全 文 :Βιοτηερµοκινετιχ στυδιεσ ον φουρ προπερτιεσ οφ τραδιτιοναλ Χηινεσε µεδιχινε :
χοµ παρισον οφ προπερτιεσ οφ Ζυοϕινωαν ανδ Φανζυοϕιν βψ µιχροχαλοριµετρψ
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(t1 ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχψ οφ vsu Ηοσπιταλ οφ ΠΛΑ, Βειϕινγ tsssv| , Χηινα ;
u1 Αχαδεµψ οφ Μιλιταρψ Μεδιχαλ Σχιενχεσ οφ ΠΛΑ, Βειϕινγ tss{xs , Χηινα ;
v1 ϑιν Ζηου Μεδιχαλ Χολλεγε , ϑινζηου tutsst , Χηινα ;
w1 ∆επαρτµεντ οφ Χηεµιστρψ, Ωυηαν Υνιϖερσιτψ, Ωυηαν wvsszu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ³µ²¥¨ ¬±·²·«¨ ²¥¨¦·¬√¬·¼ ¤±§¤∏·«¨ ±·¬¦¬·¼ ²©©²∏µ³µ²³¨µ·¬¨¶k¦²¯§o«¨ ¤·oº¤µ° ¤±§¦²²¯l ²©·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬2
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§¬©©¨µ¨±¦¨ ¥¨·º¨¨ ±·«¨ °1 Χονχλυσιον : ¬¦µ²¦¤¯²µ¬° ·¨µ¼¬¶¤ ±¨ º ¤±§∏¶¨©∏¯ ° ¤¨±¶©²µ·«¨ ¶·∏§¼ ²©·«¨ ³µ²³¨µ·¬¨¶²©×≤ 1
[ Κεψ ωορδσ] ©²∏µ³µ²³¨µ·¬¨¶²©×≤ ~¥¬²·«¨µ°²®¬±¨ ·¬¦¶~°¬¦µ²¦¤¯²µ¬° ·¨µ¼~∏²¬±º¤±~ƒ¤±½∏²¬±
≈责任编辑 古云侠
藏药然降多吉胶囊对大鼠佐剂性
关节炎细胞因子及炎症介质的影响
王晓东 o邓治文 o彭晓华 o赵军宁 3 o戴 瑛 o张白嘉
k四川省中药研究所 药理毒理研究室 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要 目的 }观察藏药然降多吉胶囊对大鼠佐剂性多发性关节炎的影响以及该药的免疫调节活性 ∀方法 }用弗
氏完全佐剂造成大鼠多发性关节炎 o观察足跖肿胀程度 !全身病变 !脾脏 ×淋巴细胞增殖功能 !腹腔巨噬细胞白介素 t
k2tl分泌活性 !血清脂质过氧化和超氧化物歧化酶k≥⁄2tl活性 ∀结果 }藏药然降多吉胶囊灌胃给药对弗氏完全佐
剂所致大鼠继发的关节肿胀有显著的抑制作用 o降低多发性佐剂性关节炎大鼠脾 × 淋巴细胞增殖转化率 o抑制血清
脂质过氧化产物的形成 o对腹腔巨噬细胞产生白细胞介素 tk2tl分泌活性亦有一定抑制作用 ∀结论 }然降多吉胶囊
对佐剂性关节炎有显著的治疗作用 o其机理与抑制 ×细胞增殖以及白细胞介素2t !过氧化脂质产生有关 ∀
≈关键词 然降多吉胶囊 ~佐剂性关节炎 ~×淋巴细胞增殖功能 ~白细胞介素2t ~过氧化脂质
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswltu2tt{y2sw
≈收稿日期 ussv2sx2tu
≈通讯作者 3赵军宁 o ר¯ }ksu{l{xuvtvz{ o∞2°¤¬¯}tvvs{ussv{s
tyx¶¦q¦²°
藏药然降多吉胶囊是在四川省甘孜州藏医院著 名主任藏医师唐卡 q昂翁降措的经验方基础上 o研制
的现代藏药复方新制剂 o主要由翼首草k榜孜毒乌l !
独活k志甲l !川木香k夏坡如达l !麝香k拉泽l等组
成 o能散寒除湿 o消肿止痛 o临床用于寒湿阻络型类
风湿性关节炎 o对关节疼痛 !活动不利有显著疗效 ∀
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第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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本实验报告然降多吉胶囊对大鼠佐剂性关节炎kl
的影响以及该药的免疫调节活性 ∀
1 实验材料
1 q1 动物 ≥⁄大鼠 o雄性 o体重 uus ∗ uxs ªo一级合
格k川实动管第 tsv号l o由国家医药局四川抗菌工
业研究所实验动物中心提供 ∀
1 q2 药品与试剂 然降多吉胶囊≈由翼首草 Πτερο2
χεπηαλυσ ηοοκεριk≤ q
q≤¯ ¤µ®¨ l ²¨ ¦®qo诃子 Τερµιναλια
χηεβυλα ·¨½qo草乌k制l Αχονιτυµ κυσνεζοφφιι ¬¨¦«¥qo
川木香 ςλαδιµιριασουλιειkƒµ¤±¦«ql¬±ªqª等按照uΒ
wΒtΒt比例制成胶囊剂内容物 o为深褐色颗粒 o每 t ª
相当于原生药 t q{zy ª ∀正清风痛宁肠溶片k盐酸
青藤碱 us °ªr片 o白云山正清制药股份有限公司生
产 o批号 |{svsv¦l ∀弗氏完全佐剂kƒ≤ o取无水羊毛
脂 w份加热融化后置于研钵中研磨 o同时滴加液体
石蜡 y份 o再加一定量减毒冻干卡介苗研磨配成每
毫升含 z qx °ª卡介苗的弗氏完全佐剂 o置 w ε 冰箱
保存备用l ∀µ2tk重组人细胞因子标准品 o购自
≥¬ª°¤公司l ∀ ° tyws细胞培养液k购自 ¬¥¦²公
司l oƒ≤≥k胎牛血清 o购自 ¬¥¦²公司l ∀v2ק kv 标
记胸腺嘧啶核苷 o上海原子核研究所l ∀超氧化物歧
化酶k≥⁄2tl放免试剂分析测定盒k均相竞争抑制
法 o北方生物技术研究所提供 o批号 ||syl ∀
1 q3 仪器 日本岛津 ∞
p vuss⁄精密电子天平 ∀
日本岛津 ∂ p zvs紫外分光光度计 ∀大鼠足容积测
定仪 ∀ |y 孔 平 底 细 胞 培 养 板 ∀ ≤u 培 养 箱
k≥
l ∀酶标仪k⁄vsuu o华东电子管厂l ∀液体
闪灼计数仪kƒutsz° o西安 uyu厂l ∀
2 实验方法
2 q1 分组与处理 大鼠按体重随机分组 o每组 tu
只 o设正常k空白l对照组 !模型对照组 !阳性药物正
清风痛宁组ks qs{ ª#®ªptl !受试药物然降多吉胶囊
大 !中 !小k以原生药计 o分别为 s qxs os qux os qtux ª#
®ªptlv个剂量组 ∀在佐剂注射后 uu §继发性病变
全部形成后开始给药 o每日 t次 o连续 tw §o观察然
降多吉胶囊对继发性病变的治疗作用 ∀
2 q2 佐剂性关节炎的诱导≈t 大鼠右后足足跖皮
内注射弗氏完全佐剂kz qx °ª#°ptls qt °致炎 o诱
导关节炎发生 o使之出现原发病变和继发病变 ∀
2 q3 观察指标 然降多吉胶囊治疗给药 tw §后 o观
察佐剂注射对侧的足爪肿胀度 !体重变化 !前肢和尾
部病变的发生率 !结节数或严重程度以及药物对炎
症介质及细胞因子的影响 ∀
大鼠佐剂性关节炎全身病变按照 x 级评分
法≈t ou }s分 o无红肿 ~t分 o小趾关节稍肿 ~u分 o趾关
节和足跖肿胀 ~v分 o踝关节以下足肿胀 ~w分 o包括
踝关节在内全部足爪肿胀 ∀
2 q4 脾脏 ×淋巴细胞增殖功能测定≈v ow 刀豆素
k≤²±l刺激淋转试验k同位素掺入法l ∀无菌条件下
取大鼠脾细胞 o用 ¤±®. ¶液洗涤 u次 o无血清 °
tyws洗涤 t 次 o用 x h ƒ≤≥2 ° tyws 调制成 u ≅
tsyr°细胞悬液 ∀将细胞悬液加入 |y孔平底细胞
培养板 otss Λr孔 o每份作 v复孔 o其中 u孔加刺激
剂 ≤²± u ±ªr孔 o为转化孔 ∀另 t孔不加刺激剂作为
对照孔 ∀平板置 vz ε ox h ≤u条件下培养 zu «o终
止培养前 tw «加入v2ק tΛ≤¬r孔 ∀用多头细胞收
集器收集细胞测定每分钟计数值k¦³°l o计算复孔平
均值 o按下式计算淋巴细胞转化率 }
淋巴细胞转化率k h l 实验组 ¦³° p对照组 ¦³°实验组 ¦³° ≅ tss h
2 q5 腹腔巨噬细胞白细胞介素 tk2tl分泌活性测
定≈v ow 无菌条件下取大鼠脾细胞 o用 ¤±®. ¶液洗
涤 u次 o无血清 °tyws洗涤 t次 o用 x h ƒ≤≥2 °2
tyws调制成 w ≅ tsy#°pt细胞悬液 o取 t °于康
氏管中 ovz ε ox h ≤u 条件培养 zu «o反复冻溶 ow
ε 保存 ∀另取 ≤xz小鼠在无菌条件下取胸腺细胞 o用
x h ƒ≤≥2 °tyws调制成 t ≅ tsy#°pt胸腺细胞悬
液 ∀取胸腺细胞悬液和冻溶上清各 tss Λ加入 |y
孔平底细胞培养板 o每份样品作 v复孔 o同时作不同
稀释浓度标准品 µ2t 和培养液对照 o然后加入
≤²± u ±ªr孔 ∀平板置 vz ε ox h ≤u条件下培养 zu
«o终止培养前 tw «加入v2ק t Λ≤¬r孔 ∀用多头细
胞收集器收集细胞测定 ¦³°o计算复孔平均值 o按下
式计算 2t活性 }
2t 活性k±ª# °ptl 样品 ¦³° p培养液对照 ¦³°标准品 ¦³° p培养液对照 ¦³° ≅
标准品活性单位
2 q6 血清脂质过氧化物k⁄l和超氧化物歧化酶
k≥⁄2tl测定 血清脂质过氧化降解产物k⁄l测
定采用分光光度法≈x ∀血清超氧化物歧化酶k≥⁄2
tl测定按照放免试剂分析盒操作说明进行k均相竞
争抑制法l ∀
2 q7 统计学方法 计数资料 !等级性资料均用 τ检
验比较各组间差异显著性 o检验水准 Α s qsx ∀
3 结果
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第 u|卷第 tu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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3 q1 然降多吉胶囊对大鼠继发性足跖肿胀以及全
身病变的影响 本试验致炎前大鼠足容积组间差异
不显著k Π s qsxl ∀注射弗氏完全佐剂后 t{ «大鼠
右侧足跖k佐剂注射侧l出现显著肿胀 o持续 tu ∗ tx
§后有所消退 o为佐剂引起的原发性关节炎肿胀 ot|
§后右侧足跖肿胀再次显著增加 ∀模型组左侧足跖
k佐剂注射对侧l的肿胀度显著高于对照组 o同时可
观察到部分动物前肢 !耳和尾部出现结节性病变 o体
重也有显著降低 ∀在大鼠因迟发性超敏反应引起的
对侧后肢多发性佐剂关节炎完全形成后 o然降多吉
胶囊开始治疗给药可明显抑制佐剂注射对侧多发性
关节炎足肿胀k表 tl ∀然降多吉胶囊对大鼠多发性
关节炎全身病变均有显著改善作用k表 ul ∀
表 t 然降多吉胶囊对 大鼠继发性左侧足肿胀的影响kcξ ? σ, ν tul h
组别
剂量
rª#®ªpt
足跖肿胀度
t| § uu § ux § u| § vw §
正常对照 p u q{t ? v qxtul u q{u ? v qxtul u q{t ? v qxtul u q{t ? v qxtul v qxz ? x qsuul
模型对照 p vz qvs ? t{ qvz wv qtv ? us qvt wv q{u ? us qw| vu qwy ? uu qyx uv qv| ? tz qws
然降多吉 s qtux vu qsu ? tz qtv wu q{| ? ts q|x uz qws ? ux qtytl tu qtv ? ut qsttl ts qtv ? tw quttl
然降多吉 s qux vw qsy ? uu qsy v| qxu ? | qwx u{ q|z ? ux quu ty qvv ? us qtu tu q|v ? tu q{|
然降多吉 s qxs vy qus ? tz qsz wv qvt ? tt qwu ut qxx ? t| quzul | qzw ? tu qwxul tu qxy ? | qxy
正清风痛宁 s qs{ vs qww ? t{ q|{ vz q|{ ? tx qvz uv q|v ? t| qsutl | qtt ? | qvsul y qwt ? y qtsul
注 }与模型对照组比tl Π s qsx oul Π s qstk表 u ∗ w同l
表 u 然降多吉胶囊对 大鼠全身病变的影响k ξ ? σ, ν tul
组别
剂量
rª#®ªpt
全身病变严重程度r分
uu § ux § u| § vu § vw §
正常对照 p s qss ? s qssul s qss ? s qssul s qss ? s qssul s qss ? s qssul s qss ? s qssul
模型对照 p u qss ? t qut u qtz ? t qtt u qxs ? t qww t q{v ? t qws t q|u ? t quw
然降多吉 s qtux u qss ? t qsw t qxs ? t qww t qss ? t qtv t qs{ ? t qty s qx{ ? s q|stl
然降多吉 s qux u qvv ? t qsz t qwu ? t qs{ t qtw ? s qy|¦ t qu| ? s qzy t qss ? t qtx
然降多吉 s qxs u qvv ? t qvs t qtz ? t quztl s q{u ? t qs{tl s qxx ? s q{utl s qzx ? s q|ztl
正清风痛宁 s qs{ u qss ? t qsw t qxy ? t qvv s q{v ? t qsvtl s qyz ? s q{ztl s qyz ? s qzttl
3 q2 然降多吉胶囊对脾脏 × 淋巴细胞转化增殖功
能的影响 然降多吉胶囊可以显著降低佐剂性关节
炎大鼠脾脏 × 淋巴细胞转化增殖功能 o对腹腔巨噬
细胞产生白细胞介素 tk2tl分泌活性亦有一定抑
制作用k表 vl ∀
表 v 然降多吉胶囊对 大鼠脾淋巴细胞转化率
和腹腔巨噬细胞 2t分泌活性的影响k ξ ? σ, ν tul
组别
剂量
rª#®ªpt
脾淋巴细胞转化率
r h
2t活性
r±ª#°pt
正常对照 p zx qsz ? v qzvtl s q|z ? s qtu
模型对照 p z{ qsv ? t qvy s q|y ? s qtv
然降多吉 s qtux zy qyt ? s q|tul s q{{ ? s qtv
然降多吉 s qxs zw q{y ? v qy{ul s q{{ ? s qtu
正清风痛宁 s qs{ zt qtu ? w qtzul s qzv ? s qtstl
3 q3 然降多吉胶囊对血清脂质过氧化产物形成的
影响 然降多吉胶囊能显著抑制佐剂性关节炎大鼠
血清脂质过氧化产物的形成 o对超氧化物歧化酶无
明显影响k表 wl ∀
表 w 然降多吉胶囊对 大鼠血清脂质过氧化物
和超氧化物歧化酶的影响k ξ ? σ, ν tul
组别
剂量
rª#®ªpt
⁄
rΛ°ª#pt
≥⁄2t
r±ª#°pt
正常对照 p s qusw ? s qtsutl y{ qxt ? { qww
模型对照 p s qu|v ? s qtsz zs q|w ? tv qwy
然降多吉 s qtux s qtuv ? s qtwtul y| qus ? tt qxw
然降多吉 s qxs s qsyu ? s qsxzul y| qxt ? tu qxw
正清风痛宁 s qs{ s qvyy ? s qut| yx q|y ? z qyx
4 讨论
佐剂性关节炎是一种以关节滑膜组织慢性增生
为主要表现的免疫功能障碍性多发性关节炎 o发病
机制和病理特征与人类风湿性关节炎类似 ∀有研究
表明 o× 细胞是类风湿性关节炎滑膜浸润的主要细
胞 o类风湿滑膜自分泌大量白细胞介素 t能诱导炎
症反应和细胞增生 o而类风湿患者体内自由基产生
增多 o从而加强炎症反应 o使关节肿痛加重≈y oz ∀藏
医认为 o类风湿性关节炎属/真布0病范围 o病因为人
体受寒和饮食不当k伤胃l o物资运输功能紊乱 o过量
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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的黄水在人体关节内扩散或凝结 o腐蚀关节 !肌肉 !
骨骼和筋脉 o从而引起关节红 !肿 !胀 !痛等炎症反
应 ∀对关节造成破坏 o使/培根0粘合功能失调 o导致
关节病变≈{ o| ∀藏医对类风湿性关节炎疾病的治疗 o
主张采用祛风散寒 o除湿清热 o消炎止痛诸法 ∀若痰
瘀互结 o关节畸形 o则须化痰搜风 !行瘀活血 o同时通
络止痛 o以疏通经络气血 o达到 / 通则不痛的目
的0≈ts o多用散寒除湿方法 o以温性的药物 o芳香除
湿的药物组成处方 o和中医的发作期间治疗方法一
致 ∀然降多吉胶囊主要药物翼首草k榜孜毒乌l o味
苦 o性寒 o有解毒除瘟 o祛风通痹之功 ~独活k志甲l味
苦辛 o性平 o能杀虫 o止血 o愈疮疡 ~川木香k夏坡如
达l味甘苦辛 o性平 o清/培根0热 o烦热 o破痞瘤 o化瘀
止痛 o建胃消积 ~麝香k拉泽l在5晶珠本草6归为汁液
精华类药物 o有解毒 o杀虫 o消炎 o避秽作用 ∀以上诸
药合用能散寒除湿 o消肿止痛 o故临床用于寒湿阻络
型类风湿性关节炎对关节疼痛 !活动不利有显著疗
效 ∀
本研究观察到然降多吉胶囊对弗氏完全佐剂所
致大鼠继发的多发性佐剂性关节肿胀有显著的抑制
作用 o而且能降低多发性佐剂性关节炎大鼠脾 × 淋
巴细胞增殖转化率 o抑制血清脂质过氧化产物的形
成 o对腹腔巨噬细胞产生白细胞介素 t分泌活性亦
有一定抑制作用趋势 ∀以上结果表明 o然降多吉胶
囊对佐剂性关节炎有一定的治疗作用 o其机理与抑
制 × 细胞增殖以及白细胞介素2t !过氧化脂质产生
有关 ∀
≈参考文献
≈t 中华人民共和国卫生部药政管理局 q中药新药研究指南k药学
药理学 毒理学l qt||w q|{ q
≈u 中华人民共和国卫生部药政管理局 q新药k西药l临床前研究
指导原则汇编k药学 药理学 毒理学l qt||v qtty q
≈v 沈关心 o周汝麟 q现代免疫实验技术 q武汉 }湖北科学技术出版
社 ot||s qux{ q
≈w 钱玉昆 q实用免疫学技术 q北京 }北京医科大学中国协和医科大
学联合出版社 ot||x qwy q
≈x 汪 谦 q现代医学实验方法学 q北京 }人民卫生出版社 ot||z q
{vv q
≈y 张进玉 q类风湿性关节炎 q北京 }人民卫生出版社 ot||{ qws o
zx otv| q
≈z 孙卫民 o王惠琴 q细胞因子研究方法学 q北京 }人民卫生出版
社 ot||| qtwu q
≈{ 万玛才旦 q藏药内服外浴治疗风湿类风湿性关节炎 z{例观
察 q中国民族医药杂志 ot||| oktl }tx q
≈| 俄仓巴 o卓玛东珠 q浅谈藏药理论的药味 q中国民族民间医药
杂志 ot||| oktl }| q
≈ts 多 果 q藏药用药酒治疗关节炎的体会 q中国民族民间医药杂
志 ot||| oktl }uw q
Εφφεχτσ οφ Ρανϕιανγδυοϕι χαπσυλε ον χψτοκινεσ
ανδ ινφλαµ µατιον µεδιατορσ οφ αδϕυϖαντ αρτηριτισιν ρατσ
• ÷¬¤²2§²±ªo⁄∞ «¬2º ±¨ o°∞ ÷¬¤²2«∏¤o ∏±2±¬±ªo⁄ ≠¬±ªo
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( Σιχηυαν Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα , Χηενγδυ ytsswt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·¶²© ¤±¬¤±ª§∏²¬¦¤³¶∏¯¨¤·µ¤§¬·¬²±¤¯ ׬¥¨·¤± ° §¨¬¦¬±¨ ²± ¦¼·²®¬±¨ ¶¤±§¬±©¯¤°°¤·¬²± ° 2¨
§¬¤·²µ¶²©¤§∏√¤±·¤µ·«µ¬·¬¶kl q Μετηοδ : °²¯¼¤µ·«µ¬·¬¶°²§¨¯ º¤¶¬±§∏¦¨§¥¼ ƒµ¨∏±§. ¶¦²°³¯ ·¨¨ ¤§∏√¤±·¬±µ¤·¶q׫¨ §¨¨ °¤§¨ªµ¨¨²©·«¨
¬±©¯¤° §¨³¤º¶ª¨ ±¨ µ¤¯ ¤©©¨¦·¬²± ×2¯ ¼°³«²¦¼·¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±©∏±¦·¬²±o2t ¤¦·¬√¬·¼ ¶¨¦µ¨·¨§¥¼ ¦¨ ¬¯¤¦°¤¦µ²³«¤ª¨ o³¨µ²¬¬§¨ ¬¯³¬§¤±§≥⁄2t ¬±
¶¨µ∏° º µ¨¨ §¨·¨¦·¨§q Ρεσυλτ : ¤±¬¤±ª§∏²¬¦¤³¶∏¯¨oª¬√ ±¨ ²µ¤¯ ¼¯ o¦²∏¯§¬±«¬¥¬··«¨ §¨¨ °¤§¨ªµ¨¨²©·«¨ ¶¨¦²±§¤µ¼¬±©¯¤° §¨³¤º¶oµ¨§∏¦¨ ×2
¼¯°³«²¦¼·¨·µ¤±¶©²µ°¤·¬²±o2t ¤¦·¬√¬·¼ ²©¦¨ ¬¯¤¦°¤¦µ²³«¤ª¨ o³¨µ²¬¬§¨ ¬¯³¬§¬±¶¨µ∏° qΧονχλυτιον : ׫¨ ¤±·¬2 ¤¦·¬²± ²© ¤±¬¤±ª§∏²¬¦¤³2
¶∏¯¨¬¶§∏¨ ·²¬·¶¬±¥¬·¬²± ²©×2¯ ¼°³«²¦¼·¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±o2t ¤¦·¬√¬·¼ ²©¦¨ ¬¯¤¦°¤¦µ²³«¤ª¨ o¤±§³¨µ²¬¬§¨ ¬¯³¬§q
[ Κεψ ωορδσ] ¤±¬¤±ª§∏²¬¦¤³¶∏¯¨~¤§∏√¤±·¤µ·«µ¬·¬¶~×2¯ ¼°³«²¦¼·¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±©∏±¦·¬²±~2t ~³¨µ²¬¬§¨ ¬¯³¬§
≈责任编辑 古云侠
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第 u|卷第 tu期
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