全 文 :川芎内酯 预处理对大鼠离体心脏缺血再
灌注所致血管内皮细胞损伤的保护作用
高 伟 o梁日欣 3 o肖永庆 o杨洪军
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要 目的 }观察川芎内酯 预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注所致血管内皮细胞损伤的保护作用 ∀方
法 }采用 ¤±ª¨ ±§²µ©©离体心脏灌流方法 o在恒温恒压条件下 o以 s1x °#°¬±p t的灌流速度给药 o剂量分别为 s1sx o
s1sux os1stu x ª#pt与 2灌流液同时灌流心脏 ts °¬±~全心停灌 vs °¬±o再灌 ys °¬±∀结果 }川芎内酯 预处理能
提高大鼠离体心脏停灌再灌期的冠脉流量 ~降低冠脉流出液中 2tΒ浓度和 ×÷
ury2¨·²2°ƒtΑ的比值 ~室性心动过
速k∂×l和心室颤动k∂ƒl的发生率降低 o∂× o∂ƒ持续时间缩短 ~心肌匀浆液乳酸脱氢酶 !丙二醛的含量降低 o超氧化
物歧化酶活性提高 ∀结论 }川芎内酯 预处理对大鼠离体心脏停灌再灌注损伤所致的血管内皮细胞损伤可能具有
保护作用 ∀
≈关键词 川芎内酯 ~心肌缺血再灌注 ~预处理 ~内皮细胞
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlt{2tww{2sw
≈收稿日期 ussx2su2uv
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kvsuztx{ul
≈通讯作者 3梁日欣 oר¯ }kstslywstwwtt2u|w{ o∞2°¤¬¯} ÷¬¤±ª
¼¤«²²q¦²°
血管内皮细胞具有多种生理功能 o参与机体的
凝血 !免疫 !物质转运和生物活性物质释放 ~同时也
是某些心脑血管疾病重要的病理基础 ~近年来 o随着
缺血性心脏病研究的深入 o对血管内皮细胞功能的
认识及其在缺血性心脏病中的重要地位 o越来越受
到广泛关注≈t ou ~预处理是指心肌经短暂缺血后 o可
增强对再次较长时间缺血的耐受性 o是一种内源性
的机体保护机制 o在缺血性心脏病中的临床意义已
被许多研究所证明≈v ~研究发现预处理心肌保护与
其保护冠脉内皮密切相关 o并推测预处理的心肌保
护可能继发于血管内皮细胞的保护≈w ∀川芎内酯
kw ox2二氢2v2丁烯基苯肽l是从川芎的主要活性部位
中分离鉴定了的内酯类化学成分≈x ∀研究表明川芎
内酯 预处理对心肌缺血再灌注损伤具有保护作
用≈y ∀本项研究进一步观察了对大鼠离体心脏缺血
再灌注所致内皮细胞损伤的保护作用 ∀
1 材料
111 动物
雄性 ≥⁄大鼠 o体重 uxs ∗ vss ªo由北京维通利
华实验动物技术有限公司提供 o合格证号 }≥≤÷
k京lussu2sssv ∀
112 药物与试剂
川芎内酯 由中国中医研究院中药研究所化
学室提供 ~⁄ 试剂盒 o批号 usswsuuw ~ ⁄ 试剂
盒 o批号 usswsxu{ ~≥⁄试剂盒 o批号 usswsysv ~考马
斯亮蓝蛋白测定试剂盒 o批号 usswsys{ ~均购自南京
建成生物工程研究所 ∀
113 仪器
¤±ª¨±§²µ©©离体心脏灌流系统 o型号 }∞ p wuxs
p ssu oƒxxssu蠕动泵k¬¯¶²± ¬±¬³∏¯¶vl均产自 °¤±2
¤¯¥公司 o西班牙 ~ °txs 型多导生理记录分析系
统 o⁄tss≤ 通用放大器 otss≤ 心电放大器 o均产自
°≤公司 o美国 ~⁄w p s1{型离心机 o北京医用
离心机厂 ~玻璃匀浆器 o• ∞×≥≤∞׃≤ o美
国 ~≥ p v型半自动生化分析仪 o北京中生生物工程
高技术公司 ∀
2 方法
211 动物模型≈z
实验动物用 v h戊巴比妥钠麻醉kvs °ª#®ªpt o
¬³l os1u h肝素 u °ªotx °¬±后固定在手术台上 ~打
开胸腔后分离心脏 o在主动脉距其起始部 w ∗ x °°
处迅速将主动脉和其他血管一并剪断 o立即置于盛
有 w ε 冷灌流液的培养皿中 o洗净残血 o在液面下找
出主动脉断端 o迅速套入主动脉套管并固定 ∀立即
#{wwt#
第 vs卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ t{
≥¨ ³·¨°¥¨µoussx
灌注通有 |x h的 u和 x h ≤u 混合气体的 2 液
k°°²¯#pt }¤≤¯ tt{ o≤¯ w1z o≤¤≤¯ u u1x o¤u≤v ux o
u°w t1u oª≥w#zu t1u o¯ ∏¦²¶¨ tt ~预先通气
ts °¬±o气体流量为 t1x # °¬±p t o灌流液的 ³ 为
z1wl ∀剪去心脏周围附着的组织 o并于肺动脉起始
部与右室圆锥部之间剪一小口 o使之冠脉回流液流
出 ~维持灌注液高度在 zs ¦°左右 o灌流液温度为 vz
ε ∀
212 实验分组
大鼠 w{只 o随机分为 y组 o每组 {只 }≠空白对
照组 }正常 2液灌流 tss °¬±~ 单纯缺血再灌组
kr 组l }正常 2液灌流 ts °¬±o然后全心停灌 vs
°¬±o再灌 ys °¬±~≈预处理组k°组l }停灌 x °¬±o再
灌 x °¬±o然后同 ~…川芎内酯 小剂量组 }s1stu x
ª#pt的川芎内酯 与 2灌流液同时灌流心脏 ts
°¬±o然后同 ~ 川芎内酯 中剂量组 }s1sux ª#
pt o余同 …~¡川芎内酯 大剂量组 }s1sx ª#pt o
余同…∀
213 观察指标
21311 冠脉流量 停灌前 o再灌后 x otx ovs oys °¬±
x个时间点冠脉流量 ∀
21312 ∂×和 ∂ƒ发生率 !持续时间 将两根电极分
别插在心尖部k n l和主动脉根部k p l o记录心电图
k∞≤l o观察再灌期 ∂ƒ o∂× 的发生率和持续时间 ~
记录于 °txs多导生理记录系统 ∀
21313 冠脉流出液中 2y o≤2t o׃Αo2tΒ及
×÷
ury2¨·²2°ƒtΑ水平 收集再灌末期冠脉流出
液 o测 2y o≤2t o׃Αo2tΒ及 ×÷
u 与 y2¨·²2
°ƒtΑ的含量 ∀
21314 心肌匀浆液乳酸脱氢酶k⁄l !丙二醛
k⁄l !超氧化物歧化酶k≥⁄l含量 实验结束后
立即取下心脏 o用滤纸吸干水分 o取心尖组织 s1u ªo
制成 ts h心肌匀浆 o测 ⁄ o ⁄含量和 ≥⁄的活
性 ∀
214 统计分析
应用 ≥°≥≥tt1s统计软件 o数据以 cξ ? σ表示 ou
组间的比较使用独立样本 τ检验 ~多组间比较使用
单因素方差分析 ~多组间不同时间点的比较使用重
复测量设计的方差分析 ~∂× o∂ƒ的发生率比较使用
费歇尔精确卡方检验 ∀
3 结果
311 对冠脉流量的影响
各组心脏再灌注期冠脉流量的变化见表 t ∀
r组缺血再灌注后 o冠脉流量明显下降 o与对照组
相比 o有显著性差异 ∀川芎内酯 大剂量组使再灌
注期内的冠脉流量明显增加 o与 r 组相比 o有显著
性差异k Π s1stl ∀
312 对再灌期心律失常的影响
表 t 川芎内酯 预处理对缺血再灌注后冠脉流量的影响kcξ ? σ, ν {l
组别
剂量
rª#pt
平衡期冠脉流量
r°#°¬±pt
再灌期冠脉流量r°#°¬±pt
x °¬± tx °¬± vs °¬± ys °¬±
空白组 p z qw ? s qw y qx ? s qw y qt ? s qx x q{ ? s qy x qu ? s qz
r 组 p z qy ? s qw u qy ? s qyvl v qw ? s qzvl v qw ? s qyvl u q| ? s qwvl
°组 p z qz ? s qy w qu ? t quxl w qw ? s qz w qv ? s qy v qz ? s qz
川芎内酯 s qstu x z qy ? s qy v qz ? s q| w qv ? t qt w qx ? t qt v q| ? s q|
s qsux z qz ? s qw v q| ? t qvwl w qz ? t qvwl w qx ? t qw v q| ? t qt
s qsx z qy ? s qz w qz ? t quyl x qs ? t quxl x qu ? t qtxl w qz ? t qsyl
注 }与空白组比较tl Π s1sx oul Π s1st ovl Π s1sst ~与 r 组比较wl Π s1sx oxl Π s1st oyl Π s1sstk表 u ∗ x同l
31211 对 ∂× o∂ƒ发生率的影响 川芎内酯 大剂
量组明显降低再灌注期 ∂× o∂ƒ 发生率 o中 !小剂量
组对其没有明显影响k表 ul ∀
31212 对再灌期 ∂× o∂ƒ的持续时间的影响 川芎
内酯 v个剂量组均使 ∂× o∂ƒ的持续时间缩短 o与
r 组相比 o有显著性差异k表 ul ∀
313 对冠脉流出液中 2y o≤2t o׃Αo2tΒ的
影响
r 组冠脉流出液中 2tΒ的含量明显提高 o与
表 u 对再灌期 ∂× o∂ƒ的持续时间和发生率
的影响kcξ ? σ, ν {l
组别 剂量rª#pt 持续时间r°¬± 发生率r h
空白组 p p p
r 组 p uv qxt ? v q||vl tssvl
°组 p ts qs| ? v qxvwl {z qx
川芎内酯 s qstu x z qxs ? t qytwl {z qx
s qsux t qyw ? s qyzxl yu qx
s qsx t qsy ? s qzsxl vz qxwl
空白组比较 o有显著性差异k Π s1stl ~川芎内酯
#|wwt#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ t{
≥¨ ³·¨°¥¨µoussx
大剂量组降低 2tΒ的含量 o与 r 组相比 o有显著
性差异 k Π s1sxl o但各给药组对 2y o≤2t o
׃Α均无明显影响k表 vl ∀
314 对冠脉流出液中 ×÷
ury2¨·²2°ƒtΑ水平的影
响
r 组能显著提高再灌期冠脉流出液中的
×÷
u与 y2¨·²2°ƒtΑ的比值 o与空白组比较 o有显
著差异k Π s1sstl ~川芎内酯 各剂量组均能使
冠脉流出液中的 ×÷
u 与 y2¨·²2°ƒtΑ的比值水平
显著下降 o与 r 组相比有显著性差异 k Π
s1stl ∀k表 wl ∀
315 对心肌匀浆 ⁄ o ⁄和 ≥⁄的影响
r 组能显著增加心肌匀浆液中 ⁄ o⁄ 含
量 o降低 ≥⁄活性 o与空白组比较 oΠ s1sst ~川芎
内酯 v个剂量组均降低心肌匀浆 ⁄含量 o增加
≥⁄活性 o与 r 相比 o有显著性差异 ∀大剂量组使
⁄含量降低 o与 r 相比 o有显著性差异k表 xl ∀
4 讨论
表 v 对再灌期冠脉流出液中内皮细胞分泌的细胞因子浓度的影响kcξ ? σ, ν { l
组别 剂量rª#pt 2yr³ª#°pt ≤2tr±ª#°pt ׃Αr³ª#°pt 2tΒr³ª#°pt
空白组 p vs qsy ? { q{x wu q{{ ? v quv tu qs| ? y qsy vt qs| ? ts qvu
r 组 p uv qty ? y qzt wy qs{ ? u qy{ ty qwy ? z qwv zs qsy ? vt qsyul
°组 p uu quz ? u qwz wx qvs ? u quv tu qvu ? y q|{ yu q{w ? ts q{x
川芎内酯 s qstu x uv qw| ? u quz wx qux ? v qx| ty qv| ? v qy| y| qvw ? tu qvv
s qsux u{ qtw ? x qxs wv q|w ? u qtt tx qt| ? y quy wz qtw ? tv qu|wl
s qsx u| qsz ? z qzv wv quw ? v qsu tv q|t ? x qzx vx q{w ? tu q|yxl
表 w 对再灌期冠脉流出液中 ×÷
u和 y p ¨·²p °ƒt±活性物质的影响kcξ ? σ, ν {l
组别 剂量rª#pt ×÷
ur³ª#°pt y2¨·²2°ƒtΑr³ª#°pt ×÷
ury2¨·²2°ƒtΑ
空白组 p { qx{ ? t qsv u{v qw| ? {t qzv s qsvu ? s qssy
r 组 p tw q{u ? u q{tul tuz q{w ? vy qs{ul s qtuw ? s qswwvl
°组 p tt qs| ? w q{w usu qzw ? {s qwx s qsys ? s qsu{wl
川芎内酯 s qstu x tv q|v ? w qwv ux| q{w ? uvy qvs s qszu ? s qsxywl
s qsux tt qy| ? w qwu ust q|v ? tvu qyw s qsxv ? s qsxsxl
s qsx ts qys ? w qsz usz qux ? yy qwy s qsxt ? s qstxxl
表 x 对心肌匀浆液中 ⁄ o⁄和 ≥⁄的影响kcξ ? σ, ν {l
组别 剂量rª#pt ⁄r#ªp t ⁄r±°²¯#°ªpt ≥⁄r#°ªpt
空白组 p t xs| qs ? usv qx y qv ? s qy tsy qy ? tw q|
r 组 p u vz{ qs ? t|y qvvl tu qt ? t qvvl x| qy ? t{ qzvl
°组 p t zz| qy ? wuv qzwl | qv ? u qxwl y{ qx ? tw qv
川芎内酯 s qstu x u suw qv ? wyz q{ z q{ ? t qwxl zx q| ? { qz
s qsux t |wx qs ? w{u qywl z qv ? u quyl {| qx ? uv q|wl
s qsx t yy| qw ? t|u qxyl y q| ? s q{yl |u qv ? t| qsxl
预处理能显著减轻缺血再灌注引起的血管内皮
损伤 o表现为改善血管内皮依赖性舒张功能 ∀国内
外学者在不同动物模型均已证明缺血预处理显著改
善受损血管乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应 o
对心功能的改善和减少乳酸脱氢酶渗出以及保护冠
脉内皮密切相关≈t o{ ∀因此 o推测缺血预处理的血
管内皮保护可能是保护缺血心脏的机制之一 ∀本实
验中 o使用川芎内酯 模拟缺血预处理 o结果发现
川芎内酯 预处理不仅降低 ∂× o∂ƒ 发生率 o缩短
∂× o∂ƒ的持续时间 o使 ⁄和 ⁄含量明显下降 o
≥⁄活性增强 o同时明显提高冠脉流量 o表明了川芎
内酯 预处理对心脏的保护作用 ∀
研究认为 }引起缺血再灌注损伤的因素不仅与
钙超载 !氧自由基有关 o内皮细胞自稳态失调 o也发
挥重要作用≈| ~缺血再灌注导致内皮细胞功能受损 o
内皮细胞丧失产生具有生物活性物质 o舒血管活性
物质 °u和缩血管活性物质 ×÷u释放失平衡是其
机制之一≈ts o心肌缺血发生时 o前列环素生成和释
放减少 o×÷u 生成和释放增加 o ×÷
ury2¨·²2°ƒtΑ
比值上升 o血管舒张与收缩平衡失调 ~本研究观察
到 }川芎内酯 预处理能使上升的 ×÷
ury2¨·²2
°ƒtΑ比值下降 ~结果提示川芎内酯 预处理可能通
过该途径调节血管舒张与收缩平衡 o对血管内皮细
胞产生潜在的保护作用 ∀
#sxwt#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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缺血再灌注损伤是许多心血管疾病的共同病理
过程 ∀充分的证据表明 }内皮是缺血再灌注损伤的
关键部位 ~细胞因子在缺血再灌注过程中的产生与
内皮细胞功能下降有直接的关系≈ts o׃Αo2tΒo
2yΒ在内皮细胞 !平滑肌细胞均有产生≈ts o并显著
拮抗内皮所产生的舒张因子的功能 o与内皮产生的
≤2t相互作用 o共同参与缺血再灌注损伤过程 ∀
本实验中川芎内酯 大剂量组可以明显降低再灌
期浓度 ~其结果显示川芎内酯 预处理可能减少血
管内皮细胞 2tΒ的产生 o对血管内皮细胞产生一
定的保护作用 ∀
≈参考文献
≈t 侯文明 o赵 榕 o郭兰敏 q内皮细胞与预处理 q国外医学#心
血管疾病分册 ousss ouzkwl }usu q
≈u 刘群峰 o马 红 q血管内皮细胞与心血管疾病的关系及其研
究进展 q心脏杂志 ousss otukul }tuy q
≈v 陈长志 o赵晓刚 q心肌保护的进展 q国外医学#心血管疾病分
册 oussv ovskvl }tvt q
≈w «¤µ¥¤±§¤ o°¨ ·¨µ¶ o • ¤¯·²±
o ετ αλ. ¶¦«¨ °¬¦³µ¨¦²±§¬·¬²±2
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¬±ª¬¶¦«°¬¤2µ¨³¨µ©∏¶∏¬± ¬± «∏°¤± ιν ϖιϖο q Χιρχυλατιον , usst otsv
ktul }tyuw q
≈x 肖永庆 o李 丽 o游小琳 o等 q川芎化学成分研究 q中国中药
杂志 oussu ouzkzl }xt| q
≈y 梁日欣 o肖永庆 o高 伟 q川芎内酯 预处理对大鼠离体心
脏缺血再灌注损伤的保护作用 q中药药理与临床 oussw ous
kyl }t q
≈z 徐叔云 o卞如濂 o陈 修 q药理实验方法学 q第三版 q北京 }
人民卫生出版社 oussu q|{y q
≈{ ²¶¤±² o¤·∏¯ ²¯ ⁄o°¤ª¯¬¤µ² ° q ¼²¦¤µ§¬¤¯ oª¨ ±¨ µ¤¯ ¤±§√¤¶¦∏¯¤µ
¤¶³¨¦·¶²©¬¶¦«¨ °¬¦³µ¨¦²±§¬·¬²±¬±ªq Λιφε Σχι ,t||y ox| }tt{x q
≈| 吴立玲 q心血管病理生理学 q北京 }北京医科大学出版社 o
usss qu| q
≈ts 陈 修 o陈维洲 o曾贵云 q心血管药理学 q第三版 q北京 }人
民卫生出版社 oussu qt|w otzs otxx q
Προτεχτιϖε εφφεχτ οφ τηε πρετρεατµεντ ωιτη Χηυανξιονγ2πατηαλιδε Α ον τηε ϖασχυλαρ
ενδοτηελιαλ χελλσιµ παιρεδ βψτηεισχηεµια ανδ ρεπερφυσιον ιν ισολατεδ ρατσ ηεαρτσ
• ¬¨o ¬2¬¬±o ÷ ≠²±ª2 ¬´±ªo ≠ ²±ª2∏±
(Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα , Χηινα Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ׫¨ ¤¬° ²©·«¬¶¶·∏§¼ º¤¶·²¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²©≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ ²±·«¨ ¬±∏µ¼ ²© ±¨§²·«¨ 2
¬¯¤¯ ¦¨¯¯ ¬±§∏¦¨§¥¼¬¶¦«¨ °¬¤¤±§µ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±¬¶²¯¤·¨§µ¤·«¨¤µ·¶q Μετηοδ : ׫¨ ¬¶²¯¤·¨§µ¤·«¨¤µ·¶º µ¨¨ ³¨µ©∏¶¨§∏±§¨µ¦²±¶·¤±·³µ¨¶¶∏µ¨ º¬·«
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³¤·«¤¯¬§¨ ³µ²§∏¦¨§¤µ¨§∏¦·¬²±¬±·«¨ ¬±¦¬§¨±¦¨ ²©µ¨³¨µ©∏¶¬²±2¬±§∏¦¨§√ ±¨·µ¬¦∏¯¤µ©¬¥µ¬¯¯¤·¬²± k∂ƒl ¤±§√ ±¨·µ¬¦∏¯¤µ·¤¦«¼¦¤µ§¬¤k∂×l q°µ¨2
·µ¨¤·° ±¨·²©·«¨ «¨ ¤µ·¶º¬·««¬ª«§²¶¨ ²© ≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ ks1sx °ª#°ptl ³µ¬²µ·²·«¨ ¬¶¦«¨ °¬¤¤±§µ¨³¨µ©∏¶¬²±oµ¨§∏¦¨§·«¨ ¬±¦¬2
§¨ ±¦¨ ²©µ¨³¨µ©∏¶¬²±2¬±§∏¦¨§ ∂ƒ ¤±§ ∂× ·²vz1x h ¤¶¦²°³¤µ¨§º¬·«±²±2³µ¨·µ¨¤·¨§¦²±·µ²¯ ªµ²∏³k Π s1sxl q׫¨ §∏µ¤·¬²± ²©²¦¦∏µµ¨±¦¨ ²©
∂ƒ ¤±§ ∂× ¬±·«¨ ªµ²∏³³µ¨·µ¨¤·¨§º¬·«≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ ¤·§²¶¤ª¨¶²©s1stu x °ª#°pt os1sux °ª#°pt ¤±§s1sx °ª#°pt º µ¨¨
kz1xs ? t1ytl okt1yw ? s1yzl ¤±§kt1sy ? s1zsl °¬± µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ oº«¬¦« º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¶«²µ·¨µ·«¤± kuv1xt ? v1||l °¬±¬± ±²±2³µ¨2
·µ¨¤·¨§¦²±·µ²¯ ªµ²∏³~s1sx °ª#°pt ²© ≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§¦²µ²±¤µ¼ ©¯²º¬± ¦²°³¤µ¬¶²± º¬·«·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³q׫¨ ¦²±·¨±·²©
≥⁄¬±·«¨ ªµ²∏³³µ¨·µ¨¤·¨§º¬·«s1sx °ª#°pt ²© ≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ º¤¶kx|1y ? t{1zl #°ªp t o¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯²º µ¨·«¤± k|u1v ?
t|1sl #°ªp t¬±·«¨ ±²±2³µ¨·µ¨¤·¨§ªµ²∏³q׫¨ ¦²±·¨±·¶²©⁄ ¤±§ ⁄ º µ¨¨ ku vz{1s ? t|y1vl #ªp t ¤±§ktu1t ? t1vl ±°²¯#°ªp t¬±
·«¨ ±²±2³µ¨·µ¨¤·¨§ªµ²∏³oº«¬¦« º µ¨¨ °∏¦««¬ª«¨µ·«¤±·«¨ √¤¯∏¨¶²©kt yy|1w ? t|u1xl #ªpt ¤±§ky1| ? s1{l ±°²¯#°ªp t ¬±·«¨ ªµ²∏³
³µ¨·µ¨¤·¨§º¬·« ≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q± ¤§§¬·¬²±o ±¨½¼° ¬¨°°∏±²¤¶¶¤¼¶¶«²º §¨¤± §¨¦µ¨¤¶¨§³µ²§∏¦·¬²± ²©2tΒ¤±§·«¨ µ¤·¬²
²©×÷
ury2¨·²2°ƒtΑq Χονχλυσιον : ∏µµ¨¶∏¯·¶¶«²º·«¤·¦«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ ³µ¨·µ¨¤·° ±¨·¦¤± ³µ²·¨¦··«¨ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ©∏±¦·¬²±©µ²°·«¨
¬±∏µ¼ ¦¤∏¶¨§¥¼¬¶¦«¨ °¬¤¤±§µ¨³¨µ©∏¶¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ≤«∏¤±¬¬²±ª2³¤·«¤¯¬§¨ ~ °¼²¦¤µ§¬¤¯ µ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±∏µ¼~³µ¨¦²±§¬·¬²±¬±ª~ ±¨§²·«¨ ¬¯∏° ¦¨¯¯
≈责任编辑 方文贤
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