全 文 ：苏郁胶囊对抑郁模型小鼠行为及海马
神经元损伤的影响
钟晓明t o毛庆秋t o黄 真t 3 o魏佳平u o梁泽华t
kt1 浙江中医学院 药学系 o浙江 杭州 vtssxv ~u1 浙江省中医院 o浙江 杭州 vtsss|l
≈摘要  目的 }探究苏郁胶囊对慢性应激抑郁模型小鼠行为 !海马神经元损伤及海马突触体内游离 ≤¤un浓度
的影响 ∀方法 }将 ys只昆明种雄性小鼠分为正常组 !模型组 !苏郁胶囊高 !中 !低剂量组kuu1{ ott1w ox1z ª#®ªp tl ∀
采用长期不可预见性中等强度应激造成小鼠抑郁模型 ∀测定各组小鼠体重变化 o’³¨ ±2©¬¨ §¯法和糖水消耗实验测定
各组小鼠的行为变化 ~‘¬¶¶¯染色法观察海马 ≤„t o≤„v区神经元形态及锥体细胞数目 ~以 ƒ∏µ¤2u负载及荧光分光光
度计检测海马突触体内游离 ≤¤un浓度 ∀结果 }与正常组比较 o模型组小鼠体重增长缓慢k Π s1stl o水平活动得分
和垂直活动得分显著减少k Π s1stl o糖水消耗量明显降低k Π s1stl ~海马 ≤„v区锥体细胞数量明显减少k Π
s1stl ~海马突触体内游离 ≤¤un浓度明显升高k Π s1stl ~苏郁胶囊高剂量组于第 tw out天时小鼠体重增长数明显高
于模型组k Π s1sxl ~苏郁胶囊高剂量能增加抑郁小鼠的水平活动得分k Π s1sxl ~苏郁胶囊高 !中剂量组能增加抑
郁小鼠的垂直活动得分k Π s1st oΠ s1sxl ~苏郁胶囊高 !中 !低剂量能明显增加抑郁小鼠的糖水消耗量k Π s1st o
Π s1sx oΠ s1sxl ~苏郁胶囊高 !中 !低剂量组能明显增加海马 ≤„v 区锥体细胞数量 k Π  s1st oΠ  s1sx oΠ 
s1sxl ~苏郁胶囊高 !中 !低剂量组能明显降低抑郁小鼠海马突触体内游离 ≤¤un浓度k Π s1st oΠ s1st oΠ s1sxl ∀
结论 }苏郁胶囊能改善小鼠的抑郁样行为 ~保护抑郁模型小鼠海马神经元损伤 o其可能与苏郁胶囊抑制海马神经细
胞外 ≤¤un内流 o阻止 ≤¤un超载相关 ∀
≈关键词  苏郁胶囊 ~抑郁症 ~行为 ~海马神经元
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltw2tt|u2sw
≈收稿日期  ussx2tt2uw
≈基金项目  浙江省中医药科技计划重点项目kussysstl ~浙
江省教育厅科研项目kussxs{vvl
≈通讯作者  3 黄真 o ר¯ }ksxztl{yytvxzy o∞2°¤¬¯}½«¨ ±yuy ƒ ¼¤2
«²²q¦²° q¦±
苏郁胶囊是根据临床验方研制而成的中药新
药 o由柴胡 !苏梗 !郁金 !石菖蒲等中药组成 o具有舒
肝解郁 !理气宽中 !宁心安神之功效 o主治肝气郁结 !
痰火扰神所致的轻 !中度抑郁症 ∀笔者采用小鼠强
迫游泳试验 !小鼠悬尾试验和利血平拮抗模型对其
抗抑郁作用进行评价 o结果显示其具有抗抑郁样活
性≈t  ∀本研究应用慢性应激结合孤养建立小鼠抑郁
模型 o通过苏郁胶囊对抑郁小鼠行为变化 !海马神经
元损伤及海马突触体内游离 ≤¤u n浓度的影响 o探讨
苏郁胶囊治疗抑郁症的机制 ∀
1 材料
111 药物与试剂 苏郁胶囊k由浙江中医学院中药
新产品制剂研究重点实验室提供 o批号 sxszsv o每 t
ª干粉相当于 tu1z ª生药 o使用时用蒸馏水溶解l ~
钙离子荧光指示剂 ƒ∏µ¤p ur„k²¯ ¦¨∏¯¤µ°µ²¥¨¶公
司l ~• °Œtyws培养液kŠ¬¥¦²公司l ~多聚甲醛 !冰醋
酸等均为市售分析纯商品 ∀
112 动物 昆明种雄性小鼠 o体重 t{ ∗ uu ªo由浙
江中医学院实验动物中心提供 o动物合格证号 ¶¼¬®
k浙lussv2sssv ∀
113 仪器 Šp ut 高速冷冻离心机k湘仪离心机
仪器有限公司l ~荧光分光光度计k日立岛津 • ƒ p
xws型l ∀
2 方法
211 分组及给药 小鼠饲养 t周以适应环境 o然后
采用 ’³¨ ±2ƒ¬¨ §¯法作行为学评分 o选择评分相近的
小鼠 o随机分为 x组 o即正常组 o模型组 o苏郁胶囊
高 !中 !低剂量组k分别相当于原生药为 uu1{ ott1w o
x1z ª#®ªptl ∀除正常组外 o其余各组小鼠均单笼饲
养 ∀于造模同时 o各组 ¬ª给药 o正常组及模型组给
予等量的生理盐水 o每天 t次 o共 ut §∀
212 慢性应激抑郁模型建立 由于机体对同种强
#u|tt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
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度的单一应激原易产生耐受性 o因此本实验运用多
种不可预知的刺激方式以每天 t次的频率交替应激
小鼠 ut §o应激包括 }异物刺激 uw «o禁食 uw «o禁水
uw «o夹尾 |s ¶owx ε 热刺激 v °¬±o悬吊 tx °¬±o昼夜
颠倒 uw «ow ε 冷刺激 x °¬±等 ∀
213 测定小鼠体重及行为变化 分别于造模第 t o
z otw out天测定各组小鼠体重 o计算小鼠的体重变
化 ~第 ut天用 ’³¨ ±2ƒ¬¨ §¯法测定各组小鼠的行为变
化 o实验装置为 ws ¦° ≅ ws ¦° ≅ ws ¦°木箱 o周壁黑
色 o底部等分为 ux方格 o记录 x °¬±内小鼠自发活
动 ∀观察指标为 ≠ 水平活动 }三爪以上跨入邻格的
次数 ∀ 垂直运动 }两前肢离地 t ¦°以上的次数 ∀
214 糖水消耗实验 实验第 uu天 o每只小鼠加 t h
蔗糖溶液 tss °o同时进行禁食 o计算小鼠 uw «饮
用 t h蔗糖溶液量 ∀
215 ‘¬¶¶¯染色 于实验第 uv天 o将小鼠于冰浴上
快速断头取脑 o左脑备用 o右脑于 w h的多聚甲醛液
中固定 w «后脱水封膜切片k片厚 y Λ°l ∀切片按常
规下行入水 o经蒸馏水略漂洗 ∀硫堇染液 o室温 x
°¬±∀以无水乙醇 tss °加冰醋酸 u ∗ v滴作分色
液 o将切片外观上所染附的蓝色除尽 ∀入二氧六环
换洗 u次 o再经二甲苯换洗 u次 o切片透明 o封片 ∀
光镜下kws ≅ tsl观察海马k≤„t o≤„v区l神经元形态
及对海马k≤„t o≤„v 区l锥体细胞进行双盲计数 ∀
计数方法如下 }每张切片取连续 u个视野 o并保证锥
体细胞层的弧度弦置于目镜的直径上 o取两视野的
平均值为该切片锥体细胞数 ow张切片的平均值为
该样本的锥体细胞数 ∀
216 海马突触体内游离 ≤¤u n浓度测定 突触体的
制备参考文献≈u  ∀取备用左脑 o分离海马 o将海马
置于匀浆器中称重 o按 tΒts加入 w ε s1vu °²¯#pt
的等渗蔗糖液 w ε 下匀浆 o离心kt xss µ#°¬±pt ots
°¬±l o取去核上清液 ∀上清液离心k| xssµ#°¬±pt ous
°¬±l o得到 °u组分 ∀将 °u组分用 s1vu °²¯ #pt的
蔗糖液kt ª#°ptl缓慢悬浮起来 o悬浮液按 wΒtx铺
在 s1{ °²¯#pt蔗糖液面上 ∀离心k| xss µ#°¬±pt ovs
°¬±l o收集 s1{ °²¯#pt蔗糖相组分 o并用 v倍体积
的 w ε 的 ‘¤n介质稀释 o离心ktz sss µ# °¬±pt ovs
°¬±l o沉淀以 ‘¤n介质清洗并悬浮 ∀突触体悬液 u
°k蛋白 ts ∗ tx °ª#°ptl与 ƒ∏µ¤p ur„ k终浓度 v
Λ°²¯#ptl于 vz ε 下孵育 ws °¬±k同时轻摇l o后加
入 t倍体积 ‘¤n介质终止 ƒ∏µ¤p u负载 ∀离心ktu
sss µ#°¬±pt ots °¬±l o用 u °‘¤n介质ks1t h牛血
清白蛋白l清洗 u次 o沉淀悬浮于 w °的 ‘¤n介质
中 ovz ε 下孵育 x °¬±∀荧光测定后按文献≈u 计算
突触体内游离 ≤¤u n浓度 ∀
217 数据处理 数据均采用 cξ ? σ表示 ∀采用
≥°≥≥ tt1x分析应用软件处理分析数据 o组间样本比
较采用 τ检验 ∀
3 结果
311 对体重变化的影响 结果见表 t ∀与正常组
比较 o模型组小鼠在第 z天体重增加已有降低趋势 o
第 tw out天的体重增加具有显著意义k Π s1stl o说
明慢性应激可使小鼠体重增加明显下降 ∀苏郁胶囊
高剂量组于第 tw out天时小鼠体重增长明显高于模
型组k Π s1sxl o中 !低剂量组小鼠体重增长有增高
的趋势 o但无明显的统计学差异 ∀
表 t 苏郁胶囊对抑郁模型小鼠体重
变化的影响kcξ ? σ, ν € tul
组别
剂量
rª#®ªpt
体重rª
z § tw § ut §
正常 p tt qu ? v qs tx qw ? t qsul t{ qu ? v qvul
模型 p x qy ? s q| z qt ? t qzwl { q| ? v qs wl
苏郁胶囊 uu q{ y qu ? u qz | qx ? t qvtl tu q{ ? u qxtl
tt qw x qz ? t qy { qz ? t qz tu qt ? u qx
x qz x q{ ? t qu { qv ? t qw ts q| ? u qu
注 }与模型组比较tl Π  s qsx oul Π  s qst ~与正常组比较
vl Π s qsx owl Π s qstk表 u ∗ w同l
312 对行为变化的影响 结果见表 u o模型组小鼠
的水平活动得分和垂直活动得分均较正常组显著减
少k Π s1stl o糖水消耗量较正常组明显降低k Π
s1stl ~与模型组比较 o苏郁胶囊高剂量组能增加抑
郁小鼠的水平活动得分k Π s1sxl ~苏郁胶囊高 !中
剂量组能增加抑郁小鼠的垂直活动得分k Π s1st o
Π s1sxl ~苏郁胶囊高 !中剂量及低剂量组能明显
增加抑郁小鼠的糖水消耗量k Π  s1st oΠ  s1sx o
Π s1sxl o并呈现一定的量效关系 ∀
313 对海马 ≤„t o≤„v区神经元形态及锥体细胞数
目的影响 结果见表 v ∀光镜下可见各组大鼠海马
≤„t区的锥体细胞排列均整齐 !密集 o每个高倍视野
下的锥体细胞数比较 o差异无显著性 o提示慢性应激
对海马 ≤„t区神经元无明显损伤作用 ~正常组小鼠
海马 ≤„v区锥体细胞同样排列较整齐 !密集 o胞浆
中尼氏质清晰可见 o而模型组小鼠海马 ≤„v区锥体
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表 u 苏郁胶囊对抑郁小鼠行为变化的影响kcξ ? σ, ν € tul
组别
剂量
rª#®ªpt
水平运动
r分
垂直运动
r分
糖水消耗量
r°
正常 p y| q| ? t| qxul uy q{ ? x q{ul u{ qx ? z quul
模型 p t{ qz ? ts q{wl tu qx n v qxwl tv qw ? x qzwl
苏郁胶囊 uu q{ vz qv ? tv qvul tz qt ? w qwtl ut qx ? u qzul
tt qw uy qu ? x q| tx q{ ? v qutl t| qu ? u qxtl
x qz ut qs ? x qw tw q| ? v q{ t{ qx ? t qz tl
细胞排列稀疏 o细胞间隙增大 o许多细胞胞浆中尼氏
质减少或消失 ∀与模型组相比 o苏郁胶囊给药组海
马 ≤„v区尼氏体增多 o神经元层次增加 o排列清晰 o
固缩和空泡化的核减少 o细胞脱落少见 ∀每个高倍
视野下海马 ≤„v区锥体细胞数量比较 o模型组明显
少于正常组 o差异有显著性k Π s1stl ~服用苏郁胶
囊后 o可剂量依赖性的增加抑郁模型小鼠海马 ≤„v
区锥体细胞数量 o差异有显著性k Π  s1st oΠ 
s1sx oΠ s1sxl o并呈现一定的量效关系 ∀
表 v 苏郁胶囊对抑郁小鼠海马 ≤„t o≤„v区锥体细胞
数目的影响kcξ ? σ, ν € tul
组别 剂量rª#®ªp t ≤„tr个 ≤„vr个
正常 p {u q{ ? x qx v| qw ? x q|ul
模型 p {t qs ? z qt vs qx ? x qvwl
苏郁胶囊 uu q{ {v qx ? x qy v{ qx ? x quul
tt qw {t q{ ? y qx vy q{ ? w qxtl
x qz {t qt ? y qy vy qt ? w qvtl
314 对海马突触体内游离 ≤¤u n浓度的影响 结果
见表 w ∀与正常组比较 o模型组小鼠海马突触体内
游离 ≤¤u n浓度明显升高k Π s1stl ~与模型组比较 o
苏郁胶囊高 !中 !低剂量组能明显降低抑郁小鼠海马
突触体内游离 ≤¤u n浓度k Π  s1st oΠ  s1st oΠ 
s1sxl o并呈现一定的量效关系 ∀
表 w 苏郁胶囊对抑郁小鼠海马突触体内游离 ≤¤un浓度
的影响kcξ ? σ, ν € tul
组别 剂量rª#®ªpt ≤¤u n r±°²¯#pt
正常 p tww qy ? vs qtul
模型 p u|t q| ? t{ qxwl
苏郁胶囊 uu q{ usx qw ? v| qwul
tt qw ut| qw ? xx qyul
x qz uwv qs ? w{ qstl
4 讨论
海马锥体细胞 ‘¬¶¶¯体的主要成分为核糖核酸
和蛋白质 o当神经元受到损害 o可导致神经元内的尼
氏体减少或消失≈t  o因此笔者以此作为神经元损伤
的一个指标 ∀本试验研究结果显示 }慢性应激抑郁
模型小鼠海马 ≤„v区锥体细胞数较正常组明显减
少k Π s1stl o而海马 ≤„t区变化不明显 o说明海马
≤„v区为慢性应激敏感区 o这也与 ≥·¨¬± …¨ «µ¨±¶
等≈v2x 报道的慢性应激可造成海马 ≤„v区神经元丢
失结果相一致 ∀苏郁胶囊高 !中 !低剂量组能明显增
加海马 ≤„v 区 ‘¬¶¶¯ 体k Π  s1st oΠ  s1sx oΠ 
s1sxl o提示苏郁胶囊对抑郁模型小鼠海马神经元有
保护作用 ∀
海马神经元损伤与 ≤¤u n超载相关 ∀长期慢性
应激可引起神经细胞外兴奋性氨基酸k如谷氨酸l堆
积 o谷氨酸与 Ν2甲基 !∆2天门冬氨酸受体k‘⁄„• l
结合增加 o受体被持续激活 o≤¤un大量内流 o≤¤un升
高达一定阈值后便可激活各种降解酶如磷脂酶 ≤ !
核酸内切酶等 o这些被激活的降解酶就能破坏神经
元脂质膜 !细胞骨架蛋白 !核酸等致神经元溃变坏
死≈y  ∀本研究结果亦证明抑郁症模型小鼠海马突触
体内游离 ≤¤u n浓度明显升高k Π s1stl o苏郁胶囊
治疗组可明显降低海马突触体内游离 ≤¤u n浓度 o与
模型组比较 o有统计学意义 o并呈现一定的量效关
系 ∀这可能是苏郁胶囊保护抑郁模型小鼠神经元损
伤的机制之一 ∀
抑郁症属中医/郁证0范畴 ∀其病理机制为情志
不舒 o肝气郁结渐致五脏不和引起 o因此中医临床多
从肝论治 ∀苏郁胶囊中柴胡具有和表解里 !疏肝升
阳之功效 o对肝气郁结 !气机不畅引起的胸胁胀满 !
抑郁寡欢等有治疗作用 ~苏梗 !郁金理气宽中 o行气
止痛 ~石菖蒲开窍豁痰 o化湿和胃 o诸药合用共奏疏
肝解郁 !理气宽中 !宁心安神之功 ∀从本实验可以得
出 }苏郁胶囊能改善小鼠的抑郁样行为 ~保护抑郁模
型小鼠海马神经损伤 o其可能与苏郁胶囊抑制海马
神经细胞外 ≤¤u n内流 o阻止 ≤¤u n超载相关 ∀
≈参考文献 
≈t  钟晓明 o毛庆秋 o黄 真 o等 1 苏郁胶囊对小鼠抑郁症模型的
影响 1 中国新药杂志 oussy otxktxl }tuwu1
≈u  沈玲红 o王彬尧 o王长谦 o等 q丹参注射液及其活性成分丹参
素 !原儿茶醛对人红细胞胞浆 ≤¤u n浓度影响的实验研究 q中国
中药杂志 oussw ou|ktsl }|{w q
≈v  ≥·¨¬± …¨ «µ¨±¶o≥¤³²¯¶®¼ •  q≥·µ¨¶¶ ¬¨¤¦¨¥¤·¨¶±¨ ∏µ²± ²¯¶¶¤±§¦¼2
·²¶®¨ ¯¨·¤¯ ³¤·«²¯²ª¼ ¬± ·«¨ «¬³³²¦¤°³∏¶q ‘¨∏µ²¶¦¬¨±¦¨ o t||w o tw
k|l }xvzv q
≈w  王雪琦 o王勇姿 o何 成 o等 q睫状神经营养因子对抑郁大鼠
行为和海马神经元损伤的影响 q中华精神科杂志 oussv ovy
ktl }wt q
≈x  张艳美 o杨 权 o许崇涛 o等 q慢性应激对大鼠海马锥体细胞
形态结构的效应 q生物化学与生物物理进展 oussu ou|kxl }
#w|tt#
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≈y  ∂¬µª¬± ≤ ∞o ‹¤ × ° o °¤¦®¤± ⁄ • q Š¯ ∏¦²¦²µ·¬¦²¬§¶¬±«¬¥¬·ª¯∏¦²¶¨
·µ¤±¶³²µ·¤±§ª¯∏·¤°¤·¨ ∏³·¤®¨ ¬± «¬³³²¦¤°³¤¯ ¤¶·µ²¦¼·¨¶}¬°³¯¬¦¤·¬²±¶
©²µª¯∏¦²¦²µ·¬¦²¬§±¨ ∏µ²·²¬¬¦¬·¼1 ‘¨∏µ¦«¨ ° ot||t oxzkwl }twuu q
Εφφεχτ οφ Συψυ χαπσυλε ον βεηαϖιορ ανδ ινϕυρψ οφ ηιπποχαµ παλ
νευρονσιν δεπρεσσιον µ οδελ µιχε
‹’‘Š ÷¬¤²2°¬±ªt o  „’ ±¬±ª2 ¬´∏t o ‹˜„‘Š «¨ ±t o • ∞Œ¬¤2³¬±ªu oŒ„‘Š  2¨«∏¤t
(t1 ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχψ, Ζηεϕιανγ Χολλεγε οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Ηανγζηου vtssxv , Χηινα ;
u1 Ζηεϕιανγ Ηοσπιταλ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχαλ, Ηανγζηου vtsss| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·²©≥∏¼∏¦¤³¶∏¯¨²± ¥¨ «¤√¬²µo¬±­∏µ¼ ²©«¬³³²¦¤°³¤¯ ±¨ ∏µ²±¶¤±§≤¤un ¬²±¬± «¬³³²¦¤°³¤¯
¶¼±¤³·¬¦¬±·«¨ §¨³µ¨¶¶¬²± °²§¨¯ °¬¦¨ q Μετηοδ : ≥¬¬·¼ °¤¯¨Ž∏±°¬±ª °¬¦¨ º µ¨¨ µ¤±§²°¯ ¼ §¬√¬§¨§¬±·²x ªµ²∏³¶o·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o·«¨ °²§¨¯
ªµ²∏³¤±§·«µ¨¨≥∏¼∏¦¤³¶∏¯¨ªµ²∏³¶k·«¨ §²¶¨¶ º µ¨¨ uu1{ ott1w ox1z ª#®ªp tµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼l q ׫¨ °²§¨¯ º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §¥¼ ¶¨³¤µ¤·¬²± ¤±§
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¦²∏¯§¬±¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¶¦²µ¨¶²©µ¨¤µ¬±ª²¥√¬²∏¶¯¼k Π s1st o Π s1sxl ~≥∏¼∏¦¤³¶∏¯ k¨uu1{ ott1w ox1{ ª#®ªp tl¦²∏¯§¬±¦µ¨¤¶¨ ¶º¨¨·º¤·¨µ
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µ¨ª¬²± ²©«¬³³²¦¤°³∏¶²¥√¬²∏¶¯¼k Π s1st oΠ s1sx oΠ s1sxl ~≥∏¼∏¦¤³¶∏¯ k¨uu1{ ott1w ox1{ ª#®ªp tl§¨¦µ¨¤¶¨§≤¤un ¬²±¬± «¬³³²¦¤°2
³¤¯ ¶¼±¤³·¬¦º¬·«§²¶¨2 ©¨©¨ ¦·µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³k Π s1st oΠ s1st oΠ s1sxl qΧονχλυσιον : ≥∏¼∏¦¤³¶∏¯¨¦¤±¬°³µ²√¨¤¯¯·«¨ ¶¼°³·²°¶²©·«¨ §¨2
³µ¨¶¶¬²± °²§¨¯ °¬¦¨ ¤±§³µ²·¨¦·¬±­∏µ¼ ²©«¬³³²¦¤°³¤¯ ±¨ ∏µ²±¶¬±·«¨ §¨³µ¨¶¶¬²± °²§¨¯ °¬¦¨ q׫¨ ³²¶¶¬¥¯¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¤¦·¬²±¬¶·²µ¨¶·µ¬¦·
≤¤un ¬²± ²√ µ¨©µ¨¬ª«·q
[ Κεψ ωορδσ] ≥∏¼∏¦¤³¶∏¯¨~¤±·¬§¨³µ¨¶¶¤±·~¥¨«¤√¬²µ~«¬³³²¦¤°³¤¯ ±¨ ∏µ²±¶
≈责任编辑 古云侠 
5中国中药杂志6近况简介
5中国中药杂志6为中国自然科学核心期刊 o中国中文核心期刊 o中国科技核心期刊 ~为/中国科学引文数
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kŒ°„l !5分析文摘6k„„l等收录 ∀
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