全 文 ：乳浆大戟提取物对人肺癌细胞 A549
增殖的影响
杨文杰，向云涛，程建辉，张向红，马繁荣，王爱红
( 延安大学医学院，陕西延安 716000)
摘要:目的 观察乳浆大戟提取物对体外培养的人肺癌细胞 A549 增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法 将 0、
0． 2、0． 4、0． 8 g /L的乳浆大戟提取物作用于体外培养的人肺癌细胞 A549，采用 MTT 法观察乳浆大戟提取物对
A549细胞增殖的影响;PI染色法观察凋亡细胞的形态;流式细胞仪检测 A549 细胞的凋亡率。结果 乳浆大戟提
取物对体外培养的 A549 细胞增殖有抑制作用，并具有浓度依赖关系。0、0． 2、0． 4、0． 8 g /L 乳浆大戟提取物作用
A549 细胞 48 h的凋亡率分别是 5． 33% ± 0． 67%、15． 53% ± 0． 15%、21． 42% ± 1． 01%、46． 57% ± 1． 76%，三者间两
两比较，P均 ＜ 0． 05。结论 乳浆大戟提取物可通过诱导 A549 细胞凋亡而抑制细胞增殖。
关键词:乳浆大戟提取物;肺肿瘤;A549 细胞;细胞凋亡
doi:10． 3969 / j． issn． 1002-266X． 2014． 35． 004
中图分类号:Ｒ734． 2 文献标志码:A 文章编号:1002-266X(2014)35-0013-03
基金项目:陕西省教育厅科学研究项目(12JK0755);延安市科技局项目(2010ks-06) ;国家大学生创新项目(201210719012)。
作者简介:杨文杰(1991-)，女，本科在读。E-mail:aihong-wang@ sohu． com
通信作者:王爱红(1973-)，女，博士，副教授，主要研究方向为营养与肿瘤。E-mail:aihong-wang@ sohu． com
Effect of extracts of Euphorbia esula on proliferation of human lung cancer cells A549
YANG Wen-jie，XIANG Yun-tao，CHENG Jian-hui，ZHANG Xiang-hong，MA Fan-rong，WANG Ai-hong
(Yanan Medical College，Yanan University，Yanan 716000，China)
Abstract:Objective To investigate the inhibit proliferation and induced apotosis effects of extracts of Euphorbia esu-
la in the human lung cancer cell lines A549． Methods The human lung cancer cell lines A549 were treated with different
concentrations(0，0． 2，0． 4，0． 8 g /L)of extracts of Euphorbia esula in vitro，the cell proliferation was analyzed by MTT;
the cell morphological changes were observed using PI dyeing;the cell apoptosis was detected by flow cytometry． Ｒesults
the growth of A549 cells were inhibited by extracts of Euphorbia esula in a dose-dependent manner． A549 cells were
treated with extracts of Euphorbia esula of 0，0． 2，0． 4，0． 8 g /L concentrations for 48 h，the apoptosis rates were 5． 33%
±0． 67%，15． 53% ± 0． 15%，21． 42% ± 1． 01%，46． 57% ± 1． 76%，respectively． Compared with the former，the lat-
ter was higher，all P ＜ 0． 05． Conclusion Extracts of Euphorbia esula can inhibit apoptosis of the A549 cells by inhibition
of cell proliferation．
Key words:extracts of Euphorbia esula;lung tumor;A549 cell;cell apoptosis
乳浆大戟为多年生草本，是国产大戟属植物中
分布最广、变异幅度最大的种之一。乳浆大戟全草
入药，具拔毒止痒、利尿消肿之效，但国内外鲜见乳
浆大戟抗肿瘤的报道。我们用乳浆大戟提取物作用
于体外培养的人肺癌 A549 细胞，观察其抗肿瘤活
性，为进一步开发利用乳浆大戟提供实验依据。
1 材料与方法
1． 1 细胞株和主要试剂 人肺癌细胞 A549 由延
安大学医学实验中心实验室保存。噻唑蓝(MTT)、
碘化丙锭(PI)、二甲基亚砜(DMSO，Sigma-Aldrich
公司，美国);ＲPMI1640 培养基(Invitrogen 公司，美
国)，四季青新生小牛血清(浙江天杭生物科技有限
公司)，胰酶(Gibco BＲL公司，美国)，荧光倒置显微
镜及 CCD 采用 Nikon 显微镜，流式细胞仪 FACS
Calibur(Becton Dickinson 公司，美国)，酶标仪采用
美国 Bio-Ｒad 680 型全自动酶标仪。
1． 2 方法
1． 2． 1 细胞培养 人肺癌细胞 A549 用 ＲPMI1640
培养基培养，常规加入 10%小牛血清，100 U /mL 青
霉素，0． 1 mg /mL链霉素。置于 37 ℃、5%CO2 培养
箱中培养。
1． 2． 2 乳浆大戟提取物制备 乳浆大戟地上全草
31
山东医药 2014 年第 54 卷第 35 期
阴干，用植物捣碎机粉碎，加适量纯水制成混悬液，
粗滤纸过滤收集滤液，低温风干称重，加纯水配制成
100 g /L，0． 22 μm滤器过滤保存于 － 20 ℃备用。
1． 2． 3 乳浆大戟提取物对 A549 细胞增殖的影响
采用 MTT法检测。取对数生长期的 A549 细胞，
以 5 × 104 /mL 密度接种于 96 孔板，每孔 200 μL。
次日细胞贴壁后，更换培养基，对照组未加乳浆大戟
提取物，实验组添加乳浆大戟提取物，其终质量浓度
为 0． 2、0． 4、0． 8 g /L，每个浓度设 6 个复孔，于培养
24、48、72 h加入 MTT 20 μL /孔(5 mg /mL)，继续孵
育 4 h，吸弃培养液，加入 DMSO 150 μL /孔，充分混
匀，在酶标仪 490 nm处测其吸光度(A)值。按照公
式计算细胞增殖抑制率:抑制率 =［1 －(实验组 A
值 /对照组 A值)］× 100%。实验重复 3 次。
1． 2． 4 乳浆大戟提取物对 A549 细胞形态的影响
采用 PI染色法。取对数生长期的 A549 细胞，以
2 × 105 /mL的密度接种于 6 孔板中，每孔 2 mL。次
日细胞贴壁后，更换培养基，对照组未加乳浆大戟提
取物，实验组添加乳浆大戟提取物，其终质量浓度为
0． 2、0． 4、0． 8 g /L，培养 48 h后弃去培养基，2 mL的
PBS液洗 2 次，加入 50 g /L 的 PI 染料，避光染色
30 min，弃上清，在荧光显微镜下观察细胞核的形态
改变。
1． 2． 5 乳浆大戟提取物对 A549 细胞凋亡的影响
采用流式细胞仪检测。流式细胞术样品的准备:①药
物处理细胞(方法同 1． 2． 4)后，收集细胞(1 ～ 5)×
106 /mL，500 ～ 1 000 r /min 离心 5 min，弃去培养液。
②3 mL的 PBS液洗 1 次。③离心去 PBS 液，加入冰
预冷的 70%乙醇固定，4 ℃，1 h。④离心去固定液，
3 mL PBS液重悬 5 min。⑤400目筛网过滤 1 次，500
～1 000 r /min 离心 5 min，弃去 PBS 液。⑥用 1 mL
的 PI染液染色，4 ℃避光 30 min。⑦流式细胞仪检测
细胞凋亡率。
1． 2． 6 统计学方法 采用 SPSS17． 0 统计软件。
计量资料以 珋x ± s表示，组间比较用成单因素方差分
析。P≤0． 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 乳浆大戟提取物对 A549 细胞的增殖抑制率
结果见表 1。
表 1 乳浆大戟提取物对 A549 细胞的增殖抑制率(%，珔x ± s)
乳浆大戟提取物(g /L)
细胞增殖抑制率
24 h 48 h 72 h
0． 2 9． 3 ± 3． 5 37． 8 ± 3． 5 27． 1 ± 6． 5
0． 4 13． 8 ± 8． 3△ 41． 9 ± 2． 6△ 45． 2 ± 1． 6△
0． 8 19． 2 ± 3． 9△# 46． 3 ± 3． 2△# 43． 1 ± 2． 8△#
注:与 0． 2 g /L比较，△P ＜ 0． 05;与 0． 4 g /L比较，#P ＜ 0． 05
2． 2 各组 A549 细胞形态变化 对照组 A549 细胞
饱满呈梭形，胞质丰富，大小均一，单层贴壁生长，细
胞核呈完整椭圆形，细胞数目多，几乎无凋亡细胞。
实验组细胞随浓度增加，细胞数目减少，细胞体积变
小、变圆，细胞核出现固缩，呈致密强荧光。0． 8 g /L
实验组的细胞减少，细胞间隙增大，贴壁状态差，细
胞变圆，细胞膜皱缩，折光性小，细胞脱落明显，见图
1(A为对照组，B为 0． 8 g /L乳浆大戟实验组)。
图 1 乳浆大戟提取物作用 A549 细胞
48 h细胞形态变化(×100)
2． 3 各组 A549 细胞凋亡率比较 对照组细胞凋
亡率为 5． 33% ± 0． 67%，实验组 0． 2、0． 4、0． 8 g /L
乳浆大载提取物作用后细胞凋亡率分别是15． 53%
±0． 15%、21． 42% ± 1． 01%、46． 57% ± 1． 76%，实
验组与对照组比较，P均 ＜ 0． 05。
3 讨论
上世纪五六十年代西方医学化学合成药物达鼎
盛时期，但从七十年代以来，人们发现化学合成药物
具有毒副作用大的缺陷，而天然药物具有毒副作用
小的优点，开发成本低［1 ～ 3］。从天然产物中寻找保
健预防和治疗疾病的有效成分成为国际潮流，天然
药物今后将会逐渐成为医药市场的主流［4 ～ 6］。
肺癌是世界上发病率和病死率最高的恶性肿瘤
之一［7］。化疗是治疗肿瘤的主要手段之一，但化疗
常常带来多系统的不良反应。天然药物具有有效成
分多、结构多样、抗癌谱广、毒副作用小等特点，已成
为开发抗肿瘤药物的新途径。我们课题组采集乳浆
大戟的地上全草，提取水溶性组分，经过滤除菌后，
作用于体外培养的人肺癌细胞 A549，结果显示，乳
浆大戟提取物能抑制 A549 细胞的增殖，最大抑制
率是46． 3%。
近年来，通过中草药诱导细胞凋亡治疗恶性肿
瘤已成为研究的热点之一［8 ～ 11］。药物除通过各自
的靶点直接作用外，也可以通过诱导细胞凋亡杀伤
肿瘤细胞。因此，能否诱导肿瘤细胞凋亡已成为筛
选抗癌药物的标准之一［12］。细胞凋亡是一个复杂
的生理和病理过程，其信号转导途径主要有两条，即
线粒体途径和死亡受体途径。不同的诱因可通过相
同的信号转导途径诱发细胞凋亡，不同的信号转导
41
山东医药 2014 年第 54 卷第 35 期
途径不是孤立发挥作用，而是紧密联系、相互作用，
整个信号转导系统为复杂的网络状调控结构。本实
验结果显示，乳浆大戟提取物处理后的 A549 细胞
出现凋亡细胞的形态特征;流式细胞检测结果显示
乳浆大戟提取物可以诱导 A549 细胞凋亡，但诱导
细胞凋亡的机制需要进一步研究。
参考文献:
［1］Cragg GM，Grothaus PG，Newman DJ． Impact of natural products
on developing new anti-cancer agents［J］． Chem Ｒev，2009，109
(7):3012-3043．
［2］ Fulda S． Modulation of apoptosis by natural products for cancer
therapy［J］． Planta Med，2010，76(11) :1075-1079．
［3］ Banerjee S，Wang Z，Mohammad M，et al． Efficacy of selected
natural products as therapeutic agents against cancer［J］． J Nat
Prod，2008，71(3) :492-496．
［4］Hauser AT，Jung M． Targeting epigenetic mechanisms:potential of
natural products in cancer chemoprevention［J］． Planta Med，
2008，74(13) :1593-1601．
［5］Mehta ＲG，Murillo G，Naithani Ｒ，et al． Cancer chemoprevention
by natural products:how far have we come［J］． Pharm Ｒes，
2010，27(6) :950-961．
［6］严永清．中药现代化研究的思路与方法［M］．北京:化学工业出
版社，2006:1-20，864．
［7］ Jemal A，Siegel Ｒ，Ward E，et al． Cancer statistics，2008［J］．
CA Cancer J Clin，2008，58(2):71-96．
［8］Siu D． Natural products and their role in cancer therapy［J］． Med
Oncol，2011，28(3) :888-900．
［9］王爱红，米志宽，符兆英．抗癌中药诱导胃癌细胞凋亡机制研究
进展［J］．肿瘤预防与治疗，2011，24(2):113-116．
［10］王爱红，陈美霓，符兆英．诱导肿瘤细胞凋亡的天然药物及其作
用机制［J］．中医药学报，2011，39(1):125-128．
［11］高枫，符兆英．天然产物诱导肿瘤细胞凋亡作用机制研究进展
［J］．中华肿瘤防治杂志，2011，18(7):557-560．
［12］王树滨，杨纯正．肿瘤化疗药物诱导细胞凋亡的研究进展［J］．
癌症，2000，19(12):1173-1176．
(收稿日期:2014-04-20)
·作者·编者·读者·
直线相关与回归分析的区别和联系
区别:①资料要求不同: 直线相关分析要求两个变量都是正态分布; 回归分析要求因变量 Y 服从正态分
布，而自变量 X是能精确测量和严格控制的变量。② 统计意义不同: 直线相关分析反映两变量间的伴随关
系，这种关系是相互的、对等的，不一定有因果关系; 回归则分析反映两变量间的依存关系，一般将“因”或较
易测定、变异较小者定为自变量，这种依存关系可能是因果关系或从属关系。③分析目不同: 直线相关分析
的目的是把两变量间直线关系的密切程度及方向用一统计指标表示出来; 回归分析的目的则是把自变量与
应变量间的关系用函数公式定量表达出来，回归分析不仅可以揭示 X 对 Y 的影响大小，还可以由回归方程
进行数量上的预测和控制。④变量的意义不同:在回归分析中，因变量 Y 处在被解释的特殊地位;在直线相
关分析中，X与 Y处于平等的地位。在直线相关分析中，X 与 Y 都是随机变量;在回归分析中，Y 是随机变
量，X可以是随机变量，也可以是非随机的，通常在回归模型中，总是假定 X是非随机的。
联系:①变量间关系的方向一致。②假设检验等价对同一样本。③r 与 b 值可相互换算。④用回归解
释相关系数的平方 r2 称为决定系数，是回归平方和与总的离均差平方和之比，故回归平方和是引入相关变
量后总平方和减少的部分，其大小取决于 r2。回归平方和越接近总平方和，则 r2 越接近 1，说明引入相关的
效果越好，反之，则说明引入相关的效果不好或意义不大。
研究在专业上有一定联系的两个变量之间是否存在直线关系以及如何求得直线回归方程等问题，需进
行直线相关和回归分析。从研究的目的来说，若仅仅为了了解两变量之间呈直线关系的密切程度和方向，宜
选用线性相关分析;若仅仅为了建立由自变量推算因变量的直线回归方程，宜选用直线回归分析。从资料所
具备的条件来说，作相关分析时要求两变量都是随机变量;作回归分析时要求因变量是随机变量，自变量可
以是随机的，也可以是一般变量。当两变量都是随机变量时，常需同时给出相关与回归分析的结果。
51
山东医药 2014 年第 54 卷第 35期