全 文 ：u. ∆επαρτµ εντ οφ ΓενεραλΣυργερψ, Τηε Σεχονδ Αφφιλιατεδ ΗοσπιταλοφΜεδιχαλΣχηοολ
οφ Ξιπαν ϑιαο Τονγ Υνιϖερσιτψ, Ξιπαν ztsssw, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·¶²©·«¨ §¬√¬§¨ §©∏±¦·¬²±¤¯ µ¨¦¬³¨ ¶²©⁄¤«∏¤±ª«¨ ¦«²±ª³¬¯¯k⁄‹≤°l ²± ¤·«¨ µ²¶¦¯ µ¨²2
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≈责任编辑 古云侠  
≈收稿日期   ussy2sw2ts
≈通讯作者   3 黄象安 oר¯}kstslyzy{|ztyo∞2°¤¬¯}«¬¬¤±ª¤±ƒ
tyv1¦²°
扶正健肝方对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠的影响
黄象安 t3 o孙利红 t o宋崇顺 u o崔 宁 t o陈燕力 t o徐洪雁 t o任 颖 u
kt1北京中医药大学 东方医院 感染性疾病科 o北京 tsssz{~
u1北京中医药大学 东直门医院 中药药理学实验室 o北京 tsszssl
≈摘要   目的 }观察扶正健肝方对白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成的影响 ∀方法 }采用人血白蛋白 k‹≥„l诱导
大鼠肝纤维化并随机分为扶正健肝方高 !低剂量组 k生药 v|1wo|1{x ª# ®ªpt lo秋水仙碱组 ks1sss t ª# ®ªpt lo模型
组 o对照组 x组 ∀观察血清丙氨酸氨基转移酶 k„×l和天门冬氨酸氨基转移酶 k„≥×l活性 !总蛋白 k ×°lo白蛋白
k„ ¥¯l含量球蛋白和白蛋白比值 ∀放射免疫分析法测定层连蛋白 k‘l!透明质酸 k‹„l和·型胶原 kŒ∂ 2≤l的含量 o化
学法测定肝脏羟脯氨酸 k‹¼³l的含量 ∀光镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度 ∀结果 }扶正健肝方能明显降低人血白
蛋白诱导的肝纤维化大鼠 „×o „≥×活性 k Π  s1sxo Π  s1stl o提高 „ ¥¯o ×°含量及 „ rŠ比值 k Π  s1sxo Π 
s1stl o降低血清 ‘o ‹„ Œ∂ 2≤含量 kΠ  s1sxo Π  s1stl∀病理学观察结果 o扶正健肝方能使大鼠胶原纤维沉积明
显减轻 o假小叶结构明显减少 ∀并明显降低纤维化计分 kΠ  s1sxo Π  s1stl∀结论 }扶正健肝方可抑制人血白蛋白
诱导的大鼠肝纤维化形成和发展 ∀
≈关键词   扶正健肝方 ~肝纤维化 ~免疫 ~人血白蛋白 ~大鼠
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussyluu2t{|s2sw
肝纤维化是绝大多数慢性肝病向肝硬化发展的
必经阶段 ≈t  o如何防治肝纤维化是目前备受关注的
问题 ∀中药抗肝纤维化有广阔的前景 o近年来研究
结果表明 o中药复方抗纤维化的特点是多环节 !多靶
位 o与化学合成药物往往仅作用在单一环节或靶位
相比有其独特的优势 o值得深入研究 ≈u  ∀扶正健肝
方是作者治疗慢性肝炎 k肝纤维化 l多年临床工作
总结出的经验方 ≈v  o在临床使用中取得了较好疗
效 ∀本实验旨在通过观察实验动物肝功能和纤维化
#s|{t#
第 vt卷第 uu期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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指标 o以及肝脏病理改变 o了解该方防治人血白蛋
白诱导的免疫损伤性肝纤维化的效果 o初步探讨其
抗肝纤维化的机制 o为临床用药提供可靠依据 ∀
1 材料
111 动物
清洁级 • ¬¶·¤µ雄性大鼠 o体重 uxs ∗ vss ªo由中
国药品生物制品检定所实验动物中心供给 o合格证
号 }京动许字 kusstl第 stz号 ∀
112 试剂和仪器
秋水仙碱 }昆明制药集团股份有限公司生产 o批
号 ussuttvz∀人血白蛋白 k‹≥„l}广东佰易药业有
限公司生产 o批号 ussvszstsv∀不完全福氏佐剂 }
美国 ≥¬ª°¤产品 ∀透明质酸 k‹„l!层连蛋白 k‘l
和 Œ∂型胶原 kŒ∂ 2≤l放射免疫试剂盒购于北京生物
技术研究所 ∀ ‹¼¥试剂盒购于江苏南京建成生物工
程研究所 ∀
113 药物
扶正健肝方剂由黄芪 !黄精 !山萸肉 !仙灵脾 !丹
参 !虎杖 !苦参 !柴胡等共 tu味中药组成 o每人每天
服 t|z ª生药 o诸药水煎煮 v次 o每次 t «o药液浓
缩 o加等量乙醇 o放置 w{ «后过滤 o回收乙醇 o配液
即得 ∀由北京中医药大学东直门医院制剂室供给 o
批号 svstt∀
2 方法
211 模型制备
• ¬¶·¤µ雄性大鼠 o按王宝恩等 ≈w 报道的文献方
法制备模型 }‹≥„用 s1|h氯化钠注射液稀释 o与等
量的不完全弗氏佐剂完全乳化 ∀除正常组外 o每只
大鼠皮下多点注射 o每次 s1x °k含 ‹≥„ w °ªlo共
w次 o前 u次间隔 tw §o第 vow次间隔 ts §∀正常组
同时皮下多点注射等容量液体石蜡 ∀
212 分组及给药
末次免疫后 o动物 k除正常组外 l由眼底静脉丛
取血 o分离血清 o用免疫扩散法测定大鼠白蛋白抗
体 o待大鼠血清明显出现白蛋白抗体后将大鼠随机
分为模型组 o扶正健肝方大 !小剂量组 o秋水仙碱组 o
尾静脉注射 ‹≥„o每周 u次 o第 t周 u1x °ªr只 o每
次 s1x °o以后每次攻击增加 s1x °ªo直至 w1x °ªo
维持此量 o共 ty次 ∀正常组尾静脉同时注射等容量
s1|h氯化钠注射液 ∀在尾静脉攻击前 t §各组动
物灌胃给药 }扶正健肝方高剂量组 k生药 v|1w ª#
®ªpt o临床用药的 tu倍 lo低剂量组 k生药 |1{x ª#
®ªpt o临床用药的 v倍 lo秋水仙碱组 ks1sss t ª#
®ªpt o临床用药的 tu倍 l∀每日 t次至实验结束 ∀
对照组 !模型组给予等体积的氯化钠注射液 ∀各组
动物每周称体重 t次 o根据体重变化调整给药剂量 ∀
实验结束时 o将大鼠用 v1xh水合氯醛麻醉 o腹主动
脉取血 o分离血清 o取血后立即取出肝组织 o放入
tsh °…≥配制的甲醛液中固定 ∀
213 观测指标及方法
21311 肝功能检测 用全自动生化分析仪测定血
清丙氨酸氨基转移酶 k„×lo天门冬氨酸氨基转移
酶 k„≥×lo血清总蛋白 k×°lo血清白蛋白 k„…lo白
蛋白和球蛋白比值 k„ rŠl∀
21312 血清 ‹„o‘和 Œ∂ 2≤和肝脏 ‹¼³的测定
按试剂盒说明书要求操作 ∀
21313 病理学观察 取血后立即取出肝组织 o称重
后放入 tsh °…≥配制的甲醛液中 o常规 ‹∞染色 o观
察肝组织学改变 o∂ ²± Š¬¨¶²±k∂ Šl胶原纤维颜色 ∀
肝纤维化分级 ≈x  }s级 k记 s分 l}肝细胞排列整齐 o
肝小叶清晰 o汇管区未见炎症 o未见脂质空泡 ~∂ Š
染色 o肝小叶结构清晰可见 o未见肝纤维化及假小叶
形成 ∀ ´级 k记 t分 l}汇管区可见炎性细胞浸润 o
成纤维细胞增生 o肝细胞变性及点状坏死 o汇管区可
见假小叶形成 o肝小叶间隔形成 o纤维沉积 ∀ µ级
k记 u分 l}汇管区可见大量炎性细胞浸润 o成纤维
细胞明显增生 o肝细胞变性坏死 o汇管区可见大量假
小叶形成 o肝小叶间隔形成 o大量纤维沉积 ∀ ¶级
k记 v分 l}汇管区可见大量炎性细胞浸润 o成纤维
细胞大量增生 o肝细胞广泛变性呈片状坏死 o汇管区
可见较多假小叶形成 o肝小叶间隔明显增宽和较多
纤维沉积 ∀
214 统计处理
计量资料用 τ检验 o等级资料用 • ¬§¬·分析 ∀采
用 ≥°≥≥ ts1s统计软件进行统计处理 ∀
3 结果
311 对肝功能的影响
与对照组相比 o模型组大鼠血清转氨酶活性明
显升高 o„…和 ×°明显降低 o„ rŠ比值明显倒置 o
提示白蛋白所致肝纤维化大鼠肝细胞明显受到损
害 ∀给予秋水仙碱和扶正健肝方不同剂量后均能使
„≥×o„×显著下降 o „…o×°o„ rŠ均明显升高 o而
扶正健肝方高剂量组明显好于低剂量组 o表明扶正
健肝方有显著保肝降酶作用 k见表 tl∀
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 t 扶正健肝方对肝纤维化大鼠血清 „×o„≥×o„…o×°o„ rŠ的影响 kcξ ? σl
分组 剂量 rª# ®ªpt ν „≥× r˜# pt „× r˜# pt „…rª# pt ×°rª# pt „ rŠ
对照 p { |zqx{ ? {q{xul vwqzx ? xqtyul wzq{z ? vqzvul yuq{z ? zq|yul vqz| ? tqytul
模型 p { twxqt| ? tsq|x zvqtw ? yqws vvqvx ? uqwu xuqtx ? wq{y tq{z ? sqxw
扶正健肝方 |q{x { ttuqvw ? twquutl y{qzw ? xqtw wtq{z ? vqtx xwqxz ? vqzwtl vqxz ? tqtwtl
v|qw { tsuqs| ? tvqxul yuq|x ? {qtwul wvqws ? yqzwtl x|quu ? {qwvul vqtu ? tqxuul
秋水仙碱 sqsss t z tsxqtw ? tyqwul yxqwy ? xq{wul wvqwv ? wqywtl x{qt{ ? xqtztl vquv ? tqttul
注 }与模型组相比 tl Π  s. sx, u) Π  sqstk表 uov同 l
312 对血清 Œ∂ 2≤o‘o‹„o‹¼³的影响
模型组大鼠血清 Œ∂ 2≤o‘o‹„和 ‹¼³明显高
于正常组 o提示白蛋白所引起的肝纤维化大鼠肝细
胞明显损伤 oŒ∂ 2≤o‘o‹„o‹¼³含量增高 o表明肝纤
维化已经形成 ∀同模型组相比 o秋水仙碱和扶正健
肝方不同剂量均能显著降低大鼠血清 Œ∂ 2≤o‘o‹„
和 ‹¼³的含量 o表明扶正健肝方对白蛋白所致肝纤
维化大鼠有较好的治疗作用 k见表 ul∀
表 u 扶正健肝方对肝纤维化大鼠血清 Œ∂ 2≤o‘o‹„的影响 kcξ ? σl
分组 剂量 rª# ®ªpt ν Œ∂ 2≤ rΛª# pt ‘rΛª# pt ‹„ rΛª# °pt ‹ ¼³rΛª# °ªpt
对照 p { v{q|z ? uquuul wzqy| ? txq|{ul wxqsv ? ttq{tul s1{v ? s1uyul
模型 p { xuqzw ? |q|u |yq{| ? tsqss ttvqss ? u|q|z t1x| ? s1wt
扶正健肝方 |q{x { wuq{w ? yquwtl zvq{t ? tuqzu zyqty ? yqz|ul t1tw ? s1vvtl
v|qw { wuqtz ? uq|uul y|qxs ? uwq|ttl ywqts ? tuqzul t1s{ ? s1vtul
秋水仙碱 sqsss t z wvqxs ? yquxtl zvqwu ? uuq{w z{qz| ? u|qvyul t1sx ? s1uzul
313 肝组织病理变化
正常组 ‹∞和 ∂ Š染色见肝小叶结构完整 o肝
细胞排列整齐 o肝细胞形态大小正常 o无炎性细胞
浸润及纤维组织增生 ∀汇管区见少许胶原纤维 ∀模
型组表现为肝细胞坏死及炎性细胞浸润明显 o肝小
叶失去正常结构 o肝细胞索排列紊乱 o小叶呈散在
性坏死 o胶原纤维增生明显 o并可见厚薄不一的纤
维伸入肝小叶 o或见相互连接的纤维隔 o重新分割肝
小叶 o并有肝细胞再生及假小叶形成 ∀扶正健肝方
各组与秋水仙碱组显示肝脏组织内炎性细胞浸润 !
肝细胞坏死和纤维组织增生等方面均较模型组大鼠
为轻 o有部分纤维分割肝小叶 o扶正健肝方低剂量
组有少数大鼠仍有不完全性假小叶 o而扶正健肝方
高剂量组和秋水仙碱组未见完整的假小叶形成 o有
部分肝组织出现再生 ∀大鼠肝纤维化病变程度分级
分析发现 o模型组病变程度总记分为 uw分 o扶正健
肝方高 !低剂量组 o秋水仙碱组病变程度总记分分别
为 ttot{otu分 o总分降低百分率分别为 xw1txh o
ux1ssh oxs1ssh o与模型组相比均有显著性差异
kΠ s1sxoΠ s1stlo见表 v∀
表 v 扶正健肝方对大鼠肝纤维化病变程度的影响
组别
剂量
rª# ®ªpt
ν s级 ´级 µ级 ¶级ν 分 ν 分 ν 分 ν 分 总分
降低率
/%
对照 p { { s s s s s s s s tss
模型 p { s s s s t u z ut uw
扶正健肝方 |q{x { s s s s v y w tu t{tl uxqss
v|qw { s s x x v y s s ttul xwqtx
秋水仙碱 sqsss t z s s w w w { s s tuul xsqss
4 讨论
肝纤维化是许多慢性肝病的共有病理过程 o在
肝细胞变性坏死和炎症刺激时 o肝脏中胶原蛋白等
细胞外基质 k∞≤ l的增生与降解失去平衡 o导致
肝脏内纤维结缔组织异常沉积 o轻者为肝纤维化 o重
者进而使肝小叶结构破坏与改建 !假小叶及结节形
成 o称为肝硬化 ≈yoz  ∀慢性肝病由肝纤维化发展为
肝硬化是一个连续的过程 o如果能有效地解除或抑
制病因 o或抑制 ∞≤的合成或促进 ∞≤降解 o可有
效地防止肝纤维化或肝硬化 o甚至使肝硬化成为可
逆的 ∀用人血清白蛋白攻击大白鼠建立的肝纤维化
动物模型属免疫损伤模型 o所形成的纤维化属主动
性纤维化 o更符合人的慢性乙型肝炎肝纤维化形成
机制 ≈{  ∀
利用肝纤维化时体内产生的某些代谢物来判断
肝组织的纤维化程度已成为近年来诸多学者的研究
目标 ∀由于诸多标志物所反映的肝纤维化的侧重点
不同 o故多主张进行多标志物联合检测以尽可能完
整了解肝纤维化之全貌 ≈|2tt  ∀ · 2≤是基底膜网状结
构的主要成分 o与持续沉积的 ‘形成完整的基底
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膜 o即 /肝窦毛细血管化 0o反映基底膜胶原的更新
率 o含量增高可较灵敏反映出肝纤维化过程 o与肝
纤维化程度正相关 o是肝纤维化的早期标志之一 ∀
‘为基底膜中特有的非胶原性结构糖蛋白 o血清
‘水平与肝纤维化活动程度及门静脉压力呈正相
关 ∀ ‹„为基质成分之一 o由星状细胞合成 o可较
准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损
状况 o有人认为本指标较之肝活检更能完整反映出
病变肝组织全貌 ∀ ‹¼³是胶原蛋白所特有的氨基酸
成分 o能够准确反映肝脏中胶原含量 o与肝纤维化程
度相平行 ∀
实验结果表明 o人血白蛋白所致免疫性肝纤维
化大鼠均有明显的肝损伤及慢性肝纤维化表现 o扶
正健肝方的不同剂量对肝功能指标均有不同程度改
善 o对 „×o„≥×的抑制作用明显 ∀表明扶正健肝方
可明显改善肝功能 o具有保肝降酶作用 ∀扶正健肝
方各剂量组能使升高的 ‹„o‘o· 2≤o‹¼³水平显
著降低 ∀病理组织切片和 ∂ Š染色结果表明 o扶正
健肝方可使白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠肝纤维
化程度明显减轻 o胶原纤维细胞和假小叶形成减少
或界限模糊 o表明扶正健肝方能抑制胶原的合成 !
∞≤的沉积 o对白蛋白所致的肝损伤 !慢性肝纤维
化大鼠具有保护作用和抗肝纤维化作用 ∀
≈参考文献  
≈t  高春芳 o陆伦根 q纤维化疾病的基础和临床 ≈  q上海 }上海
科学技术出版社 oussw}uyx1
≈u  高 峰 o程留芳 q中医药抗肝纤维化作用机制的研究进展
≈ q现代中西医结合杂志 o ussxotwkvl}v|x1
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型肝炎 vu例 ≈ q中西医结合肝病杂志 oussuotukul}tsy1
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研究 ≈ q中华医学杂志 o t|{|oy|k|l}xsv1
≈x  韦艾凌 q瘀痛消胶囊抗肝纤维化的实验研究 ≈ q辽宁中医杂
志 oussuou|kzl}wwy1
≈y  ≥«¬°¬½∏Œq ≥«²2¶¤¬®²2·²} ¤³¤± ¶¨¨ «¨ µ¥¤¯ ° §¨¬¦¬±¨©²µ³µ²·¨¦·¬²±
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uzxkwl}uuwz1
≈{  谢玉梅 o聂青和 o周永兴 o等 q双甲五灵冲剂抑制免疫性肝纤
维化大鼠肝组织中 ´ !¶型胶原蛋白及基因表达的实验研究
≈ q胃肠病学和肝病学杂志 o ussxotwktl}vy1
≈|  梁润英 o路 嵘 q鳖甲抗纤方抗肝纤维化作用的实验研究
≈ q中国中医药科技 ousswottktl}ty1
≈ts  杨 伟 o焦平华 o王晓丹 o等 q血清肝纤维化指标诊断价值的
评价 ≈ q中华肝脏病杂志 o ussto |kxl}vus1
≈tt  ’¥¨ µ·¬ƒo ∂ ¤¯¶¨¶¬¤∞o °¬¯¨ ·¨ ≤o ·¨¤¯q ‘²±¬±√¤¶¬√¨§¬¤ª±²¶¬¶²©
«¨ ³¤·¬¦ ©¬¥µ²¶¬¶ ²µ¦¬µµ«²¶¬¶≈  q Š¤¶·µ²¨ ±·¨µ²¯²ª¼o t||zottv
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Εφφεχτ οφΦυζηενγ ϑιανγαν φορµ υλα ον λιϖερ φιβροσισ
ινδυχεδ βψ αλβυµ ιν ιν ρατσ
‹˜„‘Š ÷¬¤±ª2¤±t o ≥˜‘¬2«²±ªt o ≥’‘Š ≤«²±ª2¶«∏±u o ≤˜Œ‘¬±ªt o ≤‹∞‘≠¤±2¯¬t o ÷ ˜ ‹²±ª2¼¤±t o • ∞‘ ≠¬±ªu
(t. ∆επαρτµ εντ οφ Ινφεχτιουσ∆ισεασεσ, ∆ονγ Φανγ Ηοσπιταλ, Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφΧηινεσε Μεδιχινε, Βειϕινγ tsssz{, Χηινα;
u. Πηαρµ αχολογιχαλΛαβορατορψ, ∆ονγ Ζηι Μεν Ηοσπιταλ, Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Χηινεσε Μεδιχινε, Βειϕινγ tsszss, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·²©ƒ∏½«¨ ±ª¬¤±ª¤± ©²µ°∏¯¤kƒŠƒl ²± ¬¯√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶∏¶¬±ª¬°°∏±¨¬±§∏¦¨§ ¬¯√ µ¨
©¬¥µ²¶¬¶µ¤·°²§¨ q¯ Μετηοδ : ׫¨ µ¤·°²§¨ ¶¯º¬·«¬°°∏±¬·¼ ¬¯√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶º µ¨¨ ¬±§∏¦¨§¥¼ ·«¨ «∏°¤± ¶¨µ∏° ¤¯¥∏°¬±q • ¤·¶º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§
º¬·«±²µ°¤¯ ¶¤¯¬± o¨ ƒŠƒ k|1{xov|1w ª# ®ªpt o·º² §²¶¤ª¨ ªµ²∏³¶l ¤±§ ≤²¯¦«¬¦¬±¨ ks1sss t ª# ®ªpt lq׫¨ ¤¦·¬√¬·¬¨¶²©„×o
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[ Κεψ ωορδσ] ƒ∏½«¨ ±ª¬¤±ª¤± ©²µ°∏¯¤~ ¬¯√ µ¨©¬¥µ²¶¬¶~ ¬°°∏± ~¨ «∏°¤± ¤¯¥∏°¬±~ µ¤· ≈责任编辑 古云侠  
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第 vt卷第 uu期
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中 国 中 药 杂 志
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