全 文 ：H ]
-峰 ,并伴有 m /z 739, 519, 359, 197碎片 ,推测
m /z 717为丹参酸乙的 [M - H ]-峰 ; tR= 30. 5 min
处出现 m /z 741( 100% )峰 ,推测 m /z 741为紫草酸
乙镁盐的 [M- H]-峰。紫草酸乙镁盐是丹参中酚性
酸的主要成分 ,具有纤溶作用和增强冠脉流量的作
用 ;在 tR= 27. 7, 31. 7 min处 , M S中均有 m /z 493
[M - H ]
-峰 ,且它们的碎片离子相似 ,推测为紫草
酸中的二氢呋喃环开环后脱水脱羧 ,形成的一组顺
反烯烃异构体。
丹参中间体和注射液的 HPLC-M S谱图较丹参
药材少 ,在 tR= 9. 8, 14. 3 min处分别出现 m /z 197
[ M - H ]- 峰和 m /z 359 [ M - H ]- 峰 ,与药材
HPLC-M S谱图相同。 tR= 28. 7 min处 MS表现为
m /z 359 [M - H ]
-峰 ,为迷迭香酸 ,药材中无此峰。
tR= 28. 7 min处中间体和注射液 HPLC-M S谱图中
未出现丹参酸乙的 m /z 717 [M- H ]-峰 ,但在 tR=
30. 5 min出现较强的紫草酸乙镁盐 m /z 741 [M-
H ]
-峰。另外 ,药材 HPLC-M S谱图中出现的丹参素
脱水产物、紫草酸、紫草酸的脱水脱羧产物 ,在中间
体和注射液的 HPLC-M S谱图中均未出现 ,从而进
一步说明了丹参在制备过程中所含成分发生了较大
变化。我们正对上述化学成分做进一步确证。
以 MS作为检测器 ,可以将色谱的保留值、响应
值与化合物的相对分子质量信息结合起来 ,实现对
各主要流出组分的定性 ,为药材、中间体和成品制剂
的鉴别及质量评价提供更加全面、可靠的依据。
参考文献:
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2000, 22( 6): 391-395.
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志 , 1989, 24( 1): 6-10.
麦冬总皂苷提取工艺的研究
周跃华 ,徐德生 ,冯　怡 ,吴笑如 ,李谨谨
(上海中医药大学 ,上海　 200032)
摘　要:目的　对麦冬总皂苷的提取工艺进行优化。方法　以麦冬皂苷 D的含量为指标 ,采用正交试验法对麦冬提
取的条件进行考察。结果　通过试验找出了麦冬提取的优化条件。麦冬用 5～ 10目药材 ,加 10倍量 80%乙醇 ,热回
流提取 3次 ,每次 1 h。 结论　此优选条件可充分提取麦冬总皂苷。
关键词: 麦冬 ;皂苷 ;麦冬皂苷 D;正交试验
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 1076 03
Investigation on extract process for total saponins in root of Ophiopogon japonicus
ZHOU Yue-hua, XU De-sheng , FENG Yi, WU Xiao-ru, LI Jin-jin
( Shanghai Univ er sity o f TCM , Shanghai 200032, China )
Abstract: Object　 To optimize the best ex t raction of the to tal saponins in the roo t o f Ophiopogon
japonicus ( Thunb. ) Ker-Gaw l. ( RO) . Methods　 The ex t ract condition o f total saponins in RO was ob-
serv ed by o rthogonal design wi th ophiopogonis D as index. Results　 The optimum ex tract condi tion o f RO
was established. The mo re ef fectiv e way w as to smash RO to 5-10 mesh and ex t ract total saponins in RO
w ith ten times amount of 80% alcohol thrice by ref luxing, one hour each time. Conclusion　 The to tal
saponins in RO could be fully ex t racted in this condi tion.
Key words: the roo t of Ophiopogon japonicus ( Thunb) . Ker-Gaw l. ( RO) ; to tal saponins; ophiopogo-
nis D; orthogonal design
　　麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬 Ophiopogon
japonicus ( Thunb. ) Ker-Gaw l.干燥块根 ,是常用
滋阴中药 ,始载于《神农本草经》 ,历代重要本草都有
记载。具有养阴生津 ,润肺清心的功能 ,可用于热病
·1076· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
收稿日期: 2002-06-10
* 本校 1997级本科毕业生
伤津 ,心烦口渴等症。 现代研究发现:麦冬含有甾体
皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分。麦冬及其制剂
均具有一定的抗心肌缺氧、抗心律失常作用 ,临床用
于冠心病、心绞痛取得一定疗效。本试验采用正交试
验法对麦冬皂苷的提取工艺进行了考察 ,以期为麦
冬的进一步开发利用提供参考。
1　仪器与材料
HP1100高效液相色谱仪 (安捷伦公司 ) ; PL-
ELSD蒸发光散射检测器 (英国 PL公司 ) , SGK-
2LB ( 5LB)低噪音空气泵 (北京市精华苑技术研究
所 ) , RE52AA旋转蒸发器 (上海生化仪器厂 )。
麦冬皂苷 D对照品:日本昭和大学药学院生药
及天然药化研究室伊田喜光教授提供。乙腈、甲醇为
色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
浙麦冬购自上海药材公司徐汇区中药饮片厂 ,经
上海中医药大学生药教研室吴赵云副研究员鉴定。
2　麦冬皂苷的 HPLC-ELSD测定
麦冬皂苷为甾体皂苷 ,在紫外区吸收较弱。我们
采用将 UV检测器与 ELSD检测器串联的方法 ,比
较了相同液相色谱条件下检测结果的差异 ,结果表
明 ELSD用于麦冬皂苷的检测在分离度、理论塔板
数等方面显示出一定优点 ,故选择 HPLC-ELSD对
麦冬皂苷样品进行分析。
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Platinum C18 100A( 5μm,
4. 6 mm× 250 mm) ( Alltech公司 ) ;流动相: 乙腈 -
水 ( 42∶ 58) ;预柱: phenomenex part No. KJO-282
(迪马公司 ) ;柱温: 室温 ;雾化温度: 65℃ ;蒸发温
度: 80℃ ;气体流速: 1. 5 SLM。 色谱图见图 1。
* -麦冬皂苷 D
图 1　麦冬提取物的 HPLC-ELSD图谱
2. 2　样品制备方法:取麦冬药材 5 g ,粉碎成粗颗
粒 ,置索氏提取器中用 95%乙醇提取 6 h ,提取液回
收乙醇 ,用乙醚萃取 2次 ,再以水饱和正丁醇萃取 4
次 ,正丁醇萃取液用 0. 1 mol /L NaOH萃取 2次 ,正
丁醇液回收至干 ,用甲醇溶解并定容至 5 mL,即得
麦冬粗皂苷样品。
2. 3　标准曲线:精密称取麦冬皂苷 D对照品 ,以甲
醇配成 0. 91, 0. 71, 0. 30, 0. 24, 0. 196 mg /mL的对
照溶液 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,以峰面积的对
数与进样质量 (μg )的对数进行回归 ,得回归方程
为: lnM= 0. 587 4lnA - 4. 149 4, r= 0. 999 3,线性
范围为 1. 96～ 18. 2μg。直接以峰面积对对照品的
质量作回归分析 ,线性方程为 M= 206 792. 4A -
29 108. 4, r= 0. 989 9。 从线性方程的拟合情况看 ,
峰面积与进样量的相关性不如峰面积的对数与进样
量的对数之间的相关性好。
2. 4　精密度试验:精密吸取对照品溶液 20μL,重
复进样 5次 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,结果
RSD为 1. 77% 。
2. 5　重现性试验:平行取同一样品 5份 ,按含量测
定方法制备样品 ,用上述色谱条件测定峰面积 ,结果
RSD为 3. 6%。
2. 6　回收率试验:在已知含量的麦冬药材中加入一
定量的麦冬皂苷 D对照品 ,按含量测定项下方法制
备样品 ,用上述色谱条件测定峰面积 ,计算回收率 ,
结果平均回收率为 94. 5% , RSD= 3. 8% (n= 5)。
3　麦冬皂苷提取工艺
3. 1　提取溶媒的选择: 取同批麦冬药材分别以水 ,
60% , 80% , 95%乙醇提取 ,提取液滤过 ,滤液分别回
收乙醇 ,按 2. 2项下的方法制备样品 ,测定麦冬提取
物中麦冬皂苷 D的含量 (折算成相当于每克药材的
含量 ,使数据具可比性 ) ,见表 1。结果表明 80%乙醇
提取较好。
表 1　麦冬皂苷提取用溶媒比较 ( n= 3)
溶　媒 麦冬皂苷 D( mg /g)
95%乙醇 0. 100 4
80%乙醇 0. 161 0
60%乙醇 0. 137 0
水 0. 033 6
3. 2　提取方法选择: 取同批麦冬药材分别用 80%
乙醇以热回流、索氏提取及渗漉法提取 ,提取液分别
回收乙醇并浓缩 ,按 2. 2项下方法制备样品 ,测定麦
冬提取物中麦冬皂苷 D的含量 ,结果见表 2。回流法
与索氏提取法相近 ,均优于渗漉法。回流法提取麦冬
皂苷 D的量占索氏提取的 98. 7%。
表 2　麦冬皂苷提取方法比较 (n= 3)
提取方法 麦冬皂苷 D(μg /20μL)
回流 6. 583 0
渗漉 4. 499 7
索氏提取 3. 334 1
　　注:表中回流、渗漉的样品定容为生药 2 g /m L,而索氏提取的样
品定容为生药 1 g /mL。
3. 3　提取工艺的优选: 取麦冬药材 9份 ,按 L9 ( 34 )
·1077·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
正交试验表进行试验 ,分别提取 (提取时间为每次 1
h ) ,提取液按含量测定方法制备样品 ,测定麦冬皂
苷 D的含量 ,结果见表 3, 4, 5。
表 3　因素水平表
水平 因　　素
A加溶剂量 (倍 ) B药材粒度 C提取次数 (次 )
1 10 10～ 24目 1
2 8 5～ 10目 2
3 6 压扁整粒 3
表 4　麦冬皂苷提取正交试验表
试验号 A B C D(误差 ) 麦冬皂苷 D
(μg /20μL)
1 1 1 1 1 3. 803 4
2 1 2 2 2 4. 498 8
3 1 3 3 3 4. 093 9
4 2 1 2 3 3. 919 6
5 2 2 3 1 5. 169 6
6 2 3 1 2 3. 194 1
7 3 1 3 2 4. 535 8
8 3 2 1 3 3. 738 6
9 3 3 2 1 3. 101 8
Ⅰ 12. 396 1 12. 258 8 10. 736 1 12. 074 8 C T= 144. 445 1
Ⅱ 12. 283 3 13. 407 0 11. 520 2 12. 228 7
Ⅲ 11. 376 2 10. 389 8 13. 799 3 11. 752 1
R 0. 340 0 1. 005 7 1. 021 1 0. 158 9
表 5　方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 0. 208 5 2 0. 104 3 5. 283 7
B 1. 546 1 2 0. 773 1 39. 164 1 P < 0. 05
C 1. 688 1 2 0. 844 1 42. 760 9 P < 0. 05
D(误差 ) 0. 039 5 2 0. 019 7
　　F 0. 05 ( 2, 2)= 19　F 0. 01 ( 2, 2)= 99
　　从正交试验优选结果可见: 影响麦冬皂苷提取的
因素为提取次数> 药材粒度> 所用溶媒量 ,其中提取
次数、药材粒度对麦冬皂苷的提取有显著影响。最佳提
取条件为 A3B2 C3 ,即用 5～ 10目药材 ,加 10倍量溶
媒 ,提取 3次 ,每次 1 h ,基本能提尽麦冬皂苷 D。
4　讨论
目前麦冬皂苷单体的含量测定方法有 HPLC-
UV法、薄层扫描法、等吸收双波长消去法等 ,也有
水解后测定皂苷元含量的方法 ,但水解法操作繁琐 ,
且无法避免因水解不完全而引入的误差。由于麦冬
皂苷在紫外区的吸收弱 ,仅在 208 nm处有末端吸
收 ,用 HPLC-UV法检测 ,也有一定难度。
ELSD是一种通用型检测器 ,流动相雾化后在
加热管中蒸发 ,而流动相中的被检测物形成细小的
颗粒 ,颗粒通过一狭窄检测光束时形成散射光 ,由光
电倍增管收集放大 ,转换成电信号。 ELSD对不挥发
性的被检测物均产生响应 ,因而适用范围较广 [1, 2 ]。
本实验采用 HPLC-ELSD法测定麦冬皂苷 D取得
了较好效果。该法对麦冬药材及制剂的含量测定有
一定应用价值。
实验中 5～ 10目药材提取量比 10～ 24目药材
多 ,原因可能是:药材粒度小 ,表面积大 ,药渣吸附量
增加 ,此外 ,提取时细小的麦冬药材颗粒中有粘性物
渗出 ,相互间易粘结 ,对充分提取可能有影响。验证
试验证实 ,按以上条件提取 ,药材中的麦冬皂苷可被
基本提取完全。
致谢:麦冬皂苷 D对照品为日本昭和大学药学
院生药及天然药化研究室伊田喜光教授提供。
参考文献:
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HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量
孙远明 ,余红英* ,杨跃生* * ,杨金易 ,张　明
(华南农业大学食品科学学院 ,广东 广州　 510642)
摘　要: 目的　考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲 ( Hup A)和总碱含量 ;比较不同提取方法对石杉碱甲
含量的影响。方法　采用 RP-HPLC法测定 Hup A的含量。结果　 Hup A在根、茎、叶中的含量为茎、叶> 根 ;贵州、
广东和安徽产地的 Hup A含量分别为 0. 018% , 0. 021% , 0. 020% ,提取方法之间差异不显著。 结论　 Hup A含量
在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地 Hup A含量有一定差异。
关键词: 蛇足石杉 ;石杉碱甲 ;石杉总碱 ;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 1078 03
·1078· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
收稿日期: 2002-04-17
* 现在广东工业大学轻工化工学院　* * 本校生命科学学院