全 文 ：双苓扶正抗癌制剂对 ≥≤2z|st细胞增殖
及 ¦2°¼¦基因表达的研究
陈华圣 t3 o许爱华 t o贾玲昌 u o任 莉 t
kt1扬州大学 医学院 o江苏 扬州 uuxsst~
u1扬州大学 临床医学院 o江苏 扬州 uuxsstl
≈摘要 目的 }研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌细胞增殖及 ¦2°¼¦基因表达的影响 ∀方法 }采用 ××比色法 o
观察双苓扶正抗癌制剂 kws ∗ yws Λª# °pt lx个剂量组单用及其与阿霉素 ks1wow1s Λª# °pt l及顺铂 ks1tot1s
Λª# °pt l分别合用在体外对人胃癌 ≥≤ 2z|st细胞增殖的抑制作用 ~采用流式细胞技术检测该制剂 k{s ∗ vus Λª
# °pt l对 ¦2°¼¦基因阳性蛋白标记率的影响 ∀结果 }双苓扶正抗癌制剂单用体外作用 uw «o对人胃癌细胞增殖具
有抑制作用 o在 ws ∗ yws Λª# °pt剂量下 o其抑制率随剂量增加而增加 ~与阿霉素 ks1wow1s Λª# °pt l或顺铂
ks1tot1s Λª# °pt l分别合用 o可提高对人胃癌细胞的抑制率 ~在 {s ∗ vus Λª# °pt剂量下 o可抑制 ¦2°¼¦基因的
表达 ∀结论 }双苓扶正抗癌制剂单用对人胃癌细胞增殖具有抑制作用 o且具有量效关系 ~与阿霉素或顺铂分别合用
对人胃癌细胞的抑制作用具有协同效应 ~下调 ¦2°¼¦基因的表达可能是该制剂抑制肿瘤细胞增殖的作用机制之
一 ∀
≈关键词 双苓扶正抗癌制剂 ~≥≤ 2z|st细胞 ~¦2°¼¦基因 ~阿霉素 ~顺铂
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylut2t{uu2sv
≈收稿日期 ussy2su2ts
≈基金项目 江苏省科技厅社会发展基金项目 k
≥||v{ul
≈通讯作者 3 陈华圣 oר¯}ksxtwlz{{wuwto∞2°¤¬¯}«¶¦«¨ ±
¼½∏1 §¨∏1¦±
双苓扶正抗癌制剂是在扶正抗癌冲剂的基础上
改变工艺精制而成 ∀已有的实验研究表明 o扶正抗
癌冲剂对不同状态小鼠的免疫功能具有促进作用 o
对多种小鼠移植性肿瘤具有一定的抑制作用 o能延
长小鼠生存期 o对临床常用的化疗药物 x2ƒ∏所致荷
瘤小鼠的体重减轻及骨髓有核细胞数的减少具有良
好的改善作用 ≈t2v ∀但该冲剂整体给药对肿瘤瘤体
的抑制率有待提高 o体外实验对肿瘤细胞的抑制作
用不明显 ∀笔者在不违背中医辨证的前提下 o对方
中部分药物提取有效抗癌成分后制成双苓扶正抗癌
制剂 ∀进一步的研究结果表明 o该制剂对小鼠实体
瘤的抑制率有所提高 ≈w ∀本研究报道该制剂体外
对人胃癌细胞增殖及 ¦2°¼¦基因表达的影响 ∀
1 材料
111 药物及试剂 双苓扶正抗癌制剂由土茯苓 !茯
苓 !炙黄芪 !生薏苡仁 !制半夏 !炒白术 !半枝莲 !仙鹤
草等中药组成 o制备时将薏苡仁提取薏苡仁酯 !白术
提取挥发油 o其余药物水煎 !浓缩后按一定的工艺混
合 o干燥后为咖啡色颗粒 ot ª相当于 yu1x ª生药 o
由江苏省苏北人民医院提供 ∀体外试验时将其用
° tyws培养液配制成所需剂量 o过滤除菌后置
于 w ε 冰箱中备用 ∀ ° tyws培养粉 }美国
2
≤公司产品 ∀ ××k四甲基偶氮唑蓝 l}美国 ≥¬ª°¤
公司产品 ∀小牛血清 !羊抗鼠 ª!胰蛋白酶 k ×µ¼³2
¶¬± tΒuxsl}华美生物工程公司产品 ∀鼠抗人 ¦2°¼¦
单克隆抗体 }美国进口 o华美生物工程公司分装 ∀阿
霉素 }深圳万乐药业有限公司产品 o批号 sust∞t∀
顺铂 }锦州九泰药业有限责任公司产品 o批号
susxs{∀超纯水自制 ∀其余试剂用国产分析纯 ∀
112 人癌细胞株 人胃癌 ≥≤ 2z|st细胞株 o购自
中国科学院上海细胞生物学研究所 ∀体外培养 o每
u ∗ v §传代 t次 ∀
113 主要仪器 流式细胞仪 }ƒ≤≥ ≤¤¬¥∏µo美国
¦¨·²± ⁄¬¦®¬±¶²±公司生产 ∀激光工作条件 }氩离子
激光器 ±±²√¤|s2xo激光功率 p tx °• o激光波长
w{{ ±°∀计算机数据处理软件 }美国
⁄公司
≤∞±∞≥×o ²§ƒ× × ©²µ°¤¦∂ t1st∀
#uu{t#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy
2 方法
211 ××实验 选用处于对数生长期的人胃癌细
胞株 ≥≤ 2z|sto以 s1uxh 胰蛋白酶消化后用 °
≥
k³ z1ul洗涤数次 o计数 o再用含 tsh 小牛血清
° tyws培养液将细胞数调整为 t ≅ tsx个 r°∀
向 |y孔培养板中分别加入上述细胞悬液 tss Λo
将培养板置于 xh ≤u ovz ε !饱和湿度的孵箱中培
养 uw «后取出 o分别加入含不同剂量 kws ∗ yws Λª
# °pt l双苓扶正抗癌制剂的 ° tyws各 tss
Λo与阿霉素 !顺铂的协同效应组是分别加入含不
同浓度双苓扶正抗癌制剂和阿霉素或顺铂各 xs
Λo每个剂量皆设 v个复孔 o另设不加药物的阴性
对照和单加阿霉素 !顺铂的阳性对照孔 o继续培养
uw «∀培养结束前 w «从各孔中吸出 tss Λ上清弃
去 o加入 ×× ts Λk终浓度 x °ª# °pt lo继续培
养 w «后加入酸化异丙醇 o用酶联检测仪测定细胞
增殖 Αkxzs ±°l∀细胞抑制率 kh l kt p药物孔
Αr对照孔 Αl ≅ tssh ∀
212 蛋白含量分析 细胞培养及处理方法同上 o将
细胞含量调为 u ≅ tsx个 r°∀向培养瓶中分别加入
上述细胞悬液 w °o置于 xh ≤u ovz ε !饱和湿度
的孵箱中培养 uw «后取出 o将培养瓶随机分组 o分
别加入 ws ∗ yws Λª# °pt不同剂量的双苓扶正抗
癌制剂或阳性对照药阿霉素各 w °o阴性对照组加
入等容积的 ° tyws培养液 o加药后培养时间为
w{ «∀将细胞用 °
≥洗涤后离心 ku sss µ# °¬±pt ox
°¬±lo弃上清后加入鼠抗人 ¦2°¼¦单克隆抗体 ow
ε owx °¬±后加入 °
≥o混合后离心洗 u遍 o弃上清
液后加入 tΒtx稀释的羊抗鼠 ª vs Λow ε owx
°¬±后加入 °
≥o混合后再离心洗涤 t次 o将细胞悬
浮于 s1v °°
≥中 o上机检测 ¦2°¼¦基因阳性蛋白
标记率 ∀
213 统计学处理 样本率两两之间差异的显著性
比较采用 ςu检验 ∀
3 结果
311 双苓扶正抗癌制剂单用及与阿霉素 !顺铂联用
对 ≥≤ 2z|st胃癌细胞的抑制作用 表 tou结果显
示 o双苓扶正抗癌制剂在 ws ∗ yws Λª# °pt剂量
下 o体外作用 uw «o对 ≥≤ 2z|st胃癌细胞体外增殖
皆具有抑制作用 o其抑制率随剂量增加而增加 ~与阿
霉素及顺铂分别合用 o皆可提高对人胃癌细胞的抑
制率 o但该制剂与小剂量阿霉素合用 o仅在 yws Λª
# °pt剂量下具有统计学差异 kΠ s1sxl~而该制
剂与小剂量顺铂合用 o在 {sotysovusoyws Λª#
°pt剂量下皆具有统计学差异 kΠ s1stlo且优于
大剂量顺铂组 ∀
表 t 双苓扶正抗癌制剂单用及与阿霉素联用
对 ≥≤ 2×|st胃癌细胞的抑制作用
双苓扶正
rΛª# °pt
阿霉素 rΛª# °pt
s sqw wqs
s p vu1s y|1u
ws tu1x vw1t z|1u
{s tv1u v|1y {s1w
tys tz1v wt1u {w1zul
vus uu1| ww1x |v1zul
yws uw1| wz1vtl |x1|ul
注 }与单用阿霉素组比 tl Π s1sxoul Π s1st
表 u 双苓扶正抗癌制剂单用及与顺铂联用
对 ≥≤ 2z|st胃癌细胞的抑制作用 h
双苓扶正
rΛª# °pt
顺铂 rΛª# °pt
s sqt tqs
s p tu1u us1{
ws tv1z tx1{ uv1t
{s tx1u uy1tul u{1u
tys t{1y vt1zul vw1utl
vus ut1u vv1xul vw1vtl
yws uu1x vy1|ul v{1xul
注 }与单用顺铂组比 tl Π s1sxoul Π s1st
312 双苓扶正抗癌制剂对 ≥≤ 2z|st胃癌细胞 ¦2
°¼¦基因表达的影响 表 v结果显示 o双苓扶正抗
癌制剂可下调 ≥≤ 2z|st胃癌细胞 ¦2°¼¦基因的阳
性表达率 o以 tysovus Λª# °2t u个剂量组的作用
更为显著 o与对照组比较皆具有统计学意义 ∀
表 v 双苓扶正抗癌制剂对 ≥≤ 2z|st胃癌
细胞 ¦2°¼¦基因表达的影响
组别 剂量 rΛª# °pt ¦2°¼¦阳性率 rh
对照 p uu1sx
双苓扶正 {s usqzv
tys |q{ttl
vus yquuul
阿霉素 w yqytul
注 }与对照组比 tl Π s1sxoul Π s1st
4 讨论
双苓扶正抗癌复方是针对手术 !放化疗后及中
晚期肿瘤患者脾虚为本 o痰湿癌毒为标的主要病理
特点 o参照现代中药药理研究成果 o选用既符合中医
辨证 o又有一定抗癌活性的药物进行组方 ∀实验及
临床观察结果皆表明 o该方具有一定的抗肿瘤效
#vu{t#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy
果 ≈t2y ∀本研究将该复方制剂在体外与肿瘤细胞一
起培养 o结果表明 o在 ws ∗ yws Λª# °pt剂量下可
抑制 ≥≤ 2z|st胃癌细胞的生长 o其抑制率随剂量
增加而增加 o提示该制剂单用对瘤细胞具有直接抑
制作用 o且具有量效关系 ∀
阿霉素和顺铂是临床对胃癌疗效较好的常用化
疗药物 o但毒副作用较大 ∀本研究将该制剂分别与
上述两种化疗药物联合应用 o结果显示 o皆可提高对
人胃癌细胞的抑制率 o具有协同效应 ∀但从结果可
以看出 o该制剂与大剂量阿霉素的协同效果优于小
剂量 o而与小剂量顺铂的协同效果优于大剂量 o提示
将该制剂与小剂量顺铂联合应用更具有临床意义 ∀
恶性肿瘤的本质是瘤细胞无限增殖 o原癌基因
¦2°¼¦在增殖过程中起着十分重要的作用 o其异常
表达可引起细胞 ⁄复制及 ° 转录功能紊
乱 o使细胞周期调控失衡进而形成瘤块 ≈z ∀本研究
结果显示 o双苓扶正抗癌制剂体外培养可抑制人胃
癌细胞 ¦2°¼¦基因的表达 o提示下调 ¦2°¼¦基因可
能是该制剂抗肿瘤作用的机制之一 o有待进一步研
究 ∀
≈致谢 与流式细胞术相关的实验由中国科学院上海生
命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所细胞与分子识
别中心孟绿蓉和吴直江协助完成 ∀
≈参考文献
≈t 陈华圣 o许爱华 o顾维戎 o等 1扶正抗癌冲剂增强小鼠免疫功
能的实验研究 ≈ 1南京中医药大学学报 ot||xottkul}zy1
≈u 陈华圣 o许爱华 o项晓人 o等 1扶正抗癌冲剂抗肿瘤作用的实
验研究 ≈ 1中药新药与临床药理 ot||xoyktl}uz1
≈v 陈华圣 o许爱华 o王 玲 o等 1扶正抗癌冲剂对环磷酰胺所致
小鼠机体损伤的影响 ≈ 1河北中医 ot||{ouskul}tuy1
≈w 陈华圣 o许爱华 o王正兵 o等 1双苓扶正抗癌胶囊对小鼠肝癌
的影响 ≈ 1中国实验方剂学杂志 oussvo|ktl}wx1
≈x 陈华圣 o翟 范 o邹大同 o等 1扶正抗癌冲剂治疗中晚期消化
道肿瘤 vu例 ≈ 1辽宁中医杂志 ot||xouuk{l}vyu1
≈y 翟 范 o陈华圣 1中药扶正抗癌方治疗中 !晚期消化道肿瘤
tys例临床观察 ≈ 1中国中西医结合脾胃杂志 ot||zoxkul}
yz1
≈z ¶«¬¬ o ²¥¨ ≤o °¤± • o ·¨¤¯1 ³²³·²¶¬¶¤±§¦¨¯¯ ³µ²¯¬©¨µ¤2
·¬²± ¬± ·«¨ §¨ √¨¯²³° ±¨·²©ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤¶}¤¶¶²¦¬¤·¬²±¶º¬·« ¦2
°¼¦¤±§ ³xv ³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²± ≈ q ¤¶·µ²¨ ±·¨µ²¯ ³¨¤·²¯o
ussuotz}|yy1
Στυδψ οφ Σηυανγλινγ Φυζηενγ αντι2τυµ ορ πρεπαρατιον ον προλιφερατιον
ανδ χ2µ ψχ γενε εξπρεσσιον οφ ΣΓ Χ2z|st χελλσ
≤∞∏¤2¶«¨ ±ªt o ÷ ¬2«∏¤t o ¬±2¦«¤±ªu o ∞¬t
(t1 ΜεδιχαλΧολλεγε οφ Ψανγζηου Υνιϖερσιτψ, Ψανγζηου uuxsst, Χηινα;
u1 ΧλινιχαλΜεδιχαλΧολλεγε οφ Ψανγζηου Υνιϖερσιτψ, Ψανγζηου uuxsst, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·²©≥«∏¤±ª¯¬±ªƒ∏½«¨ ±ª¤±·¬2·∏°²µ³µ¨³¤µ¤·¬²± k≥°l ©¬√¨ªµ²∏³¶²± ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±
¤±§¦2°¼¦ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©≥≤ 2z|st ¦¨¯¯¶ιν ϖιτρο1 Μετηοδ : ׫¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨¦·²©¶¬±ª¯¨≥°kws ∗ yws Λª# °pt l ¤±§¦²°2
¥¬± §¨·«¨ µ¤³¼ º¬·«¤§µ¬¤°¼¦¬±ks1wo w1s Λª# °pt l ²µ¦¬¶³¯¤·¬±ks1tot1s Λª# °pt l ²± «∏°¤± ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤ ≥≤ 2z|st ¦¨ ¯¯¶
³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± º µ¨¨ ²¥¶¨µ√ §¨¥¼ ×× ¦²¯²µ¬° ·¨µ¬¦¤±¤¯¼¶¬¶° ·¨«²§1 × ¦¨«±¬´∏¨ ²©©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼ ιν ϖιτρο º¤¶∏¶¨§·² ° ¤¨¶∏µ¨ ·«¨ µ¤·¨ ²©
³²¶¬·¬√¨¶¬ª± ²©≥°k{s ∗ vus Λª# °pt l ²± ¦2°¼¦ª¨ ±¨³µ²·¨¬± ²©≥≤ 2z|st ¦¨¯¯¶1 Ρ εσυλτ: ≥≤ 2z|st ¦¨¯¯¶³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± º µ¨¨ ¬±2
«¬¥¬·¨§¥¼ ¶¬±ª¯¨≥° ¬± §²¶¨ ²©ws ∗ yws Λª# °pt uw «1 ·¶¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨ º¤¶¬±¦µ¨¤¶¨§º¬·«¬±¦µ¨¤¶¨ ²©§²¶¨1 ׫¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨
²± ≥≤ 2z|st ¦¨¯¯¶¦²∏¯§¥¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§¥¼ ≥° ¬± §²¶¨ ²©ws ∗ yws Λª# °pt ³¯∏¶¤§µ¬¤°¼¦¬± ¬± §²¶¨ ²©s1w ¤±§w1s Λª# °pt ²µ
³¯∏¶¦¬¶³¯¤·¬± ¬± §²¶¨ ²©s1t ¤±§t1s Λª# °pt 1 ··«¨ ¶¤°¨·¬°¨o ≥° k{s ∗ vus Λª# °pt l ¤¯¶²¦²∏¯§¬±«¬¥¬·¨·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²±
²©¦2°¼¦ª¨ ±¨²©≥≤ 2z|st ¦¨ ¯¯¶1Χονχλυσιον: ≥¬±ª¯¨≥° «¤§¬±«¬¥¬·¬±ª ©¨©¨¦·²± «∏°¤± ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯¶³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± º¬·«¤
§²¶¨ 2¨ ©©¨¦·µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¤±§¶¼± µ¨ª¬¦ ©¨©¨¦·º«¬¯¨ ¦²°¥¬± §¨º¬·«¤§µ¬¤°¼¦¬± ²µ¦¬¶³¯¤·¬±1 ײ¬±«¬¥¬··«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¦2°¼¦ª¨ ±¨²©«∏2
°¤± ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯¶°¬ª«·¥¨ ²±¨²©¤¦·¬²± ° ¦¨«¤±¬¶°¶²©≥°o º«¬¦«¬±«¬¥¬·¨§·∏°²µ¦¨¯¯¶³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±1
[ Κεψ ωορδσ] ≥«∏¤±ª¯¬±ªƒ∏½«¨ ±ª¤±·¬2·∏°²µ³µ¨³¤µ¤·¬²±~ ≥≤ 2z|st ¦¨ ¯¯¶~ ¦2°¼¦ª¨ ± ~¨ ¤§µ¬¤°¼¦¬±~ ¦¬¶³¯¤·¬±
≈责任编辑 古云侠
#wu{t#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy