全 文 ：正品大黄不同品种间泻下效价强度比较研究
王家葵１，李 傲２，王 慧１，徐晓玉２
（１成都中医药大学 药学院，四川 成都 ６１００７２；２重庆医科大学 药学系，重庆 ４０００１６）
［摘要］ 目的：考察《中国药典》所载３个品种大黄间泻下效应上的差异及原因，为进一步运用量化指标客观
的评价泻下活性奠定基础。方法：以Ｂｌｉｓｓ法计算小鼠泻下效应的 ＥＤ５０，比较３个品种间效价强度，测定结肠肠壁
细胞Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活性。利用高效液相色谱法测定大黄中泻下相关组分番泻苷Ａ，结合型大黄素、大黄酚、大黄
酸，游离型大黄素、大黄酚、大黄酸的含量。紫外分光光度法测定泻下组分总蒽醌类、结合蒽醌类、游离蒽醌类、总
番泻苷类含量。结果：３个品种大黄间泻下效力存在较大的差异，以泻下质反应为指标，唐古特大黄、药用大黄及甘
肃产掌叶大黄的泻下ＥＤ５０分别为０３７，０９９，１８３ｇ·ｋｇ
－１。３个品种效价强度比为４９４∶１８５∶１。而对小鼠结
肠肠壁细胞膜Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活性抑制作用，也存在品种差异，唐古特大黄的酶抑制作用强于其他２种。不同品
种大黄泻下组分含量差异也较为明显。结论：大黄的３个品种泻下活性与泻下组分存在较大差异，这可能是导致
临床处方和成药最终疗效产生差异的重要原因之一。
［关键词］ 大黄；品种；泻下；Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶；效价强度
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００６）２３１９８７０５
［收稿日期］ ２００６０１２０
［通讯作者］ 王家葵，Ｔｅｌ：（０２８）８７７５０５２３，Ｅｍａｉｌ：ｗｊｋｍｓ＠
１６３．ｃｏｍ
大黄为多基源品种，据２００５年版《中国药典》
规定，掌叶大黄ＲｈｅｕｍｐａｌｍａｔｕｍＬ，唐古特大黄Ｒ
ｔａｎｇｕｔｉｃｕｍＭａｘｉｍ ｅｘＢ或药用大黄 Ｒｏｆｉｃｉｎａｌｅ
Ｂａｉｌ，皆可作正品大黄入药［１］。上述３个品种在临
床处方和成药生产中皆视为等同，但其泻下活性强
弱是否存在差异，所含成分与泻下活性相关性等问
题，却一直未见明确结论。本研究将在同等条件下，
围绕泻下活性，对上述３个品种大黄进行药理、化学
综合研究，以期为今后客观评价大黄的泻下活性奠
定基础。
１ 材料
１１ 药物
掌叶大黄ＲｈｅｕｍｐａｌｍａｔｕｍＬ，分别购自四川省
甘孜州大黄 ＧＡＰ药材基地，甘肃礼县大黄 ＧＡＰ药
材基地；唐古特大黄ＲｔａｎｇｕｔｉｃｕｍＭａｘｉｍｅｘＢ，购自
甘肃大黄 ＧＡＰ药材基地，经成都中医药大学中药鉴
定教研室李敏副教授鉴定。药用大黄 Ｒｏｆｉｃｉｎａｌｅ
Ｂａｉｌ，于２００４年１１月采自四川省平武县平通镇，２
年生，经成都中医药大学中药博物馆卢先明副教授
鉴定。上述大黄样品均符合《中国药典》２００５年版
大黄项下“性状、鉴别、检查”条的要求，符合药用标
准。
１２ 供试液的配制
将大黄粉碎过２０目筛，精密称取粉末４０ｇ，先
用８倍体积量清水浸泡３０ｍｉｎ，然后加热至微沸，控
制微沸状态继续煎煮２０ｍｉｎ，滤布滤过后，残渣又加
入８倍量清水，煎煮至微沸后继续微沸煎煮２０ｍｉｎ，
合并２次滤液，各滤液体积在１３０～１９０ｍＬ，若继续
加热浓缩会使泻下成分破坏较大，故各品种大黄均
在准确测定体积后，算得相对生药含量在０２１１～
０３０８ｇ·ｍＬ－１（以下药物含量单位均以原生药材
计算），作为原药液供后继实验直接或用蒸馏水稀
释后使用。
１３ 仪器及试剂
沙跎利斯１／１０００分析天平；离心机：上海安亭
科学仪器厂制造，编号 １２０２。电动匀浆机，型号
ＤＹ８９－１，宁波新芝科器研究所；Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶测
试盒及卡马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，由南京建成生
物工程研究所提供。
１４ 动物
小鼠，ＩＣＲ种，由四川省医学科学院实验动物研
究所提供，雌雄各半，健康合格，动物合格证号：
ＳＣＸＫ（川）２００４１５。
２ 方法与结果
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２１ 不同品种大黄小鼠泻下质反应试验
４种受试样品，即四川产掌叶大黄、甘肃产掌叶
大黄、唐古特大黄、药用大黄，按文献［２］分别按１０
倍稀释成多个药液系列，找出大致的范围。再用２
倍稀释的药液系列，每组４只小鼠，雌雄各半，如其
前一组为３／４泻下，则取４／４泻下组为１００％估计
泻下量（Ｄｍａｘ），如前一组为１／４或２／４泻下，考虑到
４／４组剂量在正式实验中可能泻下率低于７０％，慎
重起见，将４／４组剂量乘以１４倍，作为 Ｄｍａｘ，同理
可以找出（Ｄｍｉｎ）。每组药物均根据 Ｄｍａｘ／Ｄｍｉｎ比值选
择合宜的剂量分组方案表，查表确定所给剂量比值
及分组组数，正式实验时选用１８～２２ｇ健康小鼠，
雌雄各半，除最大剂量及最小剂量组每组１０只外，
其余各组每组２０只。实验前８ｈ禁食不禁水，按１０
ｍＬ·ｋｇ－１灌服给药，以泻水样稀便作为质反应的阳
性反应，观察５ｈ内小鼠泻下只数。
实验数据通过 ＤＡＳｖｅｒ１０软件Ｂｌｉｓｓ法计算得
各品种大黄泻下作用 ＥＤ５０，结果见表１。
结果表明，不同品种大黄的泻下效应存在较大
差异，唐古特大黄泻下效应最强，四川产掌叶大黄与
药用大黄统货泻下效应大致相当，甘肃产掌叶大黄
泻下效应最差，唐古特大黄、四川产掌叶大黄、药用
大黄、甘肃产掌叶大黄泻下效价强度之比为４９４∶
１７５∶１８５∶１。
表１ 不同品种大黄单次灌胃小鼠泻下效价强度比较
品种 回归方程
ＥＤ５０／ｇ·ｋｇ－１
（９５％可信区间）
唐古特大黄 Ｙ＝６．５９６＋３．６９８×ｌｏｇ（Ｄ） ０．３７（０．３０９～０．４４３）
甘肃掌叶大黄 Ｙ＝３．７２５＋４．８７３×ｌｏｇ（Ｄ） １．８２７（１．５９１～２．０９８）
四川掌叶大黄 Ｙ＝４．８９２＋５．５０７×ｌｏｇ（Ｄ） １．０４６（０．９１８～１．１９３）
药用大黄 Ｙ＝５．０２１＋４．２６４×ｌｏｇ（Ｄ） ０．９８９（０．８４５～１．１５６）
注：Ｙ为几率单位
２２ 对小鼠结肠壁细胞 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活性的影
响
２２１ 组织前处理 小鼠灌服供试液，０５ｈ后颈
椎脱臼处死，立即从回盲部下端开始精确称取０２ｇ
结肠，后继操作均在冰水环境中进行，用预冷的蒸馏
水反复洗净肠腔内外血液及粪便，用滤纸稍吸干，加
入１８ｍＬ生理盐水，在匀浆机中制备成１０％的匀
浆液，１０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上清０２ｍＬ加
０８ｍＬ生理盐水稀释成２％的匀浆，供匀浆蛋白测
定及 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶测定使用。
２２２ 结肠匀浆蛋白测定 因为蛋白质上具有氨
基，当棕红色的染料 ＣＢＢＧ２５０显色剂加入蛋白标准液
或样品中时，染料上的阴离子与蛋白氨基结合，使溶
液变为蓝色，在５９５ｎｍ处具有特征吸收峰，通过吸
光度 （Ａ）可算出蛋白含量。计算公式为蛋白含量
（ｇ·Ｌ－１）＝测定管Ａ／标准管 Ａ×标准管含量（ｇ·
Ｌ－１），蛋白含量结果带入 ＡＴＰ酶活力计算公式中。
２２３ Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活力测定 按照试剂盒说
明进行，组织中 ＡＴＰ酶活力计算公式：ＡＴＰ酶活力
（Ｕ·ｍｇ－１）＝（测定管Ａ－对照管Ａ）／标准管Ａ×标
准管浓度（０５μｍｏｌ·ｍＬ－１）×反应体系中样品稀
释倍数×６（水浴时间为１０ｍｉｎ，酶活力定义为１ｈ，
故乘以６）／匀浆蛋白含量（ｍｇ·ｍＬ－１）。
２２４ 药用大黄水煎液对 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶影响的
时效关系考察 取体重为１８～２２ｇ健康小鼠，雌雄
各半，分为 ０５，１，１５，２，２５，３，３５，４，４５，５ｈ，空
白组共１１组，每组１０只，除空白组灌服生理盐水
外，其余均灌服药用大黄２８６ｇｋｇ－１，按上述方法
测得小鼠结肠肠壁细胞膜上 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶值，得
到药用大黄对 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶影响的时效关系。
结果见图１。
图１ 药用大黄对Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ
酶影响的时效关系考察
结果表明，大黄水煎液对小鼠结肠肠壁膜 Ｎａ＋
Ｋ＋ＡＴＰ酶确有抑制作用，以灌服后的０５ｈ抑制力
最强，５ｈ后抑制作用基本消失。故在后面的实验
中选取灌服０５ｈ后处死动物测定酶活性，同时也
表明在泻下质反应中，选用连续观察５ｈ小鼠泻稀
便只数的合理性。
２２５ 对 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶影响的量效关系考察
取体重为１８～２２ｇ健康小鼠，雌雄各半，分别灌服
唐古特大黄、甘肃产掌叶大黄、药用大黄水煎液，每
一品种分为６组，组间按１∶０６等比稀释后的６个
给药组及灌服生理盐水的空白组，每组１０只小鼠，
以灌服后０５ｈ为处死时间，按上述方法测定小鼠
结肠肠壁细胞膜上 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶。结果表明：唐
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古特大黄水煎液对小鼠结肠肠壁细胞膜上 Ｎａ＋
Ｋ＋ＡＴＰ酶的影响与其对数剂量在［０１４，１０５ｇ·
ｋｇ－１］基本保持线性关系（Ｅ＝－１７９３８ｌｇＤ＋２７０８
１，Ｒ＝０９７７）；甘肃产掌叶大黄水煎液对小鼠结肠
肠壁细胞膜上 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶值与其对数剂量在
［０８２，６２９ｇ·ｋｇ－１］存在一定的线性关系（Ｅ＝－
０６５１９ｌｇＤ＋３８２２，Ｒ＝０８９８）；药用大黄水煎液
对小鼠结肠肠壁细胞膜上 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶值与其
对数剂量在（０５８，４４９ｇ·ｋｇ－１）基本保持线性关
系（Ｅ＝－２０６６５ｌｇＤ＋５２４６９，Ｒ＝０９８１）。
２２６ 大黄品种间效价强度差异 取体重为１８～
２２ｇ健康小鼠共 ６０只，雌雄各半，其中空白组 ２０
只，其余４组每组各１０只，均灌胃以１０ｍＬ·ｋｇ－１，
含量为０３ｇ·ｍＬ－１不同品种的大黄供试液，相当
于人用临床常用日剂量的１０倍。均以灌胃后０５ｈ
为处死时间，按上述方法测定小鼠结肠肠壁细胞膜
上Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶值。结果见表２。
表２ 不同品种及来源大黄对小鼠结肠
肠壁细胞Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶作用（珋ｘ±ｓ）
分组
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ｎ
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ
酶／Ｕ·ｍｇ－１
唐古特大黄 ３ １０ ２．３０３±０．５８２１）
四川掌叶大黄 ３ １０ ３．８５３±０．６１７１）
甘肃掌叶大黄 ３ １０ ４．９８４±１．７７６
药用大黄 ３ １０ ４．３９８±０．４３４１）
空白组 － ２０ ５．５３６±０．７８０
注：与空白组比较 １）Ｐ＜０．０１
结果表明，大黄水煎液对小鼠结肠肠壁膜 Ｎａ＋
Ｋ＋ＡＴＰ酶确有抑制作用，有效组分通过抑制肠道
对水、Ｎａ＋的重吸收，增加肠腔内容积，间接增加肠
蠕动而致泻。从表 ２可以看出大黄抑制 Ｎａ＋Ｋ＋
ＡＴＰ酶作用与泻下作用的强弱趋势是相一致的。
２３ 泻下相关组分含量测定
利用高效液相色谱法测定大黄中泻下相关组分
番泻苷 Ａ，结合型大黄素、大黄酚、大黄酸，游离型大
黄素、大黄酚、大黄酸，游离型大黄素、大黄酚、大黄
酸的含量。紫外分光光度法测定泻下组分总蒽醌
类、结合蒽醌类、游离蒽醌类、总番泻苷类含量［３７］。
试验结果见表３。
２４ 泻下组分与泻下效应的相关性分析
通过各泻下组分对泻下效应（以质反应的 ＥＤ５０
为评价指标）进行线性回归分析，求得各组分含量
与泻下效应的回归曲线，并计算决定系数 Ｒ２。以总
表３ 不同品种大黄间泻下相关组分含量比较
ｇ·１００ｇ－１
泻下组分
药用
大黄
唐古特
大黄
甘肃掌
叶大黄
四川掌
叶大黄
总蒽醌 ０．４８０ ０．９６５ ０．２４４ ０．７５３
游离蒽醌 ０．２３８ ０．３９２ ０．１６９ ０．２３５
结合蒽醌 ０．２４２ ０．５７４ ０．０７４ ０．５１８
总番泻苷 ０．８９８ ２．４４２ ０．５７４ １．３６７
总大黄酸 ０．０３６ ０．２８１ ０．０６６ ０．０４５
游离大黄酸 ０．０１７ ０．０７６ ０．０４０ ０．０１７
结合大黄酸 ０．０１９ ０．２０５ ０．０２６ ０．０２８
总大黄素 ０．０３８ ０．２４０ ０．０３２ ０．０３１
游离大黄素 ０．０１４ ０．０４２ ０．０２２ ０．０１４
结合大黄素 ０．０２４ ０．１９９ ０．０１０ ０．０１７
总大黄酚 ０．２１３ ０．２６０ ０．０３２ ０．１４２
游离大黄酚 ０．０９１ ０．０５９ ０．０２６ ０．０４０
结合大黄酚 ０．１２２ ０．２０１ ０．００６ ０．１０２
番泻苷Ａ ０．０９４ ０．４２８ ０．０４７ ０．２１２
蒽醌与泻下 ＥＤ５０的相关性为例，药用大黄、唐古特
大黄、甘肃掌叶大黄、四川掌叶大黄总蒽醌含量分别
为０４８０，０９６５，０２４４，０７５３ｇ·１００ｇ－１，泻下
ＥＤ５０分别为 ０９８９，０３７，１８２７，１０４６ｇ·ｋｇ
－１，回
归得Ｙ（ＥＤ５０）＝－１７４３７Ｘ（含量）＋２１２２５，Ｒ
２＝
０８４５２。计算结果见表４。
表４ 泻下组分对泻下效应回归分析
组分 回归方程 Ｒ２
结合大黄酚 Ｙ＝－７．４３１６Ｘ＋１．８５８８ ０．９９５７
总大黄酚 Ｙ＝－５．７８４６Ｘ＋１．９９３７ ０．９２３０
游离蒽醌 Ｙ＝－５．９３０９Ｘ＋２．５９１１ ０．８８１５
总蒽醌 Ｙ＝－１．７４３７Ｘ＋２．１２２５ ０．８４５２
总番泻苷 Ｙ＝－０．６５９９Ｘ＋１．９２９３ ０．８１２６
番泻苷 Ａ Ｙ＝－３．０８４２Ｘ＋１．６６０２ ０．７７０９
结合蒽醌 Ｙ＝－２．１７１３Ｘ＋１．８２２３ ０．７３２７
结合大黄素 Ｙ＝－５．２５５７Ｘ＋１．３８６５ ０．６４４１
总大黄素 Ｙ＝－４．４９０４Ｘ＋１．４４０８ ０．６０２５
结合大黄酸 Ｙ＝－５．００２８Ｘ＋１．４０５７ ０．５７３９
总大黄酸 Ｙ＝－３．５６４９Ｘ＋１．４３９４ ０．４８５３
游离大黄素 Ｙ＝－２５．０２３Ｘ＋１．６３３５ ０．３０６７
游离大黄酚 Ｙ＝－１１．５２４Ｘ＋１．６８０３ ０．２９４７
游离大黄酸 Ｙ＝－９．８３４７Ｘ＋１．４２６８ ０．２１０６
３ 讨论
３１ 泻下活性评价 从小鼠泻下质反应的差异看，
本次研究所选用的不同品种大黄间泻下效力存在较
大的差异，相差最大的品种泻下效力之比几乎达到
５倍。因此可以想象，在临床医师处方用药及工业
化大生产投料中，尽管使用大黄的药量相同，不同品
种间大黄泻下效力的高低仍可能造成最后疗效上的
较大差异。
为了更为准确的评价不同品种、来源间大黄的
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泻下强度是否存在差异，在现有大黄泻下机制研究
的基础上，选用了目前公认的抑制小鼠结肠肠壁膜
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶机制［８，９］，以酶活力作为量化指标进
行评价。结果表明：不同大黄水煎液均有抑制小鼠
结肠肠壁 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶作用，但其与质反应的结
果不完全吻合，提示大黄泻下可能是多机制、多因素
共同作用的结果。因此，不能简单的以酶抑制指标
来评价大黄的泻下效力，相对而言选用泻下质反应
作为指标评价大黄的泻下作用更为直观和全面。
通过各泻下组分含量对泻下效应（以质反应的
半数有效量 ＥＤ５０为评价指标），进行线性回归分析，
并计算由 Ｘ变项能正确预测 Ｙ变项之变异数的百
分比，即决定系数 Ｒ２，由 Ｒ２值可以看出，与泻下相
关性最强的是大黄酚类物质，总大黄酚、结合大黄酚
的 Ｒ２值皆在９０％以上，其对泻下作用的决定性大大
超过了一般认为的总番泻苷、番泻苷 Ａ，同时总蒽
醌、总番泻苷、番泻苷 Ａ的含量也明显影响泻下活
性。结合蒽醌类如结合大黄酚、结合大黄素、结合大
黄酸对泻下的贡献强度皆强于其游离形式，这与传
统认识相吻合。但相对例外的是，总蒽醌、结合蒽醌
与游离蒽醌三者对泻下皆有贡献，贡献程度相似，原
因尚待分析。
３２ 泻下活性存在差异的解决办法 中药最终发
挥疗效是多个有效成分、多因素共同作用的结果。
以本研究的大黄为例，不难发现大黄各品种间泻下
活性的差异实际上是活性组分即物质基础差异造成
的。上面讨论中以单一组分作为变量，对泻下活性
进行的探讨，仅仅是初步的探索。因此建立一个以
多个泻下组分为自变量，泻下效应为因变量的多元
逐步回归方程，才能真正客观、准确的评价多来源大
黄间的泻下强度差异，这是本研究的真正目的。
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Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｉｅｓｏｎｐｕｒｇａｔｉｖｅｐｏｔｅｎｃｙａｍｏｎｇｔｈｒｅｅ
ｓｐｉｅｃｅｓｏｆｃｅｒｔｉｆｉｅｄｒｈｕｂａｒｂ
ＷＡＮＧＪｉａｋｕｉ１，ＬＩＡｏ２，ＷＡＮＧＨｕｉ１，ＸＵＸｉａｏｙｕ２
（１ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｉｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７５，Ｃｈｉｎａ；
２ＰｈａｒｍａｃｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎｄｃａｕｓｅｓｏｆｐｕｒｇａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｃｅｒｔｉｆｉｅｄｒｈｕｂａｒｂ，ｓｏａｓ
ｔｏｌａｙｓｔｅａｄｙｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓｏｆｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｏｎａｓｓｅｓｓｉｎｇｐｕｒｇａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｍｐｅｒｓｏｎａｌｙｂｙｕｓｉｎｇｍｅａｓｕｒａｂｌｅｉｎｄｅｘｅｓＭｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ｐｏｔｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｐｕｒｇａｔｉｖｅＥＤ５０ｏｆｍｉｃｅａｓｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｉｎｄｅｘｗｈｉｃｈｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ，ａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅｉｎｍｏｕｓｅｃｏｌｏｎｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｍｅｍｂｒａｎｅｗｅｒｅａｌｓｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄＴｈｅｒｅｌａｔｅｄｐｕｒｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｓ（ｃｏｎｊｕｎｃｔａｎｄｆｒｅｅ
ｒｈｅｉｎ，ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ，ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｉｃａｃｉｄ，ｓｅｎｎｏｓｉｄｅＡ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＨＰＬＣａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｓ（ｔｏｔａｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ，ａｎｔｈｒａｇｌｕｃｏｓｅｎｎｉｎ；
ｃｏｎｊｕｎｃｔａｎｄｆｒｅｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＵＶＲｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｄｉｆｅｒｅｎｔｐｕｒｇａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｍｏｎｇｔｈｒｅｅｓｐｉｅｃｅｓｏｆｃｅｒｔｉ
ｆｉｅｄｒｈｕｂａｒｂＥａｃｈｐｕｒｇａｔｉｖｅＥＤ５０ｏｆｍｉｃｅｗａｓＲｈｅｕｍｔａｎｇｕｔｉｃｕｍ（ＥＤ５０＝０３７ｇ·ｋｇ
－１），Ｒｏｆｉｃｉｎａｌｅ（ＥＤ５０＝０９９ｇ·ｋｇ
－１）ａｎｄ
ＲｐａｌｍａｔｕｍｆｒｏｍＧａｎｓｕ（ＥＤ５０＝１８３ｇ·ｋｇ
－１），ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｐｏｔｅｎｃｙｏｆｔｈｏｓｅｗａｓ４９４∶１８５∶１Ｉｎｔｈｅｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｏｆ
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·０９９１·
第３１卷第２３期
２００６年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００６
ｔｈｅｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｃｅｒｔｉｆｉｅｄｒｈｕｂａｒｂＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｔｄｉｓｃｌｏｓｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｔａｂｌｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｏｆｐｕｒｇａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａ
ｍｏｎｇｔｈｒｅｅｓｐｉｅｃｅｓｏｆｃｅｒｔｉｆｉｅｄＲｈｕｂａｒｂ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｂａｂｌｙｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｔｈｅｕｌｔｉｍａｔｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ
Ｃｈｉｎｅｓｅｐａｔｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎｅｓ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｒｈｕｂａｒｂ；ｓｐｅｃｉｅｓ；ｐｕｒｇａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ；ｐｏｔｅｎｃｙ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００６０３２５
［基金项目］ 四川省科技厅应用基础项目（０１ＳＧ００３２１４）
［通讯作者］ 杨志荣，Ｔｅｌ：（０２８）８５４１０３６２，Ｅｍａｉｌ：ｐａｎ
ｍｉｎｇ１０６＠１６３．ｃｏｍ
塞隆骨提取物对成骨样细胞增殖及凋亡作用的研究
潘 明１，２，石 珏１，３，罗 霞１，３，侯若彤１，余梦瑶１，３，杨志荣１
（１．四川大学 生命科学学院，四川 成都 ６１００４１；
２．四川理工学院，四川 自贡 ６４３０００；
３．四川省中药研究所 中药细胞与分子生物学实验室，四川 成都 ６１００４１）
［摘要］ 目的：研究塞隆骨提取物对体外培养成骨样细胞代谢功能的调节作用及对其凋亡的影响。方法：采
用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提物、水煎提取液及骨胶提取物，以大鼠成骨样细胞ＲＯＳ１７／２８为细胞模
型，添加塞隆骨各提取物至大鼠成骨细胞培养体系中，ＭＴＴ法测定成骨样细胞的增殖情况，以流式细胞术检测成骨
样细胞凋亡比例。结果：１×１０－２ｇ·ｍＬ－１塞隆骨脂和水提物对大鼠成骨样细胞 ＲＯＳ１７／２８有显著的促进增殖作
用（Ｐ＜００１）；与空白组相比，各塞隆骨提取物使成骨细胞的亚二倍体峰比例明显减少，琼脂糖凝胶电泳结果表明
这些提取物能够降低成骨样细胞的凋亡率，推迟凋亡的发生。结论：塞隆骨通过促进成骨样细胞的增殖，降低成骨
样细胞的凋亡率和推迟其凋亡的发生，来发挥健骨的作用。
［关键词］ 塞隆骨提取物；成骨样细胞；增殖；凋亡
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００６）２３１９９１０４
塞隆骨为高原鼢鼠的干燥全骨架，研究发现其
部分药理学作用与传统名贵中药材虎骨类似［１］，
但其在治疗骨质疏松的机制尚不明确［２］。本实验
通过研究塞隆骨不同提取物对成骨样细胞增殖和凋
亡的影响来探索其在促进骨形成、健骨方面的作用
机制。
１ 材料
１．１ 药材及细胞
高原鼢鼠Ｍｙｏｓｐａｌａｘｂａｉｌｅｙｉ，２００３年５～６月采自
四川省阿坝州若尔盖县；大鼠成骨样细胞 ＲＯＳ１７／
２８，由本校医学院病原生物学教研室提供。
１．２ 药物制备方法
１．２．１ 塞隆骨各提取物的制备
１．２．１．１ 超临界萃取塞隆骨脂溶性成分提取 使
用ＭＦ－３７Ｋ－３８０型超临界萃取仪分２次提取，每
次装粉碎骨粉约２００ｇ，在压力２０ＭＰａ，温度４０℃，
ＣＯ２流量２０Ｌ·ｈ
－１条件下连续提取４ｈ，获骨粉脂
溶性成分。
１．２．１．２ 醇溶部分的提取 萃取脂溶性成分后，残
渣用７５％的乙醇在沸水浴上回流提取，每次回流２
ｈ，待提取液冷却后抽滤分离清液，重复３次；合并３
次的提取液，用减压蒸馏装置回收乙醇，获骨粉醇溶
部分。
１．２．１．３ 水溶性成分的提取 乙醇提取残渣用蒸
馏水在沸水浴上回流提取，每次２ｈ，待提取液冷却
后过滤，减压蒸去水分，获骨粉水溶性成分。
１．２．１．４ 塞隆骨水煎液的提取 粉碎的骨粉，混合
取样，直接用蒸馏水在沸水浴上回流提取，每次２ｈ，
重复３次，合并３次的提取液，减压浓缩，获骨粉水
煎液部分。
１．２．１．５ 骨胶提取物提取 骨粉称取２００ｍｇ，加
入Ｔｒｉｓ甘氨酸缓冲液 （ｐＨ８３），４ｍＬ，置６０℃
·１９９１·
第３１卷第２３期
２００６年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００６