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Effect of QianLie HuiChun Capsular on Fas Expression and Cell Apoptosis of Prostate Gland Tissue in Rat

前列回春对实验性大鼠前列腺组织Fas表达及细胞凋亡的影响



全 文 :Εφφεχτ οφ Σηυ ∆ι2ηυανγ ον τηε Τρανσµιττερ ανδ
Ρεχεπτορ οφ Αµινο Αχιδ ιν Βραιν ανδ Λεαρνινγ ανδ Μεµ ορψ οφ ∆εµεντια Μοδελ
≤ ˜Œ ≠±ªt o ≠ „‘«¨ ±ª2«∏¤u o ‹ ’ ˜ ≥«¬2¯¬¤±ªt o≤ ‹ „‘Š «¤±ª2©∏u
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²© ≥‹ ˜2⁄¬«∏¤±ª²±·«¨ ©∏±¦·¬²± ²©¯¨ ¤µ±¬±ª¤±§ °¨°²µ¼ q Μετηοδ : ’±·«¨
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[ Κεψ ωορδσ] ≥«∏ ⁄¬2«∏¤±ª~¯¨ ¤µ±¬±ª¤±§ °¨°²µ¼ ~§¨ ° ±¨·¬¤¤±¬°¤¯ °²§¨¯~ Š¯ ∏o Š„…„
≈责任编辑 古云霞 
前列回春对实验性大鼠
前列腺组织 ƒ¤¶表达及细胞凋亡的影响
段登志t o于 玲u o张鸿青v o杨玉琪t o陈黎明t o段呈玉t o曹继刚w
k t q云南省中医中药研究所 o云南 昆明 yxsuuv ~u q云南省疾病预防控制中心 o云南 昆明 yxsstt ~
v q昆明市第一人民医院 o云南 昆明 yxsstt ~ w q湖北中医学院 o湖北 武汉 wvssytl
≈摘要  目的 }探讨前列回春对实验性大鼠前列腺组织 ƒ¤¶表达及细胞凋亡的影响 ∀方法 }采用大鼠去势后注
射丙酸睾酮引起前列腺增生法造模 o灌胃给药 vs §后 o处死大鼠取前列腺组织并称湿重 o用免疫组化方法检测前列
腺组织中 ƒ¤¶阳性细胞的表达率 o用流式细胞术检测细胞凋亡率和观察细胞凋亡峰 ∀结果 }前列回春各组前列腺
组织湿重与模型组比较差异非常显著k Π s qstl ~前列回春各组和雌二醇组前列腺组织中 ƒ¤¶表达率明显高于模
型组k Π s qsx oΠ s qstl ~与正常组和模型组比较 o前列回春和雌二醇组的细胞凋亡率明显提高 o差异有显著性
k Π s qstl ∀结论 }前列回春可增加实验性大鼠前列腺组织中 ƒ¤¶的表达 o促进大鼠前列腺组织细胞凋亡 o降低大
鼠前列腺组织的重量 o而且呈明显量效关系 o表明前列回春可抑制前列腺增生 ∀
≈关键词  前列回春 ~ƒ¤¶~前列腺增生 ~细胞凋亡 ~凋亡峰
≈中图分类号  • u{v ~• u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvls|2s{yy2sw
前列回春是用于治疗慢性前列腺炎的中药复方
制剂 o在临床上已使用多年 o笔者曾做临床观察 o该
药不仅对慢性前列腺炎有明显疗效 o而且对前列腺
≈收稿日期  ussv2su2uy
≈通讯作者  ר¯ }ks{ztlyyz||z|
增生k…°‹l也有良好效果≈t  ∀ …°‹ 为老年男性的
常见病 o发病率较高 o至今为止 o…°‹ 的发病机制尚
未完全阐明 o但细胞凋亡在 …°‹ 的发生发展过程中
的作用已为人们初步认识≈u ov  o细胞凋亡减少可导
致前列腺增生和前列腺癌的发生≈w  o而 ƒ¤¶是与细
胞凋亡密切相关的膜受体蛋白 ∀因此 o本研究用前
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第 u{卷第 |期
ussv年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv
列回春对实验性前列腺增生大鼠进行观察 o通过称
取前列腺组织湿重 o检测前列腺组织 ƒ¤¶的表达和
细胞凋亡率 o探索前列回春的抗前列腺增生作用 o为
增加该药的适应症 o扩大治疗范围 o作为新药的二次
开发奠定基础 ∀现报道如下 ∀
1 材料和方法
1 q1 动物
健康 v月龄 ≥⁄大鼠 o雄性 o体重 uvs ∗ uzs ªo购
自华中科技大学同济医学院实验动物学部 o合格证
号 }医动字第 t|2sxv ∀
1 q2 药物
前列回春药粉k药物由虎杖 !车前子 !白花蛇舌
草 !茯苓 ! 蓄 !穿山甲 !王不留行 !蜈蚣 !黄芪 !鹿茸 !
菟丝子等组成 o按文献≈x 制备l o由吉林省东丰药业
股份有限公司提供 ~丙酸睾酮注射液 oux ª#pt o上
海第九制药厂生产 o批号 usstszsu ~苯甲酸雌二醇
注射液 ot ª# pt o天津人民制药厂生产 o批号
usstsyux ∀
1 q3 主要仪器和试剂
流式细胞仪 }ƒ„≤≥≤¤¯¬¥∏µk…∞≤ × ’‘ ⁄Œ≤ŽŒ‘2
≥’‘o美国l ~碘化丙啶k°Œl o购自 …⁄公司 ~¨¬·½病
理切片机 o德国莱卡公司生产 ~‹°Œ„≥2tsss病理凝
胶图像分析系统 o中国产 ~…÷ys2vuƒ…2∞st荧光显微
镜 o日本产 ~ƒ¤¶免疫组化染色试剂盒 o批号
ussts{ts o粘片剂 „°∞≥ os qt °²¯ #pt °…≥k³‹
z qu ∗ z qwl o⁄„…显色试剂盒 o批号 ussts{su o均购
自武汉博士德生物工程有限公司 ∀
1 q4 分组及处理
大鼠随机分为 y组 o每组 ts只 o即正常组 !模型
组 !雌二醇组 !前列回春低 !中 !高剂量组 o除正常组
外 o其他 x 组采用丙酸睾酮引起大鼠前列腺增生
法≈y 造模 o即每只大鼠腹腔注射戊巴比妥钠 wx °ª#
®ªp t麻醉后 o在无菌操作下 o经阴囊摘除双侧睾丸 oz
§后 o每只大鼠每日皮下注射丙酸睾酮 w °ª#®ªp t ox
组中除模型组外 o其他 w组同时给药 o阳性对照组皮
下注射苯甲酸雌二醇 u qx °ª#®ªp t o前列回春低 !
中 !高剂量组按每公斤体重 wss o{ss ot yss ª#us
p t的比例灌胃给药k即用前列回春药粉加蒸馏水兑
成等容积混悬液 o灌药时摇匀l o均为每日 t次 o正常
组 !模型组同时灌胃给予等容积蒸馏水 o各组大鼠在
实验期间按组分笼饲养 o自由进食 !饮水 o于给药后
vs §时分别处死大鼠 o仔细分离摘除各叶前列腺组
织称取湿重 o放入 zs h乙醇中固定待检 ∀
1 q5 观察指标和测定方法
1 q5 q1 称取大鼠体重 !前列腺组织湿重 !计算前列
腺指数 ∀
前列腺指数 €前列腺湿重 Α大鼠体重
1 q5 q2 前列腺组织中 ƒ¤¶表达的检测 将固定的
前列腺组织石腊包埋 ow Λ°切片 o采用免疫组化染
色法检测 ∀参照 ƒ¤¶免疫组化试剂盒程序进行 o具
体步骤如下 }≠ 将制好的切片用 „°∞≥防脱片剂处
理 o捞片后置烤箱中 ys ε vs ∗ ys °¬±~将切片脱
蜡至水 ~≈ v h ‹u’u室温孵育 ts °¬±o以消除内源性
过氧化物酶的活性 o蒸馏水洗 u °¬± ≅ v次 ~…滴加
复合消化液 o室温 ts °¬±o蒸馏水洗 u °¬± ≅ v次 ~ 
滴加正常山羊血清 o在室温中保持 ts °¬±o甩去多余
液体 o不洗 ~¡滴加兔抗 ƒ¤¶蛋的抗体 o室温中置 |s
°¬±o用 s qt °²¯#p t °…≥洗 u °¬± ≅ v次 ~¢滴加生
物素化山羊抗兔 ŒªŠ us ∗ vz ε us °¬±os qt °²¯ #
pt °…≥洗 u °¬± ≅ v次 ~£滴加试剂 ≥„…≤ ous ∗ vz
ε us °¬±os qt °²¯#pt °…≥洗 x °¬± ≅ w次 ~¤使用
⁄„…显色试剂盒显色 o取 t °蒸馏水 o加试剂盒中
„ o…o≤ 试剂各 t滴 o混匀后加至切片 o镜下控制反应
时间 ~¥苏木素轻度复染 o脱水 o透明 o封片 o显微镜
观察阳性细胞比例 o阳性细胞计数采用医学真彩色
计算机图象全自动分析处理系统k‹°Œ„≥2tsss型l
观察计算阳性细胞 o显微镜下胞浆或胞膜呈棕黄色
颗粒者为阳性细胞 o每张切片中随机选择 ts 个视
野 o数据转换 o计算 ƒ¤¶的吸光度 o然后进行数据处
理 o计算平均吸光度 ∀
1 q5 q3 前列腺组织细胞凋亡的检测 取出前列腺
组织 o在 w ε 条件下 o用锋利小剪刀剪碎组织 o放在
tss目筛网上 o用弯眼科镊子搓 o一边搓 o一边用
°…≥冲洗 o细胞即随 °…≥ 液流入下面烧杯中 o将细
胞悬液倒入试管 o离心 t sss µ#°¬±p t ots °¬±o弃上
清 o用 °…≥液冲洗吹打沉淀 o再离心 o连续 v次 o弃上
清 o调细胞浓度为 tsx ∗ tsy个r°o加 °…≥ s qx °o
用碘化丙啶k°Œl一步染色法 ∀内含 }°Œ xs ˏktss
°ª#ptl o• ±¤¶¨ ts ˏkx Λª#p tl os qt h ×µ¬·²±÷ p
tss os qt °°²¯ #pt ∞⁄× „ o在室温下避光染色 vs
°¬±以上 o上机前用 vss目筛网过滤 o用 ƒ„≤≥ ≤¤¯2
¬¥∏µ流式细胞仪的 ²§¬©¬·× 分析软件检测各周期
细胞指数 o每次测 t万个细胞 o直方图中 ⁄‘„ 的亚
二倍体峰即凋亡峰 ∀
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第 u{卷第 |期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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1 q6 数据处理
数据处理均以 ξ ? σ表示 o并进行方差分析 o方
差不齐时用秩和检验 ∀用华西医科大学主编的5中
国医学百科全书#医学统计学6统计软件包k第二版l
进行统计学分析 ∀
2 结果
2 q1 前列回春对实验性大鼠前列腺重量的影响
正常组前列腺湿重较轻 o模型组较重 o各组大鼠
体重 !前列腺湿重及前列腺指数见表 t ∀
表 t 各实验组大鼠体重 !前列腺湿重和前列腺指数比较k ξ ? σoν € tsl
组 别 剂量r°ª#®ªp t 大鼠体重rª 前列腺湿重r°ª 前列腺指数r°ª#ªp t
正常对照组 等容积 vwz qt ? uu qxz {zt ? tsv qsul u qxv ? s qwtul
模型对照组 等容积 vvy q| ? uz qzt tx{| ? t|| qytl w qzw ? s qy{tl
雌二醇组 u qx vu| qv ? t{ q|u tsz{ ? tuw qyt oul v qu{ ? s qv|t oul
前列低剂量组 wss vvt qt ? uw quu tuzv ? t{u qut ou ovl v q{y ? s qxzt ou ovl
前列中剂量组 {ss vu{ q| ? uw qyz tt{s ? tvz qwt oul v qyu ? s qxzt oul
前列高剂量组 t yss vuz q| ? uu qxw tszu ? |{ qst oul v qu{ ? s qvzt oul
注 }与正常对照组比较 tl Π s qst 与模型对照组比较 ul Π s qst 与雌二醇组比较 vl Π s qsx
2 q2 前列回春对实验性大鼠前列腺组织 ƒ¤¶表达
的影响
结果见表 u ∀
表 u 各实验组大鼠前列腺组织中
ƒ¤¶的表达率比较k ξ ? σ, ν € tsl
组 别 剂量r°ª#®ªp t ƒ¤¶表达率r h
正常对照组 等容积 ty q{| ? w qz|wl
模型对照组 等容积 | quw ? v qw|ul
雌二醇组 u qx t{ qvy ? x qvvwl
前列低剂量组 wss tv qx| ? u qz|vl
前列中剂量组 {ss t| qsv ? x qzzwl
前列高剂量组 t yss uv quw ? x qxtt owl
注 }与正常对照组比较 tl Π s qsx ul Π s qst 与模型对照
组比较 vl Π s qsx wl Π s qst
2 q3 前列回春对实验性大鼠前列腺组织细胞凋亡
的影响
前列回春各剂量组对实验性大鼠前列腺组织细
胞凋亡率的影响结果见表 v ∀
表 v 各实验组大鼠前列腺组织
细胞凋亡率比较k ξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量r°ª#®ªp t 细胞凋亡率r h
正常对照组 等容积 y qtw ? u qstvl
模型对照组 等容积 v quw ? s q{ztl
雌二醇组 u qx ts qzy ? u q|vu ovl
前列低剂量组 wss ts qxz ? u q|yu ovl
前列中剂量组 {ss tw qvz ? v qwzu ov owl
前列高剂量组 t yss tw qzt ? v qutu ov owl
注 }与正常对照组比较 tl Π s qsx ul Π s qst 与模型对照组
比较 vl Π s qst 与雌二醇组比较 wl Π s qst
从直方图中k图略l可见各组的凋亡峰也有明显
的差别 o前列回春中 !高剂量组的凋亡峰较高 o而模
型组和正常组的则较低 ∀
3 讨论
前列回春虽为治疗慢性前列腺炎而设 o但笔者
从祖国医学理论探讨 …°‹ 的病因病理及前列回春
的组方来看 o…°‹ 属中医癃闭 !淋证 ! 瘕等范畴 o患
者年龄较大 o年长者多肾气亏虚 !肾阳不足 !膀胱气
化不利 !腑气阻滞不畅 !气滞则血瘀 o日久而成 块 o
且肾虚易致湿热痰浊之邪内结下焦 o更使膀胱气化
失调 o致小便不畅 o淋漓不尽 o排尿困难 o甚至尿闭
等 o属于本虚标实之证 ∀前列回春有以下功效 o≠清
热除湿 o利尿通淋 o兼以益气健脾 }虎杖 !木通 !车前
子 ! 蓄 !黄柏 !白花蛇舌草 !茯苓 !黄芪等 ~活血祛
瘀通络 o软坚散结 }穿山甲 !王不留行 !地龙 !蜈蚣 !莱
菔子等 o5本草从新6记载穿山甲/善窜 o专能行散 o通
经络 o达病所0 o5医学衷中参西录6言山甲/凡血凝 !
血聚之病皆能开之0/至 瘕积聚 !疼痛麻痹 o二便不
通诸症 o用药治不效者 o皆可加山甲作向导0 o张锡纯
又谓 }/蜈蚣走窜之力最速 o内而脏腑 o外而经络 o凡
气血凝聚之处皆能开之0 o此二药在方中尤为重要 ∀
≈温肾助阳 }鹿茸 !菟丝子 !淫羊藿 !枸杞子 !五味子
等 ∀其中鹿茸为动物药 o血肉有情之品 o温肾作用最
优 ∀诸药配合 o具有寒热并用 o各走其道 o补泻兼施 o
标本兼顾的特点 ∀切合 …°‹ 肾虚 !血瘀湿热痰浊积
于膀胱之本虚标实的特点 ∀
ƒ¤¶是一种属于神经生长因子受体的膜受体蛋
白 o在细胞凋亡过程中起信号传导作用 o诱导表达
ƒ¤¶蛋白的细胞发生凋亡≈z  o有研究显示 ƒ¤¶能够介
导前列腺癌细胞凋亡≈{  o也有报道 ƒ¤¶在精原细胞
瘤中的表达明显减少或丧失≈|  o谢庆祥等≈v 的研究
表明 o…°‹ 组织中 ƒ¤¶的表达显著低于正常前列腺
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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组织 o提示由于 ƒ¤¶表达减少而导致前列腺上皮细
胞凋亡减少 o进而促使上皮细胞增生 ∀本实验结果
显示 }前列回春组和雌二醇组在模型大鼠前列腺组
织中 ƒ¤¶的表达均高于模型组 o差异非常显著 o而且
ƒ¤¶的表达量随前列回春给药量的增加而增加 ~前列
回春中 !高剂量组在模型大鼠前列腺组织中 ƒ¤¶的
表达则与雌二醇无明显差异 ∀凋亡细胞的显著特征
是 ⁄‘„断裂 o导致 ⁄‘„片段从细胞内丢失 o这一现
象可通过 °Œ染色结合流式细胞术分析而显示≈ts  o
实验表明 o前列回春各剂量组与正常组和模型组比
较 o其差异都非常显著 ~前列回春中 !高剂量组与雌
二醇组比较也有非常显著的差异 ∀可见 o前列回春
各剂量组的细胞凋亡率明显高于正常组和模型组 ∀
以上结果表明 o前列回春可促进实验性大鼠前
列腺组织 ƒ¤¶的表达 o诱导实验性大鼠前列腺组织
细胞调亡 o降低前列腺的重量 o从而抑制前列腺增
生 o提示该药可治疗前列腺增生症 ∀
≈参考文献 
≈t  段登志 o欧阳虹 o王 寅 o等 q前列回春胶囊治疗前列腺增生症
xy例 q云南中医杂志 ot||w otxkyl }vx q
≈u  ≤ ¤¯∏¶≥ o…¨ µª¨ ¶• o≥ ±¨ª¨ × o ·¨¤¯ q≤¨¯¯ Ž¬±¨ ·¬¦Œ±¨ ³¬·«¦¯¬∏° ¤±§
≥·µ²°¤²© …¨ ±¬ª± °µ²¶·¤·¬¦‹¼³¨µ³¯¤¶¬¤q∏µ²¯ ot||z otx{ }utz q
≈v  谢庆祥 o汪 鸿 o缪友仁 o等 q细胞凋亡相关基因 ¥¦¯2u和 ¥¤¬在
前列腺增生组织中表达的意义 q中华泌尿外科杂志 ot||{ ot| }
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≈w  杨金瑞 o黄 循 q前列腺疾病细胞凋亡及 …¦¯2ur…¤¬oƒ¤¬rƒ¤¶¯
调控研究 q国外医学#泌尿系统分册 ousss ouskwl }tw| q
≈x  中华人民共和国卫生部 q药品标准#中药成方制剂 qtz 册 q
t||{ qtzx q
≈y  中华人民共和国卫生部药政局 q新药k西药l临床前研究指导原
则汇编 q北京 }人民卫生出版社 ot||v qtst q
≈z  谢庆祥 o汪 鸿 o林福地 o等 q前列腺增生组织中细胞凋亡调控
基因的表达 q临床泌尿外科杂志 ousss otxkzl }vus q
≈{  פ®¨ ∏¦«¬× o≥¤¶¤®¬≠ o ˜ ®¨¬× o ·¨¤¯ q  ²§∏¯¤·¬²± ²© Šµ²∏·«¤±§
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≈|  李宏军 o俞莉章 o郭应禄 o等 q ƒ¤¶在正常睾丸组织及精原细胞
瘤中的表达 q中华男科学 ousst ozkvl }txs q
≈ts  孙 荭 o何贤辉 o黄柏炎 o等 q麦胚凝集素诱导小鼠成纤维细胞
|u|发生凋亡的研究 q中国病理生理杂志 ousst otzkzl }ysu q
Εφφεχτ οφ ΘιανΛιε ΗυιΧηυν Χαπσυλαρ ον
Φασ Εξπρεσσιον ανδ Χελλ Αποπτοσισ οφ Προστατε Γλανδ Τισσυειν Ρατ
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ª¯¤±§·¬¶¶∏¨ ¬±·«¨ °²§¨¯µ¤·q Μετηοδ : ‹¼³¨µ·µ²³«¼ ²© ³µ²¶·¤·¨ °²§¨¯µ¤·º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §¥¼ ¬±­¨¦·¬±ª·¨¶·²¶·¨µ²±¨ ·² ª¨ §¯¬±ª °¤¯¨
µ¤·¶q „©·¨µ¥¨¬±ª·µ¨¤·¨§ º¬·« ±¬¤±¯¬¨ ‹∏¬¦«∏±¬ªvs §¤¼¶o·«¨ µ¤·¶ º µ¨¨ ®¬¯¯ §¨¤±§³µ²¶·¤·¨ ª¯¤±§¶ º µ¨¨ µ¨¶¨¦·¨§©²µ ¬¨¤°¬±¤·¬²± q
× «¨ ƒ¤¶ ¬¨³µ¨¶¶¬²± º¤¶ ¬¨¤°¬±¨ §¥¼ ¬°°∏±²¥¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ≥„…≤ q × «¨ ¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶¤±§·«¨ ³¨ ¤® ²© ¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± ·«¨ ³µ²¶·¤·¨
ª¯¤±§²©·«¨ µ¤·¶º µ¨¨ ¬¨¤°¬±¨ §¥¼ ©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼ q≤²°³¤µ¨§ º¬·« °²§¨¯ªµ²∏³o·«¨ º ¬¨ª«·²©³µ²¶·¤ª¨ ª¯¤±§·¬¶¶∏¨ ¬± ªµ²∏³¶·µ¨¤·¨§
º¬·« ±¬¤±¯¬¨ ‹∏¬¦«∏± ¦¤³¶∏¯¤µ º¤¶ ¬¯ª«·k Π  s qstl q Ρεσυλτ : ≤²°³¤µ¨§ º¬·« °²§¨¯ ªµ²∏³o·«¨ ƒ¤¶ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ¬± ¤¯¯·µ¨¤·° ±¨·
ªµ²∏³¶¬±¦µ¨¤¶¨k Π s qsx oΠ s qstl q≤²°³¤µ¨§ º¬·«±²µ°¤¯ ¤±§ °²§¨¯ªµ²∏³¶o¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± ¤¯¯·µ¨¤·° ±¨·ªµ²∏³¶¬±¦µ¨¤¶¨ ¤·§¬©2
©¨ µ¨±·¯ √¨¨¯k Π s qstl qΧονχλυσιον : × «¨ ±¬¤±¯¬¨ ‹∏¦«∏± ¦¤³¶∏¯¤µ¬±¦µ¨¤¶¨¶·«¨ ƒ¤¶ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ¤±§¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶²© °²§¨¯µ¤·¶o¤±§
¶«²º¶¤§¨©¬±¬·¨ ·µ¨¤·° ±¨·¨ ©©¨ ¦·²±·«¨ «¼³¨µ·µ²³«¼ ²©³µ²¶·¤·¨ ¥¼ ³µ²°²·¬±ª·«¨ ¤³²³·²¶¬¶²©³µ²¶·¤·¨ ¦¨¯¯ q
[ Κεψ ωορδσ] ±¬¤±¯¬¨ ‹∏¦«∏± ~«¼³¨µ·µ²³«¼ ²©³µ²¶·¤·¨ ~ƒ¤¶~¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶~¤³²³·²¶¬¶³¨ ¤®
≈责任编辑 古云霞 
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第 u{卷第 |期
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