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Effects of Astragalus membranaceus injection on nitric oxide and endothelin concentration of intestinal mucosa after hemorrhage shock-reperfusion in rats

黄芪注射液对大鼠失血性休克再灌注肠黏膜NO和ET的影响



全 文 :黄芪注射液对大鼠失血性休克再灌注
肠黏膜 ‘’和 ∞×的影响
黑子清t 3 o张劲军u o林世清u o刘克玄u o陈秉学u
kt q中山大学 附属第三医院 麻醉科 o广东 广州 xtsyvs ~
u q中山大学 附属第一医院 麻醉科 o广东 广州 xtss{sl
≈摘要  目的 }探讨黄芪注射液对失血性休克2再灌注后肠黏膜组织一氧化氮k‘’l和内皮素k∞×l含量的影响 ∀
方法 }雄性 ≥⁄大鼠 vu 只 o随机分成 }正常组 !模型组 !黄芪低剂量组k黄芪注射液 ts ª#®ªptl和黄芪高剂量组k黄芪
注射液 us ª#®ªp tl ∀复制重度失血性休克及复苏动物模型 o黄芪注射液于再灌注前静脉注入 o造模完成后观察各组
动物肠黏膜病理学变化 o检测肠黏膜组织乳酸 !一氧化氮和和内皮素含量 ∀结果 }病理检查结果显示 }模型组肠黏
膜损伤最重 o黄芪具有保护失血再灌注肠黏膜的作用 o以黄芪高剂量组效果最佳 o正常组肠黏膜正常k Π s qstl ∀
模型组和黄芪低剂量组小肠黏膜组织乳酸含量高于黄芪高剂量组和正常组k Π s qsxl ∀模型组和黄芪低剂量组小
肠黏膜组织 ‘’含量低于黄芪高剂量组和正常组k Π s qstl ∀小肠黏膜组织 ∞×含量以模型组最高 o与其他 v组比
较均有统计学意义k Π s .sx或 Π s qstl o黄芪低剂量组黏膜组织 ∞×含量高于正常组和黄芪高剂量组k Π s qsxl ∀
结论 }黄芪注射液能减轻大鼠失血性休克再灌注肠黏膜损害 o可能与其减轻肠黏膜组织血管内皮功能紊乱有关 ∀
≈关键词  失血性休克 ~再灌注 ~肠黏膜 ~一氧化氮 ~内皮素 ~大鼠
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsx2swww2sw
肠屏障功能损害是多器官衰竭的发源地 o在以
往研究中 o作者证实黄芪能够减轻兔失血性休克再
灌注肠黏膜损伤≈t ou  o但其治疗机制尚不清楚 ∀一氧
化氮k‘’l !内皮素k∞×l为血管内皮细胞分泌的两种
血管活性物质≈v  o本实验以大鼠肠黏膜组织 ‘’ 和
∞×水平变化反映失血性休克再灌注后肠黏膜血管
内皮细胞功能 o并用黄芪注射液干预 o以探讨黄芪注
射液对它们的影响 o从而阐明黄芪注射液抗失血再
灌注肠黏膜损伤作用 o为临床防治失血再灌注肠黏
膜损伤提供依据 ∀
1 材料和方法
1 q1 动物分组 健康清洁级雄性 ≥⁄大鼠 vu 只 o体
重 uxs ∗ vss ªo均由中山大学医学动物中心提供 ∀
动物随机分成 w 组 o假手术对照组 o不进行休克处
理 ~模型组 o再灌注前注射生理盐水 v qs °~黄芪低
剂量组 o黄芪注射液按 ts ª#®ªptk黄芪注射液由成
都地奥九泓制药厂生产 o批号 stvwvv o按人和动物体
重比例计算 o为临床剂量的 x 倍l o用生理盐水稀释
≈收稿日期  ussv2ts2s{
≈基金项目  广东省中医药管理局基金资助ktsusytl
≈通讯作者  3 黑子清 oר¯ }ksusl{zvvww|v otvvsuuttty| o∞2°¤¬¯}
«¨¬½¬´¬±ªƒ ¶¬±¤q¦²°
到 v qs °o再灌注前静脉注入 ~黄芪高剂量组 o黄芪
注射液按 us ª#®ªptk按人和动物体重比例计算 o为
临床剂量的 ts 倍l o用生理盐水稀释到 v qs °o于
灌注前静脉注入 ∀
1 q2 动物模型建立 各组动物术前禁食 uw «ous h
乌拉坦 x qs °#®ªpt腹腔注射 o麻醉动物 o气管切开 o
插入气管导管 o以保持呼吸道通畅 o保留自主呼吸 ∀
分离左颈动脉并置管用于动脉血压监测 ~分离右颈
静脉置管 o用于给药 !回输血液 ~分离股动脉 o置管备
放血用 ∀
静脉使用肝素kuxs ˜#®ªptl后于 ts °¬±内放血
使动脉平均血压降至并维持于 x qv ®°¤o持续 ys °¬±o
建立重度失血性休克及复苏的动物模型 ∀观察 ys
°¬±后经颈静脉输入治疗用药物或溶液 v qs °ox
°¬±内间断回输全部所放血液 o再观察 |s °¬±后取
标本 ∀
1 q3 标本制备和测定 模型成功后迅速开腹 o回肠
末端 x ¦°处取 t qs ¦°肠段一份 o随即置入 w h 的多
聚甲醛液中固定 o进行蜡块包埋 !切片进行 ‹∞染
色 o光学显微镜下观察病理变化 o进行肠黏膜绒毛损
伤程度分级 o正常 }正常绒毛 ~轻度损伤 }顶部部分绒
毛脱落 ~中度损伤 }绒毛脱落明显 o上皮与固有层中
#www#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw
度分离 ~重度损伤 }绒毛脱落明显 o固有层绒毛脱落 ∀
取全部小肠 o用冰冻生理盐水清洗 o在冰盘刮取肠黏
膜组织 o吸水纸吸干水分后保存于 p zs ε 待测 ∀称
取肠黏膜组织 o制备成 ts h的组织匀浆 o分别用微量
快速测定法测定组织乳酸含量 o同时用卡马斯亮蓝
测定匀浆中的蛋白浓度 ~用硝酸还原酶间接法测定
组织 ‘’含量 ~用放免法测定组织 ∞×含量 ∀
1 q4 统计学处理 所有计量数据以 ξ ? σ表示 o多
组均数比较使用方差分析的方法 o独立样本均数间
多重比较采用 ≥⁄2τk¯¨ ¤¶·¶¬ª±¬©¬¦¤±·§¬©©¨µ¨±¦¨2τl检
验 o计数资料应用多哥独立样本比较的秩和检验 o统
计量应用 ςu表示数据经 ≥°≥≥ts qs软件包处理 ∀
2 结果
2 q1 病理学改变 w组中 o模型组肠黏膜损伤最重 o
黄芪两组损伤减轻 o高剂量组效果优于低剂量组 o正
常组无损伤 o组间比较有统计学差异k Π s qst o表
t o图 t ∗ wl ∀
表 t 大鼠失血再灌注后小肠黏膜损伤程度比较k ν € {l
组别 正常 轻度受损 中度受损 重度受损
正常组 z t s s
模型组 s s w w
黄芪低剂量组 s v w t
黄芪高剂量组 s y u s
注 }组间比较 Π s qst
图 t 正常组k ≅ ussl
黏膜上皮层无炎症细胞浸润
图 u 模型组k ≅ ussl
绒毛水肿明显 o大量膜上皮细胞脱落 o大量炎症细胞浸润
图 v 小剂量黄芪组k ≅ ussl
部分黏膜上皮细胞脱落 o中等量炎症细胞浸润
图 w 大剂量黄芪组k ≅ ussl
绒毛轻度受损 o少量黏膜上皮细胞脱落 o炎症细胞浸润少
2 q2 小肠黏膜组织乳酸含量 以模型组和黄芪低
剂量组最高k Π s qsxl o黄芪高剂量组和正常组黏膜
组织乳酸含量最低k Π s qsxl ∀黄芪高剂量组黏膜
组织乳酸含量虽高于正常组 o但两者者间无统计学
意义k Ё s qsx o表 ul ∀
2 q3 小肠黏膜组织 ‘’ 的含量 以模型组最低 o明
显低于黄芪高剂量组和正常组k Π s qstl ∀黄芪低
表 u 大鼠失血再灌注后小肠黏膜组织 ‘’与 ∞×含量的变化k ξ ? σ, ν € {l
组别 ‘’rΛ°²¯#tss ªpt ∞×r±ª#tss ªpt 乳酸r±°²¯# ªpt
正常组 wt quz ? { qysul uzw qyu ? ww qutul u qyu ? s qwxtl
模型组 us qut ? w qtw w{t qxs ? ts| q|{wl v qtt ? s qxvvl
黄芪低剂量组 uy q{y ? x qvv wtw qxv ? uy qtxt owl v qss ? s qvyvl
黄芪高剂量组 wu qwt ? | q{|ul vxv qxt ? vt q|su ovl u qy| ? s qt|tl
注 }与模型组比较 tlΠ s qsx oulΠ s qst ~与正常组比较 vlΠ s qsx owlΠ s qst
剂量组小肠黏膜组织 ‘’ 的含量高于正常组 o但两者
间无统计学意义k Ё s qsx o表 ul ∀
2 q4 小肠黏膜组织 ∞× 含量 以模型组最高 o与其
他 v组比较均有统计学意义k Π s .sx或 Π s qstl ∀
黄芪低剂量组黏膜组织 ∞× 含量高于正常组和黄芪
高剂量组k Π s .sx) ,黄芪高剂量组黏膜组织 ΕΤ含
量高于正常组 ,但两组间无统计学意义( Π  s qsx o
表 ul ∀
3 讨论
生理状况下 o小肠黏膜层的血流量占小肠供血
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw
总量的 zs h ∗ {s h ≈w  o因此 o小肠黏膜极易发生失血
再灌注损伤≈x  ∀现有学者提出小肠是多器官功能衰
竭k°∏¯·¬³¯¨²µª¤± §¼¶©∏±¦·¬²± ¶¼±§µ²°¨ ~ ’⁄≥l的中心
器官 o肠黏膜缺血再灌注损伤是最终导致 ’⁄≥重
要病因学基础及中心环节≈y  o因此 o防治肠屏障损害
极为重要 ∀本研究结果发现 o单纯失血性休克再灌
注后 o小肠黏膜损伤严重 o表现为小肠黏膜绒毛脱落
极为明显 o并且与固有层分离 o有较多炎症细胞浸
润 o有的已出现溃疡 ∀黄芪有一定的保护作用 o黄芪
高剂量效果较佳 o表现为小肠绒毛受损程度较轻 o脱
落较少 o说明黄芪对失血再灌注具有良好的保护作
用 o与作者以往的研究结果相符≈t ou  ∀
作者以往研究发现 o再灌注后肠黏膜血流仅为
失血性休克前 vs h ∗ ws h o处于一种低灌流状态≈u  o
进一步证实失血2再灌注低灌流是造成再灌注损伤
的重要原因 ∀有研究发现≈z2|  o失血性休克及复苏后
血浆 ‘’ o∞×均有明显增加 o同时肠屏障表现出病理
性的损害 o认为再灌注后 ‘’r∞× 紊乱 o内皮功能失
调是导致再灌注肠黏膜组织的低灌流或不复流的主
要原因 ∀本实验的结果显示 }模型组肠黏膜组织乳
酸明显增加 o提示肠黏膜组织无氧代谢明显 ~肠黏膜
‘’水平明显降低 o∞×水平增高 o提示小肠黏膜失血2
再灌注后微循环障碍与 ‘’r∞× 的失衡存在一定关
系 ∀
Ž¤º¤·¤≈ts 在猫的小肠缺血再灌注的实验中 o于
再灌注前给予 Λ2精氨酸k‘’前体物质l o发现再灌注
后小肠损伤减轻 ~׫²°¶²±≈tt  等使用 ∞×特异性抗血
清 o证实可使肠缺血再灌注损伤明显改善 o这些研究
说明 o从 ‘’r∞× 途径治疗 o对减轻肠缺血再灌注损
伤有积极意义 ∀
本研究结果发现 o较单纯休克组 o黄芪能明显增
加肠黏膜组织的 ‘’水平 o降低肠黏膜组织 ∞×水平 o
提示黄芪能通过减轻再灌注后肠黏膜组织的 ‘’r∞×
失衡 o减轻内皮功能紊乱 o从而改善失血再灌注肠黏
膜微循环 o减轻失血再灌注肠黏膜损伤 ∀
≈参考文献 
≈t  林世清 o黑子清 o陈秉学 o等 q黄芪对失血性休克兔小肠上皮细
胞超微结构的影响 q中华麻醉学杂志 oussv ouvkyl }wwv q
≈u  黑子清 o林世清 o刘卫峰 o等 q黄芪对失血性休克2再灌注兔肠黏
膜微循环血流量的影响 q中华麻醉学杂志 oussv ouvkzl }xwv q
≈v  ’½¨ ¯≥ o≠∏®¶¨¯  o‹¤®¯¤µŠ o ετ αλ. ‘¬·µ¬¦²¬¬§¨ ¤±§ ±¨§²·«¨ ¬¯± µ¨ ¤¯2
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Εφφεχτσ οφ Αστραγαλυσ µεµβραναχευσινϕεχτιον ον νιτριχ οξιδε ανδ ενδοτηελιν
χονχεντρατιον οφιντεστιναλ µ υχοσα αφτερ ηεµ ορρηαγε σηοχκ2ρεπερφυσιον ιν ρατσ
‹∞Œ ¬2 ¬´±ªt o‹„‘Š ¬±2­∏±u oŒ‘≥«¬2 ¬´±ªu oŒ˜ Ž¨2¬∏¤±u o≤‹∞‘…¬±ª2¬∏¨u
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u . ∆επαρτµεντ οφ Ανεστηεσιολογψ, Τηε Φιρστ Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ οφ Ζηονγ Σηαν Υνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtss{s , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·¶²© ≥·µ¤ª¤¯∏¶° °¨¥µ¤±¤¦¨∏¶¬±­¨¦·¬²± ²± ±¬·µ¬¦²¬¬§¨ ¤±§ ±¨§²·«¨ ¬¯± ¯¨ √¨¯¶²©¬±·¨¶·¬±¤¯
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤³¨ ∏·¬¦¶²¯∏·¬²± ¥¨©²µ¨ µ¨³¨µ©∏¶¬²±q„··«¨ ±¨§²©¶·∏§¼o¬±·¨¶·¬±¤¯ ³¤·«²¯²ª¼ º¤¶²¥¶¨µ√ §¨o¤±§·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²© ¤¯¦·¬¦¤¦¬§k⁄l o±¬·µ¬¦
²¬¬§¨ k‘’l o ±¨§²·«¨ ¬¯±k∞×l ²©¬±·¨¶·¬±¤¯ °∏¦²¶¤ º µ¨¨ §¨·¨¦·¨§q Ρεσυλτ : ׫¨ ¬±·¨¶·¬±¤¯ ³¤·«²¯²ª¼ ¶«²º §¨·«¤·¬±·¨¶·¬±¤¯ °∏¦²¶¤ ³¨¬·«¨ ¬¯¤¯
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¬± ±²µ°¤¯ ªµ²∏³q׫¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©⁄¤±§‘’ ²©¶°¤¯¯¬±·¨¶·¬±¨ °∏¦²∏¶° °¨¥µ¤±¨ ¬± °²§¨¯ªµ²∏³¤±§ ²¯º §²¶¤ª¨ ªµ²∏³º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼
«¬ª«¨µ·«¤±·«²¶¨ ¬± «¬ª«§²¶¤ª¨ ªµ²∏³¤±§±²µ°¤¯ ªµ²∏³k Π s qsxl o¥∏··«¨µ¨ º µ¨¨ ±²¶¬ª±¬©¬¦¤±·§¬©©¨µ¨±¦¨¶¥¨·º¨¨ ± «¬ª«§²¶¤ª¨ ªµ²∏³¤±§
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 s qsxl q׫¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©∞× ¬± ²¯º §²¶¤ª¨ ªµ²∏³º¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ «¬ª«¨µ·«¤±·«¤·¬± «¬ª«§²¶¤ª¨ ªµ²∏³¤±§±²µ°¤¯ ªµ²∏³k Π s qsxl q
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[ Κεψ ωορδσ] «¨ °²µµ«¤ª¨ ¶«²¦®~µ¨³¨µ©∏¶¬²±~¬±·¨¶·¬±¨ °∏¦²∏¶~±¬·µ¬¦²¬¬§¨ ~ ±¨§²·«¨ ¬¯± ~µ¤·
≈责任编辑 方文贤 
红花黄色素抗氧化作用的研究
金 鸣 3 o李金荣 o吴 伟
k北京市心肺血管疾病研究所 首都医科大学 附属北京安贞医院 药理研究室 o北京 tsssu|l
≈摘要  目的 }观察红花黄色素k≥≠l的抗氧化作用 ∀方法 }以邻二氮菲2ƒ u¨ n氧化法检测 ≥≠ 清除 ‹u’urƒ u¨ n体
系产生的羟自由基 ~硫代巴比妥酸比色法观察小鼠肝匀浆的脂质过氧化 ~比色法观察 ‹u’urƒ u¨ n体系产生的羟自由
基致红细胞膜的破裂 ∀结果 }t qv| ∗ v qwu ª#pt ≥≠ 的羟自由基清除率为 uz qu h ∗ tss h o呈明显量效关系 ~zz q{ ∗
zzy qt °ª#pt ≥≠ 缓解小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制率为 ts qx h ∗ |u q{ h o呈明显的量效关系 ~vz qt ∗ u|z qt °ª#pt
≥≠ 抑制羟自由基引发的红细胞破裂呈明显的量效关系 ∀结论 }≥≠ 为红花水溶性抗氧化有效部位 ∀
≈关键词  红花黄色素 ~羟自由基 ~脂质过氧化 ~红细胞
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsx2swwz2sv
红花 Χαρτηαµυσ τινχτοριυσ q为主要的活血化瘀
药 o可活血通经 !化瘀止痛 o临床上红花主要以水煎
液入药 ∀组织缺血r再灌注等过程中 o自由基引发的
氧化反应为许多血液循环障碍疾病的重要损伤机
制 ∀红花水提液可清除羟自由基 o抑制小鼠肝匀浆
脂质过氧化≈t  o红花黄色素k≥≠l为红花主要水溶性
活血化瘀有效部位 o可抑制血小板激活因子诱发的
血小板聚集 o为一血小板激活因子受体拮抗剂≈u  ∀
本室观察了 ≥≠ 的多种抗氧化作用 o以探讨红花活血
化瘀作用的实质 ∀
1 材料
1 q1 试剂与药品 硫代巴比妥酸kׅ„l为国产生物
试剂经活性炭脱色 !重结晶处理 o其他试剂均为国产
分析纯 ∀依文献≈v 方法 o以大孔树脂柱色谱法制备
≈收稿日期  ussv2tt2ts
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kvstzttwyl
≈通讯作者  3 金鸣 o ר¯ }kstslywwtuwvt2uvs{ o ∞2°¤¬¯}­¬±½¤±ªƒ
³∏¥¯¬¦v q¥·¤q±¨ ·q¦±
≥≠ o‹°≤面积归一化法分析结果表明其羟基红花黄
色素 „含量为 {v h ∀
1 q2 设备 zxx…型紫外可见分光光度计 ∀
1 q3 动物 雄性昆明小鼠为本院动物房提供 ~雄性
新西兰家兔 o为中国药品生物制品检定所提供 ∀
2 方法
2 q1 红花黄色素清除羟自由基 参考文献≈w 方法 o
以邻二氮菲2ƒ u¨ n氧化法检测 ‹u’urƒ u¨ n体系产生的
羟自由基 ∀
2 q2 红花黄色素抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化 取小
鼠处死后取肝洗净血污 o剪碎以生理盐水制 v h 匀
浆 o取此匀浆 s qv °加入各种试剂 o反应液总体积
为 s qyz °o含不同浓度 ≥≠ o ‹u’u s qssu w h oƒ ≥¨’w
s qsv °°²¯#pt ovz ε 保温 ys °¬±o加入 t °us h 三
氯醋酸及 t °s qyz h ׅ„ o|s ε 保温 tx °¬±后水
冷 ov sss µ#°¬±pt离心 us °¬±o取上清测定 xvu ±° 吸
光度 „xvu o以 ‹u’ 代替 ׅ„ 的平行试验管为各反应
管比色空白 ∀以蒸馏水代替红花黄色素溶液的反应
#zww#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
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