全 文 ：#研究论文#
中药材鹿鞭的分子鉴定研究
唐双焱t o傅 文t o陈永久u o王建云t o蒋 序t o张亚平u
kt q云南省药品检验所 o云南 昆明 yxsstt ~
u q中国科学院昆明动物研究所 o云南 昆明 yxsuuvl
≈摘要  目的 }建立中药材鹿鞭的分子分类学鉴定试剂盒 ∀方法 }根据对不同产地梅花鹿 !马鹿 !白唇鹿 !水鹿
线粒体 ⁄‘„ 进行 °≤ • 扩增和序列测定 o并与常见伪充药材来源动物线粒体 ⁄‘„ 同位置序列比较 o找到该 w个鹿
种的特征片段 o经过实际检验 o筛选出合适片段作为鹿的种属特异性 °≤ • 引物 ∀结果 }该引物与相关试剂组成试
剂盒后 o可用于中药材鹿鞭与常见伪充药材牛鞭 !驴鞭等的鉴别 ∀结论 }用分子分类学方法鉴别中药材鹿鞭 o具有
科学 !稳定 !准确 !简便等特点 o值得推广 ∀
≈关键词  鹿鞭 ~分子分类 ~线粒体 ⁄‘„ ~种属特异性引物 ~°≤ • 扩增
≈中图分类号  • u{u qzws qv ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussuls{2sxzv2sv
分子分类学是近年来随着分子生物学的发展而
出现的一个新学科 o它采用分子生物学技术 o针对生
物分子尤其是 ⁄‘„ o利用生物分类学和系统学的原
理 o结合一些计算机数据处理方法 o进行生物的分类
和系统整理 o成为分子进化研究的一个重要方面 ∀
线粒体 ⁄‘„ 因其种属特异性强 o是研究动物种间
进化 !进行种属鉴定的良好遗传标记 ∀
鹿鞭 ° ±¨¬¶ ·¨× ¶¨·¬¶≤ µ¨√¬o又名鹿肾 o是梅花鹿
Χερϖυσ νιππον ר°°¬±¦®及马鹿 Χ. ελαπηυσ ¬±2
±¤¨ ∏¶雄性的阴茎和睾丸的干燥品 ∀另外 o也用水鹿
Χ. υνιχολορ Ž¨µµ鞭和白唇鹿 Χ. αλβιροστρισ °µ½¨ 2
º¤¶®¬鞭 ∀其有补肾 !壮阳 !益精等功效 o为名贵药
材 o价格昂贵 o市场上屡见以牛鞭 !牦牛鞭和驴鞭伪
充≈t  ∀目前其鉴定标准主要依据外观性状 o准确性
不高 ∀我们试图建立其分子分类学鉴定试剂盒 o以
达到科学 !稳定 !准确 !简便的鉴定效果 ∀
1 实验材料
水鹿血采自云南盈江 ~天山马鹿血采自新疆伊
犁 !阿尔泰地区 ~东北马鹿血采自昆明圆通山 ~白唇
≈收稿日期  usst2s{2s{
≈基金项目  国家自然科学基金资助kv|zyss{tl ~云南省应用
基础研究基金k|z≤szt  l
≈通讯作者  电话 }ks{ztlvtvsxvy ∞2°¤¬¯}­¬±­°¬±ªƒ ³∏¥2
¬¯¦q®° q¼± q¦±
鹿血采自北京大兴 ~梅花鹿血采自云南七甸和易门 !
都江堰 !哈尔滨 ∀鹿鞭购自云南省药材公司 ~伪充药
材及牛 Βοσταυρυσ δοµεστιχυσ Š°¨¯¬°鞭和驴 Εθυυσ
αινιυσ ¬±±¤¨ ∏¶鞭购自昆明市场 ∀鹿鞭及其伪充药
材由云南省药检所王建云鉴定 ∀
2 方法
2 q1 ⁄‘„ 提取和检测
参照文献≈u 进行 ∀
2 q2 ⁄‘„ 扩增
2 q2 q1 目标片段为哺乳动物线粒体 ⁄‘„ 中一段
长约 xus ¥³的序列 o扩增引物为 xχ2„× Š „„× × Š2
Š„ŠŠ„≤„„≤≤ „Š×2vχ 和 xχ2Š× „≤ „× Š≤ ×2
× „× „× Š≤ „× ŠŠŠŠ≤2vχk引物 tl ∀每一样品的扩
增体积为 xs ˏo内含 t ≅ ¥∏©©¨µk购自华美生物工程
公司l o t qx °°²¯ # p t  ª≤ u¯ os qsx °°²¯ # p t
§‘×°os qx Λ°²¯ # p t引物 ou qs ˜±¬·×¤´ 酶以及
ts±ª模板溶液 ∀
2 q2 q2 目标片段为位于 2 q2 q1 中线粒体 ⁄‘„ 中
一段约 vzs ¥³的序列 o扩增引物为 xχ2„Š× ≤ × × × Š2
× „Š× „× „≤ × ≤2vχ 和 xχ2„≤ „× „Š× „× Š× ≤≤2
× „„× „2vχk引物 ul ∀每一样品的扩增体积与浓度
与 2 q2 q1 相同 ∀
2 q2 q3 目标片段为线粒体 ⁄‘„ 基因组细胞色素
#vzx#
第 uz卷第 {期
ussu年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²q{
㸻qoussu
¥基因中一个长度为 vsz ¥³的片段 o引物为哺乳动
物线粒体 ⁄‘„ 细胞色素 ¥通用引物 }xχ2≤≤ „× ≤2
≤ „„≤ „× ≤ × ≤ „Š≤ „× Š„× Š„„„2vχ 和 xχ2Š≤≤≤2
≤ × ≤ „Š„„× Š„ × „× × × Š× ≤≤ × ≤ „2vχ k引物 vl ∀
每一样品的扩增体积为 xs Λ¯ o内含 t ≅ ¥∏©©¨µk购自
华美生物工程公司l ov qs °°²¯ # p t  ª≤ u¯ os qsx
°°²¯#pt§‘×° os qx Λ°²¯ #pt引物 ou qs ˜±¬·×¤´
酶以及 xs ±ª模板溶液 ∀
上述扩增条件均为 }|y ε 预变性 u °¬±o接下来
进行 ws个循环k|x ε ws ¶oxu ε ys ¶ozu ε ys
¶l o最后在 zu ε 保温 x °¬±∀
2 q3 ⁄‘„ 序列分析
采用美国 „…Œ公司 vzz型全自动 ⁄‘„ 序列分
析仪 ∀
3 结果与讨论
用哺乳动物线粒体 ⁄‘„ 引物k引物 tl对从不
同产地梅花鹿 !马鹿 !水鹿 !白唇鹿 w个种 |个个体
血中提取的总 ⁄‘„ 进行 °≤ • 扩增和序列测定 o得
到线粒体 ⁄‘„ 基因组中从细胞色素 ¥基因末端
txs ¥³左右至 ⁄2环的一段长度约为 xus ¥³左右的
序列 o将其与 Š ±¨…¤±®中家牛≈v  !家马≈w k鹿属偶蹄
目 o驴属奇蹄目马科动物 o因无驴的序列 o故用家马
序列亦可代表l线粒体基因组中同位置的序列比较 o
找到该 w个鹿种间保守性强且又与家牛 !家马序列
有明显差异的片段 ∀合成这些片段 o将其两两组合
成 y组 o分别作为引物对从鹿鞭和常见伪药牛鞭 !驴
鞭中提取的总 ⁄‘„ 进行 °≤ • 扩增 o结果证实它们
都能扩增鹿鞭 ⁄‘„ o但对牛鞭 !驴鞭 ⁄‘„ 的扩增有
差异 ∀通过条件优化 o筛选出一组能对鹿鞭 ⁄‘„
进行扩增而不能扩增牛鞭和驴鞭 ⁄‘„ 的特异性片
段 o作为鹿线粒体 ⁄‘„ 种属特异的 °≤ • 引物 o其序
列为 xχ2„Š× ≤ × × × Š× „Š× „× „≤ × ≤2vχ 和 xχ2„2
≤ „× „Š× „× Š× ≤≤ × „„× „2vχk引物 ul ∀
以脊椎动物通用的线粒体细胞色素 ¥基因引物
k引物 vl同时扩增作为阳性对照 o用引物 u 进行
°≤ • 扩增 o可用于对中药材鹿鞭的真伪鉴定k见图
tl ∀
因此用引物 u o引物 v oΤαθ酶 o§‘×° o°≤ • 反
应缓冲液组成可用于中药材鹿鞭鉴定的试剂盒 ∀如
果线粒体 ⁄‘„ 和细胞色素 ¥基因均能被扩增 o则
说明受检药材是真的 ~如果有细胞色素 ¥基因产物
而无线粒体 ⁄‘„ 产物 o则说明受检药材是假的 ~如
果两者都不能扩增 o则说明受检药材或操作中有异
源 ⁄‘„ 污染 o需更换抽样或严格控制操作过程 ∀
图 t 鹿鞭 !牛鞭和驴鞭 ⁄‘„ °≤ • 扩增后
的琼脂糖凝胶电泳结果
t ∗ v q用引物 v进行扩增作阳性对照 x ∗ z q引物 u的扩增结果
w o{ q为相应的阴性对照 | q⁄‘„ 分子量标记
扩增模板为 }t ox q鹿鞭 u oy q牛鞭 v oz q驴鞭
用该试剂盒进行多份鹿鞭及伪鹿鞭的实际鉴
定 o结果证明该试剂盒均能有效地检出真伪 ∀该分
子分类学试剂盒具有科学 !稳定 !准确 !简便的特点 o
能克服现行鹿鞭检验标准的不足 o值得在实际药检
工作中进一步使用和推广 o以有效制止假冒药材的
泛滥 o维护人民的健康和经济利益 ∀同时 o随着该技
术在实践中的不断应用和日臻完善 o将为革新法定
的药品检验方法 !提高名贵药材鹿鞭检验技术的准
确性和先进性做好理论和物质上的准备 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药品生物制品检定所 !广东省药品检验所 q中国中药材真
伪鉴别图典 tk常用贵重药材 !进口药材分册l q广州 }广东科技
出版社 ot||x qt{w q
≈u  王建云 o何广新 o傅 文 o等 q鹿鞭的微量 ⁄‘„ 提取及序列
鉴定 q中国中药杂志 ot||z ouuktsl }xz| q
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第 uz卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Ρεσεαρχη ον τηε Ιδεντιφιχατιον
οφ Πενισετ Τεστισ Χερϖι ωιτη Μολεχυλαρ Ταξονοµ ψ
× „‘Š ≥«∏¤±ª2¼¤±t oƒ ˜ • ±¨t o ≤ ‹∞‘ ≠²±ª2­¬∏u o • „‘Š ¬¤±2¼∏±t o
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Ž∏±°¬±ªyxsuuv o≠∏±±¤± o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ °¤®¨ ·«¨ ®¬·º¬·« º¬·¦«·²¬§¨ ±·¬©¼ ° ±¨¬¶ ·¨× ¶¨·¬¶≤ µ¨√¬º¬·« °²¯ ¦¨∏¯¤µ·¤¬²±²°¼ q Μετηοδ : × «¨
°·⁄‘„ ²©¶¬®¤¤±§µ¨§§¨ µ¨©µ²° §¬©©¨ µ¨±·¤µ¨¤¶ º¤¶¤°³¯¬©¬¨§¥¼ °≤ • ¤±§¶¨ ∏´¨ ±¦¨§q ≤²°³¤µ¨§ º¬·«·«¨ °·⁄‘„ ²© ¥²√¬±¨ ¤±§
«²µ¶¨ ©µ²° º¬·¦«·«¨ ©¤¯¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ ¶º µ¨¨ °¤§¨ o¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶¨ª° ±¨·¶²©§¨ µ¨º µ¨¨ ©²∏±§q • ¨¶¨¯¨ ¦·¨§²±¨ ¤¶·«¨ ¶³¨ ¦¬¨¶§¬¶·¬±¦·¬√¨
°≤ • ³µ¬° µ¨²©§¨ µ¨qΡεσυλτ : × «¨ ®¬·°¤§¨ ∏³ º¬·«·«¬¶³µ¬° µ¨¤±§µ¨ ¤¯·¨§µ¨¤ª¨ ±·¶¦²∏¯§¥¨ ∏¶¨§·²§¬¶¦¨µ± ° ±¨¬¶ ·¨× ¶¨·¬¶≤ µ¨√¬©µ²°
·«¨ ©¤¯¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ qΧονχλυσιον : Œ·¬¶¤¶¦¬¨±·¬©¬¦o¶·¨¤§¼ o¤¦¦∏µ¤·¨ ¤±§¦²±√ ±¨¬¨±·º¤¼·²¬§¨ ±·¬©¼ ° ±¨¬¶ ·¨× ¶¨·¬¶≤ µ¨√¬º¬·« °²¯ ¦¨∏¯¤µ
·¤¬²±²°¼ q
[ Κεψ ωορδσ] ° ±¨¬¶ ·¨× ¶¨·¬¶≤ µ¨√¬~ °²¯ ¦¨∏¯¤µ·¤¬²±²°¼ ~ °·⁄‘„ ~·«¨ ¶³¨ ¦¬¨¶§¬¶·¬±¦·¬√¨°≤ • ³µ¬° µ¨~°≤ •
≈责任编辑 袁桂京 
黄芩清除自由基活性与黄芩苷含量的相关性研究
刘玉萍t o°∏µ∏¶²·¤° …¤¶±¨ ·u o小松 + ∆子u o曹 晖t
kt q中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszss ~
u q富山医科药科大学 和汉药研究所 o日本 富山 |vs2st|wl
≈摘要  目的 }开发简便 !可靠的评价黄芩品质新方法 ∀方法 }测定清除 ⁄°°‹ 自由基活性 o并以 ‹°≤ 法测
定黄芩苷 !黄芩素 !汉黄芩苷和汉黄芩素的含量 ∀结果 }黄芩提取物的清除 ⁄°°‹ 自由基活性与黄芩苷含量呈相关
关系 ∀结论 }测定清除 ⁄°°‹ 自由基活性可以作为评价黄芩品质的有效方法之一 ∀
≈关键词  黄芩 ~品质评价 ~⁄°°‹ 自由基 ~清除 ⁄°°‹ 自由基活性
≈中图分类号  • u{x qx ~• u{y qs ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussuls{2sxzx2sy
黄芩为唇形科植物黄芩 Σχυτελλαρια βαιχαλενσισ
Š ²¨µª¬q的干燥根 ∀性寒味苦 o主要用于肺热咳嗽 !
黄疸 !泻 痢 !痈 肿 疮 毒 等 疾 病 ∀ 含 有 黄 芩 苷
k¥¤¬¦¤¯¬±l o黄芩素k¥¤¬¦¤¯ ¬¨±l o汉黄芩苷kº²ª²±¬±2z2
Ο2ª¯∏¦∏µ²±¬§¨l o汉黄芩素kº²ª²±¬±l等黄酮类成分 ∀
≈收稿日期  ussu2sw2vs
≈通讯作者  电话 }kstslywstwwtt2u|xu
药理学研究证明其有抑制炎症≈t ∗ v  o抗菌≈w  o抗过
敏≈x ∗ z  o改善脂质代谢≈{ ∗ tu  o抑制血栓形成≈tv  o抑
制流感病毒 „ o…≈tw  o抑制 ∞…病毒活化≈tx  o抗致癌
促进作用≈ty  o抗过氧化≈tz ot{  o抑制 tuts细胞毒≈t| 
等作用 ∀鉴于自由基与多种常见疾病有关 o尤其是
在炎症反应中 o巨噬细胞呼吸爆发释放大量氧自由
基 o而自由基在杀伤细菌等入侵者的同时对正常机
体组织也会产生损伤 o笔者认为测定黄芩抗自由基
活性可从另一个侧面评价黄芩品质 ∀以往多以黄芩
#xzx#
第 uz卷第 {期
ussu年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²q{
㸻qoussu