全 文 ：大鼠肠内菌对麦冬皂苷 ⁄χ代谢的研究
沈 岚 3 o徐德生 o冯 怡 o林 晓 o吴笑如
k上海中医药大学 o上海 ustusvl
≈摘要 目的 }通过大鼠肠内菌代谢转化麦冬皂苷 ⁄χ的离体 !在体实验 o探索麦冬皂苷 ⁄j口服后吸收入血成
分 ∀方法 }采用 °≤2∞≥⁄定量检测离体实验的代谢产物及原形药含量 ~采用 ×≤ o°≤2≥法分别鉴定 !监测在
体实验大鼠尿 !血中的代谢产物 ∀结果 }麦冬皂苷 ⁄χ可被大鼠肠内菌群代谢 o且随着时间的延长 o代谢产物之一薯
蓣皂苷元含量增加 ∀结论 }薯蓣皂苷元为麦冬皂苷 ⁄χ经肠内菌代谢后的吸收入血成分之一 ∀
≈关键词 麦冬皂苷 ⁄χ ~肠内菌代谢 ~薯蓣皂苷元
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxls{2syt{2sv
≈收稿日期 ussw2su2uw
≈通讯作者 3 沈岚 oר¯ }ksutl xtvuuutt o∞2°¤¬¯}¤¯¤±¶∏¶∏
¶¬±¤1¦²°
麦冬是中医常用药 o具有滋阴润肺 !益胃生津 !
清心除烦的功效≈t ∀现代药理研究表明≈u ov o麦冬
治疗冠心病的主要有效成分是甾体皂苷 ∀其苷元分
别为 }罗斯考皂苷元kµ∏¶¦²ª¨±¬±l !kuvΣ ouwΣ ouxΣl2
uv ouw2二羟基罗斯考皂苷元≈kuvΣ ouwΣ ouxΣl2uv ouw2
§¬«¼§µ²¬¼2µ∏¶¦²ª¨±¬± !薯蓣皂苷元k§¬²¶ª¨±¬±l !麦冬苷
元k²³«¬²ª¨±¬±l等 ∀
本研究通过大鼠肠内菌对麦冬皂苷 ⁄χ离体 !在
体代谢转化实验 o采用 °≤2∞≥⁄定量检测离体实
验的代谢产物及原形药的含量 ~×≤ o°≤2≥法分
别鉴定 !监测在体实验大鼠尿 !血中的代谢产物 o探
索麦冬皂苷 ⁄χ口服后吸收的入血成分 o以期阐明传
统中药制剂中麦冬皂苷发挥药效的机制 o并促进新
药制剂的开发 ∀
1 材料
111 动物
•¬¶·¤µ大鼠 o雄性 o体重 uus ∗ uxs ªo本校实验动
物中心提供 o沪动管办kussvlvw号 ∀
112 对照品
麦冬皂苷 ⁄χ对照品 o自制 o经测定纯度达 || h
以上 ~薯蓣皂苷元对照品 o≥¬ª°¤公司 ∀
113 药品
麦冬皂苷 ⁄χ粗品 o自制 o经测定纯度达 zv h以
上 ~胃蛋白酶 o购于华美试剂公司 oux ªr瓶 ∀
114 试剂
乙醚k o上海振兴化工一厂l o高效液相用乙
腈 !甲醇为色谱纯k× §¨¬¤ ≤²°³¤±¼q¬±¦o≥l o水为双
蒸水 o生理盐水k医用l ∀人工胃液 }ts ª胃蛋白酶溶
于 tss °稀盐酸k³ t1ul中 ∀
厌氧培养液 }取 vz1x °溶液 ks1z{ h
u°wl ovz1x °溶液
ks1wz h u°w ot1t{ h ¤2
≤¯ ot1u h kwlu≥w os1tu h ≤¤≤¯ u os1ux h ª≥wku
l os1t h µ¨¶¤½∏µ¬±¨ t °o2¦¼¶·¨¬±¨ #u s1x ªoux h
2¤¶¦²µ¥¬¦¤¦¬§u °o{ h ¤u≤v xs °o牛肉膏 t ªo蛋
白胨 t ª和营养琼脂 t ªo加蒸馏水至 t o最后调 ³
z1x ∗ {1s ∀
115 仪器
ª¬¯¨ ±·ttss型 °≤k美国安捷伦公司l ~蒸发
光散射检测器 °p ∞≥⁄tsssk°¬¯¼°¨ µ¤¥²µ¤·²µ¬¨¶l ~
ª¬¯¨ ±·ttss型 ∞≥p ≥检测器k美国安捷伦公司l ~
× p vvu 型微量天平k上海精密科学仪器有限公
司l ∀
2 分析方法的建立
211 麦冬皂苷 ⁄χ°≤2∞≥⁄分析方法
色谱柱 ¯ ·¯¨¦« °¯¤·¬±∏° ≤t{ tsskw1y °° ≅ uxs
°° ox Λ°l ~流动相乙腈2水kwuΒx{l ~流速 t1ss °#
°¬±pt ~∞≥⁄~雾化温度 ys ε ~蒸发温度 {s ε ~气流
速度 t1x °#°¬±pt ∀
标准曲线的建立 }精密称取麦冬皂苷 ⁄χ对照
品 x1|s °ªo用甲醇配制成 t1t{ °ª#°pt麦冬皂苷
⁄χ对照品溶液 ∀将其稀释成一系列浓度对照品溶
液 o按以上色谱条件进行 °≤ 分析 ∀以峰面积 Α
的自然对数为横轴 o以含量 Ψ的自然对数为纵轴 o
#{ty#
第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ {
³µ¬¯oussx
得标准曲线回归方程 ±¯Ψ s1txy y n s1xzv u¯ ±Αo
ρ s1||| t o线性范围为 x1| ∗ uv1y Λªo最低定量限
为 x1| Λª∀
212 薯蓣皂苷元 °≤2∞≥⁄分析方法的建立
色谱柱 ¯ ·¯¨¦« °¯¤·¬±∏° ≤t{ tss kw1y °° ≅ uxs
°° ox Λ°l ~流动相乙腈2水k{sΒusl ~流速 t1ss °#
°¬±pt ~∞≥⁄~雾化温度 ys ε ~蒸发温度 {s ε ~气流
速度 t1x °#°¬±pt ∀
标准曲线的建立 }精密称取薯蓣皂苷元对照品
u1uy °ªo用甲醇配制成 t1tv °ª#°pt薯蓣皂苷元对
照品溶液 ∀将其稀释成一系列含量对照品溶液 o按
以上色谱条件进行 °≤分析 ∀以峰面积 Α的自然
对数为横轴 o以含量 Ψ的自然对数为纵轴 o得标准
曲线回归方程 ±¯Ψ p s1vt{ { n s1xyy y¯ ±Αoρ
s1||| y o线性范围为 x1yx ∗ uu1ys Λªo最低定量限为
x1yx Λª∀
213 薯蓣皂苷元 °≤2≥分析方法的建立
色谱柱 ¯ ·¯¨¦« °¯¤·¬±∏° ≤t{ tss kw1y °° ≅ uxs
°° ox Λ°l ~流动相乙腈2醋酸水溶液 kzwΒuy o³
v1xwl ~流速 t1ss °#°¬±pt ~电喷雾电离源k∞≥l o选
择性监测质荷比为k µ/ ζlwtx带正电荷的分子离子
峰 ~电喷雾电压 zs ∂ ~毛细管电压 v sss ∂ ~干燥气
kul流速 ts #°¬±p t ~干燥气温度 vxs ε ∀
214 薯蓣皂苷元 ×≤ 展开条件 硅胶 预制板
kx1s ≅ ts1sl¦°u ~展开剂 }正己烷2醋酸乙酯kvΒul ~显
色剂 }ts h u≥w的乙醇溶液 otsx ε 加热 x °¬±∀
215 麦冬皂苷 ⁄χ在人工胃液中的稳定性研究≈w
精密称取麦冬皂苷 ⁄χ对照品 {1st °ªo加微量
甲醇溶解 o然后与 ts °温度为 vz ε 人工胃液混
合 o用移液管分装于 s ot ou ov号试管中k预先置于 vz
ε 恒温水浴中l o每支 u1x °o然后分别用 s1u °²¯#
pt ¤ 在 s ot ou ov «后调 ³ 至 z1s终止反应 ∀
样品液水浴蒸干 o用甲醇定容于 u °容量瓶中 o摇
匀 o取上清液按 211 项色谱条件进行 °≤ 分析 o测
定人工胃液中未被解离的麦冬皂苷 ⁄χ的含量 ∀
以 s «组测得的麦冬皂苷 ⁄χ量为 tss h o依据各
组峰面积与 s «组的峰面积之比求出经一段时间后
未发生变化的麦冬皂苷 ⁄χ占原加入药物的百分含
量 o结果见表 t ∀
鉴于大鼠口服给药过程中药物在胃内停留小于
t «o所以可以认为口服给予麦冬皂苷 ⁄χ后 o其在胃
内保持稳定 o仍以大部分原形形式经小肠吸收 ∀
表 t 麦冬皂苷 ⁄χ在人工胃液kvz ε l中的
稳定性kcξ ? σ, ν vl
培养时间r« 含量r°ª 剩余率r h
s s1{z ? s1sw tss
t s1zx ? s1sv {y1u
u s1xt ? s1su x{1y
v s1wy ? s1sy xu1|
216 大鼠肠内细菌对麦冬皂苷 ⁄χ的代谢转化研
究≈x
21611 离体试验方法 取大鼠盲肠内容物约 x ªo
混悬于盛有 ws °麦冬皂苷 ⁄χ粗品溶液ks1tus °ª#
°ptl的培养罐中 ovz ε 厌氧条件下分别培养 { otu o
tw «∀
样品处理方法 }倾出全部样品液 o过滤 o滤液用
乙醚超声提取 u次 o每次 vs °otx °¬±o合并乙醚
层 o水浴蒸干 ∀用甲醇将残渣转移至 u °离心管
中 o蒸干 o残渣用 xs Λ甲醇溶解 ov sss µ#°¬±pt离心
x °¬±∀取上清液按 212项的色谱条件进行 °≤ 分
析 o测定代谢产物薯蓣皂苷元的含量 ∀水层用正丁
醇超声提取 u次 o每次 vs °otx °¬±o合并正丁醇
层 o水浴蒸干 o用甲醇将残渣转移至 u °离心管中 o
蒸干 o残渣用 xss Λ甲醇溶解 ov sss µ#°¬±pt离心 x
°¬±o取上清样按 211项的色谱条件进行 °≤分析 o
测定麦冬皂苷 ⁄χ的含量 ∀空白液按样品液同法处
理 ∀结果见表 u ∀
表 u 肠内细菌对麦冬皂苷 ⁄χ的代谢转化的
含量比较kcξ ? σ, ν vl
成分
代谢前
r°ª
代谢 tu «后
r°ª
代谢 tw «后
r°ª
均值
r°ª
麦冬皂苷 ⁄χ w1su p s1w{u s1w{w ? s1s{v
w1su p s1v||
w1su p s1xzs
薯蓣皂苷元 s n s1st{ u s1sty t ? s1ssu
s n s1stv y
s n s1sty x
注 }n表示有出峰 o但因含量太小未积分 op表示未做检测
结果表明 o麦冬皂苷 ⁄χ能被离体培养大鼠肠道
内细菌所代谢 otu «就有代谢产物薯蓣皂苷元生成 o
同时原形药也呈大幅度下降趋势 otw «仅剩约
tu h ∀色谱图表明 o空白液在麦冬皂苷 ⁄χ及薯蓣皂
苷元的出峰时间均无干扰 o样品分离较好 o且峰形良
好 ∀
21612 在体试验方法 取大鼠 o于代谢笼中饲养 z
§o待其充分适应本室环境后 o收取空白尿液备用 ∀
#|ty#
第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ {
³µ¬¯oussx
禁食 tu «后 o灌胃麦冬皂苷 ⁄χv §o剂量为 xs °ª#
®ªpt#§pt o期间禁食但自由饮水k糖盐水l o收集尿
液 o连续 v §∀尿液用等量的乙醚超声提取 u次 o每
次 tx °¬±o合并有机层 o浓缩 !过滤 o即得澄明分析样
本 ∀吸取适量薯蓣皂苷元标准品液 !空白尿样 !给药
后尿样点样于硅胶预制板上 o按 214 项条件展开 ∀
于最后一次给药后 t «腹主动脉取血 o分离血浆 o用
甲醇沉淀蛋白后过 ≤t{固相萃取柱 o收集乙醚洗脱
液 o挥干后 o用适量甲醇溶解残渣 o过滤 o取滤液进行
°≤2≥分析 ∀
×≤ 结果表明 o给药后尿样与薯蓣皂苷元对照
品同样位置处显紫红色斑点 o而空白尿样则无 ∀
°≤2≥结果表明 o给药后血样中有薯蓣皂苷元出
现 o且空白血样无干扰 o其为麦冬皂苷 ⁄χ的吸收入
血成分之一 ∀由此证明 o麦冬皂苷 ⁄χ在大鼠体内代
谢后 o部分转化为代谢产物薯蓣皂苷元 o吸收入血 o
经尿液排出 ∀
4 讨论
肠道内细菌的苷键水解酶系对具有苷键的药物
进行水解是肠道内细菌代谢药物的一大特征 ∀本实
验中 o离体 !在体肠内菌代谢转化实验均证明 o麦冬
皂苷 ⁄χ在大鼠肠内菌作用下能被代谢成薯蓣皂苷
元 o且最终在血液 !尿液中也检出薯蓣皂苷元 ∀由此
推测麦冬皂苷 ⁄χ在消化道以其苷元形式吸收进入
血液 ∀提示应利用肠菌的这种代谢功能 o使制剂在
肠内崩解 o吸收 o最大程度发挥药效 ∀另外 o有必要
进一步对口服麦冬皂苷 ⁄χ后的原形及代谢产物入
血情况进行进一步研究 o对原形药与肠内菌代谢产
物在生物活性方面有何异同进行考察 o以期阐明传
统麦冬制剂中发挥作用的真正有效成分 o阐明传统
中药制剂中麦冬皂苷发挥药效的机制 o为开发新药
奠定化学和药理学基础 o并促进新的药物制剂的开
发 ∀
可考虑将麦冬皂苷制成肠溶制剂 ∀制剂中的麦
冬皂苷在胃中很少甚至不溶出 o大大减少了对胃黏
膜的刺激 o降低了胃部不良反应 o而进入到小肠 o由
于肠溶辅料k如丙烯酸树脂 µl呈 ³ 依赖性 o因此
在 ³ y1{环境中迅速溶解释放出药物 o皂苷在肠道
菌群作用下 o代谢为次级苷及苷元 o由于分子量大大
降低 o极性降低 o使苷元易通过肠道黏膜进入到血液
循环产生药效 ∀此方面的研究正在进行中 ∀
≈参考文献
≈t 国家中医药管理局中华本草编委会 q中华本草k精选本l q上
海 }上海科学技术出版社 ot||{ qusxv q
≈u 封 凤 q参麦注射液临床应用 q时珍国医国药 ot||| otskyl }
wzx q
≈v 葛 勤 o康钦树 o赵劲松 q养心口服液质量标准研究 q时珍国
医国药 ot||| otskttl }{tt q
≈w 刘铁汉 o王 毅 o王本祥 o等 q淫羊藿苷的肠菌代谢研究 ´肠内
细菌对淫羊藿苷的代谢转化 q中草药 ousss ovtkttl }{vw q
≈x 王 毅 o刘铁汉 o王 巍 o等 q肠内菌群对人参皂苷 ªt的代谢
转化作用的研究 q中国中药杂志 ousst ouykvl }t{{ q
Εφφεχτ οφιντεστιναλ βαχτερια ον µεταβολισµ οφ οπηιοπογνιν σαπονιν ∆χ ιν ρατσ
≥∞¤±o÷ ⁄¨ 2¶«¨ ±ªoƒ∞ ≠¬o ÷¬¤²o • ÷¬¤²2µ∏
(Σηανγηαι Υνιϖερσιτψ οφ Τρεδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Σηανγηαι ustusv , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¬¨³¯²µ¨ ·«¨ ° ·¨¤¥²¯¬¦·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ¤±§·«¨ ¤¥¶²µ¥¨§ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶ ²© ²³«¬²³²ª±¬± ¶¤³²±¬± ⁄χk ⁄χl
ª¬√ ±¨ ²µ¤¯ ¼¯ ¬±µ¤·¶q Μετηοδ : ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©¥²·«²µ¬ª¬±¤¯ ⁄χ ¤±§¬·¶° ·¨¤¥²¯¬·¨¶º µ¨¨ §¨·¨¦·¨§¥¼ ° ¤¨±¶²© °≤2∞≥⁄¤±§·«¨ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶
²© ⁄χ¬± ¥¯²²§¤±§∏µ¬±¨ º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ∏¶¨ ²©×≤ ¤±§ °≤2≥ ιν ϖιϖο q Ρεσυλτ : ⁄χ ¦²∏¯§¥¨ ° ·¨¤¥²¯¬½¨ §¥¼¬±·¨¶·¬±¤¯ ¥¤¦·¨µ¬¤¬±
µ¤·¶q׫¨ ¦²±·¨±·²©§¬²¶ª¨ ±¬±o²±¨ ²©·«¨ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶o¬±¦µ¨¤¶¨§ªµ¤§∏¤¯ ¼¯ ¤¶·«¨ ·¬°¨³¤¶¶¨§qΧονχλυσιον : ⁄χ ¦¤± ¥¨ ° ·¨¤¥²¯¬½¨ §¬±¬±·¨¶2
·¬±¨ ²©µ¤·¤±§¬·¶° ·¨¤¥²¯¬·¨ o§¬²¶ª¨ ±¬±oº¤¶¤¥¶²µ¥¨§¬± ¥¯²²§²©µ¤·q
[ Κεψ ωορδσ] ²³«¬²³²ª±¬± ¶¤³²±¬± ⁄χ ~¬±·¨¶·¬±¤¯ ¥¤¦·¨µ¬¤ ° ·¨¤¥²¯¬¶° ~§¬²¶ª¨ ±¬± ≈责任编辑 古云侠
#suy#
第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ {
³µ¬¯oussx