全 文 ：灵芝醇溶酸性组分的制备工艺与检测方法研究
黄书铭t o杨新林t o王帮武t o朱鹤孙t o徐建兰u
kt q北京理工大学 生命科学与技术学院 o北京 tsss{t ~
u q无锡三联高科技开发有限公司 o江苏 无锡 utwsuv l
≈摘要  目的 }研究灵芝子实体中醇溶酸性组分k ·¨«¤±²¯2¶²¯∏¥¯¨¤±§¤¦¬§¬¦¦²°³²±¨ ±·¶o∞≥„≤l制备工艺 o并建
立一种定量测定 ∞„≥≤ 含量的方法 ∀方法 }灵芝精粉用无水乙醇浸泡 o碱提酸化和氯仿萃取得 ∞≥„≤ 组分 ~利用
∞≥„≤ 与浓硫酸的特征性颜色反应进行定量测定 ∀结果 }ts ª级 ∞≥„≤ 较优的制备工艺为 }灵芝精粉与无水乙醇的
投料比 tkªlΒtxk°l o浸提时间 uw «o饱和 ‘¤‹≤ ’v溶液和氯仿萃取量分别为 t vss °o分 v次萃取 ∀ ∞≥„≤ 定量
测定条件为 }样品量 t ªo溶剂 tx °o浸泡 s qx «oxs h ‹u≥’w乙醇溶液 otss ε 水浴加热 v °¬± o测定 w|s ±°处光吸
收值 ∀结论 }本文提供的 ∞≥„≤ 制备的工艺路线 o具有设计合理 !操作简便的特点 o建立的 ∞≥„≤ 含量的测定方法可
以用于灵芝相关产品的质量鉴定 ∀
≈关键词  灵芝 ~醇溶酸性组分 ~制备 ~测定
≈中图分类号  • u{v ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svvu2sv
灵芝赤芝 Γανοδερµ α λυχιδυ µ kƒµql Ž¤µ¶·是
担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌 o在我国具有悠久的
药用历史 ∀随着对药理作用研究的深入 o证实了灵
芝有提高机体免疫力 !保肝护肝 !抗肿瘤 !抑菌等多
方面的作用≈t  ∀
灵芝子实体经乙醇提取 !碱提酸化≈u 后即得到
∞≥„≤ o椐文献报道 ∞≥„≤ 主要由三萜类化合物组
成≈v  ∀作为灵芝重要有效成分之一 o三萜类化合物
具有护肝保肝≈w  !抑制肿瘤细胞增殖≈x 等作用 o其
分离纯化及生物活性研究是目前灵芝研究的一个主
要方向 ∀
本文通过对不同浸提时间和萃取条件的比较 o
筛选出较好的 ∞≥„≤kts ª级l制备工艺 ∀同时利用
∞≥„≤与 ‹u≥’w乙醇溶液的特征性颜色反应 o建立
了一种定量测定灵芝样品中 ∞≥„≤ 含量的方法 ∀
1 材料
• xst…旋转蒸发器 !≥vtu 数显恒速搅拌器 !
≥‹…2v循环水真空泵k上海申生科技有限公司l ~
≈收稿日期  ussu2s|2sw
≈基金项目  国家重点科技项目k攻关l计划 !原国家科委生命
科学技术发展中心主任基金项目
≈通讯作者  ר¯ }kstsly{|tt|w|
 ²§¨¯xxs型酶标仪k美国 …¬²2• ¤§公司l ∀
安徽产椴木培养灵芝子实体精粉k无锡三联高
科技开发公司l o∞≥„≤ 标准品k由本实验室按文献
≈y 制备 o纯度 |{ h以上l o各种化学试剂为分析纯 ∀
2 实验方法
2 q1 灵芝子实体中 ts ª级 ∞≥„≤ 的制备工艺
2 q1 q1 ∞≥„≤ 制备工艺流程k见图 tl
2 q1 q2 操作步骤
2 q1 q2 q1 浸泡 !抽滤与减压蒸馏 称取 t®ª椴木
灵芝精粉 o按 tΒtx加入无水乙醇 o恒速搅拌 o浸泡
uw «o用自制的过滤装置抽滤 o除去残渣 o提取液在
wx ∗ xs ε op s qs{ ∗ p s qt  °¤oyz ∗ y{ µ#°¬±p t o
减压旋转蒸馏 o完全蒸干后得到黑色浸膏 o粗提物称
重 ∀
2 q1 q2 q2 氯仿溶解 !碱提 将上述粗提物用氯仿
溶解后 o倾入球形分液漏斗中 o加入饱和 ‘¤‹≤ ’v
溶液萃取 ∀充分振荡 !静置 o收集上清液 o下层氯仿
部分复加入饱和 ‘¤‹≤ ’v溶液 o分 u次萃取 o收集 !
合并 v次上清液 o冷却至 s ε o准备酸化 ∀
2 q1 q2 q3 酸化 !氯仿萃取与减压浓缩干燥 用 y
°²¯#pt冷盐酸将碱提液酸化至 ³‹v ∗ x o酸化后的
碱提液用氯仿按 tΒtk ς/ ςl萃取 u ∗ v次 o收集氯仿
溶部分 o减压蒸干得到淡黄色固体 ∞≥„≤ ∀
#uvv#
第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
图 t tsª级 ∞≥„≤ 提取流程图
2 q2 灵芝样品中 ∞≥„≤ 含量的测定
2 q2 q1 检测原理
∞≥„≤ 是灵芝中一类重要的生物活性成分 o能
与浓硫酸产生特征性的颜色反应≈z  ∀在实验中可
观察到 o∞≥„≤ 与 ‹u≥’w乙醇溶液混合液 o在 tss ε
水浴加热数分钟 o出现颜色反应 o根据显色深浅可进
行比色定量 ∀
2 q2 q2 标准曲线绘制
准确称取 ∞≥„≤ 标准品溶于无水乙醇中 o配成
us °ª#°p t ∞≥„≤ 乙醇溶液 ∀再用无水乙醇配成
us ots ox ou qx ot qux os ª#pt系列标准溶液 o取各溶
液 s qx °置于试管中 o平行 u组 o共 tu支试管 o分
别加入 s qx °xs h ‹u≥’w 乙醇溶液 o混匀后加塞
密封防止蒸气逸出 ∀tss ε 水浴加热 v °¬±取出 o
室温冷却后各取 txs ˏ于 |y孔酶标板 o在 w|s ±°
处测 ’⁄值 ∀
2 q2 q3 供试品测定
称取灵芝子实体精粉样品 t ªu份 ou ªt份 o分
别用 tx otx ovs °氯仿浸泡 s qx otu os qx «ou sss µ
#°¬±p t离心 ts °¬±q上清液经过饱和 ‘¤‹≤ ’v 碱
提 !酸化 !氯仿萃取 !减压蒸馏干燥后 o无水乙醇溶
解 oςtk°l表示其用量 ∀取各溶液 s qx °置于试
管中 o按上法进行 ‹u≥’w显色反应 o在 w|s ±° 处测
出 ’⁄值 o利用标准曲线求出各自的浓度 Χkª#
ptl o按公式 ςt ≅ Χ/ Ω ≅ tss% ( Ω为样品重量l
计算所测样品中 ∞≥„≤ 的含量 ∀
3 结果与讨论
3 q1 不同的萃取条件对 ∞≥„≤ 得率的影响
不同的无水乙醇浸提量和浸泡时间 o都会影响
到粗提物的得率 o见表 t ∀表 t显示 o在 tu «和 uw «
的浸泡时间下 o当无水乙醇的用量分别为 ts otu otx
时 ouw «浸泡时间比 tu «浸泡时间的粗提物得率
分别提高了 s qvv h os qvu h os qxv h ∀对于 tu «浸
泡时间 otu 和 tx 组比 ts 组的粗提物得率分
别提高了 s quy h和 s qxx h ~对于 uw «浸泡时间 otu
和tx组比ts组的粗提物得率分别提高了
s qux h和 s qzx h ∀通过以上分析 o提高粗提物得率
的较优工艺条件为灵芝精粉与无水乙醇的投料比 t
kªlΒtxk°l o浸提时间 uw «∀
表 t 不同溶剂体积和浸提时间对
灵芝粗提物得率的影响
原料重量r®ª 溶剂体积 r 浸泡时间 r« 粗提物得率 r h
t ts tu v qtz
uw v qx
t tu tu v qwv
uw v qzx
t tx tu v qzu
uw w qux
不同萃取工艺亦会对 ∞≥„≤ 得率产生影响 o见
表 u ∀表 u显示 o饱和 ‘¤‹≤ ’v碱提的总用量 t vss
和 t xss °ov次萃取比 t sss °ov次萃取 ∞≥„≤
的得率分别提高了 s qux h和 s qvw h o后者仅多出
s qs| h ∀因此 ot ®ª灵芝精粉制备 ∞≥„≤ 的较优萃
取工艺条件为从灵芝精粉粗提物中萃取 ∞≥„≤ o饱
和的 ‘¤‹≤ ’v的总用量 t vss °o分 v次提取 o氯
仿萃取的总用量及萃取次数和饱和的 ‘¤‹≤ ’v 一
样 o按 tΒtk ς/ ςl比例 o分 v次萃取 ∀
表 u 不同萃取条件对 ∞≥„≤ 得率的影响
样品重
量r®ª
‘¤‹≤ ’v萃取
用量r° 次数
氯仿萃取
用量r° 次数
∞≥„≤ 得
率r h
t xss n uxs n uxs v t sss u s qzx
t xss n wss n wss v t vss v t qss
t xss n xss n xss v t xss v t qs|
3 q2 灵芝样品中 ∞≥„≤ 含量的测定
∞≥„≤ 标准曲线见图 u ∀其线性回归方程 Ψ €
p s .suv vw n s .szx tx Ξ ,相关系数 ρ € s .||| w{ ,
Π  s qsss t ∀经显著性检验 ot qux ∗ us °ª#°p t
的 ∞≥„≤ 标准品溶液浓度与吸光度呈显著性线性相
关 o说明该法在此浓度范围内测定结果比较准
确≈{  ∀
灵芝样品中 ∞≥„≤ 含量测定结果见表 v ∀v次
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第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
测定同一灵芝样品中 ∞≥„≤的百分含量分别为
t qss h ot qsv h和 t qsy h o与较大量制备 ∞≥„≤ 的
得率接近k表 ul ∀t ª和 u ª量浸泡 s qx «测得的
∞≥„≤ 含量值的相对误差仅为 t qx h o而且 t ª样品
浸泡 tu «与 s qx «相比 o测得的 ∞≥„≤ 含量值只提
高了 s qsy h ∀因此 o实际测定时可以采用的条件为
样品量 t ª~溶剂体积 tx °~浸泡时间 s qx «∀此
外 o由于本文描述的比色法采用酶标仪和酶标板进
行光度测量 o因而可以同时快速地检测多个样品 ∀
表 v 灵芝样品中 ∞≥„≤ 的含量测定
样品重量rª 浸泡时间r« ∞≥„≤ 含量r h
t s qx t qss
u s qx t qsv
t tu t qsy
3 q3 结论
3 q3 q1 本文提供的从灵芝子实体中分离 ∞≥„≤ 组
分的工艺路线 o具有设计合理 !操作简便的特点 o为
进一步规模化生产 ∞≥„≤ 的工艺提供了参考依据 ∀
3 q3 q2 本文首次描述的定量测定灵芝样品中
∞≥„≤ 含量的方法 o具有准确度高 !重复性好 !可同
时分析多个样品等优点 o有可能作为一种标准的质
量鉴定方法加以推广应用 ∀
3 q3 q3 鉴于灵芝 ∞≥„≤ 组分具有多种重要的生物
活性 o本文研究结果对于灵芝新产品的研究与开发
有一定的促进作用 ∀
≈参考文献 
≈t  赵东旭 o杨新林 o王帮武 o等 q灵芝研究的若干进展 q食用菌学
报 ot||| oy kvl }x| q
≈u  Ž∏¥²·¤ × o„¶¤®¤ ≠ o ¬∏µ¤Œo¨·¤¯ q≥·µ∏¦·∏µ¨¶²© Š¤±²§¨µ¬¦„¦¬§
„ ¤±§…o× º² ‘¨ º ¤±²¶·¤±¨ ×¼³¨ …¬··¨µ×µ¬·¨µ³¨ ±¨ ¶©µ²° Γαν2
οδερµ α λυχιδυ µ kƒµql Ž¤µ¶·q ‹¨¯√ ·¨¬¦¤ ≤«¬°¬¦¤ „¦·¤ot|{u oyx
kul }ytt q
≈v  ‘¬¶«¬·²¥¤ × o≥¤·² ‹ o Ž¤¶¤¯ × o ·¨¤¯ q ‘¨ º …¬··¨µ≤uz ¤±§ × µ¨2
³¨ ±²¬§¶©µ²° ·«¨ ƒ∏±ª∏¶ Γανοδερµ α λυχιδυ µ k • ¬¨¶«¬l q „ªµ¬¦
…¬²¯ ≤«¨ ° ot|{x ow|kyl }tz|v q
≈w  王明宇 o刘 强 o车庆明 o等 q灵芝三萜类化合物对 v种小鼠肝
损伤模型的影响 q药学学报 ousss ovxkxl }vuy q
≈x  ¬± ≤ ‘o ײ°¨ • ° o • ²± ≥ q ‘²√¨¯ ≤¼·²·²¬¬¦°µ¬±¦¬³¯ ¶¨²©
ƒ²µ°²¶¤± Γανοδε µ α λυχιδυ µ q ‘¤·°µ²§ot||t oxwkwl }||{ q
≈y  王帮武 o杨新林 o张利刚 o等 q灵芝酸性组分的提取分离及抑菌
活性研究 q北京理工大学学报 oussu ouuktl }tux q
≈z  李平作 o徐 柔 o夏结红 o等 q灵芝深层发酵生产四环三萜酸的
研究 q工业微生物 ousss ovsktl }tx q
≈{  许晓文 o杨万龙 o沈含熙 q定量化学分析 q天津 }南开大学出版
社 ot||y qwy{ q
Στυδψ ον Πρεπαρατιον Προχεσσ ανδ Αναλψτιχαλ Μετηοδσ
οφ ΕΣΑΧ φροµ Γανοδερµα λυχιδυµ
‹ ˜„‘Š ≥«∏2°¬±ªt o ≠ „‘Š ÷¬±2¯¬±t o • „‘Š …¤±ª2º∏t o ‹ ˜ ‹ 2¨¶∏±t o ÷ ˜ ¬¤±2¯ ¤±u
kt q≥¦«²²¯ ²© ¬©¨ ≥¦¬¨±¦¨¶¤±§ × ¦¨«±²¯²ª¼ o …¨ ¬­¬±ªŒ±¶·¬·∏·¨ ²© × ¦¨«±²¯²ª¼ o …¨ ¬­¬±ª tsss{t o≤«¬±¤~
u q • ∏¬¬≥¤±¯¬¤± ‹¬ª«2·¨¦« ⁄¨ √¨¯²³° ±¨·≤²q·§qo • ∏¬¬ utwsuv o¬¤±ª¶∏o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³·«¨ ³µ²¦¨§∏µ¨ ©²µ¶¨³¤µ¤·¬±ª·«¨ ·¨«¤±²¯2¶²¯∏¥¯¨¤±§¤¦¬§¬¦¦²°³²±¨ ±·¶k∞≥„≤l ©µ²° Γανο2
δερµ α λυχιδυ µ o¤±§·² ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ ° ·¨«²§©²µ ∏´¤±·¬©¼¬±ª∞≥„≤ ¬± Γ . λυχιδυ µ . Μετηοδ : × «¨ ·¨«¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·²© Γ . λυχιδυ µ º¤¶
¬¨·µ¤¦·¨§ º¬·«¤¶¤·∏µ¤·¨§ ‘¤‹≤ ’v ¶²¯∏·¬²±o¤¦¬§¬©¬¨§¤±§µ¨2 ¬¨·µ¤¦·¨§¥¼ ¦«¯²µ²©²µ° ·² ²¥·¤¬± ∞≥„≤ q × «¨ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼¶¬¶²©
∞≥„≤ º¤¶¥¤¶¨§²±·«¨ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¦²¯²µµ¨¤¦·¬²± ¥¨·º¨¨ ± ∞≥„≤ ¤±§ ‹u≥’w q Ρεσυλτ : × «¨ ²³·¬°¤¯ ¦²±§¬·¬²±¶©²µ¶¨³¤µ¤·¬±ª ∞≥„≤
²± ¤ts ª¶¦¤¯¨¤µ¨ ¤¶©²¯ ²¯º¶}µ¤·¬²²© °¤·¨µ¬¤¯ ¤±§ ·¨«¤±²¯ k°l otΒ tx ~¬°° µ¨¶¬±ª·¬°¨ouw «~√²¯∏°¨²©¶¤·∏µ¤·¨§ ‘¤‹≤ ’v ¤±§
¦«¯²µ²©²µ° otvss °~ ¬¨·µ¤¦·v ·¬° ¶¨q ׫¨ ¦²±§¬·¬²± ©²µ° ¤¨¶∏µ¬±ª ∞≥„≤ ¬¶¤¶©²¯ ²¯º¶}¶¤°³¯¨ º ¬¨ª«·ot ª~¶²¯∏·¬²± √²¯∏°¨ot qx
°~¬°°∏¨µ¶¬±ª·¬°¨os qx «~§¨·¨¦·¬±ªµ¨¤ª¨ ±·oxs h ‹u≥’w ¬± ·¨«¤±²¯ ~ «¨ ¤·¬±ª·¬°¨¬± tss ε º¤·¨µ¥¤·«¨ ov °¬±~ ° ¤¨¶∏µ¬±ª
º¤√¨¯ ±¨ª·«ow|s ±° qΧονχλυσιον : × «¨ ³µ²¦¨§∏µ¨ ©²µ∞≥„≤ ³µ¨³¤µ¤·¬²±¬¶¶¬°³¯¨¤±§ º¨¯ 2¯§¨¶¬ª±¨ §o¤±§·«¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ § ° ·¨«²§©²µ
∞≥„≤ ¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼¶¬¶²©·«¨ Γ . λυχιδυ µ µ¨ ¤¯·¨§³µ²§∏¦·¶q
[ κεψ ωορδσ] Γ . λυχιδυ µ ; ·¨«¤±²¯2¶²¯∏¥¯¨¤±§¤¦¬§¬¦¦²°³²±¨ ±·¶k∞≥„≤l ~³µ¨³¤µ¤·¬²± ~ ° ¤¨¶∏µ¨ ° ±¨·
≈责任编辑 刘  
#wvv#
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