全 文 :非水毛细管电泳法测定防己及其制剂中
防己诺林碱和防己碱的含量
李玉琴 t3 o陈兴国 u o齐永秀 t o李 珂 t o贾宝秀 t o刘彩红 t o曹明亮 t
ktq泰山医学院 药学院 o山东 泰安 uztsty~
uq兰州大学 化学化工学院 o甘肃 兰州 zvssssl
≈摘要 目的 }建立简单 !快速 !灵敏的能同时分离测定防己及其制剂中防己诺林碱和防己碱的非水毛细管电
泳方法 ∀方法 }采用非水毛细管电泳法 o缓冲体系 xs °°²¯# pt醋酸铵 2t1sh醋酸 2ush乙腈的甲醇溶液 o熔融石英
毛细管 kzx Λ° ≅ xs1s ¦°lo分离电压 us ®∂ o检测波长 utw ±°o阳极进样 ∀结果 }防己诺林碱和防己碱在 t1ss ∗ xss
°ª# pt与峰面积线性关系良好 ∀迁移时间的日内相对标准偏差分别为 s1s|h和 s1x|h o日间相对标准偏差分别
为 s1yvh和 t1|h ~峰面积的日内相对标准偏差分别为 s1wxh和 w1|h o日间相对标准偏差分别为 u1vh和 x1yh ∀
防己中防己诺林碱和防己碱平均回收率分别为 tsuh和 tsxh o风痛安胶囊中防己诺林碱和防己碱平均回收率分
别为 |w1yh和 |{1zh ∀结论 }该方法简单 !快速 !准确 !重复性好 o可用于防己及其制剂的质量控制 ∀
≈关键词 防己诺林碱 ~防己碱 ~非水毛细管电泳 ~防己 ~凤痛安胶囊
≈中图分类号 u{wqt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlt|2t||u2sw
≈收稿日期 ussy2ts2us
≈通讯作者 3 李玉琴 oר¯}ksxv{lyuu|zxu2{utuo∞2°¤¬¯}¯´ u´|
tyvq¦²°
防己为千金藤属防己科植物粉防己的干燥根 o
主产于浙江 !安徽 !湖北 !湖南 !江西等地 ∀具有利水
消肿 !祛风止痛的功能 o主治水肿 !小便不利 !风湿痹
痛 !下肢湿热 !疮毒 !湿疹等 ≈t ∀防己含多种生物
碱 o其中主要的活性成分是防己诺林碱和粉防己碱 ∀
近年的研究表明防己诺林碱有抗炎镇痛 !降压 !抗肿
瘤和抑制胶原引起的血小板凝集等作用 ≈uov ∀防己
碱有消炎 !镇痛 !降压 !抗矽肺等作用 ∀临床用于治
疗高血压 !矽肺等疾病 o已取得了较好疗效 ∀研究还
证明 o防己碱是天然的非选择性的钙通道阻滞剂 o又
是钙调蛋白的拮抗剂 o有着广泛的药理作用和应用
前景 ≈w ∀
近年来 o以纯乙腈 !甲醇和二甲基甲酰胺等有机
溶剂或它们的混合物为分离介质的非水毛细管电泳
k≤∞l日益引起重视 o因为采用非水介质能获得
较高的分离效率及不同的选择性 o许多在水相 ≤∞
中不能分离的物质在 ≤∞中能很容易地得到分
离 ≈x ∀与以水为分离介质的毛细管电泳方法相比 o
≤∞体系可使用更高的电压和离子强度 o具有更
高的分离效率和分析灵敏度 o能增加疏水性样品的
溶解度 o减少疏水性分析物对毛细管壁的吸附以及
减少毛细管中的焦耳热等优点 ≈y ∀目前已有 u篇关
于 ≤∞分离测定防己诺林碱和防己碱的报道 ≈zo{ o但
文献 ≈z 采用的是 ≤∞2 ≥联用技术 o仪器价格昂
贵 o不易推广 ~文献 ≈{ 分析时间较长 k uu °¬±l∀
因此有必要建立更加快速 !灵敏并且分离效率高的
毛细管电泳分析方法 ∀本研究采用乙酸铵的甲醇溶
液作为缓冲溶液 o对防己诺林碱和防己碱的非水毛
细管电泳迁移行为进行了研究 o考察了冰醋酸 !乙腈
及缓冲液浓度 !电压等因素对分离的影响 o并且建立
了一种能同时分离测定防己及其制剂凤痛安胶囊中
防己诺林碱和防己碱的非水毛细管电泳新方法 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶±∏¤±·¤wsss型 k ¬¯¯¬³²µ¨o • ¤·¨µ¶≤«µ²2
°¤·²ªµ¤³«¼ ⁄¬√¬¶¬²± ²© ¬¯©²µ§o o≥l毛细管电泳
仪 o数据处理器 ¤¬¬°¤{us色谱工作站 ∀熔融石英
毛细管 k河北永年光纤厂 l∀ °≥ p ts型酸度计
k萧山市科学仪器厂 l∀为了避免缓冲溶液和样品
溶液挥发 o缓冲瓶和样品瓶都必须具塞 ∀
防己诺林碱 k批号 ttsz|v2ussssvl和防己碱
k批号 ttsztt2ussusxl购于中国药品生物制品检定
所 ∀防己和风痛安胶囊 k北京天九药业有限公司 o
批号 ussysustl均购自兰州当地药店 ∀所有试剂均
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为分析纯 ∀实验用水为蒸馏水 ∀
2 方法
2q1 电泳条件
熔融石英毛细管 kzx1s Λ° ≅ xs ¦°lo有效长度
wu1w ¦°~缓冲体系为 t1sh醋酸 2ush乙腈 2xs °°²¯
# pt醋酸铵甲醇溶液 ~分离电压 us ®∂ ~阴极检测 o
检测波长 utw ±°~柱箱温度 kux ? s1xl ε ~阳极重
力进样 k高度差 ts ¦°lo进样时间 x ¶∀
2q2 溶液制备
对照品溶液的制备 }精密称定防己诺林碱和防
己碱适量 o置于同一量瓶中 o以甲醇为溶剂 o配制成
混合标准储备溶液 k防己碱 t sss °ª# pt o防己诺
林碱 t sss °ª# pt lo不同质量浓度的对照品溶液
直接用甲醇稀释至所需浓度即可 ∀
供试品溶液的制备 }取粉碎的防己样品 t1sss
ªo用 v °甲醇超声提取 o每次 vs °¬±o离心 ts °¬±o
倾出上清液 ∀重复提取 v次 o最后将 v次提取液合
并 !s1wx Λ°滤膜过滤 o用甲醇定容至 ts °∀取 ts
粒风痛安胶囊 o倾出内容物 o混匀 o精密称取 u1sss
ªo按上述方法提取 ∀
所有溶液在电泳前均用 s1wx Λ°滤膜过滤 ∀
2q3 条件优化及结果
电解质和有机溶剂的选择 }大多数的有机溶剂
如甲醇 !甲酰胺 !Ν2甲基甲酰胺 !Ν, Ν2二甲基甲酰胺
和二甲亚砜是 ≤∞中常用的溶剂 ∀但是 oΝ2甲基
甲酰胺 !Ν, Ν2二甲基甲酰胺和二甲亚砜在短波长会
产生较高的背景吸收 o从而降低检测灵敏度 ∀因此 o
本文选用甲醇作为溶剂 ∀醋酸铵是 ≤∞体系中最
常用的电解质 o该体系也以醋酸铵为电解质 ∀
醋酸体积分数的影响 }电泳介质的酸度是分离
可离解物质的一个重要的影响因素 o它决定着每一
个被分析物的离解程度 o因而缓冲液的酸度可显著
改变其电泳行为 ∀在该体系中用醋酸调节背景电解
质的酸度 ∀以含 tss °°²¯ # pt的醋酸铵 otsh乙
腈的甲醇溶液为缓冲在 us ®∂下考察了醋酸在 s ∗
u1sh对分离的影响 ∀如图 t所示 ou种碱的迁移时
间随醋酸体积分数的升高而缩短 ∀这种现象归因于
随醋酸体积分数的增大 ou种碱的电离程度增大 o因
而其迁移速度加快 ~而且所含氮原子数越多 o其所带
的正电荷越多 o迁移速度也越快 ∀而且如图 t所示 o
当醋酸为 t1sh时 ou种生物碱的检测灵敏度最高 o
因此该体系的最佳醋酸体积分数为 t1sh ∀
图 t 醋酸体积分数对分析物迁移时间 kτl和峰面积
kΑl的影响
t1防己诺林碱 ~u1防己碱
醋酸铵浓度的影响 }电解质的浓度由于其影响
电渗流 k∞ƒl和缓冲液的黏度而显著影响分离效
率 ∀为了获得最佳的分离度 o以含 t1sh 醋酸和
tsh乙腈的甲醇溶液为缓冲 o在 us ®∂下考察了醋
酸铵从 ux ∗ tss °°²¯# pt对分离的影响 ∀从实验
结果可知 o迁移时间和分离度随醋酸铵浓度的增加
明显增加 o而当醋酸铵小于 ux °°²¯# pt时防己诺
林碱和防己碱不能基线分离 ∀当醋酸铵为 xs °°²¯
# pt时 o峰面积和分离度都达到最佳 o因此实验中
选择 xs °°²¯# pt醋酸铵为运行电解质 ∀
乙腈体积分数的影响 }采用混合溶剂是提高分
离选择性和分离效率的重要手段 ∀混合溶剂可改变
流动相的极性 !分配系数以及电渗流淌度 ∀在本实
验中将乙腈作为改性剂 o以含 t1sh醋酸和 xs °°²¯
# pt醋酸铵的甲醇溶液为缓冲 o在 us ®∂下考察了
tsh ∗ vsh乙腈对分离的影响 ∀如图 u所示 o随乙
腈体积分数的增大迁移时间显著降低 o而峰面积逐
渐增大 o当乙腈体积分数大于 ush时 o分析物的峰
面积呈下降趋势 o综合考虑分析物的峰面积和迁移
时间 o本实验所选择的最佳乙腈体积分数为 ush ∀
图 u 乙腈体积分数对分析物迁移时间 kτl和
峰面积 kΑl的影响
t1防己诺林碱 ~u1防己碱
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电压的影响 }在毛细管电泳中 o分离电压直接影
响着分离速度 ~分离电压越高 o分析时间越短 ∀为了
获得较高的分离效率 o在不影响分离度和检测灵敏
度的前提下 o尽可能使用较高的分离电压 ∀但过高
的电压会产生较高的焦耳热 o从而降低柱效 ∀本研
究考察了从 ty ∗ uw ®∂分离电压对分离的影响 o实
验结果见图 v∀根据实验结果 ous ®∂选为本体系的
最佳分离电压 ∀
图 v 分离电压对分析物迁移时间
kτl和峰面积 kΑl的影响
t1防己诺林碱 ~u1防己碱
依据上述实验结果 o该体系的最佳电泳条件为 }
t1sh醋酸 !ush乙腈和 xs °°²¯ # pt醋酸铵的甲
醇溶液及 us ®∂的分离电压 ∀在上述条件下 ou种
生物碱的标准谱图见图 w∀如图 w所示 o分离可在 y
°¬±内全部完成 ∀
图 w 标准混合液图谱和实际样品图谱
1标准混合物 k分析物质量浓度均为 tss °ª# pt l~
1防己
药材 ~≤1凤痛安胶囊 ~tq防己诺林碱 ~u1防己碱
2q4 线性及检测灵敏度考察
精密量取防己诺林碱和防己碱混合标准储备液
u1x °o置于 x °量瓶中 o用甲醇定容至刻度 o制得
xss °ª# pt对照品溶液 o然后逐级稀释 o制得 uxso
tssoxsouxotsoxou1xot °ª# pt的对照品溶
液 o分别测定 ∀以质量浓度 Ξk°ª# pt l为横坐标 o
峰面积 Ψ为纵坐标线形回归 o防己诺林碱和防己碱
均在 t ∗ xss °ª# pt呈良好的线性关系 ∀防己诺
林碱和防己碱的线形回归方程分别为 Ψ xw1tt n
uxz1sΞkρ s1||| yl~Ψ p wyy1z n uyv1uΞ kρ
s1||| wl∀检测限 k⁄l以 v倍的噪声计 o防己诺
林碱和防己碱的 ⁄值分别为 s1ux °ª# pt os1y{
°ª# pt ∀由结果可知 o该方法具有很高的检测灵
敏度 ∀
2q5 精密度试验
取高 !中 !低 v个质量浓度 kuxsotssoxs °ª#
pt l的标准混合液分别重复进样 y次 o用峰面积和
迁移时间的相对标准偏差 k ≥⁄l作为考察体系精密
度的指标 ∀防己诺林碱和防己碱迁移时间和峰面积
的日内 ≥⁄分别为 s1s|h o s1x|h 和 s1wxh o
w1|h ~日间相对标准偏差分别为 s1yvh ot1|h o
u1vh ox1yh ∀
2q6 样品含量和回收率的测定
用本实验所建立的方法 o测定了防己和风痛安
胶囊中的防己诺林碱和防己碱 o通过比较迁移时间
和用标准物质标记 u种方法鉴定各自的出峰位置 ∀
所得样品图谱见图 wo测定结果见表 t∀
表 t 防己和风痛安胶囊中防己诺林碱
和防己碱的测定结果 kν vl
样品
防己诺林碱 防己碱
含量 ≥⁄rh 含量 ≥⁄rh
防己 t1{ztl u1xy v1{xtl t1x{
凤痛安胶囊 s1sz{ul u1u{ s1twul u1vy
注 }tl °ª# ªpt ~ul °ªr粒
分别取 3q2项下的供试液各 v份 o用标准加入
法测定方法的回收率 ∀测定方法和结果见表 u∀
3 结论
本实验研究了防己诺林碱和防己碱在非水体系
中的电泳迁移行为 o考察了影响电泳迁移行为的各
种因素 o并在此基础上首次建立了同时分离测定防
己诺林碱和防己碱的 ≤∞新方法 o该方法简便 !快
速 !灵敏 !准确 !重复性好 o对于中药防己及其制剂中
防己诺林碱和防己碱的分离测定和质量控制具有实
用价值 ∀
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表 u 防己和风痛安胶囊中防己诺林碱和防己碱的加样回收率 kν vl
样品 分析物 加入量 r°ª# pt 测得量 r°ª# pt 回收率 rh 平均值 rh ≥⁄rh
防己 防己诺林碱 xux1x xss tsx1t tsu u1xy
uxs ux{1zx tsv1x
tss |y1{ |y1{
防己碱 xss xwt1x ts{1v tsx v1tu
uxs uyy1zx tsy1z
tss ||1w ||1w
风痛安胶囊 防己诺林碱 xss w|{ ||1y |w1y v1yw
uxs uvv1x |v1w
tss |s1{ |s1{
防己碱 xss w|t |{1u |{1z u1yz
uxs uxv1x tst1w
tss |y1x |y1x
≈参考文献
≈t 江苏新医学院 q中药大辞典 ≈ q上海 }上海人民出版社 o
t|zx}|{tq
≈u פ±ª• o ∞¬¶¨±¥µ¤±§q Στεπηανιαε τετρανδραε ≥q ²²µ¨o ¬± ≤«¬2
± ¶¨¨ §µ∏ª¶²©³¯¤±·²µ¬ª¬±¤¯≈ q
µ¨¯¬±} ≥³µ¬±ª¨µ2∂ µ¨¯¤ªo t||u}
|yvq
≈v ׶∏·¶∏°¬×o ²¥¤¼¤¶«¬≥o ¬∏≠≠ o ·¨¤¯q ±·¬2«¼³¨ µª¯¼¦¨°¬¦ ©¨©¨¦·
²©©¤±ª¦«¬±²¯¬±¨¬¶²¯¤·¨§©µ²° Στεπηανια τετρανδρα ¤§¬¬¬± ¶·µ¨³·²2
½²·²¦¬±2§¬¤¥¨·¬¦°¬¦¨≈ q
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¬±·¨µ¤¦·¬²± ¤··«¨ §¬¯·¬¤½¨ °2¥¬±§¬±ª¶¬·¨≈ q
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usswouxkts2ttl}tystq
≈z 柳仁民 o何风云 o孙爱玲 q毛细管电泳 2电喷雾 2质谱 2质谱分离
鉴定粉防己生物碱 ≈ q药学学报 ousswov|kxl}vyvq
≈{ ≠¤±ªo ²±ª o ¬∏ • o ·¨¤¯q ±¤¯¼¶¬¶²©·¨·µ¤±§µ¬±¨¤±§
©¤±ª¦«¬±²¯¬±¨¬± ·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬± ¶¨¨ ° §¨¬¦¬± ¶¨¥¼ ¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²2
³«²µ¨¶¬¶≈ q ≤«µ²°¤·²ªµo t||{o{ttkt2ul}uzwq
∆ ετερµ ινατιον οφ τετρανδρινε ανδ φανγχηινολινε ιν Ρ αδιξ Στεπηανιαε Τετρανδραε
ανδ ιτσ πρεπαρατιον βψ νοναθυεουσ χαπιλλαρψ χηροµ ατογραπηψ
≠∏2´ ¬±t o ≤∞÷¬±ª2ª∏²u o ± ≠ ²±ª2¬¬∏t o ¨t o
¤²2¬¬∏t o ≤¤¬2«²±ªt o ≤ ¬±ª2¯¬¤±ªt
(t. Χολλεγε οφ Πηαρµ αχψ, Ταισηαν Μεδιχινε Χολλεγε, Ταιαν uztsty, Χηινα;
u. Χολλεγε οφ Χηεµ ιστρψ ανδ Ενγινεερ, Λανζηου Υνιϖερσιτψ, Λανζηου zvssss, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤± º¨ ° ·¨«²§©²µ·«¨ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©©¤±ª¦«¬±²¯¬±¨¤±§·¨·µ¤±§µ¬±¨¬± Στεπηανια τετρανδρα
¤±§ƒ ±¨ª·²±ª¤± ¦¤³¶∏¯¨¥¼ ±²¤± ∏´¨ ²∏¶¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶q Μετηοδ : ≥ ³¨¤µ¤·¬²± º¤¶¦¤µµ¬¨§²∏·¬± ¤± ∏±¦²¤·¨§©∏¶¨§¦¤³¬¯¯¤µ¼
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° ·¨«¤±²¯q ¶¨³¤µ¤·¬²± √²¯·¤ª¨ ²©us ®∂ ¤±§¤∂ §¨ ·¨¦·²µº¤√¨¯ ±¨ª·«¤·utw ±° º µ¨¨ ¤§²³·¨§q ≥¤°³¯¨º¤¶¬±·µ²§∏¦¨§©µ²° ·«¨ ¤±2
²§¨ q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± µ¤±ª¨ ¶º µ¨¨ t1sso xss °ª# pt ©²µ¥²·«¤±¤¯¼·¨¶q ±§¨ µ·«¨ ²³·¬°∏° ¦²±§¬·¬²±¶o ·«¨ µ¨ ¤¯·¬√¨¶·¤±§¤µ§
§¨ √¬¤·¬²± k ≥⁄o ν yl ©²µ·«¨ °¬ªµ¤·¬²± ·¬°¨²© ¤¨¦«¤±¤¯¼·¨ º µ¨¨ s1s|h o t1|h k¬±·µ¤2§¤¼l ¤±§s1yvh o t1|h k¬±·¨µ2§¤¼l~ ׫¨
≥⁄ ©²µ·«¨ ³¨ ¤® ¤µ¨¤²© ¤¨¦«¤±¤¯¼·¨ º µ¨¨ s1wxh o x1|h k¬±·µ¤2§¤¼l ¤±§u1vh o x1yh k¬±·¨µ2§¤¼lo µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©
·«¨ ¤±¤¯¼·¨¶º µ¨¨ §¨ ·¨µ°¬± §¨ ¤¨¶¬¯¼ º¬·« ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶tsuh ©²µ©¤±ª¦«¬±²¯¬±¨ ¤±§ tsxh ©²µ·¨·µ¤±§µ¬±¨ ¬± Σ1 τετρανδρα ¤±§
|w1yh ©²µ©¤±ª¦«¬±²¯¬±¨¤±§|{1zh ©²µ·¨·µ¤±§µ¬±¨¬± ƒ ±¨ª·²±ª¤± ¦¤³¶∏¯ ¶¨o µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q Χονχλυσιον: ׫¨ ³µ²³²¶¨§° ·¨«²§¬¶¶¬°2
³¯ o¨ µ¤³¬§o ¤¦¦∏µ¤·¨ ¤±§«¬ª«¨ µµ¨³¨ ¤·¤¥¯ o¨ ¤±§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·²¦²±·µ²¯ ²©·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ²©Σ1 τετρανδρα ¤±§ƒ ±¨ª·²±ª¤± ¦¤³¶∏¯ ¶¨q
[ Κεψ ωορδσ] ƒ¤±ª¦«¬±²¯¬± ~¨ ·¨·µ¤±§µ¬± ~¨ ±²±¤´ ∏¨ ²∏¶¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶~ Στεπηανια τετρανδρα~ ƒ ±¨ª·²±ª¤± ¦¤³¶∏¯ ¶¨
≈责任编辑 鲍 雷
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