全 文 ：胶束电动毛细管色谱法测定戊己丸中吴茱萸碱和
吴茱萸次碱的含量
罗东玲，席先蓉，高言明，秦亚东，黄 平
（贵阳中医学院 药学系 分析室，贵州 贵阳 ５５０００２）
［收稿日期］ ２００６０７３０
［通讯作者］ 席先蓉，Ｔｅｌ：（０８５１）５８９３９１４，Ｅｍａｉｌ：ｌｄｌｏｏ１６＠
ｓｉｎａ．ｃｏｍ
戊己丸收载于《中国药典》２００５年版一部，是由
黄连、吴茱萸和白芍３味药细粉制成的水泛丸，功效
主要为泄肝和胃，降逆止呕。其含量测定［１］仅用紫
外可见分光光度法测定盐酸小檗碱的含量。除盐
酸小檗碱外，吴茱萸碱和吴茱萸次碱也是戊己丸中
重要有效成分，具有较强的药理作用［２］，药典未收
载其含量测定方法。经查阅文献资料，吴茱萸及其
制剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量测定方法报道有
ＨＰＬＣ［３］，薄层扫描色谱法［４］，ＨＰＣＥＣＺＥ［５］以及
ＨＰＣＥＭＥＫＣ［６］，但用ＨＰＣＥＭＥＫＣ测定戊己丸中吴
茱萸碱和吴茱萸次碱的含量未见报道。本实验建立
了 ＭＥＫＣ同时测定戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次
碱含量的方法，对于控制其制剂的质量，结果满意。
１ 仪器与试药
ＨＰ３ＤＣＥ高效毛细管电泳仪（Ａｇｉｌｅｎｔ公司），
ＤＡＤ检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作站，自动进样器；摇摆
式高速中药粉碎机；超声清洗机（２５０Ｗ，北京超声
设备二厂）；ＡＥ－２４０双量程电子分析天平１／万和
１／１０万两档，梅特勒托利多上海有限公司）；亚沸
水蒸馏水器。
吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品（中国药品生物
制品检定所提供，批号分别为１１０８０２２００５０４，０８０１
９７０２）；硼砂、十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）、甲醇、ＮａＯＨ
均为分析纯，水为亚沸蒸馏水。药材购于贵州同济
堂药店，经贵阳中医学院生药教研室刘秡教授鉴定，
黄连（批号 ０５１２２６０２）为毛茛科植物黄连 Ｃｏｐｔｉｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．的 干 燥 根 茎；吴 茱 萸 （批 号
０５１２０９０１）为芸香科植物吴茱萸 Ｅｖｏｄｉａｒｕｔａｅｃａｒｐａ
（Ｊｕｓｓ．）Ｂｅｎｔｈ．的干燥近成熟果实；白芍（批号
０６０１１２０１）为毛茛科植物芍药ＰａｅｏｎｉａｌａｃｔｉｆｌｏｒａＰａｌ．
的干燥根，以上３味中药均属药典收载品种，符合
法定标准，为合格药材。
２ 方法与结果
２．１ 电泳条件和系统适用性实验
空心未涂层石英毛细管柱（河北永年光导纤维
厂），柱长５８ｃｍ（有效柱长４９７ｃｍ），内径５０μｍ；
运行电解质为 ５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂缓冲液（含 ５０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＳＤＳ）甲醇（１３∶１）；压力进样１ｋＰａ×１０
ｓ；柱温２５℃；检测波长２２５ｎｍ。每次进样前，均用
０１ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶液冲洗毛细管柱４ｍｉｎ，运
行缓冲液冲洗 ５ｍｉｎ，所用缓冲液及样品液均经
０２２μｍ微孔滤膜过滤。在此条件下，测得吴茱萸
碱、吴茱萸次碱对照品，戊己丸阴性样品、戊己丸样
品及样品加标定性的ＭＥＫＣ谱图（见图１）。样品液
中吴茱萸碱和吴茱萸次碱与各自相邻峰的分离度大
于１５，理论塔板数均大于６×１０５，且阴性样品液没
有相应的峰出现。
图１ 对照品和样品ＭＥＫＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．样品；Ｃ．加标定性样品；Ｄ．吴茱萸阴性；
１．吴茱萸碱；２．吴茱萸次碱
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
２．２ 溶液制备
２．２．１ 对照品溶液制备 精密称取吴茱萸碱对照
品３２６ｍｇ、吴茱萸次碱对照品４６０ｍｇ，分别用甲
醇溶解并定容至１０ｍＬ，即得０３２６ｍｇ·ｍＬ－１吴茱
萸碱、０４６０ｍｇ·ｍＬ－１吴茱萸次碱对照品溶液。
２．２．２ 样品溶液的制备 按处方量［１］精密称取经
６０℃干燥至恒重的药材粉末黄连３ｇ，吴茱萸０５
ｇ，白芍３ｇ，精密加入１００ｍＬ甲醇，密塞，称重，超声
４５ｍｉｎ，冷至室温补重，过滤，取续滤液定容至 １００
ｍＬ，即得供试品溶液。
２．２．３ 阴性对照液的制备 去除吴茱萸药材后其
余药材按２．２．２项下进行制备，即得阴性对照溶液。
２．３ 线性关系考察
分别取吴茱萸碱０３２６ｍｇ·ｍＬ－１、吴茱萸次碱
０４６０ｍｇ·ｍＬ－１对照品溶液，用甲醇分别稀释为
０２６，０１８，０１３，００６，００３ｍｇ·ｍＬ－１的吴茱萸碱
标准系列和０２３，０１８，００９，００６，００３ｍｇ·ｍＬ－１
的吴茱萸次碱标准系列，均用上述电泳条件对各浓
度进行测定。以峰面积（Ａ）为纵坐标，质量浓度
（Ｃ）为横坐标，进行线性回归，得吴茱萸碱回归方程
Ａ＝４８４２６Ｃ＋０５６，ｒ＝０９９９７和吴茱萸次碱回归
方程 Ａ＝４３６１４Ｃ－４５８，ｒ＝０９９９２，表明吴茱萸
碱、吴茱萸次碱分别在００３～０３２６，００３～０４６ｍｇ
·ｍＬ－１呈良好的线性关系。
２．４ 精密度试验
精密吸取吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品混合溶
液，在上述电泳条件下连续测定６次，计算得吴茱萸
碱ＲＳＤ为２１９％，吴茱萸次碱ＲＳＤ为１５３％。
２．５ 重复性试验
按２．２．２项下方法制备６份供试品溶液，在上
述电泳条件下进行测定，计算得吴茱萸碱 ＲＳＤ为
１９１％，吴茱萸次碱ＲＳＤ为２９４％。
２．６ 稳定性试验
取供试品溶液，按上述电泳条件分别于２，５，７，
１１，１５ｈ进行测定，计算得吴茱萸碱ＲＳＤ为２６２％，
吴茱萸次碱 ＲＳＤ为２７２％。结果表明样品液至少
在１５ｈ内稳定。
２．７ 回收率试验
分别精密称取已知含量的样品粉末５ｇ共９份
（内含吴茱萸碱０１７５ｍｇ·ｇ－１，吴茱萸次碱０１００
ｍｇ·ｇ－１），分别加入样品含量的０８，１，１２倍的吴
茱萸碱、吴茱萸次碱标准品溶液，按２．２．２项下制备
９份供试液，在上述电泳条件下测定，计算回收率，
结果见表１。
表１ 吴茱萸碱、吴茱萸次碱加样回收率
对照品
样品中
含量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
吴茱萸碱 ０８７６ ０６８０ １５１７ ９５５８ ９７５１ ２５３
０８７３ ０６８０ １５１７ ９５８８
０８２１ ０６８０ １５００ ９９８８
０８９２ ０８５０ １７５０ １００９０
０８６２ ０８５０ １６８０ ９６２９
０８５５ ０８５０ １７１７ １０１４０
０８４０ １０００ １８００ ９５２４
０９０９ １０００ １８６７ ９５８８
０９０１ １０００ １８７０ ９６５６
吴茱萸次碱 ０５００ ０４００ ０９１７ １０３４０ ９８６９ ２１９
０４９９ ０４００ ０９００ １００２０
０４６９ ０４００ ０８７０ １００２１
０５１０ ０５００ ０９９６ ９７２５
０５１５ ０６００ １１００ ９７０９
０４８９ ０５００ ０９７５ ９７１４
０４８０ ０６００ １０６７ ９７２９
０５２０ ０６００ １１１０ ９８０８
０４９２ ０５００ ０９８０ ９７５６
２．８ 样品测定结果
按照２．２．２项下供试品制备方法平行制备４份
样品，按照上述电泳条件进样，分别进行含量测定，
得样品中吴茱萸碱含量为 ０１７３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ
１９１％；吴茱萸次碱含量为 ００９８ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ
２７９％。
３ 讨论
３．１ 实验条件的选择
分别考察了以水、甲醇、无水乙醇和９５％乙醇
为溶剂，并采用了药典法、冷浸法和超声法对吴茱萸
碱、吴茱萸次碱的提取效率进行了比较，发现以冷浸
法提取的含量最低，超声提取与药典法提取含量相
差不大，由于药典法的步骤繁琐，转移次数多易造成
损失，误差增大，故选用甲醇超声提取的方法。
分别用甲醇超声提取 １５，３０，４５，６０ｍｉｎ，发现
４５ｍｉｎ后吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量已不再增
加，故本实验选择提取时间为４５ｍｉｎ。
３．２ 检测波长的选择
经光谱扫描确认吴茱萸碱最大吸收波长在２２５
ｎｍ；吴茱萸次碱最大吸收波长在３４５ｎｍ，为保证可
以同时测定两成分且都具有较高测定灵敏度，选用
２２５ｎｍ作为测定波长。
３．３ 电泳条件的选择
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本实验采用了 ＣＺＥ和 ＭＥＫＣ２种模式进行分
离，由于吴茱萸碱及吴茱萸次碱结构相似，极性相
近，在ＣＺＥ模式中先后选用不同浓度、不同ｐＨ的硼
砂缓冲液（２０～１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）、磷酸盐缓冲液
（２０～１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）、碳酸盐缓冲液（５０～１００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１），分别在上述缓冲液中按１∶０５～１∶１５
的比例加入甲醇或乙醇或乙腈或异丙醇或不加入有
机溶剂，始终不能分离此两成分，而胶束电泳却可较
好的分离，故选择ＭＥＫＣ模式。
分别考察了不同浓度的硼砂缓冲液（含 ＳＤＳ
２０～１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）和不同浓度的磷酸盐缓冲液
（含ＳＤＳ２０～１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１），发现硼砂体系的分
离效率优于磷酸盐体系，且５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的硼砂缓
冲液分离效率最好；另当ＳＤＳ从２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１增至
５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的过程中，分离效率逐渐增大，但超过
５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１后，分离效率逐渐降低，且电流波动较
大，当ＳＤＳ的浓度超过８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，吴茱萸碱
及吴茱萸次碱无峰出现，故本实验选用５０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１的硼砂缓冲液（含ＳＤＳ５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）。
在胶束电泳模式中，发现不加改性剂峰形差，分
析时间过长，且组分不能达到良好的分离。而在加
入的甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇等改性剂中，以甲醇效
果最好，故考察硼砂缓冲液甲醇的比例（１０∶１～１∶
２），发现分离效率随甲醇用量的增加而增大，峰形
改善，但达到１∶１左右时，分离效率急剧下降，至１∶
２时不能达到基线分离，故选择最佳分离比例 ５０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１硼砂缓冲液（含 ＳＤＳ５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）甲
醇（１３∶１）。
３．４ 本实验方法学考察的数据表明本方法稳定性、
精密度、加样回收率和重复性均能满足定量的要求，
而且前处理简单，样品及试剂用量少，分析耗费低，
环境污染少，柱效远高于 ＨＰＬＣ，是一种很有发展潜
力的分析方法。
［参考文献］
［１］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：４１６．
［２］ 戴媛媛，刘保林，窦昌贵．吴茱萸及其有效成分的药理研究进
展［Ｊ］．中药材，２００３，２６（４）：２９５．
［３］ 谭生建，赵炳成，王海涛，等．高效液相色谱法测定戊己丸中吴
茱萸碱和吴茱萸次碱含量［Ｊ］．解放军药学学报，２００２，１８（４）：
２０２．
［４］ 刘蕴秀，罗淑荣，冯孝章．薄层荧光扫描法测定吴茱萸药材及
其制剂中５种生物碱的含量［Ｊ］．药学学报，１９９９，３４（５）：３８３．
［５］ 李琴韵，王智华，洪筱坤．ＨＰＣＥＦＰＳ技术对吴茱萸质量的研究
［Ｊ］．中成药，２００３，２５（７）：５７０．
［６］ ＺｈａｎｇＪＨ，ＯｋｕｂｏＡ，ＹａｍａｚａｋＳＩ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｅｔａｉｎｅｓｉｎ
ｐｌａｎｔｓｂｙｌｏｗｐＨｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｓｔｈｅｉｒｐｈｅｎａｃｙｌｅｓｔｅｒｓ
［Ｊ］．ＢｕｎｓｅｋｉＫａｇａｋｕ，１９９７，４６（４）：２７５．
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００７０１２４
［基金项目］ 贵州省中药现代化科技产业研究开发基金项目
（黔科合农字［２００５］５０４０号，［２００６］５０４２号）
［通讯作者］ 王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，Ｅｍａｉｌ：ｇｙｗｙｌ＠ｍｃ．
ｅｄｕ．ｃｎ
ＨＰＬＣ测定珍珠滴丸中３，４Ｏ二咖啡酰基奎宁酸的含量
赵 平，王爱民，王永林，兰燕宇，何 迅，李勇军
（贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４）
珍珠滴丸系由羊耳菊、珍珠等药味组成，经提取
精制而得，为贵州省中药现代化科技产业研究开发
基金项目。本方具有解毒定痛，化腐生肌之功效，临
床用于复发性口腔溃疡等症。处方中的君药羊耳菊
为贵州地道药材，具有疏风散热，解毒消肿作用［１］。
羊耳菊药材目前尚无质量检测用对照品［２］，为了有
效控制药材及制剂质量，作者对羊耳菊化学成分进
行了研究，从中分离出含量较高的化合物［３６］，并按
《中药新药质量标准用对照品研究的技术要求》进
行标准物质研究，制备了化学纯度较高、化学结构明
确的３，４Ｏ二咖啡酰基奎宁酸（Ｃ２５Ｈ２４Ｏ１２）化学对
照品。建立了珍珠滴丸中３，４Ｏ二咖啡酰基奎宁
酸的含量测定方法，以控制本品的质量。
１ 仪器与试药
高效液相色谱仪系统（岛津 ＬＣ－１０Ａｖｐ），包含
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