全 文 ：臭椿和鸦胆子抗烟草花叶病毒作用研究
沈建国 o张正坤 o吴祖建 o谢联辉 o林奇英 3
k福建农林大学 植物病毒研究所 生物农药与化学生物学教育部重点实验室 o福建 福州 vxsssul
≈摘要   目的 }研究臭椿和鸦胆子的抗植物病毒作用 ∀方法 }以烟草花叶病毒 k·²¥¤¦¦² °²¶¤¬¦√¬µ∏¶o א ∂ l为
供试病毒 o采用局部枯斑法测定 u种药用植物提取物对 א ∂侵染的抑制作用 ~叶碟法研究 u种药用植物提取物的
抗 א ∂增殖作用 o并通过盆栽试验 o测定 u种药用植物提取物对烟草花叶病的防治作用 ∀结果 }臭椿和鸦胆子提
取物不仅能有效抑制 א ∂ 侵染 o而且对 א ∂ 的增殖也有明显抑制作用 o并对烟草花叶病具有较好的防治效果 ∀
结论 }臭椿和鸦胆子抗烟草花叶病毒作用显著 o在抗植物病毒方面具有进一步研究和开发价值 ∀
≈关键词   臭椿 ~鸦胆子 ~烟草花叶病毒 ~抗病毒
≈中图分类号   ≥ xyz ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlst2ssuz2sv
≈收稿日期   ussy2sv2uu
≈基金项目   福建省教育厅项目 kŽswsvzl~福建省科技厅重点
资助项目 k||22t|vl
≈通讯作者   3 林奇英 oר¯}ksx|tl{vz{|wv|o∞2°¤¬¯} ¬¯± ¬´¼¬±ƒ
tuyq¦²°
臭椿 Αιλαντηυσ αλτισσιµ αk ¬¯¯ql≥º¬±ª¯¨和鸦胆
子 Βρυχεα ϕαϖανιχαkql µ¨µ分别为苦木科臭椿属和
鸦胆子属药用植物 o是我国民间常用中草药 o具有清
热 !解毒 !燥湿 !杀虫等功效 ≈tou  ∀近年来 o臭椿和鸦
胆子的研究主要集中在抗肿瘤方面 ≈uov  o有关 u种
药用植物抗植物病毒作用的研究报道甚少 ∀作者在
对我国 tss多种药用植物提取物抗植物病毒作用系
统筛选中发现 o臭椿和鸦胆子具有较强的抗病毒活
性 ∀为进一步明确 u种药用植物的抗植物病毒作
用 o本试验以烟草花叶病毒 kא ∂ l作为供试病毒 o
对臭椿和鸦胆子提取物的抗病毒作用进行研究 ∀
1 材料与方法
1q1 仪器 !试剂及药材 高速 !超速离心机 k… ¦¨®2
°¤±公司 l~• ∞xu„旋转蒸发仪 k上海亚荣生化仪器
厂 l~酶标仪 k…¬²2µ¤§公司 l~碱性磷酸酶标羊抗兔
ŒªŠk≥¬ª°¤公司 l~א ∂抗血清 k提纯 א ∂免疫家兔
获得 o效价为 tΒts uwsl~|xh乙醇 k分析纯 l~二甲
基亚砜 k分析纯 l∀臭椿 !鸦胆子购自福建省医药公
司 o由福建农林大学生命科学院何可钅曾副教授鉴
定 ∀
1q2 供试毒源和供试寄主 供试毒源 }烟草花叶病毒
kא ∂ l普通株系 o由福建农林大学植物病毒研究所保
存 ∀心叶烟单斑分离后 o繁殖于普通烟 Žvuy上 o经差速
离心 !°∞Š沉淀及 tsh ∗ wsh蔗糖不连续密度梯度离
心后提纯备用 ~供试寄主 }א ∂局部枯斑寄主心叶烟
kΝιχοτιανα γλυτινοσαloא ∂系统侵染寄主普通烟 Žvuy
kΝ1ταβαχυµ ≤∂ q Žvuy lo防虫温室内培育 ∀
1q3 植物提取物的制备 称取臭椿根皮 !鸦胆子种
子粗粉适量 o|xh乙醇回流提取 v次 o合并 v次提取
液 o过滤 o减压浓缩至膏状 o分别得臭椿提取物和鸦
胆子提取物 ow ε 保存 ∀
1q4 抑制侵染作用测定 采用局部枯斑法 ≈w  ∀选
择健康 !生长旺盛的 y ∗ {叶期心叶烟 o左半叶接种
提取物与病毒等体积混和液 k病毒接种终浓度为 ts
Λª# °pt lo右半叶接种蒸馏水 k含少量二甲基亚
砜 l与病毒等体积混和液作对照 o接种后用水冲洗 ∀
每处理接种 w ∗ x个叶片 o重复 v次 ov §后统计枯斑
数目 o计算抑制率 ∀臭椿 !鸦胆子提取物使用前分别
用少量二甲基亚砜溶解后配成一定浓度溶液 ∀
抑制率 kh l € ≈k对照枯斑数 p处理枯斑数 l r对照枯斑
数   ≅ tssh
1q5 抑制增殖作用测定 采用叶碟法 ≈wox  ∀在健
康的普通烟 Žvuy叶片上接种病毒一定时间后 o用打
孔器从叶肉部分 k避开大叶脉 l打取直径为 tu °°
的圆片 o分别以漂浮于供试提取物溶液和蒸馏水
k含少量二甲基亚砜 l中作为处理和阳性对照 o同时
设置以健康叶圆片漂浮于蒸馏水 k含少量二甲基亚
砜 l中作为阴性对照 ∀ w{ «后叶圆片以 tΒus的碳
酸盐缓冲液包被 o间接 ∞Œ≥„法 ≈y 测定 Αwsx值 o计算
抑制率 ∀臭椿 !鸦胆子提取物使用前分别用少量二
#zu#
第 vu卷第 t期
ussz年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼o ussz
甲基亚砜溶解后配成一定浓度溶液 ∀
抑制率 kh l € ≈k阳性对照病毒浓度 p处理病毒浓度 l r
阳性对照病毒浓度   ≅ tssh
不同质量浓度提取物抑制病毒增殖作用测定 }
在普通烟 Žvuy上接种病毒 uw «后 o分别以 to sqxo
squxo sqtuxo sqsyu x °ª# °ptx个质量浓度提取
物处理 o以叶碟法进行生物测定 ∀接种病毒不同时
间后提取物抑制病毒增殖作用测定 }在普通烟 Žvuy
上接种病毒 tuouwovyow{ «后 o分别用 u种提取物
处理 o以叶碟法进行生物测定 ∀臭椿 !鸦胆子提取物
质量浓度设为 sqx °ª# °pt ∀
1q6 盆栽试验 参照姚宇澄等 ≈z 方法测定臭椿 !
鸦胆子提取物对烟草花叶病的防效 o试验在防虫温
室内进行 ∀选取 x ∗ y叶期健康 !生长一致的普通烟
Žvuy o分别于接种前第 y天 !第 t天和接种后第 u天 !
第 y天喷施提取物溶液 o同时以不接种病毒和接种
病毒而只喷清水的烟草作为阴性和阳性对照 o每处
理 x株 o重复 v次 ∀最后一次喷药后 us §取样 o取
样部位为接种叶上第 v叶 ∀臭椿 !鸦胆子提取物质
量浓度设为 sqt °ª# °pt ∀
2 结果与分析
2q1 抑制 א ∂侵染作用 不同质量浓度臭椿 !鸦
胆子提取物对 א ∂侵染心叶烟的抑制作用见表 t∀
由表 t可见 ou种提取物均有很高的抗 א ∂侵染作
用 o在 t °ª# °pt下 o臭椿提取物对 א ∂侵染心叶
烟的抑制率为 |squh o鸦胆子提取物为 |yquh ∀此
外 o从表 t中还可看出 ou种植物提取物对 א ∂ 侵
染心叶烟的抑制效果呈明显的剂量 2效应相关性 o随
着质量浓度降低 ou种植物提取物对 א ∂的抑制率
逐渐降低 ∀当降至 sqsyu x °ª# °pt时 o臭椿 !鸦
胆子提取物对 א ∂侵染心叶烟的抑制率分别仅为
w{qsh ovvquh ∀
表 t u种提取物不同质量浓度对 א ∂侵染的抑制效果
质量浓度
r°ª# °pt
抑制率 rh
臭椿提取物 鸦胆子提取物
t |squ |yqu
sqx {sqz {uqy
squx yzqv zsqz
sqtux xzqt yyqt
sqsyu x w{qs vvqu
2q2 抑制 א ∂增殖作用 以叶碟法测定不同质量浓
度臭椿 !鸦胆子提取物对 א ∂增殖的抑制作用∀结果
表明 k表 ulo臭椿 !鸦胆子提取物对 א ∂在系统侵染寄
主普通烟 Žvuy体内的增殖有很强的抑制活性 o质量浓度
为 t °ª# °pt时 ou种提取物对 א ∂增殖的抑制率分
别为 {|qwh o|sq|h ∀与抑制 א ∂侵染心叶烟一样 ou
种提取物对 א ∂增殖的抑制作用也呈明显的剂量 2效
应相关性 o浓度越低 o抑制活性越弱 ∀
表 u u种提取物不同质量浓度对 א ∂增殖的抑制效果
质量浓度
r°ª# °pt
抑制率 rh
臭椿提取物 鸦胆子提取物
t {|qw |sq|
sqx {tqx {{qy
squx xtqt zyqu
sqtux wxqw xuqy
sqsyu x vvq{ u|qt
在接种病毒 tuouwovyow{ «后的抗病毒作用测
定结果表明 k图 tlou种提取物 ksqx °ª# °pt l在
接种病毒后 tu ∗ vy «以内处理对病毒增殖均有明
显的抑制作用 o抑制率都在 zsh以上 ∀随着提取物
处理与病毒接种之间时间的延长 ou种提取物对病
毒增殖的抑制作用逐渐下降 o在接种 w{ «后处理 o
臭椿 !鸦胆子提取物对病毒增殖的抑制率分别仅为
utqyh ovxqth ∀由此可见 o臭椿 !鸦胆子提取物可
能主要作用于病毒增殖的早期阶段 o对病毒增殖后
期则抑制效果不理想 ∀
图 t 接种病毒不同时间后 u种提取物
抑制病毒增殖的效果
2q3 对烟草花叶病的防治作用 臭椿 !鸦胆子提取
物处理的 Αwsx值均显著低于阳性对照 o表明 u种提
取物对 א ∂引起的烟草花叶病具有较好的防治作
用 o臭椿 !鸦胆子提取物对 א ∂在烟草植株体内的
抑制率分别为 zyq{h oz|quzh k表 vl∀此外 o与阳
性对照相比 o用 u种提取物喷施的烟草发病时间均
推迟 | ∗ ts §o这说明 u种植物提取物能在一定程度
上抑制 א ∂的侵染 o具有延缓症状发生的作用 ∀
3 讨论
本研究以 א ∂为供试病毒 o分别对苦木科药用
植物臭椿和鸦胆子的抗植物病毒作用进行了研究 ∀
结果表明 o臭椿 !鸦胆子不仅对 א ∂侵染心叶烟具
#{u#
第 vu卷第 t期
ussz年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼o ussz
表 v 臭椿 !鸦胆子提取物对烟草花叶病的防治效果
kcξ ? σ, ν € xl
处理 Αwsx 抑制率 rh
臭椿提取物 sqvsu u ? sqstv | zyq{s
鸦胆子提取物 squzs s ? sqstx s z|quz
≤Žk n l tqvsu y ? sqsxz x p
≤Žk p l squvw s ? sqssz t p
有很强的抑制作用 o而且对 א ∂在普通烟 Žvuy离体
叶片内的增殖也有较高的抑制活性 o在接种后 tu ∗ vy
«ou种植物提取物处理对 א ∂在离体叶片内的增殖
均有较强的抑制效果 o但接种 w{ «后用 u种提取物
处理 o则抗 א ∂增殖作用均不明显 ∀这表明 u种提
取物可能主要作用于病毒复制的早期 o通过对病毒早
期复制过程中某一环节的抑制 o从而使病毒粒子无法
正常增殖 ∀此外 o臭椿 !鸦胆子提取物在活体条件下
对 א ∂也具有较好的抑制作用 o喷施 u种植物提取
物对 א ∂引起的烟草花叶病防治效果明显 ∀
从植物中寻找抗植物病毒活性物质 o是开发植
物病毒抑制剂的重要途径之一 ≈{  o近年来已成为人
们研究的热点 ∀寻找植物源抗病毒活性物质的前提
是筛选到抗病毒作用强的植物 o目前已报道的抗病
毒植物大多仅有抑制病毒侵染作用 o具有抑制病毒
增殖作用的较少 ≈{2ts  ∀本研究结果发现 o苦木科药
用植物臭椿和鸦胆子不仅抑制病毒侵染作用显著 o
而且还有较高的抑制病毒增殖作用 o因此 u种药用
植物在植物病毒病防治上具有较好的研究价值和应
用前景 ∀臭椿 !鸦胆子中抗病毒有效成分的提取 !分
离 !鉴定以及作用机制等进一步研究 o可能对抗植物
病毒先导化合物的发现具有重要意义 ∀
≈参考文献  
≈t  吕金顺 o熊 波 o郭 迈 o等 q臭椿中新苦木苦素的结构鉴定
≈ q中山大学学报 oussuowtkvl}vzq
≈u  谢慧媛 o邓胡宁 o黄淑霞 o等 q鸦胆子化学成分研究 ≈ q中药
材 ot||{outk{l}v|{q
≈v  ¬± o ≤²µ§¨ ¯¯ Š „o ‘¬≤ o ·¨¤¯q ±∏¤¶¶¬±²¬§©µ²° Βρυχεα ϕα2
ϖανιχα≈ q °«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼o t||sou|}uzusq
≈w  陈年春 q农药生物测定技术 ≈   q北京 }北京农业大学出版
社 ot||s}t|wq
≈x  ƒµ¨±¦« ≤ o ײº µ¨¶Š ‹ ‘q Œ±«¬¥¬·¬²± ²©¬±©¨¦·¬√¬·¼ ²©³²·¤·² √¬2
µ∏¶÷ ¥¼ ©¯¤√²±²¬§¶≈ q °«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼o t||uovtk|l}vsusq
≈y  谢联辉 o林奇英 q植物病毒学 ≈   qu版 q北京 }中国农业出版
社 oussw}txyq
≈z  姚宇澄 o杨火召 o高 俊 o等 q牛心朴子草抗植物病毒组分的
生物活性研究 ≈ q内蒙古工业大学学报 oussuoutktl}uq
≈{  刘国坤 o谢联辉 o林奇英 o等 qtx种植物的单宁提取物对烟草
花叶病毒 kא ∂ l的抑制作用 ≈  q植物病理学报 oussvovv
kvl}uz|q
≈|  朱水芳 o裘维蕃 q几种中草药抽提物对黄瓜花叶病毒引起的
辣椒花叶病治疗作用初步研究 ≈ q植物病理学报 ot|{|ot|
kul}tuvq
≈ts  李重九 o费 菁 q丙酰紫草素对病毒的钝化作用 ≈ q中国农
业大学学报 ot||zoukxl}wzq
Αντιϖιραλεφφεχτ οφΑιλαντηυσαλτισσιµ α ανδ
Βρυχεα ϕαϖανιχα ον τοβαχχο µ οσαιχ ϖιρυσ
≥‹∞‘¬¤±2ª∏²o ‹ „‘Š «¨ ±ª2®∏±o • ˜ ∏2­¬¤±o ÷ Œ∞ ¬¤±2«∏¬o Œ‘±¬2¼¬±ª
(Ινστιτυτε οφ Πλαντ ςιρολογψ, Κεψ Λαβορατορψ οφ Βιοπεστιχιδε ανδ Χηεµ ιχαλΒιολογψ οφΜινιστρψ οφ Εδυχατιον, Φυϕιαν Αγριχυλτυρε
ανδ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ, Φυζηου vxsssu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ¤±·¬√¬µ¤¯ ©¨©¨¦·²©·º²° §¨¬¦¬±¤¯ ³¯¤±·o ¬q q¨ Αιλαντηυσαλτισσιµ α ¤±§Βρυχεα ϕαϖανιχα ²± ·²¥¤¦2
¦²°²¶¤¬¦√¬µ∏¶q Μετηοδ : ˜¶¬±ª ²¯¦¤¯ ¯¨ ¶¬²± ¤±§¯¨ ¤©§¬¶¦¶¤¶¶¤¼o ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° Α. αλτισσιµ α ¤±§Β. ϕαϖανιχα º µ¨¨ √¨¤¯∏¤·¨§©²µ¤±·¬√¬2
µ¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ¤ª¤¬±¶·× ∂ ¬±©¨¦·¬²± ¤±§µ¨³¯¬¦¤·¬²±o µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q ׫¨ ·«¨ µ¤³¨ ∏·¬¦ ©¨©¨¦·²©·º² ¬¨·µ¤¦·¶²± ·²¥¤¦¦²°²¶¤¬¦§¬¶¨¤¶¨ º¤¶¤¯2
¶² §¨ ·¨µ°¬±¤·¨§¥¼ ³²··¨¶·¶q Ρ εσυλτ: Α. αλτισσιµ α ¤±§Β. ϕαϖανιχα ¦²∏¯§±²·²± ¼¯ ¬±«¬¥¬·× ∂ ¬±©¨¦·¬²± ©¨©¨¦·¬√¨¯¼o ¥∏·¤¯¶²«¤§¤«¬ª«
¬±«¬¥¬·²µ¼ ¤¦·¬√¬·¼ ¤ª¤¬±¶·× ∂ µ¨³¯¬¦¤·¬²±q ׫¨ ¬¨³¨ µ¬° ±¨·¤¯ µ¨¶∏¯·¶¬± ªµ¨ ±¨«²∏¶¨ ¬±§¬¦¤·¨§·«¤·Α. αλτισσιµ α ¤±§ Β. ϕαϖανιχα «¤§
¶²°¨¦¨µ·¤¬± ·«¨ µ¤³¨ ∏·¬¦ ©¨©¨¦·²± ·²¥¤¦¦²°²¶¤¬¦§¬¶¨¤¶¨ ¦¤∏¶¨§¥¼ א ∂ q Χονχλυσιον: „¶¶«²º¬±ª¶·µ²±ª¬±«¬¥¬·¬²± ²©× ∂ o Α. αλτι2
σσιµ α ¤±§Β. ϕαϖανιχα «¤√¨¤³²·¨±·¬¤¯ √¤¯∏¨ ©²µµ¨¶¨¤µ¦«¤±§§¨ √¨¯²³° ±¨·²± ¤±·¬√¬µ¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ¤ª¤¬±¶·³¯¤±·√¬µ∏¶q
[ Κεψ ωορδσ] Αιλαντηυσαλτισσιµ α; Βρυχεα ϕαϖανιχα~ ·²¥¤¦¦² °²¶¤¬¦√¬µ∏¶kא ∂ l~ ¤±·¬√¬µ¤¯ ¤¦·¬√¬·¼
≈责任编辑 张宁宁  
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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