全 文 ：左旋四氢巴马汀对脑缺血小鼠
脑组织氨基酸类神经递质含量的影响
张仲苗t ou 3 o郑筱祥u o江 波t o周 权t
kt q浙江大学 医学院 附属第二医院 o浙江 杭州 vtsss| ~
u q浙江大学 生物医学工程与仪器科学学院 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要  目的 }通过观察左旋四氢巴马汀对脑缺血小鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的影响 o探讨左旋四氢巴
马汀抗脑缺血作用的可能机制 ∀方法 }动物分为对照组 o模型组 o左旋四氢巴马汀低 !中 !高剂量组 o银杏组 o采用脑匀
浆法结合 ‹°≤ 法分别测定各组小鼠脑组织中 Š¯ ∏oŠ„…„含量 ∀结果 }模型组小鼠脑组织 Š¯ ∏和 Š„…„含量均较对照
组明显上升 oŠ¯ ∏rŠ„…„明显升高 ∀左旋四氢巴马汀能明显降低脑缺血小鼠脑组织 Š¯ ∏含量 o使 Š¯ ∏rŠ„…„趋于正常 ∀
结论 }左旋四氢巴马汀可能通过降低脑缺血大鼠脑组织 Š¯ ∏含量 o降低 Š¯ ∏rŠ„…„比值发挥其抗脑缺血作用 ∀
≈关键词  左旋四氢巴马汀 ~谷氨酸 ~Χ2氨基丁酸 ~脑缺血
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsw2svzt2sv
左旋四氢巴马汀k Λ2·¨·µ¤«¼§µ²³¤¯°¤·¬±¨ o Λ2׋°l
是广泛应用于临床的镇痛药物 o由防己科植物千金
藤中提取 ∀研究发现 Λ2׋°除了具有镇痛 !镇静 !
降压等作用外 o还具有钙拮抗及抗心率失常等作
用≈t  ∀近期有研究表明 Λ2׋°对大鼠和小鼠脑缺
血损伤具有保护作用 o其可能机制包括抗氧自由基
损伤 !抑制一氧化氮k±¬·µ¬¦²¬¬§¨ o‘’l介导的神经损
伤等≈u  o但 Λ2׋°对脑缺血时氨基酸类神经递质含
量变化的影响未见报道 ∀本研究在小鼠脑缺血模型
上 o结合脑匀浆和 ‹°≤ 的方法 o对小鼠脑内谷氨酸
kª¯∏·¤°¤·¨o Š¯ ∏l和 Χ2氨基丁酸kΧ2¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§o
Š„…„l的含量进行测定 ∀通过比较 Λ2׋°组和模型
组各项指标的变化 o探讨 Λ2׋°对其影响 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
1 q1 q1 试剂 左旋四氢巴马汀注射液k广东省博罗
先锋药业集团有限公司提供 o批号 usstswsul ∀银杏
提取物注射液k金纳多lk德国威玛舒培博士药厂提
供 o批号 ussusxtsysysul ∀谷氨酸 oΧ2氨基丁酸kŠ„2
…„l标准品 o邻苯二甲醛k’°„l o巯基乙醇 oŽ‹u°’w o
硼酸钠均为 ≥¬ª°¤公司产品 ∀甲醇k色谱纯l o乙醇
k分析纯l ∀ ¬¯¯¬³²µ¨超纯水配制流动相 ∀
≈收稿日期  ussv2s|2sx
≈通讯作者  3张仲苗 oר¯ }ksxztl{zz{v{|t
1 q1 q2 动物 Œ≤• 小鼠 o体重 t{ ∗ uu ªo雌雄各半 o
由浙江省医学科学院实验动物中心提供k合格证 }医
动字第 uu2usstsst号l ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 动物分组 动物随机分为 y组 o对照组 o模
型组k脑缺血组l oΛ2׋°低 !中 !高剂量组 o银杏组 o
每组 tu只 ∀ Λ2׋°不同剂量组小鼠在术前 vs °¬±
腹腔注射药物 s qw °#us ªpt o分别达到终浓度为
tw ou{ oxy °ª#®ªpt ∀对照组和模型组腹腔注射等量
生理盐水 o银杏组小鼠尾静脉注射等量银杏注射液 o
终浓度为 wx qx °ª#®ªpt ∀
1 q2 q2 脑缺血模型的建立 按照孟刚等人的方
法≈v 并加以改进 }取给药 vs °¬±后的小鼠 o以水合氯
醛麻醉 o对照组进行双侧颈动脉剥离 o不结扎 ∀其余
各组双侧颈动脉结扎 ∀tu °¬±后断头 o在冰台上剥
离出小鼠全脑k保留大脑及间脑l o称重 ∀取无水乙
醇us °o用筛网仔细匀浆 otu sss µ# °¬±pt离心 x
°¬±o取上清 ∀对样品稀释 o’°„衍生后 o用所建立的
‹°≤法检测脑匀浆上清液中 Š¯ ∏和 Š„…„水平 ∀
1 q2 q3 仪器和色谱条件≈w  岛津 ≤ p ts„×√³系
列 ozzux进样阀 o• ƒ p ts„÷荧光检测器 ∀色谱柱
‹¼³¨µ¶¬¯ ≤t{ ’⁄≥柱 o流动相为一定比例的 Ž‹u°’w缓
冲液及甲醇 o³‹ 约 y qy o梯度洗脱 ∀流量 t qs °#
°¬±pt o进样体积 us ˏo柱温为室温 o• ƒ的激发波长
vxz ±° o发射波长 wxx ±°∀柱前 ’°„衍生反应法测
#tzv#
第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ w
„³µ¬¯oussw
氨基酸水平 ∀ ’°„ 衍生剂配置 ’°„x °ªo甲醇 tux
ˏo巯基乙醇 us ˏ!四硼酸钠缓冲液 t °混匀 o暗
处保存 ouw «老化后使用 ∀衍生反应样品 us ˏo碳
酸氢钠缓冲液 us ˏo’°„ts ˏ混匀 t °¬±后反应终
止 ∀
1 q2 q4 统计方法 计算各组 Š¯ ∏oŠ„…„及 Š¯ ∏rŠ„2
…„值 o分别与模型组进行统计比较 ∀结果用 ξ ? σ
表示 o显著性差异用 ∞¬¦¨¯¯ 软件 τ检验 ∀
2 结果
2 q1 Λ2׋°对小鼠脑缺血后脑组织 Š¯ ∏含量的影
响
与对照组相比 o模型组小鼠脑组织中 Š¯ ∏含量
升高 y倍以上k Π  s qstl ∀银杏组小鼠脑组织 Š¯ ∏
含量与模型组相比明显下降k Π s qstl ∀v种浓度
Λ2׋°都明显降低脑缺血小鼠脑组织 Š¯ ∏含量k Π
s qstl ∀其中 o高剂量组效果最明显 o其次为低剂量
组 ∀但均未能使 Š¯ ∏含量降至正常k见表 tl ∀
2 q2 Λ2׋°对小鼠脑缺血后脑组织 Š„…„ 含量的
影响
与对照组相比 o模型组小鼠脑组织中 Š„…„ 的
含量明显升高k Π s qstl ∀银杏组小鼠脑组织 Š„2
…„含量与模型组相比无明显差别k Ё s qsxl ∀中 !
高剂量 Λ2׋°组小鼠脑组织 Š„…„的含量与模型组
也无明显差别 k Π  s qsxl ∀然而低剂量 Λ2׋°
组小鼠脑组织Š„…„含量较模型组明显降低k Π
s qstlk见表 tl ∀
2 q3 Λ2׋°对小鼠脑缺血后脑组织 Š¯ ∏rŠ„…„比值
的影响
对照组小鼠脑组织 Š¯ ∏rŠ„…„ 为 u qtx o模型组
上升至 v qvz o有显著差别k Π s qstl ∀与模型组相
比 o银杏组两者比值有明显降低k Π s qstl ∀与模型
组相比 ov种剂量 Λ2׋°组均能使比值明显下降
kΠ s qstl o且高剂量 Λ2׋°组比值下降更明显k见
表 tl ∀
表 t 不同剂量 Λ2׋°及银杏对小鼠脑缺血后脑组织 Š¯ ∏oŠ„…„含量及 Š¯ ∏rŠ„…„的影响k ξ n σl
组别 剂量r°ª#®ªpt ν Š¯ ∏rΛ°²¯#ªp t Š„…„rΛ°²¯#ªpt Š¯ ∏rŠ„…„
对照组 p tt s qwv ? s qsy s qus ? s qsu u qtx ? s quy
模型组 p tu u qzw ? s qwxtl s q{v ? s qt|tl v qvz ? s qxxtl
Λ2׋°组 tw tu t qz{ ? s qvxul s qyw ? s qs{ul u qzy ? s qvvul
u{ tu u qtx ? s qv|ul s q{s ? s qtw u qzs ? s qwsul
xy tu t qyx ? s qtyul s qzz ? s qs| u qtw ? s qtwul
银杏组 wx qx tu u qty ? s quxul s q{{ ? s qs| u qwy ? s qvtul
注 }与对照组比较 tl Π s qst o与模型组比较 ul Π s qst
3 讨论
氨基酸是中枢神经系统中重要的神经递质 ∀脑
缺血时兴奋性氨基酸 k∞„„l释放增加 o其中 Š¯ ∏在
细胞外液中浓度升高最明显 ∀ Š¯ ∏造成神经毒性作
用主要有两个过程 o一是以 ‘¤n o‹u’ 内流 o神经元
水肿为特征的急性过程 ∀二是通过激活 Š¯ ∏受体 o
启动电压依赖性钙通道 o导致细胞内钙超载 o造成迟
发性神经元变性坏死的迟发过程≈x  ∀因此 o在缺血
早期 o控制 Š¯ ∏大量释放 o阻止 ≤¤u n内流是防止缺血
性神经元损伤的重要环节 ∀
Š„…„是 Š¯ ∏经谷氨酸脱羧酶脱羧而成 o有抗焦
虑和抗惊厥作用 o是脑内主要抑制性神经递质
kŒ„„l ∀脑损伤时 Š„…„ 含量也上升 o为其/保护抑
制0作用提供依据≈y  ∀其可能通过突触后膜超极化 o
减少 ≤¤u n内流 o降低细胞代谢使突触后神经元处于
保护性抑制状态 o并通过突触前抑制减少 Š¯ ∏释放 o
减少低灌注区神经元细胞死亡≈z  ∀
研究表明 oΛ2׋°可抑制再灌注早期 ‘’ o内皮
素2t及乳酸过量产生 o提高脑组织 „×°含量 o对脑组
织起保护作用≈{  ∀脑缺血再灌注前后给予 Λ2׋°可
增加热休克蛋白 zsk‹≥°zsl表达 o减少迟发性损伤阶
段神经元细胞凋亡发生≈t  ∀ Λ2׋°还能通过清除自
由基 !抗脂质过氧化延缓或减轻脑组织缺血再灌注
损伤≈u  ∀上述实验均表明 Λ2׋°对缺血脑损伤有保
护作用 ∀本实验从小鼠脑缺血时脑组织内氨基酸变
化进一步说明 Λ2׋°的抗脑缺血作用 ∀
在脑缺血致脑损伤研究中 o一个共同趋势是脑
组织中 Š¯ ∏oŠ„…„ 含量均升高 o且 ∞„„ 升高幅度大
于 Œ„„≈|  o本实验中 o小鼠脑组织缺血 tu °¬±后 oŠ¯ ∏
含量较对照组升高约 y倍 oŠ„…„含量较对照组升高
约 w倍 o与前述结果一致 ∀目前 o银杏制剂广泛用于
治疗慢性脑血管疾病和卒中后遗症 ∀研究表明 o银
杏可降低大鼠脑缺血时脑组织 Š¯ ∏含量 o升高 Š„…„
含量 o使 Š¯ ∏rŠ„…„ 值明显降低≈ts  ∀本实验结果显
#uzv#
第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ w
„³µ¬¯oussw
示银杏明显降低 Š¯ ∏含量 o但对 Š„…„含量无明显影
响 ∀可能与实验模型不同有关 ∀v种剂量 Λ2׋°均
明显降低大鼠脑缺血时脑组织 Š¯ ∏含量 o高 !中剂量
Λ2׋°对 Š„…„含量变化无明显影响 ∀上述结果表
明 o与银杏相同 oΛ2׋°主要通过降低 Š¯ ∏合成和释
放起脑保护作用 ∀本实验观察到低剂量 Λ2׋°除降
低 Š¯ ∏含量 o还降低 Š„…„含量 o其机制尚有待于进
一步探讨 ∀
目前 o越来越多的研究者趋于用 Š¯ ∏rŠ„…„来表
现两者之间的动态平衡关系 ∀有研究者观察了新生
儿缺血缺氧脑病患者脑脊液 Š¯ ∏rŠ„…„与脑损伤关
系 o发现损伤越重 o比值越高≈tu  ∀本实验表明 o模型
组比值比对照组明显升高 ∀银杏和 v种剂量的 Λ2
׋°均能使比值明显下降 ∀
本研究结果表明 o银杏和左旋四氢巴马汀均能
降低脑缺血时小鼠脑组织 Š¯ ∏含量 o降低 Š¯ ∏rŠ„…„
比值 ∀这可能是银杏和左旋四氢巴马汀在脑缺血时
脑保护作用的机制之一 ∀为左旋四氢巴马汀用于临
床脑缺血治疗提供一定依据 ∀
≈参考文献 
≈t  蒋崇慧 o杨光田 o汤 彦 o等 q左旋四氢巴马汀在大鼠脑缺血2
再灌注时对神经元凋亡的影响 q中华急诊医学杂志 ousst ots
kyl }v{y q
≈u  刘家兰 o李德清 q左旋四氢巴马汀对大鼠和小鼠脑缺血再灌注
损伤的保护作用 q中国现代医学杂志 oussu otukt{l }w{ q
≈v  孟 刚 o陈志武 o马传庚 q芸香苷对小鼠脑缺血损伤作用的实
验研究 q中国药理学通报 ousss otykvl }vsx q
≈w  …¨ ª¯ ¼¨ ⁄ o • ¬¨¦«¨¯ „ o ∞µ°¬¶¦« „ q≥¬°³¯¨«¬ª«2³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§
¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¤±¤¯¼¶¬¶²©©µ¨¨ ³µ¬°¤µ¼ ¤°¬±² ¤¦¬§¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ¬±
µ¤·¶³¯¤¶°¤¤±§¦¬¶·¨µ±¤¯ ¦¨µ¨¥µ²¶³¬±¤¯ ©¯∏¬§q ϑ Χηροµατογρ Β ot||w o
yzx }t{x q
≈x  …¤µ·« „ o…¤·«o ‘¨º¨¯¯ ⁄ • q ≤²°¥¬±¤·¬²±·«¨µ¤³¼ ²© Ž2{st ¤±§
¤2³«¨ ±¼¯2·¨µ·¥∏·¼¯2±¬·µ²±¨ ±¨«¤±¦¨¶³µ²·¨¦·¬²±¶¤ª¤¬±¶·¬¶¦«¨ °¬¦ ±¨ ∏2
µ²±¤¯ §¤°¤ª¨ ¬± ²µª¤±²·¼³¬¦«¬³³²¦¤°³¤¯ ¶¯¬¦¨ ¦∏¯·∏µ¨¶q Εξπ Νευρολo
t||y otwtkul }vvs q
≈y  ≥«∏¤¬¥ „ oŒ­¤½  ≥ o ¬¼¤¶«¬·¤ ‹ o ετ αλqŠ„…„ ¤±§ Š¯ ∏·¤°¤·¨¯¨ √¨¯¶
¬± ·«¨ ¶∏¥¶·¤±·¬¤ ±¬ªµ¤ µ¨·¬¦∏¯¤·¬²± ©²¯ ²¯º¬±ª µ¨³¨ ¤·¬·¬√¨ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶2
¦«¨ °¬¤¬± ª¨µ¥¬¯¶q Εξπ Νευρολot||z otwzkul }vtt q
≈z  张 勇 qΧ2氨基丁酸与脑缺血损伤 q卒中与神经疾病 ot||| oy
k„’|l }vs q
≈{  汤 彦 o杨光田 o蒋崇慧 q颅痛定在大鼠急性全脑缺血再灌注
损伤中对一氧化氮 !内皮素2t及能量代谢的影响 q急诊医学 o
usss o|kyl }vz| q
≈|  …²ª¤¨µ·o≥¦«¨¯¯ µ¨⁄o ²²±¨ ± o ετ αλq ‘¨∏µ²¦«¨ °¬¦¤¯ ¦«¤±ª¨¶¤±§
¤¯¶¨µ⁄²³³¯ µ¨©¯²º°¨ ·µ¼¬±·«¨ ±¨§²·«¨ ¬¯±2t µ¤·°²§¨¯©²µ©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯
¬¶¦«¨ °¬¤q Βραιν Ρεσousss o{{zkul }uyy q
≈ts  胡 波 o梅元武 o孙圣刚 o等 q银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注
皮质内氨基酸动态平衡的影响 q卒中与神经疾病 ousst o|ktl }
t q
≈tt  陆中权 o张姿英 o林忠东 o等 q新生儿缺血缺氧性脑病脑脊液谷
氨酸和 Χ2氨基丁酸含量与脑损伤的关系 q温州医学院学报 o
t||| ou|kul }tsz q
Εφφεχτσ οφ Λ2τετραηψδροπαλµατινε ον χονχεντρατιονσ
οφ νευροτρανσµιττερ αµινο αχιδσιν µιχε ωιτη χερεβραλισχηεµια
‹„‘Š «²±ª2°¬¤²tou o‹∞‘Š ÷¬¤²2¬¬¤±ªoŒ„‘Š …²t o‹’˜ ±∏¤±t
kt . ∆επαρτµεντ οφ Χλινιχαλ Πηαρµαχψ, Τηε Σεχονδ Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ,
Χολλεγε οφ Μεδιχιναλ Σχιενχεσ , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtsss| , Χηινα ;
u . ∆επαρτµεντ οφ Βιοµεδιχαλ Ενγινεερινγ , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕετιϖε : ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·¶²© Λ2·¨·µ¤«¼§µ²³¤¯°¤·¬±¨ k Λ2׋°l²± ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²© ±¨ ∏µ²·µ¤±¶°¬·¨µ¤°¬±² ¤¦¬§¶¬±
°¬¦¨ º¬·«¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤¤±§·²§¬¶¦∏¶¶·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶²© Λ2׋°¬±·¼µ¨¤·¬±ª¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤q Μετηοδ : ¬¦¨ º µ¨¨ µ¤±§²°¯ ¼ §¬√¬§¨§¬±2
·²¶¬¬ªµ²∏³¶}¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤ªµ²∏³o Λ2׋°·µ¨¤·¨§ªµ²∏³k§²¶¨¶º µ¨¨ tw ou{ oxy °ª#®ªp t µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼l¤±§ Š¬±®ª² ¥¬¯²¥¤
¬¨·µ¤¦··µ¨¤·¨§ªµ²∏³q≤²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²© Š¯ ∏¤±§Š„…„ º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ‹°≤ q Ρεσυλτ : ≤²°³¤µ¨§º¬·«¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o Š¯ ∏¤±§Š„…„ ¬±
°¬¦¨ º¬·«¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤º µ¨¨ °∏¦««¬ª«¨µq׫¨ µ¤·¬²²© Š¯ ∏rŠ„…„ ¬±¦µ¨¤¶¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ q Λ2׋° °¤µ®¨ §¯¼ µ¨§∏¦¨§·«¨ ¦²±¦¨µ·µ¤·¬²±¶²©
Š¯∏¤±§·«¨ µ¤·¬²²© Š¯ ∏rŠ„…„ ¬± °¬¦¨ º¬·«¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤q Χονχλυσιον : ⁄¨ ¦µ¨¤¶¨ ¬± Š¯∏¦²±¦¨µ·µ¤·¬²± ¤±§µ¤·¬² ²© Š¯∏rŠ„…„ °¤¼ ¥¨
²±¨ ²©·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶²© Λ2׋°¬±·µ¨¤·¬±ª¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤q
[ Κεψ ωορδσ] Λ2·¨·µ¤«¼§µ²³¤¯°¤·¬±¨ ~ª¯∏·¤°¤·¨~Χ2¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§~¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤
≈责任编辑 古云侠 
#vzv#
第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ w
„³µ¬¯oussw