ¦²¨ ©©¬¦¬¨±·¶l值作为参
考 o进行数据处理 ∀
Π¤³³ € ϖ Θ /(ϖ τ# Α# Χ²l ¦°# ¶pt ktl
其中 ϖ Θk°²¯l为 ϖ τ k¶l内的转运量 oΑ k¦°u l
为膜面积 oΧ² k°²¯ # °pt l为在 ≤¤¦²2u单层细胞
的顶侧或肠腔侧的药物初浓度 ∀对两组的比较用 τ
检验 ,均以 cξ ? σ表示 ∀
3 结果
311 丹参素含量分析方法的建立
在本实验色谱条件下 o丹参素保留时间为 x1ww
°¬±o≈ 2‹  p µ / ζ t|z1to且丰度最大 o故对此离子
进行选择性检测 o从而大大提高了方法的灵敏度 ∀
31111 标准曲线 精密称取丹参素 x Λªo用 ‹…≥≥
缓冲液配成 s1t Λª# °pt o倍比稀释 y次 o所得系
列对照品溶液按 /样品处理 0项操作后进样 ∀以浓
度为横坐标 o丹参素质谱峰面积为纵坐标进行回归 o
得到标准曲线为 Ψ € u1s ≅ tsy Ξ n |1u ≅ tsx oρu €
s1||| {o线性范围为 s1su ∗ x Λª# °pt ∀
31112 回收率 取已知丹参素含量的 v份样品溶
液 o分别加入其含量的 {sh otssh otush 对照品 o
按 /样品处理 0项操作后进样 o重复 x次 o得到加样
回收率为 |y1xh o||1th otsu1uh ∀
31113 精密度 准确吸取样品溶液 us ˏo重复进
样 y次 o测定丹参素质谱峰面积 oy次的 • ≥⁄为
y1vh ∀
31114 稳定性 取样品溶液 o在 sowotuouwovyow{
«进行测定 o以峰面积为考察指标 oy次测定结果的
• ≥⁄为 w1|h ∀
31115 重复性 取相同样品处理方法的同浓度样
品 y份 ous ˏ进样 ∀测定丹参素峰面积 oy次测定
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∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t{
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
的 • ≥⁄为 z1wh ∀
312 丹参素对 ≤¤¦²2u细胞活性和增殖的影响
在丹参素浓度为 t1s ≅ tspy °²¯ # pt时 o相应
的 ≤¤¦²2u细胞存活率 Œ≤为 ||1yh ∀随着丹参素浓
度不断增加 o≤¤¦²2u细胞存活率随浓度增加而降
低 o当丹参素浓度为 x1s ≅ tspv °²¯# pt时 o相应的
Œ≤为 |u1vh o从实验数据中计算得到 Œ≤|{约为 {1w
≅ ts2x °²¯ # pt o可见 x1s ≅ tspv ot ≅ tspv ox ≅
tspw ot ≅ tspw °²¯ # pt w个浓度对 ≤¤¦²2u细胞有
生长抑制作用 o不适合进行转运实验 o故选择高于
|{h的细胞存活所对应的药物浓度 x ≅ tspx ot ≅
tspx ox ≅ tspy ot ≅ tspy °²¯# pt作为转运实验 ∀
313 丹参素的跨膜转运
31311 时间及浓度对丹参素转运的影响 不同浓
度丹参素通过 ≤¤¦²2u细胞单层模型从 „侧向 …侧
转运 Π¤³³随时间变化见图 to„侧 k¤³¬¦¤¯l为绒毛面 o
含有多种载体 o发挥转运物质的作用 o…侧 k¥¤¶²¯¤·2
µ¨¤¯l为基底面 o相当于肠内壁 o具有外排的功能 ∀
从图中可以看出相同浓度条件下 oΠ¤³³在 |s °¬±之
前随着时间延长呈线性升高 o然后趋向饱和 ∀另一
方面 oΠ¤³³值随浓度增大而逐渐减小 ∀根据式 ktlo
也就是在 |s °¬±前 o同一浓度 Χ²的转运过程中 o
ϖ τ增加的同时 ,相应的转运量 ϖ Θ随之增加 ,且其
增加的幅度与 ϖ τ相比要强的多 ,即 ϖ Θ/ϖ τ升高 o
从而使 Π¤³³线性上升 ∀在 |s °¬±后 o转运载体逐渐
饱和 o随着 ϖ τ增加 ,相应的转运量 ϖ Θ增加趋势减
弱 o使得 Π¤³³变化趋缓 ∀另一方面 o在相同 ϖ τ时间
的转运过程中 ,随着浓度 Χ²的增加 o„2…的丹参素
转运量 ϖ Θ也随之增加 ,但其增加的幅度与浓度 Χ²
的变化相比要弱的多 o即 ϖ Θ/Χ²相应变小 o这可能
与 ≤¤¦²2u细胞单层的转运载体有限有关 o最终表观
渗透系数 Π¤³³反而减小 ∀
考察 vs °¬±时的 „2…转运过程 ot ≅ tspy ox ≅
tspy ot ≅ tspx ox ≅ tspx °²¯# pt丹参素转运量分别
为 ks1yx ? s1sxl ≅ tsptt okt1t{ ? s1tyl ≅ tsptt o
kt1xt ? s1uvl ≅ tsptt okt1|{ ? s1s{l ≅ tsptt °²¯o
可见在加入药物之后 o丹参素逐渐透过 ≤¤¦²2u单层
细胞膜进入接受池 o随着给药浓度的提高 o转运量也
相应增加 ∀
考察 tus °¬±时的双向转运过程 o丹参素在 ≤¤2
¦²2u细胞模型中的 …2„转运的表观渗透系数与 „2…
转运的表观渗透系数之间的比值 Πµ¤·¬²见表 to结果
图 t 时间和浓度对丹参素表观渗透
系数 Π¤³³的影响 k„2…转运 l
表明在较低浓度时 oΠµ¤·¬²值较高 o而随着浓度上升 o
Πµ¤·¬²值逐渐降低 o且不同浓度条件下 oΠµ¤·¬²值均大于
t1x∀
表 t tus °¬±时不同浓度条件下丹参素 Π¤³³
变化 kcξ ? σ, ν € vl
浓度
r°²¯# pt
Π¤³³ r≅ tspy ¦°# ¶pt
„ 2… …2„ Πµ¤·¬²
t ≅ tspy xquu ? sqvz tsqv ? sqxt tq|z
x ≅ tspy uqvz ? squt wqtz ? sqvu tqzy
t ≅ tspx tquw ? sqtv uqsx ? squz tqyx
x ≅ tspx sqwt ? sqsu sqyy ? sqtx tqyt
31312 维拉帕米对丹参素转运的影响 °2ª³蛋白
抑制剂维拉帕米浓度参考文献确定 ≈{  o加入维拉帕
米后 o丹参素的转运量及 Π¤³³均与对照组有所不同 o
测定结果见图 u∀实验中可知 ot ≅ tspx °²¯ # pt维
拉帕米在 ys °¬±后能显著促进 t ≅ tspx °²¯# pt丹
参素通过 ≤¤¦²2u单层细胞模型的 „2…转运量 kΠ 
s1sxlo同时显著抑制了丹参素通过 ≤¤¦²2u单层细
胞模型的 …2„转运量 kΠ  s1sxl∀另外 o„2…转运
的表观渗透系数 Π¤³³在 wx °¬±后与对照组相比显著
增大 kΠ  s1sxlo在 |s °¬±后差异更加明显 kΠ 
s1stl∀ …2„转运的 Π¤³³在 wx °¬±后则显著减小
kΠ s1sxlo在 |s °¬±后差异也更加明显 kΠ 
s1stl∀
图 u t ≅ tspx °²¯# pt维拉帕米对 ≤¤¦²2u转运 t ≅ tspx
°²¯# pt丹参素时 Π¤³³的影响 k ν € w l
4 讨论
与外翻肠囊法等不同的是 ≤¤¦²2u细胞模型不
需要组织脏器的分离 o避免了组织损伤引起的实验
#|txt#
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差异 o而且 ≤¤¦²2u细胞膜上存在多种药物代谢酶 o
可以更真实地反映药物的吸收情况 ∀本实验采用
≤¤¦²2u细胞模型研究了丹参素的转运情况 o结果表
明 o药物转运的速率受时间 !给药浓度以及 °2ª³抑
制剂等多方面因素的影响 ∀
在一定浓度条件下 o„侧向 …侧转运的 Π¤³³值
随时间增加而增大 o但在 |s °¬±后 o斜率下降 o趋向
于饱和状态 ∀不同浓度的丹参素给药后 oΠµ¤·¬²值均
大于 t1xo且随着浓度的增加 Πµ¤·¬²值也逐渐减小 o这
一现象表明在 ≤¤¦²2u细胞中存在某种转运载体 o这
种转运载体位于细胞单层的 „侧 ≈|  ∀在 |s °¬±之
前 o丹参素由这种载体快速透过单层进行转运 o并且
斜率不变即 Π¤³³变化速率保持恒定 o而 |s °¬±后 o转
运载体部分达到饱和 o斜率下降 o随着时间推移 o载
体逐渐饱和 o最终使 Π¤³³增速趋缓 ∀在相同时间情
况下 o„侧向 …侧转运的 Π¤³³值随丹参素浓度的增
加而逐渐减小 o也说明丹参素的跨膜转运具有饱和
现象 o随浓度的增加更容易使载体饱和从而达到平
衡状态 ∀
在加入 °2ª³蛋白抑制剂维拉帕米 ys °¬±后 o丹
参素 Π¤³³o„2…值增大 o而 Π¤³³o…2„值变小 o均与对照组有
显著差异 ∀由于维拉帕米是 °2ª³专属性抑制剂 o证
明 °2ª³在丹参素的 ≤¤¦²2u细胞穿透转运中是一种
重要的转运载体 ∀ °2ª³是 ≤¤¦²2u细胞主要的转运
蛋白之一 o也是能量 k„×°l依赖性膜蛋白 o它具有外
排泵作用 o可将胞内化合物逆浓度梯度运至胞
外 ≈ts  ∀目前研究表明 °2ª³是人多药耐药基因
k ⁄• l编码的分子质量为 tzs ≅ tsv的膜蛋白 o存
在于细胞层的绒毛面一侧 o若药物转运有 °2ª³参
与 o „侧向 …侧转运速率减慢 o而 …侧向 „侧转运
速率加快 ∀本实验在给药过程中加入维拉帕米后 o
°2ª³外排作用受到抑制 o最终使丹参素 Π¤³³o„2…值增
大 o转运加快 o而 Π¤³³o…2„值降低 o转运减慢 o也证明了
°2ª³的参与 o因此推测丹参素在 ≤¤¦²2u细胞模型中
的转运可能主要是由 °2ª³转运蛋白介导的主动转
运 ∀虽然 °2ª³是 ≤¤¦²2u细胞中主要的转运蛋白之
一 o但 ≤¤¦²2u细胞单层中还含有其他多种转运蛋
白 ≈tt  o某些药物还可能通过其他转运蛋白载体进行
转运 o这有待于进一步研究 ∀
≈参考文献  
≈t  «¤±ª‹ o ¬‘q ≥¤¯√¬¤±²2¯¬¦2¤¦¬§Œ} ¤± º¨ §¨ ³¶¬§¨ ©µ²° Σαλ2
ϖια χαϖαλεριει≈ q ° ¤¯±·¤ §¨o t||wo ysktl }ztq
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布研究 ≈ q中国药学杂志 o t||wou|kxl} u|tq
≈v  洪 馨 o宓穗卿 o王宁生 q复方丹参滴丸中丹参素的药物动力
学研究 ≈ q中药新药与临床药理 o usssottkxl}u{yq
≈w  ≥¤°¥∏¼ ≠ o ƒ µ¨µ∏½½¤≥o • ¤±¤¯§¬Šo ·¨¤¯q Œ±·¨¶·¬±¤¯ ¦¨¯¯ ¦∏¯·∏µ¨
°²§¨ ¶¯} ¤³³¯¬¦¤·¬²±¶¬± ·²¬¬¦²¯²ª¼ ¤±§ ³«¤µ°¤¦²¯²ª¼≈  q ≤¨¯¯
…¬²¯ ײ¬¬¦²¯o usstotz}vstq
≈x  ‹¬§¤¯ª² Œ o • ¤∏¥ × o …²µ¦«¤µ§·• ×q ≤«¤µ¤¦·¨µ¬½¤·¬²± ²©·«¨
«∏°¤± ¦²¯²± ¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯ ¬¯±¨k≤¤¦²2ul ¤¶¤°²§¨ ¯¶¼¶·¨° ©²µ
¬±·¨¶·¬±¤¯ ³¨¬·«¨ ¬¯¤¯ ³¨ µ° ¤¨¥¬¯¬·¼≈ q Š¤¶·µ²¨ ±·¨µ²¯²ª¼o t|{|o|y
kvl}zvyq
≈y  ‹¬§¤¯ª²Œo Ž¤·²„o …²µ¦«¤µ§·• ×q …¬±§¬±ª²© ³¨¬§¨ µ°¤¯ ªµ²º·«
©¤¦·²µ¥¼ «∏°¤± ¦²¯²± ¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯ k≤¤¦²2ul °²±²¯¤¼¨ µ¶≈ q
…¬²¦«¨ ° …¬²³«¼¶• ¶¨≤²°°∏±o t|{|otysktl}vtzq
≈z  „µ·∏µ¶¶²± °o Ž¤µ¯¶¶²± q ≤²µµ¨ ¤¯·¬²± ¥¨ ·º¨¨ ± ²µ¤¯ §µ∏ª¤¥¶²µ³·¬²±
¬± «∏°¤±¶¤±§¤³³¤µ¨±·§µ∏ª ³¨ µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ ¦²¨ ©©¬¦¬¨±·¶¬± «∏°¤±
¬±·¨¶·¬±¤¯ ³¨¬·«¨ ¬¯¤¯ k≤¤¦²2ul ¦¨¯¯¶≈  q …¬²¦«¨ ° …¬²³«¼¶• ¶¨
≤²°°∏±o t||totzxkvl}{{sq
≈{  Š¤²‘o  ∏µ¤¶¨ ’o ≥¦«²º ±¨ • o ·¨¤¯q „ ©∏±¦·¬²±¤¯ ¤¶¶¤¼ ©²µ
∏´¤±·¬·¤·¬²± ²©·«¨ ¤³³¤µ¨±·¤©©¬±¬·¬¨¶²© ¬¯ª¤±§¶²©°2ª¯¼¦²³µ²·¨¬±
¬± ≤¤¦²2u ¦¨¯¯¶≈ q °«¤µ° • ¶¨o usstot{kul}tztq
≈|  胡晓渝 o姚彤炜 o曾 苏 q ≤¤¦²2u细胞系及其在药物吸收 !代
谢中的应用 ≈ q中国现代应用药学杂志 o ussuot| kul}{{q
≈ts   ±¨²± •  o …¤µµ• ‹ q ×µ¤±¶³²µ·¨µ¶¬±√²¯√ §¨¬± ¤³¬¦¤¯ ¤±§¥¤2
¶²¯¤·¨µ¤¯ ∏³·¤®¨ ²© ¦¨©·¬¥∏·¨± ¬±·² ≤¤¦²2u ¦¨¯¯¶≈  q …¬²³«¤µ°
⁄µ∏ª⁄¬¶³²¶o ussuouvk{l}vtzq
≈tt  °¤±ªŽ≥q  ²§¨ ¬¯±ª²©¬±·¨¶·¬±¤¯ §µ∏ª¤¥¶²µ³·¬²±} • ²¯ ¶¨²©·µ¤±¶2
³²µ·¨µ¶¤±§ ° ·¨¤¥²¯¬¦ ±¨½¼° ¶¨ k©²µ·«¨ ª¬¯¯ ·¨¨ µ¨√¬¨º ¶¨µ¬¨¶l
≈ q ⁄µ∏ª ·¨¤¥⁄¬¶²³o ussvovtktul}txszq
Τρανσπορτ µ εχηανισµ οφ ∆ανσηενσυ αχροσσΧαχο2u µ ονολαψερ µ οδελ
‹˜ ⁄¬2©¨±ªt o ‹ „’ ÷¬¤²2³¬±ªtou o ≤‹∞‘Š ≠¬2¼∏t
(t. Πηαρµ αχευτιχαλλνφορµ ατιχσ Ινστιτυτε, Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz, Χηινα;
u. Ζηεϕιανγ ΜεδιχαλΧολλεγε, Ηανγζηου vtssxv, Χηινα)
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≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussy2st2sy
≈基金项目   湖北省计划生育委员会资助项目 k≥ ussv p stl
≈通讯作者   3 熊承良 o ר¯} ksuzl {vy|uyxto ƒ¤¬} ksuzl
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野山楂根拮抗雷公藤多苷对雄性大鼠生殖
损伤作用的研究
胡 廉 o徐惠敏 o熊锦文 o田永红 o明 钰 o熊 芬 o熊承良 3
k华中科技大学 同济医学院 计划生育研究所 生殖医学中心 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要   目的 }观察中药野山楂根水煎剂对雷公藤多苷所致雄性不育大鼠生育力的影响 ∀方法 }将成年雄性
大鼠随机分组 o分别给予雷公藤多苷片溶液 kts °ª# ®ªpt lo野山楂根水煎剂 kt1{ox1wot{ ª# ®ªpt l n雷公藤多苷
片溶液 kts °ª# ®ªpt l和蒸馏水 kt °# ®ªpt l灌胃 o{周后停用雷公藤多苷 o中药组继续行野山楂根灌胃 ∀ w周后
各组动物与成年雌性大鼠交配 o观察交配雌鼠妊娠率和平均胚胎 !黄体数 ∀测定雄鼠生殖器官性腺脏器指数 !附睾
精子计数 !活力 !存活率 o观察各组动物睾丸 !附睾组织病理和超微结构改变 o放射免疫法测定血清和睾丸组织睾酮
k×lo血清卵泡刺激素 kƒ≥‹ l和促黄体生成素 k‹ l含量 ∀结果 }与雷公藤多苷模型组比较 o野山楂根组交配雌鼠
妊娠胎数 !雄鼠睾丸 !附睾脏器指数以及附睾精子计数 !活力均有提高 kΠ  s1sxl~野山楂根组精子超微结构较模型
组有明显恢复 ~睾丸组织匀浆 ×显著高于模型组 kΠ  s1stl∀结论 }野山楂根能够拮抗雷公藤多苷对雄性大鼠的
生殖损伤作用 o提高不育症模型雄鼠的生育力 ∀
≈关键词   野山楂根 ~雷公藤多苷 ~精子发生 ~下丘脑 2垂体 2睾丸轴 ~大鼠
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt{2txut2sx
野山楂 Χραταεγυσχυνεατα ≥¬¨¥1 ·¨∏¦¦1又名南
山楂 !小叶山楂 !红果子 o是山楂属植物的一种 ∀通
过对不同品种山楂的比较研究发现 o野山楂中的黄
酮含量较高 o其主要药理活性存在于心血管系统 o抗
心肌缺血和降低胆固醇作用强于北山楂 k商品山
楂 l≈t  ∀目前 o用山楂制成的中成药已达五六十种
之多 o但多以北山楂的果实 !叶等入药 o野山楂应用
很少 o且大多都是局限于消化系统或者心血管系统 o
生殖系统的研究鲜有报道 ∀本实验在民间验方及前
期预实验基础上 o观察野山楂根对不育症动物模型
生育功能的影响 o探讨其对雄性生殖功能的作用 ∀
1 材料与方法
111 动物
成年 • ¬¶·¤µ大鼠 o雄 !雌性各 xs只 o体重 uss ∗
uxs ªots ∗ tu周龄 ∀合格证号 ≥≤÷Žk鄂 l ussw2
ssszo购于华中科技大学同济医学院实验动物中心 ∀
112 药品与试剂
野山楂根 o由京山县计划生育委员会提供 ∀切
片洗净晾干 o双蒸水常压下煎煮 u次 o制成生药为 u
ª# °pt的水煎剂 ∀雷公藤多苷片 kŠ×• o规格每
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第 vt卷第 t{期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
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