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Determination of Concentration and Encapsulation Efficie ncy of Silybin Liposomes

水飞蓟宾脂质体包封率及其水飞蓟宾含量测定



全 文 :3 讨论
3 q1 本试验曾选用甲醇2水 !乙腈2水进行等度洗脱
和常规的流动相极性逐渐减小的梯度洗脱条件 o均
没有得到满意的结果 ∀最终采用本文的梯度洗脱条
件 o使淫羊藿定 ≤ 和淫羊藿苷得到了很好的基线分
离 o并且样品中其他成分也具有很好的分离度 o同时
该方法缩短了分析时间 ∀对于流动相中酸的选用 o
比较了磷酸和乙酸 o以磷酸的效果较佳 ∀
3 q2 试验中选择比较了甲醇 !|x h 乙醇 !zs h 乙
醇 !xs h乙醇 !vs h乙醇和 tx h乙醇 y种提取溶剂 o
并考察了提取方法 !时间和溶剂体积等 o试验结果表
明以 vs h乙醇 {s ε 水浴热回流提取 u次 o提取溶
剂每次 ux °o回流时间分别为 u ot «的提取方法 o
提取效果最好 ∀
3 q3 5中国药典6usss年版中 o淫羊藿质量控制指
标为淫羊藿苷 ∀本试验在测定的 y个样品中 o柔毛
淫羊藿样品中淫羊藿定 ≤ 的含量高于淫羊藿苷 o箭
叶淫羊藿和朝鲜淫羊藿样品中淫羊藿苷也并非是唯
一主要成分 o淫羊藿定 ≤ 也是主要成分之一 o故本
文认为以多指标来考察淫羊藿质量更为科学 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 q一部 qusss quy{ q
≈u  周件贵 q近几年药用淫羊霍的研究进展 q时珍国药研究 ot||y ou
kyl }{z q
≈v  孙国华 q淫羊藿的综合研究与开发利用 q中国中医信息杂志 o
t||z owkwl }tv q
≈w  郭宝林 o王春兰 o肖培根 o等 q箭叶淫羊藿黄酮类成分分析和质
量评价 q中草药 ot||y ouzktsl }x{w q
≈x  郭宝林 o肖培根 q四川产淫羊藿属植物的黄酮类成分分析 q华西
药学杂志 ot||y ottkul }zx q
≈y  郭宝林 o肖培根 qx种淫羊藿的不同部位的黄酮类成分分析 q中
国中药杂志 ot||y outk|l }xuv q
≈z  郭宝林 o王春兰 o陈建民 o等 q药典中 x种淫羊藿中黄酮类成分
的反相高效液相色谱分析 q药学学报 ot||y ovtkwl }u|u q
≈{  张 艺 q{种川商品淫羊藿总黄酮的含量测定及资源利用 q中
国中药杂志 ot||x ouskwl }ust q
≈|  张 艺 o肖崇厚 o钟国跃 q‹°≤ 法测定川产淫羊藿属植物的淫
羊藿甙含量 q中国中药杂志 ot||x ouskxl }uyx q
∆ετερµινατιον οφ Επιµεδιν Χ ανδ Ιχαριιν ιν Ηερβα Επιµεδιι βψ ΗΠΛΧ
• „‘Š ¬±ª2 ∏´¤±t o…Œ «¬2°¬±ªt oŒ °¬±ªt oŒ ‹∏¬t o≤ ‹∞‘Š ƒ ¬¨2¯ ²±ªu
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ • °2‹°≤ ° ·¨«²§©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²© ³¨¬° §¨¬± ≤ ¤±§¬¦¤µ¬¬± ¬± ‹ µ¨¥¤ ∞³¬° §¨¬¬q
Μετηοδ :≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¦²±§¬·¬²±¶}‹¼³¨µ¶¬¯ …⁄≥2≤t{ ¦²¯∏°± o¤¦¨·²±¬·µ¬¦¨ ¤±§º¤·¨µ¦²±·¤¬±¬±ªs qsx h ³«²¶³«²µ¬¦¤¦¬§¤¶ªµ¤§¬¨±·
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[ Κεψ ωορδσ] «¨ µ¥¤ ³¨¬° §¨¬¬~¨³¬° §¨¬± ≤ ~¬¦¤µ¬¬±~• °2‹°≤ ≈责任编辑 袁桂京 
水飞蓟宾脂质体包封率及其水飞蓟宾含量测定
余江南 o徐希明 o朱 源 o高 昊
k江苏大学 药学院 o江苏 镇江 utusstl
≈摘要  目的 }建立一种一阶导数紫外分光光度法测定水飞蓟宾脂质体包封率及脂质体中水飞蓟宾含量 ∀方
≈收稿日期  ussv2s{2tx
≈基金项目  江苏省自然科学基金资助项目k…Žussusszl ~江苏高校高新技术产业化项目k‹st2sytl
≈通讯作者  余江南 ר¯ }ksxttlxsv{tvx
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第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨°¥¨µoussv
法 }水飞蓟宾脂质体溶液经 ≥ ³¨«¤§¨ ¬ Štss柱分离后 o以水飞蓟宾一阶导数紫外扫描图谱在 uzz ±°和 u|w ±°处出
现的特征峰和特征谷的振幅 ∃ Α进行定量 ∀结果 }方法的线性范围为 s qx ∗ vs qs °ª#p tkρ€ s q||| {l o回收率为
tst qz h o精密度为 t q{ h ∀采用该法测定药脂比为 s qsu ∗ s qsy的水飞蓟宾脂质体 o包封率为 yx qt h ∗ {v qs h o脂
质体中水飞蓟宾平均含量为 zys qw °ª#p tk ν € wl ∀结论 }一阶导数分光光度法准确 !简便 o可用于水飞蓟宾脂质
体的质量控制 ∀
≈关键词  水飞蓟宾脂质体 ~包封率 ~含量测定 ~一阶导数分光光度法
≈中图分类号  • u{v qy ~• u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltt2tsuz2sw
水飞蓟素系菊科植物水飞蓟 Σιλψβυ µ µ αρι2
ανυ µ Š¤¨µ·±果实中提取得到的黄酮木脂类化合
物 o其最主要成分为水飞蓟宾k¶¬¯¼¥¬±o≥…l o临床
上用于治疗急慢性肝炎 !肝硬化及中毒性肝损
伤≈t ou  ∀≥…难溶于水 o已有的工艺是将其制成水
溶性的葡甲胺盐 !卵磷脂复合物≈v ow  !固体分散
体≈x2z 等 o以提高生物利用度 ∀脂质体k¯ ¬³²¶²° l¨作
为一类新型靶向药物载体 o脉管给药后可显著聚集
于肝脏并缓慢释药 o这种由肝脏枯否氏k®∏³©©¨µl细
胞吞噬所致的被动靶向 o无疑有利于肝位病灶 o尤其
是肝炎等的治疗 ∀我们以 ≥…为模型药 o首次尝试
制备水飞蓟宾脂质体k¶¬¯¼¥¬± ¬¯³²¶²° ¶¨l o为控制其
质量 o本文建立了一阶导数分光光度法 o用于水飞蓟
宾脂质体包封率及水飞蓟宾含量测定 o该法操作简
便 o易于推广 ∀
1 仪器与试药
˜ ∂2uwst°≤ 紫外可见分光光度计k日本 ≥«¬2
°¤§½∏公司l ~旋转蒸发仪k德国 ‹ ¬¨§²¯³«l ~层析柱
k天津玻璃仪器厂l ~超声清洗仪k无锡超声电子设备
厂l ~水飞蓟宾k中国药品生物制品检定所l ~豆磷脂
k上海黄浦江磷脂公司l ~其余试剂为分析纯 ∀
2 方法与结果
2 q1 脂质体的制备
2 q1 q1 空白脂质体的制备 豆磷脂 !甲醇 !氯仿及
其它辅料按一定比例配方 o采用薄膜匀化法≈{ 制备
空白脂质体 ∀
2 q1 q2 水飞蓟宾脂质体的制备 称取豆磷脂 !水
飞蓟宾适量 o共置于茄形瓶中 o加入一定比例的甲醇
2氯仿混合溶媒及其他辅料 o使溶解至溶液澄清透
明 o利用真空泵在不断旋转振摇下 o蒸发除去混合溶
媒 o使脂质以薄膜状沉集于瓶的内壁 ∀真空干燥数
小时 o使残留溶剂挥发殆尽 o向茄形瓶中加入一定量
的 s q| h ‘¤≤¯水合介质 o旋转水合 u «得水飞蓟宾
脂质体混悬液 ∀于 ux ε 放置数小时 o使其充分水
合 o即得 ∀
2 q2 导数光谱的绘制
2 q2 q1 零阶导数光谱 精密称取一定量的水飞蓟
宾 o用甲醇溶解 o定容 o制成 us °ª#pt溶液 o以甲醇
为空白 o置 t ¦°石英比色皿中 o于 uxs ∗ vvs ±°内
以 t ±°为间隔进行扫描 o记录零阶光谱 o见图 t中
的曲线 t ou{{ ±°处为水飞蓟宾的峰值吸收 ~取空
白脂质体 t qs °于 ts °容量瓶中 o甲醇定容 o得
供试液 t o吸取供试液 t t qs °置另一 ts °容量
瓶中 o甲醇定容 o得供试液 u ∀以甲醇为空白 o供试
液 u于 uxs ∗ vvs ±°以 t ±°为间隔进行扫描 o记录
零阶光谱 o见图 t中的曲线 u ∀由图 t可见 o在 uxs
∗ vvs ±°用零阶导数光谱法测定水飞蓟宾 o空白脂
质体对测定产生干扰 ∀
图 t 零阶导数光谱
t q水飞蓟宾k≥…l u q空白脂质体
2 q2 q2 一阶导数光谱 由水飞蓟宾及空白脂质体
的零阶导数光谱 o于 ˜ ∂2uwst°≤ 紫外可见分光光
度计直接进行数据处理 o分别获得水飞蓟宾及空白
脂质体的一阶导数光谱 o见图 u ∀图 u表明 }空白脂
质体的一阶导数光谱在 uzs ∗ vss ±°近似于一条
直线 o而水飞蓟宾的一阶导数光谱在 uzz ±°和 u|w
±°处出现特征峰和谷 o据此 o可通过测定 uzz ±°
和 u|w ±°处峰与谷的振幅 ∃„ 对脂质体中水飞蓟
宾的含量进行测定 ∀
2 q3 溶液的配制
2 q3 q1 ≥…标准储备液的配制 精密称取水飞蓟
宾对照品 ts °ªo置于 xs °容量瓶中 o甲醇溶解 o
定容 ∀所得 ≥…标准储备液浓度为 s qu °ª#°p t ∀
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第 u{卷第 tt期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨°¥¨µoussv
图 u 一阶导数光谱
t q水飞蓟宾k≥…l u q空白脂质体
2 q3 q2 磷脂储备液的配制 取空白脂质体 t qs °
于 ts °容量瓶中 o生理盐水定容 o摇匀 o即得 ∀
2 q3 q3 参比液的配制 取 t qs °的生理盐水 o用
甲醇定容至 ts °∀
2 q4 工作曲线的绘制
精密移取≥…标准储备液s qs os qts os qux o
s qx ot qs ot qx °o分别置 ts °容量瓶中 o各加入
t qs °磷脂储备液 o依次用甲醇定容 ∀以参比液为
空白 o依次测定各溶液在 uzz ±°处峰和 u|w ±°处
谷间的振幅 ∃ Α o并以 ∃ Α对浓度 Χ进行回归 o得回
归方程 }∃ Α € v .zy ≅ tsp v Χ n t .tt ≅ tsp v , ρ €
s q||| { o表明在 s qx ∗ vs qs °ª#p t ∃ Α与浓度呈
线性关系 ∀
2 q5 回收率试验
准确配制高 !中 !低 v种浓度的 ≥…溶液 o分别
精密量取 t qs °o置 ts °容量瓶中 o加甲醇稀释
至刻度 ∀再分别精密量取各稀释液 t qs °o置 ts
°容量瓶中 o各加入 t qs °磷脂储备液 o用甲醇
定容 o摇匀 o以参比液为空白 o依次测定各溶液在
uzz ±°处峰和 u|w ±°处谷间的振幅 ∃ Α o按回归
方程计算浓度 o求得回收率 o结果见表 t ∀平均回收
率为 tst qz h o• ≥⁄为 t q{ h ∀
表 t 水飞蓟宾脂质体的回收率试验k ν € vl
加入量
r°ª#p t
测出量
r°ª#p t
回收率
r h
平均回收率
r h
• ≥⁄
r h
u qss t q|| || qx
ts qss ts qus tsu qs tst qz t q{
us qss us qzu tsv qy
2 q6 水飞蓟宾脂质体包封率测定
2 q6 q1 凝胶柱分离 取充分容胀的 ≥ ³¨«¤§¨ ¬ Š2
tss适量 o制备凝胶柱ktxs °° ≅ uss °°l≈|  ~精密
量取脂质体混悬液 s qx °上柱 o以生理盐水洗脱 o
流速 t qt °#°¬±p t o每管 t °o收集 |s管 ∀各管
收集完毕 o加甲醇定容至 x °~另取 t qs °生理
盐水 o加甲醇定容至 x °o作为空白溶液 o于 u{{
±°处k≥…的最大吸收波长l测定各样品管溶液的
吸光度 o以样品管编号为横坐标 o吸光度为纵坐标 o
绘制洗脱曲线 o见图 v ∀图中的单峰为 ≥…脂质体 ∀
2 q6 q2 包封率测定 精密量取脂质体混悬液 t .s
°上柱 o以生理盐水洗脱 o乳白色带接近柱口时开
始收集 o待其完全通过时停止收集 o将收集到的 ≥…
脂质体以生理盐水定容至 ts °∀精密量取此稀释
液 t qs°置 ts°容量瓶中 o用甲醇定容 o摇匀 o以
参比液为空白 o测定 uzz ±°处峰和 u|w ±°处谷间
的振幅 ∃ Α o由回归方程计算被包封的 ≥…量 Ωε o
按下式计算包封率k∞‘h l }ΕΝ h € k Ωε/ Ωτl ≅
tss h o式中 Ωτ为 ≥…的投料量 ∀采用该法测得
药脂比 s qsu ∗ s qsy的水飞蓟宾脂质体的包封率为
yx qt h ∗ {v qs h ∀
图 v 凝胶柱分离水飞蓟宾脂质体混悬液洗脱曲线
2 q7 水飞蓟宾含量测定
精密量取脂质体混悬液 t qs °o以生理盐水定
容至 ts °o摇匀 ~精密量取此稀释液 t qs °o置于
ts °容量瓶中 o用甲醇定容 o摇匀 o以参比液为空
白 o测定 uzz ±°处峰和 u|w ±°处谷间的振幅 ∃ Α o
由回归方程计算脂质体混悬液中 ≥…浓度 o采用优
化工艺k详细制备工艺另文发表l所制得的脂质体中
实际测得 ≥…平均浓度为 zys qw °ª#ptk ν € wl ∀
3 讨论
利用葡聚糖凝胶过滤色谱法将游离 ≥… 和
≥…脂质体分离为测定包封率的关键 ∀本实验中 o
采用凝胶柱色谱分离时 o以生理盐水为洗脱液 o游离
≥…不被洗脱 o≥…脂质体能够被洗脱 o从而实现
游离 ≥…与 ≥…脂质体的分离 ∀为了证实图 v洗
脱曲线中的单峰为 ≥…脂质体峰 o游离 ≥…不被洗
脱 o我们以 ≥…对照品进行了对照试验 o证明了上
述推断 ∀
≈参考文献 
≈t  …¨ ¦®°¤±±2Ž±²³³ ≥ o •¬¨·¥µ²¦® ≥ o • ¼¨«¨ ±° ¼¨ µ¨ • o ·¨¤¯ qŒ±2
«¬¥¬·²µ¼ ∞©©¨ ¦·¶²©≥¬¯¬¥¬±¬± ²± ≤¼·²¦«µ²°¨°2wxs ∞±½¼° ¶¨¬± ‹∏2
°¤± ¬√ µ¨ ¬¦µ²¶²° ¶¨q°«¤µ°¤¦²¯ ײ¬¬¦²¯ ousss o{ykyl }uxs q
#|ust#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
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≈u  • ∏o µ¨±  „ q‹ ³¨¤·¬¦≥·¨¯ ¤¯·¨ ≤¨¯ ¶¯}„ פµª¨·©²µ·«¨ ×µ¨¤·2
° ±¨·²©¬√ µ¨ƒ¬¥µ²¶¬¶q Š¤¶·µ²¨ ±·¨µ²¯ ousss ovxk|l }yyx q
≈v  Š¬¤¦²°¨¯ ¬¯ ≥ o Š¤¯ ²¯ ⁄o „³²¯ ²¯±¬² ° o ·¨¤¯ q ≥¬¯¼¥¬± ¤±§ Œ·¶
…¬²¤√¤¬¯¤¥¯¨ °«²¶³«²¯¬³¬§ ≤²°³¯ ¬¨ kŒ§… tstyl °²·¨±·¬¤·¨ ¬±
√¬·µ²¤±§¬± √¬√²·«¨ „¦·¬√¬·¼ ²© ≤¬¶³¯¤·¬±q¬©¨ ≥¦¬oussu ozs
ktul }twwz q
≈w  许建文 o张光军 o陈正跃 q水飞蓟宾2卵磷脂复合物制备工艺比
较 q中国生化药物杂志 oussu ouvkxl }uwx q
≈x  李凤前 o胡晋红 o朱全刚 q水飞蓟宾固体分散体中总黄酮的测
定 q中草药 oussu ovvktl }vt q
≈y  李凤前 o胡晋红 o王 慧 o等 q°∞Šysss固体分散体系对难溶
性药物水飞蓟素的增溶作用与晶格变化的关系 q药学学报 o
ussu ovzkwl }u|w q
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究 q华西药学杂志 ousst otykvl }t|v q
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x|{ q
≈|  徐秀兰 q生物化学实验指导 q北京 }中国医药科技出版社 o
t||w qtv| q
∆ετερµινατιον οφ Χονχεντρατιον ανδ Ενχαπσυλατιον
Εφφιχιενχψ οφ Σιλψβιν Λιποσοµεσ
≠ ˜ ¬¤±ª2±¤± o ÷ ˜ ÷¬2°¬±ªo ‹ ˜ ≠∏¤± oŠ„’ ‹¤²
k ≥¦«²²¯ ²© °«¤µ°¤¦¼ o¬¤±ª¶∏ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o«¨ ±­¬¤±ª utusst o¬¤±ª¶∏o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ±¨¦¤³¶∏¯¤·¬²± ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ²©¶¬¯¼¥¬± ¬¯³²¶²° ¶¨q Μετηοδ : „©·¨µ≥¬¯¼¥¬± ¬¯³²¶²° ¶¨¶²¯∏2
·¬²± º¤¶¶¨³¤µ¤·¨§·«µ²∏ª«¶³«¤§¨ ¬ Š2tss ¦²¯∏°± o¨¯∏¨ ±·¦²¯¯¨ ¦·¨§ º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §¥¼·«¨ ©¬µ¶·§¨µ¬√¤·¬√¨ ˜ ∂ ¶³¨ ¦·µ²° ·¨µ¼ qΡεσυλτ :
× «¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± ¦∏µ√¨²© ≥¬¯¼¥¬± º¤¶ ¬¯±¨ ¤µ¬±·«¨ µ¤±ª¨ ²©s qx ∗ vs qs °ª#p tkρ € s q||| {l q× «¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ º¤¶tst qz h q
× «¨ µ¨ ¤¯·¬√¨¶·¤±§¤µ§§¨ √¬¤·¬²± º¤¶t q{ h q × «¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º §¨·«¤··«¨ ±¨¦¤³¶∏¯¤·¬²± ©¨©¬¦¬¨±¦¼µ¤±ª¨ §©µ²° yx qt h ∗ {v qs h º«¨ ±
·«¨ §µ∏ªr³«²¶³«²¯¬³¬§µ¤·¬² √¤µ¬¨§©µ²° s qsu ∗ s qsy q ׫¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²© ≥…¬± ¬¯³²¶²° ¶¨³µ¨³¤µ¨§¥¼ ²³·¬°∏° ·¨¦«±¬´∏¨ º¤¶
zys qw °ª#p tk ν € wl qΧονχλυσιον : × «¨ ° ·¨«²§¬¶¤¦¦∏µ¤·¨ o¶¬°³¯¨¤±§¶∏¬·¤¥¯¨©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²© ≥¬¯¼¥¬± ¬¯³²¶²° ¶¨q
[ Κεψ ωορδσ] ¶¬¯¼¥¬± ¬¯³²¶²° ¶¨~ ±¨¦¤³¶∏¯¤·¬²± ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ~¤¶¶¤¼ ~©¬µ¶·§¨µ¬√¤·¬√¨ ˜ ∂ ¶³¨ ¦·µ²° ·¨µ¼
≈责任编辑 刘  
甘草饮片超微粉碎前后
甘草酸溶出行为的比较研究
李志猛t o王跃生u o李晓明u o闫 寒u o章 军u o唐晓军u o李 心v
kt q北京同仁堂股份有限公司 科学研究所 o北京 tssstt ~
u q中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszss ~
v q中国北京同仁堂k集团l有限责任公司 北京中药二厂 o北京 tssstsl
≈摘要  目的 }考察超微粉碎前后甘草饮片中甘草酸溶出行为变化规律 ∀方法 }以甘草酸含量为测定指标 o分别对不同
的样品进行测定实验 ∀结果 }超微粉碎后甘草酸的溶出显著提高 o且粉碎时间越长 o粒度越细 o甘草酸溶出越易 ∀结论 }超微粉
碎后有助于甘草饮片中甘草酸的溶出 o粉碎粒度对甘草酸的溶出有显著的影响 ∀
≈关键词  甘草 ~甘草酸 ~超微粉碎
≈中图分类号  • u{u qw ~ • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltt2tsvs2sw
≈收稿日期  ussv2s|2u|
≈通讯作者  王跃生 ר¯ }kstslywstwwtt2uwxw ƒ¤¬}kstsl
ywstv||y ∞2°¤¬¯}º¼¯ º|x ƒ tuy q¦²°
甘草为豆科植物甘草 Γλψχψρρηιζα υραλενσισ
ƒ¬¶¦«q的干燥根及根茎 o为常用中药 o具有清热解毒 !
润肺止咳 !缓急止痛 !调和诸药等功效 o现代研究表
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第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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