全 文 ：ｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ），ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ），ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ（ＸＯＤ），ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＧＳＨ
Ｐｘ），ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ），ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ＮＯＳ）ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｗａｓｃｏｌｅｃｔｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ
（ＲＯＳ）ｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ（ＥＳＲ）．Ｒｅｓｕｌｔ：ＷａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣ．ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｒＣＭＥＣｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ，ｒｅｄｕｃｅｄＬＤＨ，
ＭＤＡａｎｄＸＯＤｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄＳＯＤ，ＧＳＨＰｘａｎｄＮＯＳａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｈｉｌｅｉｎｔｈｅｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎＲＯＳｓｉｇｎａｌｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＷａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣ．ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓｈａｓａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｒｅｌｉｋｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｏｆｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓ，ｅｎ
ｈａｎｃｉｎｇｉｔｓｃｌｅａｒａｎｃｅ，ｅｎｈａｎｃｉｎｇｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ；ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ；ｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００８０５１５
［基金项目］ 浙江省中医药项目（２００６Ｃ０８５，２００７ＣＡ０５９）
［通讯作者］ 许东航，Ｔｅｌ：（０５７１）８７７８３８９１，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｄｏｎｇ
ｈａｎｇ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
鸦胆子油乳对人肺癌 Ａ５４９细胞血管内皮
生长因子表达的影响
徐 翔，许东航，江 波，吕庆华
（浙江大学 医学院 附属第二医院 药剂科，浙江 杭州 ３１０００９）
［摘要］ 目的：研究鸦胆子油乳对人肺癌 Ａ５４９细胞血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，
ＶＥＧＦ）表达的影响。方法：以健康人外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ，ＰＭＮ）为正常对照，
分别用不同剂量的鸦胆子油乳（０５，１２５，２５，５ｇ·Ｌ－１）与人肺癌Ａ５４９细胞共育４８ｈ，采用定量ｓａｎｄｗｉｃｈ酶免疫
技术和ＲＴＰＣＲ法分别测定ＰＭＮ细胞和Ａ５４９细胞培养上清液ＶＥＧＦ分泌和细胞内 ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达，未加药
组采用等量ＲＰＭＩ１６４０培养液。结果：Ａ５４９细胞上清液 ＶＥＧＦ分泌量较外周血单个核细胞显著上升（１２０７３ｖｓ
２１２１，Ｐ＜００５），２５ｇ·Ｌ－１鸦胆子油乳作用４８ｈ能使 Ａ５４９细胞 ＶＥＧＦ分泌显著减少（２０３０ｖｓ１２０７３，Ｐ＜
００５）。Ａ５４９细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达较骨髓单个核细胞也显著上升（０９５７３ｖｓ０４６４９，Ｐ＜００５），鸦胆子油乳
（０５，１２５，２５ｇ·Ｌ－１）作用４８ｈ对 Ａ５４９细胞 ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达无显著影响，５ｇ·Ｌ－１鸦胆子油乳可显著降低
Ａ５４９细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达（０４６８２ｖｓ０９５７３，Ｐ＜００５）。结论：鸦胆子油乳能降低Ａ５４９细胞ＶＥＧＦ的分泌和
表达，该作用可能是其抗肿瘤的作用机制之一。
［关键词］ 血管内皮生长因子；Ａ５４９细胞；鸦胆子油乳
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２１２５１７０４
鸦胆子为苦木科植物 Ｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａ（Ｌ．）
Ｍｅｒ．的成熟果实，鸦胆子油乳以鸦胆子石油醚提取
物为原料，以精制大豆磷脂为乳化剂制成的水包油
乳剂，临床上用于治疗肺癌、肺癌脑转移、消化道恶
性肿瘤、膀胱癌、前列腺癌等［１］。临床研究证明鸦
胆子油乳联合化疗药品能显著提高癌症患者的治愈
率，减少毒副作用，促进和恢复肌体免疫力，疗效确
切。近年来有关鸦胆子油乳抗肿瘤机制有较深入研
究，包括对多药耐药性逆转作用［２］、对胃癌增殖作
用机制研究［３］、抑制膀胱癌作用机制研究［４］等。认
为鸦胆子油乳对胃癌多药耐药有一定的逆转作用，
可以抑制一些细胞株的增殖，有抑制消化道癌细胞
的生长和ＤＮＡ合成等作用。然而，目前鸦胆子油乳
对肿瘤血管新生的影响国内外均未见报道。
本研究以小细胞肺癌 Ａ５４９细胞株为研究对
象，考察鸦胆子油乳对小细胞肺癌 Ａ５４９细胞血管
内皮生长因子分泌和表达的影响。
１ 材料
１．１ 药物
鸦胆子油乳（浙江三九邦而康药业有限公司提
供，每支１０ｍＬ，含鸦胆子油１ｇ），４℃冰箱保存，使
用时用双蒸水或生理盐水稀释。
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１．２ 试剂
新生牛血清（杭州四季青公司）；ＲＰＭＩ１６４０，二
甲基亚砜，胰蛋白酶（Ｓｉｇｍａ公司）；Ｔｒｉｚｏｌ总 ＲＮＡ提
取液（ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司）；耐热 ＴａｑＤＮＡ聚合酶（Ｐｒｏ
ｍｅｇａ公司）；ｄＮＴＰｓ混合物（上海生工生物工程有限
公司）；血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）检测试剂盒和抗
人ＶＥＧＦ中和抗体（美国 Ｒ＆Ｄ公司）；ＰＣＲ引物
（ＶＥＧＦ和βａｃｔｉｎ二对引物参照文献［５］，委托上海
生工生物工程有限公司合成）；小细胞肺癌细胞株
Ａ５４９（上海细胞生物研究所）。
１．３ 仪器
细胞培养箱（美国 Ｆｏｒｍａ公司）；倒置显微镜、
普通光学显微镜（日本 ＯＬＹＭＰＵＳ公司）；ＹＪ－
８７５ＳＡ型超净工作台（吴江净化设备总厂）；３Ｋ１８Ｃ
台式高速冰冻离心机（Ｓｉｇｍａ公司）；ＰＴＣ－２００ＤＮＡ
ＥｎｇｉｎｅＰＣＲ扩增仪（美国 ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈ公司）；Ｇｅｎｅ
ＱｕａｎｔＰｒｏＲＮＡ／ＤＮＡＣａｌｃｕｌａｔｏｒ８０－２１０９－９８型核
酸定量仪（英国 Ａｍｅｒｓｈａｍ ＰｈａｒｍａｒｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ公
司）；酶标仪（ＢＩＯＲＡＤ公司）。
２ 方法
２．１ 细胞培养
小细胞肺癌 Ａ５４９细胞株培养于含 １００ｍＬ·
Ｌ－１特级胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，加入１×
１０５Ｕ·Ｌ－１青霉素，１００ｍｇ·Ｌ－１链霉素，置于孵箱，
在３７℃，５０ｍＬ·Ｌ－１ＣＯ２饱和湿度的条件下培养，
实验时取对数生长期细胞。正常组采用健康人外周
血Ｆｉｃｏｌ分离液分离的单个核细胞。
２．２ 细胞培养上清液收集
调整获得的细胞悬液密度为１×１０６个／ｍＬ，接
种于２５ｍＬ细胞培养瓶中，培养体系为５ｍＬ（培养
液为１０％胎牛血清的 ＲＰＭＩ１６４０液），置 ３７℃，
１００％饱和湿度，５％ＣＯ２孵箱中，与终浓度为２５ｇ
·Ｌ－１的鸦胆子油乳作用４８ｈ后取样品（未加药组
和正常组采用等量 ＲＰＭＩ１６４０培养液）。离心收集
培养上清液，分管后置 －８０℃冻存备用（各时点收
集上清液时），细胞锥虫蓝拒染率＜８０％弃之。
２．３ 上清液ＶＥＧＦ测定
采用定量ｓａｎｄｗｉｃｈ酶免疫技术（ＥＬＩＳＡ法），按
试剂盒说明书操作步骤进行。取出 －８０℃冻存备
用细胞培养上清液，室温溶解。采用抗 ＶＥＧＦ单克
隆抗体预包被微量反应板（９６孔），加入分析稀释剂
ＲＤ１Ｗ１００μＬ，再加已稀释的不同浓度对照品或样
本２００μＬ到相应孔中，室温孵育２ｈ。弃上清，每孔
加入４００μＬ工作缓冲液洗涤，反复洗涤３次，然后
将微量反应板倒置于干净的滤纸上，吸干。每孔加
辣根过氧化物酶标记的 ＶＥＧＦ多克隆抗体２００μＬ，
室温孵育２ｈ。每孔加入２００μＬ底物溶液，避光，室
温孵育２０ｍｉｎ。每孔加入５０μＬ中止反应液后，在
酶标仪４５０，５７０ｎｍ波长处测吸光度（Ａ）。
取复孔Ａ平均值，对照品和样本的Ａ减去零孔的
Ａ，以对照品浓度的对数值为横坐标及其Ａ的对数值
为纵坐标（两者之间线性关系良好，均ｒ＞０９９８），建
立直线回归方程，将样本Ａ的对数值代入方程中求出
其浓度的对数值，反对数后即为其浓度值。
２．４ ＲＴＰＣＲ法检测Ａ５４９细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达
２．４．１ 细胞收集 调整获得的细胞悬液密度为
１×１０６个／ｍＬ，接种于细胞培养瓶中。分别加入鸦
胆子油乳（０５，１２５，２５，５ｇ·Ｌ－１），共育４８ｈ后，
经Ｔｒｉｚｏｌ处理，－８０℃冻存。未加药组和正常组采
用等量ＲＰＭＩ１６４０培养液。
２．４．２ 细胞总 ｍＲＮＡ提取 按试剂盒说明书操作
步骤进行。取－８０℃冻存细胞，室温融化后，５ｍｉｎ
后加入氯仿，剧烈震荡，置室温 ５ｍｉｎ，４℃离心
（１２０００×ｇ，１５ｍｉｎ）；取上层水相于另一新的无
ＲＮＡ酶Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，加等体积（约０５ｍＬ）的异
丙醇混匀，室温放置１０ｍｉｎ后，４℃离心（１２０００×
ｇ，１０ｍｉｎ），弃上清液；沉淀物用０１％ＤＥＰＣ处理的
水配置的７５％乙醇溶液洗涤２次；空气干燥后重溶
于适量经 ０１％ＤＥＰＣ处理的去离子水中。所得
ＲＮＡ用紫外分光光度仪测定浓度和纯度，Ａ２６０／Ａ２８０
均大于１７；经１％甲醛变性胶电泳，在紫外灯下观
察出现清晰集中的２８Ｓ，１８Ｓ两条带，且２８Ｓ／２８Ｓ约
为２∶１，证实ＲＮＡ制品完整，未被降解。
２．４．３ 逆转录反应 总反应体系４０μＬ中，含总
ｍＲＮＡ６μｇ，１０ｐｍｏｌ六聚体随机引物２μＬ，１０ｍｍｏｌ
·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ２μＬ，以０１％ＤＥＰＣ处理的水补足至
２４５μＬ，于 ６５℃ ５ｍｉｎ后，再置冰上；加 ５×ＲＴ
ｂｕｆｅｒ８μＬ，０１ｍｏｌ·Ｌ－１ＤＴＴ４μＬ，ＲＮＡ酶抑制剂
（４０Ｕ·μＬ－１）１μＬ，２５℃ １０ｍｉｎ后，再置冰上；加
逆转录酶ＭＭＬＶ（２００Ｕ·μＬ－１）１５μＬ，３７℃反应
５０ｍｉｎ；然后７０℃１５ｍｉｎ终止反应。－２０℃保存。
２．４．４ ＰＣＲ反应 设计两对引物（由上海生工生
物工程有限公司合成），ＶＥＧＦ：上游 ５′ＴＣＧＧＧＣ
ＣＴＣＣＧＡＡＡＣＣＡＴＧＡ３′，下游 ５′ＣＣＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡ
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ＴＣＴＧＧＴＴＣ３′，基因片断长度为：５１６ｂｐ，６４８ｂｐ，７２０
ｂｐ，７７１ ｂｐ。 βａｃｔｉｎ：上 游 ５′ＣＧＣＴＧＣＧＣＴＧ
ＧＴＣＧＴＣＧＡＣＡ３′，下 游 ５′ＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴＣ
ＣＧＣＴ３′，基因片断长度为６１９ｂｐ。
体系中含 １０ｐｍｏｌ·Ｌ－１上游及下游引物各 １
μＬ，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ２μＬ，１０×ＰＣＲｂｕｆｅｒ２５
μＬ，２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＭｇＣｌ２２μＬ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶（５Ｕ
·μＬ－１）０２５μＬ，逆转录反应产物２μＬ，加 ＤＨ２Ｏ
至总体积２５μＬ。ＰＣＲ循环：９４℃预变性４ｍｉｎ后，
以９４℃变性６０ｓ，６０℃退火６０ｓ，７２℃延伸９０ｓ为
１个循环，βａｃｔｉｎ反应２５个循环，ＶＥＧＦ反应３５个
循环，最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。反应产物４℃保存。
每次扩增时均做空白阴性及阳性对照。
２．５ 扩增产物分析
扩增产物在１５％琼脂凝胶电泳（电压为５Ｖ·
ｃｍ－１，电泳约３０ｍｉｎ）后，取出凝胶在紫外线灯箱中
观察，Ｋｏｄａｋ凝胶成像分析软件进行分析，读取阳性
条带的吸光度值。以βａｃｔｉｎ作为内参照，基因表达
强度按Ａ／βａｃｔｉｎ的比值计算。
２．６ 鸦胆子油对健康人外周血单个核细胞的影响
取正常人外周血单个核细胞，调整细胞密度至
１×１０６个／ｍＬ，分别加入鸦胆子油乳０５，１２５，２５，
５ｇ·Ｌ－１共育４８ｈ，对照组加入等量 ＲＰＭＩ１６４０培
养液。结果发现，鸦胆子油乳０２５～０５ｇ·Ｌ－１作
用４８ｈ，细胞台盼蓝染色拒染率＞８０％。
２．７ 统计学方法
实验数据以 珋ｘ±ｓ表示，各组数据之间的比较采
用ＳＰＳＳ１３０分析软件，两两比较采用 ＭＷ检验，
以Ｐ＜００５为有显著性差异。
３ 结果
３．１ 对Ａ５４９细胞上清ＶＥＧＦ水平的影响
与正常对照（健康人外周血单个核细胞）相比，
小细胞肺癌Ａ５４９细胞分泌的 ＶＥＧＦ远高于正常外
周血单个核细胞（Ｐ＜００５）。２５ｇ·Ｌ－１鸦胆子油
乳作用 ４８ｈ能使 Ａ５４９细胞分泌 ＶＥＧＦ显著减少
（Ｐ＜００５），且其 ＶＥＧＦ分泌水平与健康人外周单
个核细胞相近，无显著性差异（表１）。
表１ Ａ５４９细胞株经２５ｇ·Ｌ－１鸦胆子油乳
作用４８ｈ后ＶＥＧＦ水平变化 μｇ·Ｌ－１
组别 中位数 珋ｘ±ｓ 范围
正常 ２１２１ ２８６２±２８０９ ０～９４１８
模型 １２０７３ １５４７２±１４９１９１） ０～６３２６２
鸭胆子油乳 ２０３０ ３０１３２±２６２２２） ５６０～９２８７
注：与正常组比较１）Ｐ＜００５；与模型组比较２）Ｐ＜００１
３．２ 对Ａ５４９细胞株ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达水平的影响
不同浓度鸦胆子油乳与 Ａ５４９细胞作用 ４８ｈ
后，Ａ５４９细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达随着鸦胆子油乳剂
量的增加，ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达持续减少（图１）。
Ｍｍａｒｋ；１～３鸭胆子油乳０．５，１．２５，２．５ｇ·Ｌ－１组；
４Ａ５４９细胞模型；５鸭胆子油乳５．００ｇ·Ｌ－１；
６ＰＭＮ；７空白组
图１ 小细胞肺癌细胞株Ａ５４９在不同浓度
鸦胆子油乳作用４８ｈＶＥＧＦｍＲＮＡ表达电泳图
３．３ 对Ａ５４９细胞株ＶＥＧＦｍＲＮＡ相对表达量的影响
用ＶＥＧＦｍＲＮＡ相对表达量进一步分析发现，
未加药小细胞肺癌细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ相对表达量显
著地高于正常组（ＰＬ）。低、中剂量鸦胆子油乳组
（０５，１２５，２５ｇ·Ｌ－１）ＶＥＧＦｍＲＮＡ的相对表达
量与未加药小细胞肺癌细胞组相近，而高剂量组鸦
胆子油乳（５ｇ·Ｌ－１）使 Ａ５４９细胞株 ＶＥＧＦｍＲＮＡ
的相对表达量显著降低，高剂量组和正常组之间的
差异无统计学意义（表２）。
表２ 鸦胆子油乳对Ａ５４９细胞株作用４８ｈＶＥＧＦｍＲＮＡ相对表达量变化
组别
剂量
／ｇ·Ｌ－１
ＶＥＧＦｍＲＮＡ
中位数 珋ｘ±ｓ 范围
正常 － ０４６４９ ０３７７１±０２５０２ ０００００～０７３６７
模型 － ０９５７３ ０９２２１±０３８２３１） ０００００～１６６６１
鸦胆子油乳 ０５～２５ １０２３０ １１３４５±０３７９７ ０８２３０～１５５７５
５ ０４６８２ ０４４４６±０２１４６２） ０００００～０７９０７
注：与正常组比１）Ｐ＜００１；与模型组相比２）Ｐ＜００１
４ 讨论 目前认为，肿瘤内部新生血管的形成是肿瘤生
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长，同时也是使肿瘤细胞播散和发生远处器官转移
的一个重要因素。新生血管把肿瘤细胞和循环系统
连接起来，维持肿瘤细胞的代谢和生长。血管内皮
生长因子（ＶＥＧＦ）主要是由肿瘤细胞分泌入体液的
促血管形成的重要细胞因子，对血管内皮细胞的增
殖、基膜降解、内皮细胞迁移和血管构建的调控作用
较强，且特异性高［６］。研究证明，ＶＥＧＦ是肿瘤血管
形成的关键性介质［７］。无论是 ｍＲＮＡ水平还是蛋
白水平，在许多动物和人的恶性肿瘤中都有 ＶＥＧＦ
的高表达；抑制 ＶＥＧＦ可以抑制肿瘤的生长［８］。因
此考察鸦胆子油乳对肿瘤细胞ＶＥＧＦ表达的影响对
鸦胆子油乳治疗肿瘤的机制有重要意义。
本实验结果表明，小细胞肺癌 Ａ５４９细胞分泌
ＶＥＧＦ显著高于外周血单个核细胞，该结果表明
ＶＥＧＦ升高是肿瘤细胞的特征性表现，与目前的文
献报道相一致［７］。因此，降低ＶＥＧＦ水平，有可能对
肿瘤具有一定的治疗作用。鸦胆子油乳（２５ｇ·
Ｌ－１）作用４８ｈ使Ａ５４９细胞分泌ＶＥＧＦ显著减少至
接近外周血单个核细胞水平。然而，相同剂量的鸦
胆子油乳作用相同时间却未能改变 Ａ５４９细胞
ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达，高剂量（５ｇ·Ｌ－１）鸦胆子油
乳使Ａ５４９细胞株 ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达显著减少。上
述现象提示不同剂量的鸦胆子油乳可能作用于
ＶＥＧＦ合成和分泌的不同环节，其机制值得进一步
探讨。
本研究结果表明，鸦胆子油乳能抑制小细胞肺
癌Ａ５４９细胞株的ＶＥＧＦｍＲＮＡ合成和分泌，该作用
可能是其治疗肺癌的作用机制之一。
［参考文献］
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ｔｏｒｓｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｓｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．ＩｎｖｅｓｔＮｅｗＤｒｕｇｓ，
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［８］ ＭｅｌｎｙｋＯ，ＳｈｕｍａｎＭＡ，ＫｉｍＫＪ．Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ
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ｅｆｅｃｔｏｎｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９６，５６（４）：９２１．
Ｅｆｅｃｔｓｏｆｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒｉｎＡ５４９ｃｅｌｌｉｎｅ
ＸＵＸｉａｎｇ，ＸＵＤｏｎｇｈａｎｇ，ＪＩＡＮＧＢｏ，ＬＶＱｉｎｇｈｕａ
（ＤｉｖｉｓｉｏｎｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙ，２ｎｄＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１０００９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ
（ＶＥＧＦ）ｉｎＡ５４９ｃｅｌｌｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａ５４９ｃｅｌｓｗｅｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌ（０５，１２５，２５，
５ｇ·Ｌ－１）ｆｏｒ４８ｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＶＥＧＦｌｅｖｅｌｉｎｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＶＥＧＦＥＬＩＳＡｋｉｔｓａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦｗａｓ
ｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙＲＴＰＣＲ．ＰＭＮｉｎｈｅａｌｔｈｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｗａｓｔｒｅａｔｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔＶＥＧＦｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｌｅｖａｔｅｄｉｎＡ５４９ｃｅｌｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ（１２０７３ｖｓ２１２１，Ｐ＜００５）．Ｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌ
（２５ｇ·Ｌ－１）ｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅｄｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔＶＥＧＦｐｒｏｔｅｉｎｉｎＡ５４９ｃｅｌｓ（２０３０ｖｓ１２０７３，Ｐ＜００５），ｂｕｔｈａｄｎｏｅｆｅｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦｍＲＮＡ（１０２３０ｖｓ０９５７３）．Ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌ（５ｇ·Ｌ－１）ｓｉｇｎｉｆｉｃｅｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄＶＥＧＦｍＲＮＡｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ（０４６８２ｖｓ０９５７３，Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＢｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌｃａｎｄｅｐｒｅｓｓｔｈｅＶＥＧＦｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎ
Ａ５４９ｃｅｌｓ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｏｎｅｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｉｔｓａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｅｃｔ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；Ａ５４９ｃｅｌｌｉｎｅ；ｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａｏｉｌ ［责任编辑 古云侠］
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第３３卷第２１期
２００８年１１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２１
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００８