全 文 ：注射用复方荭草冻干粉针除鞣质工艺研究
郑 林，王永林，王爱民，兰燕宇，李勇军，何 迅，黄 勇，刘丽娜
（贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４）
［收稿日期］ ２００６１２０６
［基金项目］ 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项基金
项目（黔科合中药专字［２００４］０３号）
［通讯作者］ 王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，Ｅｍａｉｌ：ｇｙｗｙｌ＠
ｇｍｃ．ｅｄｃ．ｃｎ
近年来中药注射剂有了较快的发展，为临床治
疗疾病提供了更多的用药选择，但是，中药注射剂在
临床使用中的安全性问题也越来越受到关注和重
视。中药注射剂中的鞣质是引起不良反应的重要诱
因，中药注射剂中鞣质的存在不但影响中药注射剂
的质量，而且还能与肌体组织蛋白结合形成硬结，多
次局部注射还有可能导致肌体组织坏死，造成无菌
炎症［１］，故中药注射剂中要求除去鞣质。目前常用
的除鞣质方法多为明胶沉淀法、酸性及碱性醇沉法，
而聚酰胺除鞣质方法研究虽多但未见有应用于工业
化生产的报道。作者通过应用实例成功地将聚酰胺
法除鞣质应用于中药注射剂“注射用复方荭草冻干
粉针”的工艺生产，为中药注射剂除鞣质技术提供
了有益的参考和借鉴。
注射用复方荭草冻干粉针是由民间验方研制开
发的中药注射剂，具有化瘀通络，活血止痛功能，用
于治疗冠心病心绞痛（心血瘀阻证）。目前该项目
已进入Ⅲ期临床试验。方中主药荭草含有鞣质，其
提取物在未经处理前鞣质检查不合格。因此，必须
对工艺过程中的荭草提取物进行除鞣质处理。作者
根据荭草所含化学成分的特性，以指标成分的动态
转移率和小鼠异常毒性试验为评价指标，比较了明
胶法、碱性醇沉法和聚酰胺法的除鞣质效果，确定了
本品最优除鞣质工艺。
１ 仪器与材料
高效液相色谱仪（岛津 ＬＣ－１０Ａｖｐ系列），
Ｒｈｅｏｄｙｎｅ７７２５ｉ型进样器，旋转蒸发仪（ＢＵＣＨＩＢ－
４９０），梅特勒１／１０万电子天平（ＡＥ２４０）。
荭草药材采自贵州省惠水县阜康堂药用植物生
态农庄，经贵州省中药研究所陈德媛研究员鉴定为
蓼科植物荭草 ＰｏｌｙｇｏｎｕｍｏｒｉｅｎｔａｌｅＬ．的干燥果穗及
带叶茎枝；荭草药材提取物浸膏（贵阳医学院药物
研究开发中心提供）；聚酰胺（中国医药上海化学试
剂公司，批号 Ｆ２００００８１７）；异荭草素和荭草素对照
品（贵阳医学院药物研究开发中心提供，纯度均大
于９８％）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均
为分析纯。清洁级昆明种小鼠，合格证号：ＳＣＸＫ
（黔）２００２０００１（贵阳医学院实验动物中心提供）。
２ 方法与结果
２．１ 化学评价指标及测定方法［２］
根据文献报道［３］，荭草主要含黄酮类成分，其中
异荭草素、荭草素含量高并具有多种药理作用［４］，被
认为是荭草的重要活性成分。故选用异荭草素、荭草
素的转移率为指标，对除鞣质工艺进行筛选。
２．１．１ 色谱条件 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＯＤＳＣ１８色谱柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈０１％磷酸溶液
（１８∶８２），柱温４０℃，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波
长３５０ｎｍ，进样量１０μＬ。
２．１．２ 对照品溶液的制备 分别取异荭草素和荭
草素对照品约２０ｍｇ和１０ｍｇ，精密称定，置１００ｍＬ
量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
２．１．３ 供试品的含量测定 分别吸取样品溶液以
水稀释至适宜浓度，用０４５μｍ的微孔滤膜滤过，
进样测定。
２．２ 安全性评价指标及测定方法
异常毒性检查可作为评价注射剂安全性的指标
之一［５］，小鼠的致死浓度相当于人用剂量的 ６０倍
时，药物的毒性较小［６］。故以异常毒性试验得出的
小鼠致死浓度相当于人用剂量的倍数，作为安全性
指标，按《中国药典》２００５年版一部附录中药注射剂
安全性检查法应用指导原则项下异常毒性试验方
法［５］，取体重１７～２０ｇ的健康昆明种小鼠试验，对
各工艺样品进行安全性评价。
２．３ 除鞣质工艺的比较
２．３．１ 明胶法［７］ 取荭草药材提取物浸膏，以水
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稀释至每１ｍＬ相当于３ｇ生药，加入５％明胶溶液，
至上清液不再出现沉淀为止，加入乙醇至含醇量达
７５％，放置过夜，滤过。
２．３．２ 碱性醇沉法［８］ 取荭草药材提取物浸膏以
８０％乙醇溶解至每 １ｍＬ相当于 ３ｇ生药，再用
ＮａＯＨ液调ｐＨ８～９，放置过夜，滤过。
２．３．３ 聚酰胺法 为优化工艺条件，采用单因素试
验法对影响聚酰胺法除鞣质的主要因素：树脂吸附
容量、洗脱溶媒浓度、溶媒用量和洗脱流速等进行试
验。
２．３．３．１ 吸附容量的考察 取荭草药材提取物浸
膏４２ｇ（相当于生药３６０ｇ），加８０％乙醇溶解至
１２０ｍＬ，分别各取２０ｍＬ加入聚酰胺１，２，３，４，５，６
ｇ，搅拌，静态吸附３ｈ，滤过，滤液水浴挥至近干，残
渣加水适量溶解，调ｐＨ７～７５，加水定容至５０ｍＬ，
取样按《中国药典》２００５年版一部附录注射剂项下
鞣质检查法［５］进行鞣质检查。试验结果表明，聚酰
胺吸附容量（上柱液中生药量／聚酰胺干重）小于每
１ｇ吸附２０ｇ生药时，可去除样品中的鞣质。为保
证产品的质量，规定吸附容量为每１５ｇ生药使用１
ｇ聚酰胺。
２．３．３．２ 洗脱溶媒浓度的选择 取荭草药材提取
物浸膏４份（每份相当于生药６０ｇ），分别用２０ｍＬ
６０％，７０％，８０％乙醇溶解，上聚酰胺柱（４ｇ），分别
用６０％，７０％，８０％乙醇各１５０ｍＬ洗脱。收集洗脱
液，取样测定异荭草素、荭草素并进行鞣质检查，结
果见表１。
表１ 洗脱溶媒浓度选择试验结果
乙醇体积分数
／％
异荭草素转移率
／％
荭草素转移率
／％
鞣质检查
６０ ８８８８ ９００４ －
７０ ９２６１ ９３１４ －
８０ ９５２８ ９５１４ －
９０ ９４５０ ９７７４ －
当乙醇体积分数增大至８０％时，异荭草素、荭
草素总转移率达９５％以上，可使异荭草素和荭草素
有效解析，各体积分数乙醇洗脱液鞣质检查均为阴
性。综合考虑，以８０％乙醇为洗脱溶媒。
２．３．３．３ 洗脱流速和洗脱溶媒用量 取荭草药材
提取物浸膏４份，每份约４２ｇ，分别用８０％乙醇溶
解至１２０ｍＬ，上聚酰胺柱（２４ｇ，３ｃｍ，径高比１∶６），
以１ｍＬ·ｍｉｎ－１吸附流速进行吸附，用８０％乙醇为
洗脱溶剂，分别以１，２，３，４ｍＬ·ｍｉｎ－１的流速进行
洗脱，至洗脱液中异荭草素、荭草素薄层检查为阴性
时停止洗脱。取样测定异荭草素、荭草素并进行鞣
质检查，结果见表２。
表２ 聚酰胺洗脱流速和洗脱剂用量考察
洗脱流速
／ｍＬ·ｍｉｎ－１
异荭草素
转移率／％
荭草素
转移率／％
鞣质
检查
洗脱剂用量
／ｍＬ
１ ９４９８ ９６１５ － ４５０
２ ９３３６ ９４１７ － ５１０
３ ９３４６ ９５７７ － ６００
４ ９４５５ ９３５０ － ６８５
注：“－”表示无浑浊或沉淀
可见，洗脱流速对异荭草素、荭草素转移率无明
显影响。从省时、低耗角度考虑，洗脱流速控制在３
ｍＬ·ｍｉｎ－１，洗脱剂用量为６００ｍＬ（即５ＢＶ）。
２．３．３．４ 样品制备 取荭草药材提取物浸膏，按上
述工艺条件以８０％乙醇溶解至每１ｍＬ相当于３ｇ
生药，上聚酰胺柱（聚酰胺用量按每１ｇ吸附１５ｇ生
药折算），吸附流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，以５ＢＶ８０％乙醇
进行洗脱，洗脱流速３ｍＬ·ｍｉｎ－１，收集洗脱液。
上述样品回收溶剂后，调ｐＨ７，加水稀释至每１
ｍＬ含２ｇ生药，煮沸、放冷、滤过，冷藏２４ｈ，取上清
液用０４５μｍ微孔滤膜滤过，分装，灭菌，备用。
２．４ 除鞣质效果的考察
以指标成分的动态转移率和小鼠异常毒性试验
为评价指标，比较不同制备工艺的除鞣质效果，结果
见表３。
由下表可知，聚酰胺法明显优于传统除鞣质方
法，不仅除鞣质效果好，而且指标成分损失少（异荭
草素、荭草素转移率达９４％以上），还能有效地提高
制剂的安全性（小鼠的致死浓度达１２０倍以上，远
高于其他除鞣质方法）。
３ 讨论
目前除鞣质的方法主要有热处理冷置法、明胶
沉淀法、聚酰胺法、酸性及碱性醇沉法、铅 盐沉淀
法［８］。在实际运用中，应根据处方中主要成分不
同，灵活选用除鞣质方法。根据荭草药材中主要含
异荭草素、荭草素等黄酮类成分，本实验选择了明胶
沉淀法、碱性醇沉法和聚酰胺法进行除鞣效果比较。
鞣质为多元酚化合物，易被聚酰胺吸附，且吸附
力极强，不易被洗脱，因此，利用黄酮类物质在醇溶
液中不易被聚酰胺吸附，而鞣质在醇溶液中仍能被
吸附的性质使之与鞣质分离［９，１０］。由于聚酰胺树脂
法除鞣质的影响因素较多，除文中讨论的项目外，
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表３ 不同除鞣质方法比较（ｎ＝３）
除鞣质方法
除鞣质
检查
处理前样品
异荭草素量／ｍｇ荭草素量／ｍｇ
处理后样品
异荭草素量／ｍｇ 转移率／％ 荭草素量／ｍｇ 转移率／％
异常毒性检查
／致死浓度的倍数
明胶法 ± ７８１８ ４４７６ ６４６２ ８２６６ ３７２５ ８３２２ ３０
碱性醇沉法 － ８１８５ ４６８６ ５１０９ ６２４２ ２９１１ ６２１２ ６０
聚酰胺法 － ７９０４ ４５２５ ７４８８ ９４７４ ４３２１ ９５４９ １２０
注：“±”表示无明显浑浊
还进行了径高比、吸附流速、聚酰胺的重复使用次数
等工艺条件研究，结合实际生产过程，确定径高比
１∶６、吸附流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１（０５ＢＶ·ｈ－１）、聚酰胺
重复使用次数为１０次。
本品使用聚酰胺法能使有效成分充分转移、异
常毒性明显降低，小鼠的致死浓度大于１２０倍，明显
高于其他除鞣质方法，为除鞣技术在中药注射剂中
的工业化应用提供了可鉴之据。
传统方法多以指标成分转移率来比较不同工艺
对注射液的除鞣质效果，未与除鞣质的目的———提
高制剂安全性联系，笔者选用小鼠异常毒性试验为
安全性评价指标，结合化学指标，可从有效性和安全
性角度来确定最佳除鞣质工艺。此法为中药注射剂
除鞣质工艺的筛选和评价提供了一种新的思路。
［参考文献］
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华西药学杂志，２００３，１８（４）：２７５．
［８］ 王 健，徐自升，毛宏亮．中药注射液中鞣质去除方法的探讨
［Ｊ］．基层中药杂志，２００１，１５（５）：５１．
［９］ 杨基森．中药制剂设计学［Ｍ］．贵阳：贵州科技出版社，１９９２：
４７４．
［１０］ 庄 越，曹宝成，萧瑞祥．实用药物制剂技术［Ｍ］．北京：人民
卫生出版社，１９９９：４４３．
［责任编辑 鲍 雷］
固相萃取高效液相色谱法测定人血浆中灯盏乙素
及３，５二咖啡酰基奎宁酸
袁加才，张 军，居文政，廖善伟
（南京中医药大学 附属医院，江苏 南京 ２１００２９）
［收稿日期］ ２００６１２２６
［通讯作者］ 袁加才，Ｔｅｌ：１３７７６６０８１６７
灯盏细辛酚注射液具活血通络、祛风通脉功效，
临床用于缺血性中风、脑络痹阻等。其有效成分灯
盏乙素和总咖啡酸酯的含量大于８０％。主要活性
单体为灯盏乙素（ｓｃｕｔｅｌａｒｉｎ），具有扩张微血管、降
低血液黏稠度和脑血管阻力、增加脑血流量、改善微
循环的作用，可用于缺血性脑血管病的治疗。３，５
二咖啡酰基奎宁酸也有一定的活性作用。作者采用
固相萃取小柱提取血浆中的灯盏乙素及３，５二咖
啡酰基奎宁酸，用高效液相色谱法检测，以期为灯盏
细辛酚注射液的药代动力学研究提供实验方法。
１ 仪器与试剂
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００液相色谱仪；ＡｇｉｌｅｎｔＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ
色谱工作站；梅特勒托利多 ＡＥ２４０电子天平；梅特
勒托利多 Ｄｅｌｔａ３２０Ａ／ＣＰＨ计；ＢｉｏｆｕｇｅＰｒｉｍｏＲ冷冻
高速离心机；ＤｒｉｃｔＱ５超纯水机；ＷＨ２涡轮混合器
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第３２卷第１７期
２００７年９月
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １７
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