全 文 ：吴茱萸水和７０％乙醇提取物的急性毒性
和遗传毒性试验
杨秀伟
（北京大学药学院 天然药物学系 天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京 １０００８３）
［摘要］ 目的：研究吴茱萸水和７０％乙醇提取物的急性毒性和致突变性。方法：采用霍恩氏法研究灌胃给予
小鼠吴茱萸水和７０％乙醇提取物的半数致死量（ＬＤ５０）。选用健康昆明种小鼠４０只，雌雄各半，体重１７～２２ｇ，随
机分为４个受试药物剂量组：１００，２１５，４６４，１０００ｇ·ｋｇ－１，灌胃给药，观察７ｄ，记录中毒和死亡情况，计算得出
ＬＤ５０。采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验（Ａｍｅｓ试验）研究其致突变性，小鼠精子畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试
验研究其致畸变性。结果：小鼠口服吴茱萸水和７０％乙醇提取物的ＬＤ５０大于１００ｇ·ｋｇ
－１；２种提取物各剂量组小
鼠灌胃后未见明显中毒症状，亦无死亡。２种提取物的 Ａｍｅｓ试验阴性、未发现对小鼠精子产生畸变作用、对小鼠
骨髓细胞染色体未见损伤。在急性毒性、小鼠精子畸变和小鼠骨髓细胞微核试验中，从试验开始到结束，小鼠体重
增重情况良好。结论：吴茱萸水和７０％乙醇提取物对小鼠属实际无毒，ＬＤ５０大于１００ｇ·ｋｇ
－１；在本试验条件下，
未发现其有遗传毒性。
［关键词］ 吴茱萸；吴茱萸提取物；急性毒性；遗传毒性
［中图分类号］Ｒ２８５．５，Ｒ９６５３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１１１３１７０５
［收稿日期］ ２００７１２１０
［基金项目］ 国家科技攻关项目（９６９０１０１３９，９９９２９０２１０）；国
家科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０８Ｂ０３０９，２００６ＢＡＩ０６Ａ０１０２）
［通讯作者］ 杨秀伟，Ｔｅｌ：（０１０）８２８０５１０６，Ｅｍａｉｌ：ｘｗｙａｎｇ＠
ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
中药吴茱萸为芸香科植物吴茱萸 Ｅｖｏｄｉａｒｕｔａｅ
ｃａｒｐａ（Ｊｕｓｓ．）Ｂｅｎｔｈ．及其变种石虎 Ｅ．ｒｕｔａｅｃａｒｐａ
（Ｊｕｓｓ．）Ｂｅｎｔｈ．ｖａｒ．ｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ（Ｄｏｄｅ）Ｈｕａｎｇ和疏毛
吴茱萸 Ｅ．ｒｕｔａｅｃａｒｐａ（Ｊｕｓｓ．）Ｂｅｎｔｈ．ｖａｒ．ｂｏｄｉｎｉｅｒｉ
（Ｄｏｄｅ）Ｈｕａｎｇ的干燥近成熟果实，为常用中药之
一。有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻之功效；用于
厥阴头痛、寒疝腹痛、寒湿脚气、经行腹痛、脘腹胀
痛、呕吐吞酸、五更泄泻，亦用于高血压和偏头痛等
症的治疗；外治口疮。在对吴茱萸系统性研究里，作
者报道了吴茱萸化学成分的研究［１７］、拟除虫菊酯类
农药残留分析［８］、生物碱的定量分析［９］以及精制吴
茱萸胶囊化学成分的研究［１０］；对吴茱萸中的５种生
物碱成分以及总喹诺酮生物碱的急性毒性进行了研
究［２］。吴茱萸为著名汤剂“吴茱萸汤”［１０］、丸剂“左
金丸”和胶囊剂“左金胶囊”［１１］等的主要药味之一，
临床应用大剂量时对中枢有兴奋作用，并可引起视
力障碍及错觉；有内服３０ｇ引起中毒的个案报道，
表现为腹痛、腹泻、视力障碍、错觉、毛发脱落。迄
今，有关吴茱萸毒性的研究未见报道。为确保吴茱
萸的用药安全，本研究通过小鼠急性毒性、Ａｍｅｓ试
验、精子畸变和骨髓微核试验等对吴茱萸水和７０％
乙醇提取物进行安全性评价。
１ 材料
１．１ 动物
健康昆明种小鼠，体重１７～２２ｇ（急性毒性试
验）或２５～３５ｇ（精子畸变试验）、２５～３０ｇ（骨髓微
核试验），由北京大学医学部实验动物科学部提供，
合格证号为ＳＣＸＫ（京）２００２００２１。动物置于（２２±
１）℃控温和光暗周期为１２ｈ环境下，给予清洁级
普通小鼠饲料饲养（北京大学医学部实验动物科学
部提供）。
１．２ 菌株
菌株采用经鉴定符合要求的组氨酸营养缺陷型
鼠伤寒沙门菌 ＳａｌｍｏｎｅｌａｔｙｐｈｉｎｕｒｉｕｍＴＡ９７，ＴＡ９８，
ＴＡ１００，ＴＡ１０２４个菌株，大鼠肝匀浆Ｓ９作为体外代
谢活化系统，皆由北京大学营养与保健食品评价中
心提供。
１．３ 药物
湖南湘潭产吴茱萸由湖南宏生堂制药有限公司
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提供，经北京大学药学院杨秀伟教授鉴定为吴茱萸
Ｅｒｕｔａｅｃａｒｐａ干 燥 近 成 熟 果 实。标 本 （Ｎｏ．
１９９９０９０１）存放在北京大学天然药物及仿生药物国
家重点实验室。
１．４ 试剂
２氨基芴 （２ａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｎｅ，２ＡＦ；ＦｌｕｋａＣｈｅｍｉｅ
ＡＧ，Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａ
ｍｉｄｅ，ＣＰ；上海华联制药有限公司）、多氯联苯（ｐｏｌｙ
ｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄｂｉｐｈｅｎｙｌｓ，ＰＣＢｓ；Ａｃｃｕｓｔａｎｄａｒｄ，ＮｅｗＨａ
ｖｅｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）、琼脂粉（日本进口分装，上海麦莎生
物科技有限公司）、小牛血清和 ＲＰＭＩ１６４０培养基
（ＧｉｂｃｏＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．，ＧｒａｎｄＩｓ
ｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ）、Ｇｉｅｍｓａ染液（北京耀明前沿科技发
展中心）、丝裂霉素 Ｃ（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎＣ，ＭＭＣ；Ｒｏｃｈｅ公
司，日本）；４硝基喹啉１氧化物（ＮＱＯ，４ｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏ
ｌｉｎｅ１ｏｘｉｄｅ）、黄曲霉毒素 Ｂ１（ａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，ＡＦＢ１）和
二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）皆购于Ｓｉｇｍａ
ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。
１．５ 仪器
ＨＥＲＡｃｅｌ型 ＣＯ２培养箱和冷冻离心机均为美
国科俊仪器公司产品，日本 ＯｌｙｍｐｕｓＳＺＸ１０型体式
显微镜，日本日立公司７０２０型全自动生化分析仪，
美国伯乐公司５５０型酶标仪。
２ 方法
２．１ 受试药物的制备
取吴茱萸粗粉２０ｋｇ用２０Ｌ水提取，共提取３
次；合并提取液，过滤，滤液减压浓缩，得吴茱萸水提
取物（ＥＲＷＥ，批号００１２２３）５６３ｇ，收率２８１５％。试
验时用生理盐水溶解并稀释至受试浓度。另取吴茱
萸粗粉２０ｋｇ用２０Ｌ７０％乙醇水溶液提取，共提取
３次；合并提取液，过滤，滤液减压浓缩，得吴茱萸
７０％乙醇提取物（ＥＲＥＥ，批号 ００１２２５）５２４ｇ，收率
２６２０％。试验时用适量ＤＭＳＯ溶解，并用生理盐水
稀释至受试浓度。ＥＲＷＥ和 ＥＲＥＥ在“北京大学营
养与保健食品评价中心”备案号分别为 ０１０００８，
０１０００７。
２．２ 小鼠急性毒性试验
采用霍恩氏法，选用健康昆明种小鼠４０只，雌
雄各２０只进行试验。小鼠随机分为４个受试药物
剂量组：１００，２１５，４６４，１０００ｇ·ｋｇ－１，间距为
２１５，灌胃给药，每天１次。灌胃前禁食１６ｈ，不禁
水，观察７ｄ，记录中毒和死亡情况，计算得出半数致
死量（ＬＤ５０）。
２．３ 致突变试验
２．３．１ Ａｍｅｓ试验 采用经鉴定符合要求的鼠伤寒
沙门菌组氨酸缺陷型 ＴＡ９７，ＴＡ９８，ＴＡ１００，ＴＡ１０２４
种试验菌株进行试验；采用ＰＣＢ诱导的大鼠肝匀浆
作为体外代谢活化系统。受试药物研磨后，称取一
定量配成所需浓度，１５ｍｉｎ高压灭菌后用于试验。
在顶层琼脂中加入０１ｍＬ试验菌株增菌液、０１ｍＬ
受试药物溶液和０５ｍＬＳ９混合液（当需要代谢活
化时），混匀后倒入底层培养基平板上。设０２，２０，
２００，１０００，５０００μｇ／皿５个剂量组，同时设自发回
复突变和阳性突变剂（２ＡＦ或ＮＱＯ）对照组。在３７
℃培养４８ｈ，计数每皿回复突变菌落数。如果受试
药物的回复突变菌落数是自发回复突变菌落数的２
倍以上，并呈剂量反应关系者则定为阳性。整套试
验在相同条件下重复进行２次试验。以单因素方差
分析比较各组回复突变菌落数。
２．３．２ 精子畸变试验 将体重２５～３５ｇ的性成熟
雄性小鼠２５只随机分为５组，每组５只，５组分别
为阴性对照组、阳性对照组和３个剂量受试药物试
验组。阳性对照组按６０ｇ·ｋｇ－１剂量灌胃环磷酰
胺，试验组灌胃给予受试药物，剂量分别为 １２５，
２５，５０ｇ·ｋｇ－１，相当于ＬＤ５０的１／８，１／４和１／２，阴
性对照组灌胃相同体积的蒸馏水。以上处理连续５
ｄ，每天１次，于首次处理后３５ｄ处死动物，取双侧
附睾，于生理盐水中剪碎，过滤、离心，取沉淀液涂
片，干燥，固定，１％伊红染色，显微镜下观察，每只动
物观察１０００个精子，记录畸形精子数，计算精子畸
变率。
２．３．３ 骨髓微核试验 选用体重为２５～３０ｇ的昆
明种小鼠５０只，随机分为５组，每组１０只，雌雄各
半。５组分别为：阳性对照组、阴性对照组和３个剂
量受试药物试验组。阳性对照组按６０ｍｇ·ｋｇ－１剂
量灌胃环磷酰胺，试验组灌胃给予受试药物，剂量分
别为１２５，２５，５０ｍｇ·ｋｇ－１体重，相当于 ＬＤ５０的
１／８，１／４和１／２，阴性对照组灌胃相同体积的蒸馏
水。以上处理共２次，２次间隔２４ｈ，第２次处理后
６ｈ处死动物，取胸骨骨髓，以小牛血清稀释涂片、
干燥，甲醇固定，１∶１０Ｇｉｅｍｓａ染液染色，显微镜下观
察，每只小鼠观察１０００嗜多染红细胞，记录微核细
胞数，计算微核率。以单因素方差分析比较各组微
核发生率。
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２．４ 统计学处理
所有数据处理用 ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，
Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ，ＵＳＡ）进行，用珋ｘ±ｓ表示。各组组间
差异采用单因素方差分析（ＯｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ），采用
ＳｔｕｄｅｎｔＮｅｗｍａｎＫｅｕｌｓ（ＳＮＫ）进行组间的两两比较，
Ｐ＜００５为具有统计学意义。
３ 结果
３．１ 小鼠急性毒性试验
在ＥＲＷＥ和 ＥＲＥＥ的小鼠急性毒性试验中，２
种提取物各剂量组小鼠灌胃后未见明显中毒症状，
亦无死亡；对２种性别小鼠的急性毒性 ＬＤ５０皆大于
１０００ｇ·ｋｇ－１。２种提取物的小鼠急性毒性试验体
重情况如表１，从试验开始到试验结束，小鼠体重增
重情况良好。
３．２ 致突变试验
３．２．１ Ａｍｅｓ试验 在加与不加Ｓ９条件下，ＴＡ９７，
ＴＡ９８，ＴＡ１００，ＴＡ１０２４种试验菌株各菌株的自发回
复突变菌落数均在正常范围内，且各菌的阳性对照
均高于相应的自发回复突变菌落数 ２倍以上，但
表１ 吴茱萸水（ＥＲＷＥ）和７０％乙醇提取物（ＥＲＥＥ）
的小鼠急性毒性试验体重情况（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｇ·ｋｇ－１ 性别 初始体重／ｇ 终末体重／ｇ
ＥＲＷＥ １００ 雄性 ２０６±１１ ３２０±２１
雌性 １８８±０８ ２４６±０９
２１５ 雄性 ２０４±１１ ３２０±１９
雌性 １８４±１１ ２５０±１４
４６４ 雄性 ２０６±１１ ３２０±１６
雌性 １８６±１５ ２５０±１９
１０００ 雄性 ２１０±１０ ３２２±１３
雌性 １８４±１１ ２４６±１５
ＥＲＥＥ １００ 雄性 ２０８±１１ ３０８±０８
雌性 １９６±１１ ２６０±１２
２１５ 雄性 ２０８±０８ ３０８±１６
雌性 １８８±１３ ２５２±１６
４６４ 雄性 ２０４±１１ ２９６±１１
雌性 １９４±１３ ２６０±１４
１０００ 雄性 ２０４±０９ ２９８±１１
雌性 １９０±１２ ２５６±１１
ＥＲＷＥ和ＥＲＥＥ各剂量组回复突变菌落数均未高于
相应菌株自发回复突变菌落数的２倍，且无剂量反
应关系。试验重复１次，所得结论相同。加 Ｓ９的
试验结果见表２。不加Ｓ９的试验数据略。
表２ 吴茱萸水（ＥＲＷＥ）和７０％乙醇提取物（ＥＲＥＥ）的Ａｍｅｓ试验（＋Ｓ９）的回复突变菌落数（珋ｘ±ｓ）
组别 次数 剂量／μｇ／皿 ＴＡ９７／皿 ＴＡ９８／皿 ＴＡ１００／皿 ＴＡ１０２／皿
ＥＲＷＥ 第１次 ０２ １４１±７０ ３６±２１ １５７±３０ ２４４±８４
２０ １３６±５６ ３６±１５ １６３±４７ ２５１±７５
２００ １３２±５８ ３７±４２ １５１±８５ ２４１±７５
１０００ １４２±６５ ３３±２５ １６３±４６ ２２３±１５１
５０００ １４１±５５ ３６±１５ １６１±９６ ２３９±１０１
自发回变 １４９±９１ ３４±２１ １６３±４２ ２５２±５７
第２次 ０２ ９７±４３ ３１±１１ １３１±６２ ２７３±５０
２０ ９４±１１ ２９±２１ １３５±１０ ２７５±４６
２００ ９３±３８ ３０±２５ １３２±３２ ２６４±１００
１０００ ９５±３０ ３１±２３ １３５±３５ ２８０±９５
５０００ ９４±７２ ３０±３２ １３１±６９ ２７３±７８
自发回变 １００±４０ ３１±１５ １３３±５８ ２７４±９０
阳性对照物 ２ＡＦ １０ １１０２ ３１１ ８０９
ＡＦＢ１ １ １１７０
ＥＲＥＥ 第１次 ０２ １７７±９４ ４０±２５ １３５±９６ ２８６±５０
２０ １７３±５６ ４４±３０ １３５±６４ ２９５±８１
２００ １７８±４０ ４５±１５ １３４±３６ ２９１±１２９
１０００ １７７±７５ ４２±６５ １３１±７０ ２９４±４２
５０００ １７１±３０ ３７±４９ １３０±６０ ２９２±６６
自发回变 １７５±９８ ３９±５１ １３８±１２３ ２９３±１６６
ＤＭＳＯ １７２±１１１ ３９±５１ １２９±９５ ２９２±１２５
第２次 ０２ １４１±６５ ３２±２１ １６９±４２ ２５８±１００
２０ １４４±３５ ３２±３０ １６８±１２５ ２６３±６１
２００ １４５±３２ ３３±２５ １６３±５０ ２５６±９３
１０００ １４０±２０ ３４±４０ １７３±４３ ２５２±５０
５０００ １３８±４５ ３３±２５ １７０±５１ ２４８±９０
自发回变 １３９±５０ ３２±２１ １７１±４６ ２４４±８０
ＤＭＳＯ １３９±６５ ３２±３５ １７０±７１ ２６０±９２
阳性对照物 ２ＡＦ １０ ８５４ ３４４ １０３３
ＡＦＢ１ １ １００９
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３．２．２ 精子畸变试验 结果如表３，ＥＲＷＥ和ＥＲＥＥ
对小鼠精子畸形发生率未产生明显改变，２种药物各
剂量组与阴性对照组比较差异无显著性，而环磷酰胺
阳性对照组与阴性对照组比较差异显著（Ｐ＜００５）。
未发现ＥＲＷＥ和ＥＲＥＥ对小鼠精子产生畸变作用。从
试验开始到试验结束，小鼠体重增重情况良好，各组间
未见显著性差异。
表３ 吴茱萸水（ＥＲＷＥ）和７０％乙醇提取物（ＥＲＥＥ）
的小鼠精子畸形结果（ｎ＝５）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
精子数
／个
畸形精子数
／个
畸变率
／‰
阴性对照 － ５×１０００ ８９ １７８１）
ＣＰ ６０ ５×１０００ ４１９ ８３８
ＥＲＷＥ １２５ ５×１０００ ９１ １８２１）
２５０ ５×１０００ ９４ １８８１）
５００ ５×１０００ １００ ２００１）
ＥＲＥＥ １２５ ５×１０００ ８８ １７６１）
２５０ ５×１０００ ９３ １８６１）
５００ ５×１０００ １００ ２００１）
注：与环磷酰胺对照组比较１）Ｐ＜００５（表４同）
３．２．３ 骨髓微核试验 结果如表４所示，ＥＲＷＥ和
ＥＲＥＥ各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著
性，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异显
著（Ｐ＜００５）。ＥＲＷＥ和ＥＲＥＥ对小鼠骨髓细胞染色
体未见损伤。从试验开始到试验结束，小鼠体重增重
情况良好，各组间未见显著性差异。
表４ 吴茱萸水（ＥＲＷＥ）和７０％乙醇提取物
（ＥＲＥＥ）的小鼠微核试验结果（ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
观察细胞
／个
微核细胞
／个
微核率
／‰
阴性对照 － １０×１０００ ７ ０７１）
ＣＰ ６０ １０×１０００ ３００ ３００
ＥＲＷＥ １２５ １０×１０００ ６ ０６１）
２５０ １０×１０００ ６ ０６１）
５００ １０×１０００ ８ ０８１）
ＥＲＥＥ １２５ １０×１０００ ４ ０４１）
２５０ １０×１０００ ４ ０４１）
５００ １０×１０００ １２ １２１）
４ 讨论
本项研究执行《食品安全性毒理学评价程序和方
法》（ＧＢ１５１９３９４）。急性毒性试验中，ＥＲＷＥ和ＥＲＥＥ
对２种性别小鼠的ＬＤ５０皆大于１００ｇ·ｋｇ
－１体重。根
据对遗传物质作用终点的不同，并兼顾体外和体内试
验以及体细胞和生殖细胞的配套原则，本研究采用Ａ
ｍｅｓ试验、精子畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试验，综
合观察了ＥＲＷＥ和ＥＲＥＥ的致突变作用。Ａｍｅｓ试验
从基因水平上反映了遗传物质受损伤情况；微核的产
生与染色体断裂及纺锤体受损有关，微核率的大小可
间接反映染色体受损情况。本研究结果显示，在无论
有无活化系统（Ｓ９混合液）存在情况下，ＥＲＷＥ和
ＥＲＥＥ对ＴＡ９７，ＴＡ９８，ＴＡ１００和ＴＡ１０２４种菌株各剂量
组回复突变菌落数均接近自发突变，与阴性对照组相
比无显著性差异，也无剂量反应关系。结果提示ＥＲ
ＷＥ和ＥＲＥＥ在体外Ａｍｅｓ试验未发现致突变作用。
在试验剂量范围内，未发现对试验小鼠骨髓嗜多染红
细胞有致突变作用，也未发现对试验小鼠精子有损伤
作用。在实际应用中，吴茱萸多以复方形式应用，如
“吴茱萸汤”、“左金丸”等，为水煎工艺制备；“吴茱萸降
压颗粒”优选为１０倍量７０％乙醇工艺制备［１２］。在复
方应用中，如果不存在药物相互作用，吴茱萸的应用应
是安全的。在前言部分述及的大剂量应用吴茱萸对中
枢有兴奋作用，并可引起视力障碍及错觉等副作用可
能与吴茱萸中含单胺类物质有关。吴茱萸能促进组胺
释放，在应用单胺氧化酶抑制剂时会使这些物质的代
谢灭活发生障碍，产生所谓的毒性。
［致谢］ 北京大学营养与保健食品评价中心协助完成本
项研究。
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［９］ ＺｈａｏＭＹ，ＹａｎｇＸＷ．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄ
ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙＲＰＬＣｏｆｓｉｘａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｅｖｏｄｉａｅｆｒｕｃ
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·０２３１·
第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
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Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｎｓａｆｅｔｙｏｆｗａｔｅｒａｎｄ７０％ ｅｔｈａｎｏｌｉｃｅｘｔｒａｃｔｓｏｆ
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ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｍｕｔａｇｅｎｉｃｒｉｓｋｏｆｔｈｅｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｓ（ＥＲＷＥ）ａｎｄ７０％ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓ（ＥＲ
ＥＥ）ｆｒｏｍｔｈｅｎｅａｒｌｙｒｉｐｅｆｒｕｉｔｏｆＥｖｏｄｉａｒｕｔａｅｃａｒｐａ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｂａｓｉｓｆｏｒｓａｆｅｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｏｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＥＲＷＥａｎｄ
ＥＲＥＥｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｆｒｏｍｔｈｅｎｅａｒｌｙｒｉｐｅｆｒｕｉｔｏｆＥ．ｒｕｔａｅｃａｒｐａｂｙｒｅｆｌｕｘｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＨ２Ｏａｎｄ７０％ｅｔｈａｎｏｌａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒｔｈｒｅｅ
ｔｉｍｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｔｅｒｍｓｆｒｏｍ“ｔｅｃｈｎｉｃａｌｓｔａｎｄａｒｄｓｆｏｒｔｅｓｔ＆ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｈｅａｌｔｈｆｏｏｄ”ｉｓｓｕｅｄｂｙＨｅａｌｔｈｙ
ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＰＲＣ，ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙ，ａｎｄＡｍｅｓ，ｍｏｕｓｅｍａｒｏｗｃｅｌｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓａｎｄｍｏｕｓｅｓｐｅｒｍａｂｅｒａｔｉｏｎｔｅｓｔｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙ
ｔｅｓｔｏｆＥＲＷＥａｎｄＥＲＥＥｉｎｍｉｃｅｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆＨｏｒｎｔｏｇｉｖｅｔｈｅｍｅｄｉａｎｌｅｔｈａｌｄｏｓｅ（ＬＤ５０）．ＦｏｒｔｙｈｅａｌｔｈｙＫｕｎｍｉｎｇｓｔｒａｉｎ
ｍａｌｅａｎｄｆｅｍａｌｅｍｉｃｅｗｅｒｅｕｓｅｄａｎｄｔｈｅｉｒｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ１７２２ｇ．Ａｌｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｒａｎｄｏｍｌｙｔｏ４ｄｉｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓ
ｗｈｉｃｈｅａｃｈｈａｄ１０ｍｉｃｅ．ＴｈｅＥＲＷＥｏｒＥＲＥＥｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄａｔｔｈｅｄｏｓｅｓｏｆ１００，２１５，４６４ａｎｄ１０００ｇ·ｋｇ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｖｉａｉｎ
ｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｒｏｕｔｅ．Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆａｎｉｍａｌｓｐｏｉｓｏｎｅｄａｎｄｄｉｅｄｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｎｏｔｅｄｄａｉｌｙｆｏｒ７ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｄａｙｓ．ＴｈｅＡｍｅｓｔｅｓｔｗａｓｃａｒｉｅｄ
ｏｕｔｕｓｉｎｇｔｈｅＳａｌｍｏｎｅｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍｓｔｒａｉｎＴＡ９７，ＴＡ９８，ＴＡ１００ａｎｄＴＡ１０２．Ｉｎｔｈｅｓｐｅｒｍａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓｔｅｓｔ，２５ｈｅａｌｔｈｙａｄｕｌｔｍａｌｅＫｕｎ
ｍｉｎｇｓｔｒａｉｎｍｉｃｅｗｉｔｈａｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ２５３５ｇｗｅｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｒａｎｄｏｍｌｙｔｏ５ｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓ（１ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ，１ｎｅｔａｔｉｖｅｃｏｎ
ｔｒｏｌａｎｄ３ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓ）ｗｈｉｃｈｅａｃｈｈａｄ５ｍｉｃｅ．Ａｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｏｆ６０ｇ·ｋｇ－１ｏｆｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｗａｓｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｔｏｍｉｃｅ
ｉｎａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅｏｆｄｉｓｔｉｌｅｄｗａｔｅｒ．Ｉｎｔｈｅｔｒｅａ
ｔｅｄｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅＥＲＷＥｏｒＥＲＥＥｗａｓｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄａｔｔｈｅｄｏｓｅｓｏｆ１２５，２５０ａｎｄ５００ｇ·ｋｇ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｖｉａｔｈｅｓａｍｅ
ｒｏｕｔｅｗｉｔｈｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｏｎｃｅｄａｉｌｙｆｏｒ５ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｄａｙｓ．Ｔｈｅｓｐｅｒｍｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｗａｓｐｒｅ
ｐａｒｅｄｆｒｏｍｃａｕｄａｌｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓｏｆｍａｌｅｍｉｃｅａｔ３５ｔｈｄａｙａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔ．ＴｈｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｗａｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＥｏ
ｓｉｎＹａｎｄａｉｒｄｒｉｅｄｓｍｅａｒｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄ．Ｏｎｅｔｈｏｕｓａｎｄｓｐｅｒｍｓｐｅｒａｎｉｍａｌｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｆｏｒａｂｎｏｒｍａｌｓｈａｐｅｓａｎｄｔｈｅｒａｔｅｓｏｆｓｐｅｒｍａｂｅｒａ
ｔｉｏｎｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｏｗｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓａｓｓａｙ，５０ｈｅａｌｔｈｙａｄｕｌｔｍａｌｅａｎｄｆｅｍａｌｅＫｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅ，ｗｅｉｇｈｉｎｇ２５ｔｏ３０ｇ，
ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｓｓｉｇｎｅｄｔｏｆｉｖｅｇｒｏｕｐｓ（１ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ，１ｎｅｔａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌａｎｄ３ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓ）ｗｈｉｃｈｅａｃｈｈａｄ１０ｍｉｃｅ，ｆｉｖｅｍａｌｅｓａｎｄ
ｆｉｖｅｆｅｍａｌｅｓ．Ｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｔｗｉｃｅａｔｉｎｔｅｒｖａｌｓｏｆ２４ｈｗｉｔｈｔｈｅＥＲＷＥｏｒＥＲＥＥａｔｄｏｓｅｓｏｆ１２５，２５０ａｎｄ５００
ｇ·ｋｇ－１ｉｎｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ａｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｏｆ６０ｇ·ｋｇ－１ｏｆｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｉｎａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅｏｆ
ｄｉｓｔｉｌｅｄｗａｔｅｒｉｎａｎｅｔａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｏｗｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ１０ａｎｉｍａｌｓ
ｆｏｒｅａｃｈｇｒｏｕｐａｔ６ｈａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔｄｏｓｅａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＳｍｅａｒｓｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＧｉｅｍｓａａｎｄａｎａｌｙｓｅｄｆｏｒｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｏｗ
ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓｆｒｏｍ１０００ｃｅｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｏｒａｌａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙｓｔｕｄｙｉｎｍｉｃｅｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅＬＤ５０ｏｆｔｈｅｂｏｔｈＥＲＷＥａｎｄＥＲＥＥｗａｓｍｏｒｅ
ｔｈａｎ１００ｇ·ｋｇ－１．ＴｈｅｍｉｃｅｗｉｔｈｂｏｔｈｔｈｅｐｏｉｓｏｎｅｄｓｉｇｎｏｒｄｉｅｄｈａｄｎｏｔｂｅｅｎｏｂｓｅｒｖｅｄａｆｔｅｒｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＥＲＷＥｏｒＥＲＥＥ
ａｔｔｈｅｄｏｓｅｓｏｆ１００，２１５，４６４ａｎｄ１０００ｇ·ｋｇ－１．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔｓｗｅｒｅａｌｎｅｇａｔｉｖｅ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＡｍｅｓ，ｍｏｕｓｅｍａｒｏｗｃｅｌ
ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓａｎｄｍｏｕｓｅｓｐｅｒｍａｂｅｒａｔｉｏｎｔｅｓｔ．Ｉｎｔｈｅａｌａｓｓａｙｉｎｖｉｖｏ，ｔｈｅｍｉｃｅｓｈｏｗｅｄａｎｏｒｍａｌｙｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｆｒｏｍ
ｔｈｅｓｔａｒｔｔｏｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｏｒａｌＬＤ５０ｏｆｔｈｅＥＲＷＥａｎｄＥＲＥＥｉｎｍｉｃｅｗａｓｍｏｒｅｔｈａｎ１００ｇ·ｋｇ
－１ｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏ
ｎｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｎｔｈｅａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙｒａｔｉｎｇｃｒｉｔｅｒｉａ．ＴｈｅｂｏｔｈＥＲＷＥａｎｄＥＲＥＥｓｈｏｗｅｄｎｏｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｅｖｏｄｉａｒｕｔａｅｃａｒｐａ；ｆｒｕｃｔｕｓｅｖｏｄｉａｅｅｘｔｒａｃｔ；ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙ；ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙ
［责任编辑 古云侠］
·１２３１·
第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８