全 文 ：参麦注射液对脑出血大鼠神经细胞凋亡相关基因
表达影响的实验研究
何泽云t 3 o屈 波u o李晓峰u
kt1 浙江大学 医学院 第一附属医院 o浙江 杭州 vtsssv ~
u1 湖南中医学院 o湖南 长沙 wtssszl
≈摘要  目的 }观察参麦注射液对大鼠脑出血后神经细胞凋亡相关基因的影响 ∀方法 }采用 • ²¶¨±¥¨µª法复制
大鼠脑出血模型 o测定脑出血后大鼠海马 ≤„t区神经细胞病理形态结构及其 …¦¯2u基因 !…¤¬基因表达 ~结果 }参麦
注射液减少大鼠脑出血后海马 ≤„t区锥体细胞凋亡数目 o显著增加 …¦¯2u基因表达 o降低 …¤¬基因表达 o使 …¤¬ °• 2
‘„r¥¦¯2u °• ‘„比率下降 ∀结论 }参麦注射液能调节凋亡基因 o减少大鼠脑出血后神经细胞的凋亡 ∀
≈关键词  参麦注射液 ~脑出血 ~神经元凋亡 ~凋亡相关基因
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltu2ttys2sy
≈收稿日期  ussw2sv2tz
≈基金项目  国家自然科学基金kv||sst||l ~湖南省自然科学
基金k||≠ussvl ~中国博士后基金kussvsvwxutl
≈通讯作者  3 何泽云 oר¯ }ksxztl{zuvyx{w o∞2°¤¬¯}«½¼º­ussv
ƒ ¼¤«²²1¦²°1¦±
新近研究表明脑出血后血肿周围迅速出现广泛
的缺血区域 o并导致血肿周围广泛的脑水肿形成 o这
种继发性缺血符合缺血半暗带的所有特征≈t ou  ∀血
肿周围缺血半暗带的存在加重了脑出血后脑组织继
发性损伤 o导致较高的致残率 !死亡率 ∀因而抢救血
肿周围缺血半暗带中可逆性的缺血神经细胞 !抑制
继发性损伤成为研究脑出血的热点之一 ∀参麦注射
液是化裁于古方生脉饮的中药注射制剂 o现代药理
研究报道 }参麦注射液能显著减轻氧自由基对细胞
的损伤 o改善细胞能量代谢 o降低脂质过氧化 o提高
超氧化物歧化酶k≥’⁄l的活性 o具有减轻脑细胞缺
血损伤及抗细胞凋亡的作用≈v ow  ∀本实验通过观察
参麦注射液对脑出血后血肿周围神经细胞凋亡 o及
其凋亡相关基因 …¤¬ °• ‘„ o…¦¯2u °• ‘„ 表达的影
响 o为参麦注射液治疗脑出血提供理论依据 ∀
1 材料
111 动物 健康 ≥⁄雄性大鼠 o体重kuus ? usl ªo由
湖南省卫生防疫站实验动物中心提供 ∀
112 药物 参麦注射液k≥l }由红参 !麦冬组成 o
每支 ts °含生药各 t ª∀正大青春宝药业有限公
司生产 o批号 |wvsvvx|w ∀
113 主要试剂 º 型胶原 o≥¬ª°¤公司 ~⁄∞°≤ o上海
生工 ~×µ¬½²¯ 核酸提取液k ²¯·s{ty„usl oŠ¬¥¦²公司生
产 ~苯酚 o海特公司 ~°≤• o¤µ®¨µ°µ²°¨ ª¤~„ ∂ 逆转
录酶 o°µ²°¨ ª¤~פ´ ⁄‘„ 聚合酶 o°µ²°¨ ª¤~• ‘„¶¬±o
°µ²°¨ ª¤~’¯¬ª²k§×lty o°µ²°¨ ª¤~§‘×°¶ ¬¬¤µ¨k ²¯·}|l o
上海生工 ~琼脂糖粉 o上海生工 ~异丙醇 !氯仿 !乙醇 !
蔗糖等均为分析纯 ∀
114 主要仪器 ⁄ŽŒ2u型恒温水箱 o上海实验仪器
总厂 ~׊ty台式高速冷冻离心机 o湖南湘仪仪表总
厂 ~⁄t{ts自动双重纯水蒸馏器 o上海申生科技有限
公司 ~׊vu{{光学读数天平 o湘仪天平仪器厂 ~…Œ’2
• „⁄凝胶成像系统 o美国 …Œ’2• „⁄公司 ~ŒŽp {u„
真空干燥箱 o上海实验仪器总厂 ~⁄≠≠ p ¶电泳槽 o
北京六一仪器厂 ~⁄≠≠ p ¶ y…型电泳仪 o北京六一
仪器厂 ~≠°≥ p ts液氮罐 o四川亚西机器厂 ~°≤°热
循环仪 o美国 ~≥‘p v立体定位仪 o日本 ~’°×’‘多功
能显微镜 o西德 ~‹ p yss 透射电子显微镜 o日本 ~
‹…tt{s组织修整机 o瑞典 ~图像分析仪k≥·µ¤·¤ª¨ ±¨
¤¨ª¯¨ ¼¨¨ ŒŒl o美国 ∀
2 实验方法
211 实验分组 实验分批进行 o按完全随机方法将
≥⁄大鼠分为 w组 ∀正常组 }普通饲养 o自动饮水 o不
作任何处理 ~假手术组 }普通饲养 o术前 uw «以 u °
注射用水腹腔注射 o术后仍用上法k每天 t次l o直到
处死为止 ~模型组 }组内再随机分成脑出血后 tu ouw
#sytt#
第 u|卷第 tu期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tu
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
«ou ow oz §共 x个时间点 o术前 uw «以 u °注射用
水腹腔注射 o术后仍用上法k每天 t次l o直到处死为
止 ~参麦组组内时间点及动物分配同模型组 o术前
uw «以参麦注射液 u °k相当于红参 !麦冬各 s1u ªl
腹腔注射 o术后仍用上法k每天 t次l o直到处死为
止 ∀
212 大鼠脑出血模型方法 按文献≈x 法复制 ∀
3 观察指标及方法
311 神经系统病态观察 术后 vs °¬±左右 o造模大
鼠清醒后即开始观察 o以后每天各观察 t次 o包括神
经系统病态及爬杆记分 ∀
31111 神经系统病态 包括躯体倾斜 o立行欲倒 o
旋转爬行 o活动迟缓 o易激惹 ∀
31112 爬杆记分 爬杆长 u ° o宽 u1w ¦° o厚 w1w
¦° o一端抬高 wxβ o术前 v §训练大鼠由低向高爬行 ∀
计分方法 }将木条等分为 w段 o每段计 y分 ow段总
分相加共 uw分 ∀
312 组织形态学观察
31211 光学显微镜观察 将实验大鼠以 ts h水合
氯醛腹腔注射麻醉后断头处死 o取出全脑 o分离出血
侧海马 o浸入 ts h中性福尔马林液中固定 o常规梯
度酒精脱水 o石蜡包埋 o‹∞染色 o’°×’‘多功能光
学显微镜观察摄像 ∀
31212 透射电子显微镜观察 按上述方法取出大
鼠出血侧海马组织 ∀t h 锇酸固定 os1t °²¯#pt°…≥
漂洗 o梯度丙酮脱水 o∞³²±2{tu包埋 o在 Ž…tt{ss型
组织修整机上切片 o醋酸铀2醋酸铅双重染色 o‹ p
yss型透射电子显微镜观察 !摄像 ∀
313 • ×2°≤• 技术测定血肿周围脑组织 …¦¯2u °•2
‘„ o…¤¬ °• ‘„
31311 总 • ‘„的提取 按文献≈y 方法进行 ∀
31312 ¦⁄‘„合成 在 s1x °反应管内依次加入
以下成分建立 vs ˏ反应体系 }⁄∞°≤处理水 tw ˏ~
x ˜#ˏpt • ±¤¶¬± w ˏ~总 • ‘„ t Λª~’¯¬ª²k§×ltyt ˏ~
加热至 yx ε x °¬±o随后加入 x ≅ • ×缓冲液 w ˏ~ux
°°²¯#pt ª≤¯ u w ˏ~ts °°²¯#pt §‘×°¶t ˏ~„ ∂
逆转录酶 t ˏ∀wu ε 保温 ys °¬±o|w ε 变性 v ∗ x
°¬±o冰上冷却 o离心数秒 o然后 °≤• 扩增 ∀
31313 °≤• 引物设计根据 Š¨ ±¨ …¤±®参照文献≈y 
利用基因探索者软件自行设计 ∀ …¦¯2u 引物序列
k°µ¬°¨ µl为上游引物 }xχ2Š×≤ ≤Š× Š≤≤ ׊≤ „×× ×„Š
≤„„ Š≤× Š2vχ ~下游引物 }xχ2„≤„ ׄ„ ŠŠ≤ „„≤
≤„≤ „≤≤ „×≤ Š„× ≤2vχ o扩增产物 }wvt ¥³∀ …¤¬引
物序列为上游引物 }xχ2×≤≤ „≤≤ „„Š „„Š ≤׊ „Š≤
Š„2vχ ~下游引物 }xχ2Š×≤ ≤„Š ≤≤≤ „׊ „׊ Š××
≤×2vχ o扩增产物 }uxz ¥³∀
内参照 Β2¤¦·¬± 引物序列 o上游引物 oxχ2׊„
≤ŠŠ ×≤„ ŠŠ× ≤„× ≤„≤ ×„× ≤ŠŠ ≤„„ ׊„2vχ ~下游
引物 }xχ2×׊ „×≤ ××≤ „׊ Š×Š „ׄ ŠŠ„ Š≤Š „ŠŠ
Š≤„2vχ o扩增产物长度 }uys ¥³∀
°≤• 反应按实验室操作规程进行 ∀
31314 检测与分析 取反应产物 ts ˏ经 t1x h 琼
脂糖凝胶电泳 vs ∗ ws °¬±k电压 tss ∂ l o溴乙啶染
色 o使用凝胶成像系统记录电泳结果 o测定各电泳条
带灰度值 o以目的基因与内参基因的灰度面积比值 o
作为半定量资料进行统计分析 ∀
4 统计方法
计量资料以 cξ ? σ表示 o实验数据先做方差齐
性检验 o方差齐者两组样本均数间比较用 τ检验 o多
组样本均数间比较用 Φ检验 o组间比较用 θ检验 ~
方差不齐者作数据转换变为方差齐再行上述检验 ∀
5 结果
511 对术后神经系统病态的影响 大鼠术后平均
wx °¬±麻醉清醒 o遗留各种神经系统病理体征 o假手
术组大鼠清醒后未见明显神经系统病态 ∀模型组 !
参麦治疗组大鼠清醒后均出现活动迟缓 !易激惹 !站
立不稳 o病灶对侧肢体无力 !步阈增宽 o爬行时躯体
偏向病灶对侧 o两组大鼠术后神经系统病态比较无
显著差异k Ё s1sxl o表 t ∀
表 t 大鼠术后神经系统病态k ν € wsl 只
组别 躯体倾斜 立行欲倒 旋转爬行 活动迟缓 易激惹
参麦组 v{ vz v{ ws ws
模型组 v| vz vz ws ws
在爬杆实验中模型组 !参麦治疗组大鼠手术后
tu «ot ou ow §时爬杆计分比较有明显差异k Π 
s1sxl ∀记分结果见表 u ∀
512 肉眼观察 造模后 o注射胶原酶侧大脑苍白球
均出现出血 o血肿面积平均约kv °° ≅ u °° ≅ u
°°l o出血面积以 tu «时平均最大 o以后各时间组血
肿逐渐减少 oz §时 o模型组可见到病灶中含有少量
深棕色凝血块 o参麦组仅见血肿吸收后形成的中风
囊腔 ∀
513 组织形态学观察
51311 光学显微镜观察 在低倍镜下确定大鼠出
#tytt#
第 u|卷第 tu期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 u 术后大鼠爬杆记分
组别 ν 造模时间 记分
模型组 ws tu « t{1|t ? t1|y
vu t § tx1vz ? s1{t
uw u § |1z| ? s1|u
ty w § y1v{ ? s1zz
{ z § 无明显缺陷
参麦组 ws tu « tz1vs ? t1|vtl
vu t § tv1{u ? s1||tl
uw u § {1tw ? s1zytl
ty w § x1uz ? s1z{tl
{ z § 无明显缺陷
假手术组 ts tu « 无明显缺陷
{ t § 无明显缺陷
y u § 无明显缺陷
w w § 无明显缺陷
u z § 无明显缺陷
正常组 w 无明显缺陷
注 }参麦组与模型组比较tl Π s1sx
血侧 ≤„t区后 o用高倍镜k ≅ uxsl仔细观察海马 ≤„t
区锥体细胞的细胞形态结构 ∀结果 }正常组k ν € wl
海马 ≤„t区锥体细胞层次较多 o细胞排列整齐 o细胞
核呈圆形 o常见 t ∗ u个核仁 ~模型组k ν € tsl内 otu
«时海马 ≤„t区锥体细胞排列松散 o细胞层次减少 o
细胞间可见大小不一着色较深的细胞块 oz §时 o海
马 ≤„t区锥体细胞排列松散 o细胞层次较少 o细胞间
仍可见大小不一着色较深的细胞块k图 tl ~参麦组
k ν € tslz §时 o海马 ≤„t 区排列较紧密 o细胞层次
较少 o细胞间有大小不一着色深的细胞块k图 ul ∀
图 t 参麦组 z §k ≅ uxsl
图 u 模型组 z §k ≅ uxsl
51312 透射电子显微镜观察 模型组 z §时 o海马 ≤„t
区毛细血管和胶质细胞水肿严重k图 vlo参麦组 z §时
海马 ≤„t区毛细血管和胶质细胞轻度水肿k图 wl∀
图 v 模型组 z §k ≅ xsssl
图 w 参麦组 z §k ≅ {sssl
514 对大鼠脑出血后血肿周围组织凋亡相关基因
…¦¯2u °• ‘„ o…¤¬ °• ‘„表达的影响动态 检测各组
大鼠脑出血后 tu «ot ou ow oz §时血肿周围脑组织 o各
样本均得到所扩增的¦⁄‘„目的片段 o所设立的阴性
对照样本未得到¦⁄‘„目的片段 ∀脑出血后 tu «ot ou
§o参麦组与模型组 …¤¬ °• ‘„表达均显著上调 o与假
手术组比较有显著性差异kΠ s1sxl∀z §时 o参麦组
…¤¬ °• ‘„上调幅度明显低于模型组 o模型组 …¤¬ °•2
‘„表达仍高于正常水平 ok图 x !图 y !表 vl∀
图 x …¤¬rΒ2¤¦·¬±k模型组l
t ov ox oz o| ott otv otx1Β2¤¦·¬±顺序时间段 ~
u ow oy o{ ots otu otw oty1…¤¬顺序时间段
图 y …¤¬rΒ2¤¦·¬±k参麦组l
t ov ox oz o| ott otv otx1Β2¤¦·¬±顺序时间段 ~
u ow oy o{ ots otu otw oty1…¤¬顺序时间段
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表 v …¤¬ °• ‘„rΒ2¤¦·¬± °• ‘„灰度对比值kcξ ? σ, ν € usl
组别 tu « t § u § w § z §
参麦组 s1{zt ? s1suxul s1zuw ? s1swyt oul s1yvs ? s1stzt oul s1x|x ? s1ss{ s1xzy ? s1stw
模型组 t1ssv ? s1s{tul s1{|{ ? s1sz|ul s1{xu ? s1sv|ul s1zzs ? s1szwul s1zvs ? s1tsxul
假手术组 s1xvt ? s1ssw s1xst ? s1ssx s1wzz ? s1st| s1wy{ ? s1sws s1wz| ? s1sxv
正常组 s1wwz ? s1sw{ s1www ? s1sww s1wsw ? s1svw s1wux ? s1swu s1wuz ? s1swv
注 }与模型组比较 tl Π s1sx ~与假手术组比较 ul Π s1sxk表 w同l
脑出血后参麦组 !模型组 …¦¯2u °• ‘„表达均有
明显上调 o参麦组较模型组上升显著 ow ∗ z §时 o两
组比较仍有显著性差异k Π s1sxl ok图 z !图 { !表
wl ∀
图 z …¤¬2urΒ2¤¦·¬±k参麦组l
t ov ox oz o| ott otv otx1Β2¤¦·¬±顺序时间段 ~
u ow oy o{ ots otu otw oty1…¤¬顺序时间段
图 { …¤¬2urΒ2¤¦·¬±k模型组l
t ov ox oz o| ott otv otx1Β2¤¦·¬±顺序时间段 ~
u ow oy o{ ots otu otw oty1…¤¬顺序时间段
6 讨论
611 脑出血后海马 ≤„t区神经凋亡及参麦注射液
作用探讨 脑出血后血肿周围脑组织缺血是最主要
的继发性损害 o临床与动物实验均发现脑出血后血
肿周围组织µ≤…ƒ持续下降 !组织缺血损伤和进行性
加重的水肿 o与原发性缺血性脑损伤相似 o符合缺血
半暗带的所有特征 o该区域内脑组织的缺血改变在
一定时间窗内是可逆的≈z o{  ∀研究表明 o局灶性脑
缺血发生后在缺血半暗带神经细胞的死亡以凋亡为
主 o细胞凋亡是不同于细胞坏死的另一种细胞死亡
形式 o其形态学改变表现为 }细胞萎缩 !核固缩 !染色
质凝集 o最后形成凋亡小体被吞噬 o其过程受一系列
相关基因的调控 ∀一般认为氧化应激 !钙稳态失衡 !
线粒体损伤在凋亡的发生中既可单独作用又可三者
联合作用 o是诱导调亡的共同通路≈|  ∀脑出血后大
量凋亡细胞出现在血肿周围区域 o这表明凋亡机制
对脑出血后的组织损伤有重要意义 ∀缺血半暗带细
胞凋亡异常增加可能是缺血性脑损伤的重要发病机
制 o新近研究表明脑出血继发性缺血损伤在血肿周
围迅速发生 o一旦损害形成 o这种改变将独立进行 o
可引起神经细胞凋亡≈ts  ∀本实验发现 }大鼠脑出血
表 w …¦¯2u °• ‘„rΒ2¤¦·¬± °• ‘„灰度对比值kcξ ? σ, ν € usl
组别 tu « t § u § w § z §
参麦组 t1swx ? s1sy{t oul t1uvy ? s1uzzt oul s1{wx ? s1suvt oul s1{sz ? s1uuvt oul s1zw{ ? s1ut|t oul
模型组 s1{wu ? s1suxul s1yzx ? s1sv{ul s1xwt ? s1s{w s1xvu ? s1svt s1wzw ? s1sw|
假手术组 s1xyy ? s1suz s1xwy ? s1svs s1w{x ? s1sw| s1w{x ? s1sts s1wyx ? s1syu
正常组 s1wx ? s1s{| s1wxt ? s1s|s s1ww{ ? s1s{y s1wxu ? s1s{{ s1wvw ? s1uss
tu «后 o海马 ≤„t区锥体细胞即出现凋亡 o这种锥体
细胞的凋亡将持续 z §∀神经细胞凋亡可能是造成
脑组织缺血后迟发性持续性神经损伤的重要因素之
一 o脑出血后可造成脑组织缺血损伤 !细胞凋亡 !坏
死并存的局面 ∀笔者以往的研究证实 o参麦注射液
可减轻大鼠脑出血后海马 ≤„t 锥体细胞凋亡 o减轻
脑出血大鼠神经病理体征以及提高脑出血后神经功
能恢复≈tt  o其作用机制可能与参麦注射液抗脂质过
氧化 o减轻自由基损伤 o维持线粒体膜结构功能的完
整等作用有关≈tu  ∀
612 脑出血后血肿周围组织 …¤¬ °• ‘„ o…¦¯2u °•2
‘„表达及参麦注射液的作用探讨 凋亡相关基因
…¤¬o…¦¯2u同属 …¦¯2u¶家族 o…¦¯2u蛋白是一种膜结合
蛋白 o存在于细胞中的线粒体 !核膜等处 o主要生理
功能是抑制细胞凋亡 o延长细胞寿命 ∀ …¤¬蛋白是
…¦¯2u的同源蛋白 o具有促进细胞凋亡的作用 o并抑
制 …¦¯2u的效应≈tv otw  ∀近年来研究表明 o多种刺激
因素作用下k氧自由基 o钙离子超载等l o线粒体内膜
蛋白k包括腺嘌呤核苷酸转移因子 „‘×l和外膜蛋白
k如电压依赖性阴离子通道 ∂⁄„≤l相互作用形成
#vytt#
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∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tu
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
/渗透性转移孔道0k°×°l o此通道使线粒体中的促
凋亡因子k细胞色素 ≤ 等l释放入胞浆 o诱导细胞发
生凋亡≈tx oty  o一旦细胞色素 ≤ 释放入胞浆 o凋亡过
程将进入不可逆转的阶段 ∀ …¤¬可通过促使 ∂⁄„≤
开放 o导致细胞色素 ≤ 从线粒体中释放 o诱导凋亡 ~
…¦¯2u则通过与 ∂ „⁄≤ 直接结合而关闭 ∂⁄„≤ 来阻
止凋亡的发生≈tz2t|  ∀在正常细胞中 o存在着 …¤¬与
…¦¯2u的微量表达 o细胞胞浆中 …¤¬2…¤¬同源二聚体
促进细胞凋亡 o…¦¯2u2…¤¬异源二聚体则抑制细胞死
亡 o细胞是否发生凋亡 o依赖于这些分子的相对浓
度≈us  ∀本实验发现 o脑出血后血肿周围组织 …¤¬
°• ‘„ o…¦¯2u °• ‘„表达均有显著上调 o尤以 tu «∗ t
§时最为明显 o与假手术组比较差异显著 o模型组
…¤¬ °• ‘„在出血 u §后表达逐渐下调 oz §时仍高
于正常水平 o模型组 …¦¯2u °• ‘„在出血后 tu «时表
达达到高峰 oz §时接近正常水平 o参麦组 …¦¯2u °•2
‘„在出血后 t §时表达达到高峰 oz §时仍高于正
常水平 ∀参麦注射液可明显抑制 …¤¬ °• ‘„在脑出
血后表达的上调 o并促使 …¦¯2u °• ‘„ 表达显著上
调 o…¤¬ °• ‘„r…¦¯2u °• ‘„ 比值降低 o…¤¬r…¦¯2u 比
率决定了缺血性神经元是否发生凋亡 o提示参麦注
射液可能通过调节 …¤¬r…¦¯2u基因表达 o抑制了脑出
血后神经细胞的凋亡 o具有神经保护作用 ∀其具体
机制推测是参麦注射液通过抗氧自由基 !减轻氧化
应激及钙离子超载等作用 o影响 …¦¯2u的表达 o从而
抑制细胞凋亡的发生≈us out  ∀
≈参考文献 
≈t  ¨¨Ž• oŽ¤º¤¬‘oŽ¬° ≥ o ετ αλ1  ¦¨«¤±¬°¶²© §¨¨ °¤©²µ°¤·¬²±¤©·¨µ
¬±·µ¤¦¨µ¨¥µ¤¯ «¨ °²µµ«¤ª¨ }¨ ©©¨¦·¶²©·«µ²°¥¬± ²± ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¥¯²²§ ©¯²º
¥¯²²§2¥µ¤¬± ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼¤±§¦¨¯¯ ¶∏µ¬√¤¯ ¬±¤µ¤·°²§¨ 1¯ Νευροσυργερψo
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≈u  ⁄¨ ¯ ²³³² Š o∂²± Ž∏°° µ¨• o ‹¤°¤±± Š ƒ1 Œ¶¦«¨ °¬¦§¤°¤ª¨ ²©
¥µ¤¬± °¬¦µ² √¨ ¶¶¨ ¶¯}¬±«¨µ¨±·µ¬¶®¶ ©²µ ·«µ²°¥²¯¼·¬¦ ·µ¨¤·°¨ ±·¬±
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t||sout}{st1
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Στροκε ot||{ ou| }tz|t1
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¥µ¤¯ «¨ °²µµ«¤ª¨ 1 Στροκε ot||v ouwk≥∏³³¯¼tl }ttx1
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§¤¯ ¦¨¯¯ ¤¯¼¨ µ²©·«¨ ª¨µ¥¬¯ «¬³³²¦¤°³∏¶©²¯ ²¯º¬±ª·µ¤±¶¬¨±·¬¶¦«¨ °¬¦¬¶
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³µ²©¬¯¨ ¤³²³·²·¬¦¦¨¯¯ §¨¤·«¬±·µ¤±¶¬¨±·¬±·µ¤¦¨µ¨¥µ¤¯ °¤¶¶¯ ¶¨¬²± ²©·«¨
µ¤·1 Νευροτραυµα ot||| otykul }twv1
≈tt  尤昭玲 o何泽云 o潭元生 o等 1 参麦注射液对出血性中风老龄
大鼠 ≤„t 区神经细胞 ⁄‘„ 断裂的影响 1 中国中医药科技 o
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≈tu  何泽云 o尤昭玲 o潭元生 o等 1 参麦注射液对自由基损伤后海
马神经细胞凋亡的影响 1中国中医药科技 oussu o|ktl }wu1
≈tv  ∂¤∏¬ ⁄o≥·µ¤¶¶¨µ„1 ׫¨ °²¯ ¦¨∏¯¤µ¥¬²¯²ª¼ ²©¤³²³·²¶¬¶1 Προχ Νατλ
Αχαδ Σχι ΥΣΑot||y ot|v }uuv|1
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第 u|卷第 tu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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[ Κεψ ωορδσ] ≥«¨ ±°¤¬Œ±­¨¦·¬²±~¬±·µ¤¦¨µ¨¥µ¤¯ «¨ °²µµ«¤ª¨ ~±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶~¤³²³·²¶¬¶µ¨ ¤¯·¨§ª¨ ±¨
≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussw2sv2u|
≈基金项目  四川省中医药管理局资助项目k„2usss2ttl
≈通讯作者  3 张杰 oר¯ }ksu{l{xwtuw{x o∞2°¤¬¯}…¬²¼¤±ª ƒ
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八珍汤对ys≤²Χ照射小鼠骨髓细胞及脾细胞凋亡研究
赵弋清t o罗 霞t ou o陈东辉t ou o余梦瑶t o程耀锋t o张 杰t 3
kt1 四川大学 生命科学学院 o四川 成都 ytssyw ~
u1 四川省中药研究所 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要  目的 }探讨八珍汤对ys≤²Χ射线照射小鼠骨髓细胞及脾细胞凋亡的影响 ∀方法 }利用ys≤² Χ射线一次
性全身照射小鼠 o动态观察其骨髓细胞 !脾细胞凋亡情况 ∀结果 }实验观察到照射后模型组小鼠骨髓细胞在 y «其
凋亡数最多 o以后随时间延长而逐渐减少 o八珍汤组小鼠骨髓细胞和脾细胞凋亡数与模型组相比两者在 y «处有显
著性差异k Π s1sx oΠ s1stl ~在 tu ot{ ouw «也能相应的拮抗细胞的凋亡 ∀结论 }八珍汤对ys≤² Χ射线照射小鼠骨
髓细胞及脾细胞凋亡有较好的抑制作用 o可能也是八珍汤补血的机制之一 ∀
≈关键词  八珍汤 ~脾细胞 ~骨髓细胞 ~辐射 ~凋亡
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltu2ttyx2sv
八珍汤源自5正体类要6 o是四君子汤和四物汤
的复方 o为经典的气血双补 o补血 !活血 !调经之良
方 ∀本实验主要观察辐射后不同时间点八珍汤对小
鼠骨髓细胞和脾细胞凋亡的影响 o以期为八珍汤的
临床应用提供更多的理论依据 ∀
1 材料
111 药物 八珍汤由当归 | ª!白芍 y ª!白术 ts ª!
熟地黄 | ª!人参 tx ª!川芎 x ª!茯苓 tu ª!甘草 v ª
组成 o购自成都同仁堂药店 o均经四川省中药研究所
生药室鉴定为正品 ∀以上各药按常法煎至 u ª#
°pt的药液 ∀
112 动物分组
健康昆明小鼠 o雌雄各半 o体重 t{ ∗ uu ªo由四
川省中药研究所提供 ∀随机分为 v组 }正常组 o模型
组 o八珍汤组 ∀八珍汤组用八珍汤 s1u °#ts ªpt灌
胃 o连续 z §o第 {天给模型组和八珍汤组小鼠 t
次ys≤²Χ射线照射 o剂量为 x1x Š¼o分别于照射后 y o
tu ot{ ouw «颈椎脱臼处死 ∀
113 试剂 基因组 ⁄‘„纯化试剂盒 !• °Œ2tyws培
养基kŠŒ…≤’l !ts h小牛血清 !ts h胎牛血清 !≤²±„ o
s1{v h ×µ¬¶2‘‹w≤¯ ∀
2 方法
211 骨髓细胞 ⁄‘„的提取及凝胶电泳 小鼠颈椎
脱臼处死 o无菌取双侧股骨 o用 y号针头吸 • °Œ2
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第 u|卷第 tu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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