全 文 ：猪去氧胆酸提取工艺研究
陆 进t 3 o杜守颖u o赵丽瑞v o张 薇v
kt q中日友好医院 药学部 o北京 tsssu| ~
u q北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu ~
v q天津医科大学 o天津 vssustl
≈摘要 目的 }研究猪去氧胆酸的最佳皂化 !精制提取工艺 ∀方法 }采用正交设计 |kvwl方法 o筛选出最佳提取
工艺 o采用双波长薄层扫描法测定猪胆粉经皂化后的猪去氧胆酸含量 o考察了提取时间 !氢氧化钠浓度 !氢氧化钠
溶液用量对猪去氧胆酸含量的影响 o优选出合理皂化提取工艺 ~考察加溶剂量 !活性炭量 !回流时间 !回流次数对猪
去氧胆酸含量影响 o选出最佳精制工艺 ∀结果 }用 {倍量的 { h氢氧化钠液加热回流 ty «的条件为最佳皂化提取工
艺 ~用 y倍量醋酸乙酯 !加 x h活性炭 !回流 vs °¬±及回流 u次为最佳精制工艺 ∀结论 }采用正交设计筛选出的最佳
提取k皂化和精制l方法较好 o工艺可行 ∀
≈关键词 猪去氧胆酸 ~提取工艺 ~正交设计 ~薄层扫描
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlsx2swtw2sw
猪去氧胆酸k¤2«¼§µ²¬¼¦«²¯¬¦ o⁄≤l是从猪胆
粉k为猪胆汁的干燥品l中提取的有效成分 o具有降
血脂 !镇痉 !祛痰作用 o临床上用于高血脂症 !气管炎
以及由肝胆疾病引起的消化不良 o对百日咳菌 !白喉
杆菌 !金黄色葡萄球菌等有抑制作用 o其作为清开灵
注射剂中的有效成分 o经临床观察对急性白血病的
治疗有良好作用 o体外实验证明其具有诱导细胞凋
亡 !抑止细胞的增殖分裂作用≈t ou ∀猪去氧胆酸的提
取工艺分为皂化 !精制k脱色 !脱水 !浓缩 !干燥l ∀迄
今为止 o尚未见猪去氧胆酸的提取工艺参数研究 ∀
作者首先对碱皂化工艺进行了实验研究 o优选出最
佳工艺条件 o对优选的皂化工艺进行了验证 ~在前期
皂化工艺的基础上 o以加溶媒量 !活性炭量 !回流时
间 !回流次数等工艺条件为考察因素 o对精制工艺进
行正交实验优化 o并对优选的精制工艺进行验证≈v ∀
1 仪器与试剂
岛津 ≤≥ p |sss双波长薄层扫描仪 !硅胶板
k青岛海洋化工厂l !猪去氧胆酸对照品k中国药品生
物制品检定所l !环己烷 !醋酸乙脂 !冰醋酸 !氢氧化
钠 !盐酸 !浓硫酸 !无水乙醇等试剂均为分析纯 ∀
2 方法与结果
≈收稿日期 ussv2sv2us
≈通讯作者 3 陆进 oר¯ }kstslywuuu|xx o∞2°¤¬¯}∏¬±szs|t
¶¬±¤q¦²°
2 q1 猪去氧胆酸含量的测定方法≈w2{
测定猪胆粉提取物中猪去氧胆酸的含量 o依据
参考文献采用双波长薄层扫描法 ∀
2 q1 q1 色谱条件 依据有关胆汁酸类物质的薄层
色谱条件报道 o硅胶板 o展开剂为环己烷2醋酸乙
脂2冰醋酸kwΒwΒs qzl ~显色剂为 ts h硫酸乙醇 otts
ε 烘至斑点显色 o用洁净玻璃板覆盖 ~扫描条件Κ≥
vzx ±° oΚ yxs ±° o≥÷ v o狭缝为 t qu °° ≅ t qu
°° o双波长反射法锯齿扫描 ∀
2 q1 q2 样品溶液的制备 将经水解后的猪去氧胆
酸粗品研成粉末 o精密称取 uus °ªo置 ux °量瓶
中 o加适量醋酸乙脂 o超声 ts °¬±o用醋酸乙脂稀释
至刻度 ∀
2 q1 q3 对照品溶液的制备 精密称取猪去氧胆酸
对照品 ts .su °ª至 ts °量瓶中 o用醋酸乙脂稀释
至刻度 o即得 ∀
2 q1 q4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液
s .x ot ou ov ow Λo分别点于同一薄层板上 o以环己烷2
醋酸乙脂2冰醋酸kwΒwΒs qzl为展开剂展开 o取出晾
干 o浸于 ts h硫酸乙醇溶液中 o立即取出 otts ε 烘
至斑点显色 o于 Κ≥ vzx ±° oΚ yxs ±°波长进行双
波长扫描测定 o见表 t ∀以点样量为横坐标 o斑点峰
面积为纵坐标 o进行线性回归处理 o得回归方程 Ψ
x wyv .yy Ξ n w {{s q|z oρ s q||{ ∀猪去氧胆酸在
s qx ∗ w Λª与峰面积呈良好的线性关系 ∀
#wtw#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ x
¤¼oussw
2 q1 q5 猪去氧胆酸含量测定 精密吸取供试品溶
液 t Λo对照品溶液 s qx ow Λ分别点于同一硅胶薄
层板 o以环己烷2醋酸乙脂2冰醋酸kwΒwΒs qzl为展开
剂 o展开 o取出 o晾干 o浸于 ts h硫酸乙醇溶液中 o立
即取出 otts ε 烘至斑点显色 o于 Κ≥ vzx ±° oΚ
yxs ±°波长进行双波长扫描 o测定样品和对照品的
峰面积 o以外标二点法先计算猪去氧胆酸含量 o再推
算猪去氧胆酸总含量k即粗品得量与猪去氧胆酸含
量的两项乘积l ∀
2 q2 猪去氧胆酸皂化工艺的优选
2 q2 q1 制定因素水平表 根据文献≈t ou 及预实验
结果 o作者将考察的因素及其范围确定如下 }氢氧化
钠浓度 !加热时间 !氢氧化钠溶液的倍数 o选 |kvwl
的正交设计进行实验 o每个因素设计 v个水平 o因素
水平见表 t ∀
表 t 皂化工艺因素水平表
水平
Α
氢氧化钠浓度
r h
Β
加热回流时间
r«
Χ
加氢氧化钠液量
r倍
t { tu {
u ts ty ts
v tu us tu
2 q2 q2 试验方法 称取猪胆粉 ts ªo按设计条件水
解 o水解提取后 o静置分层 o虹吸除去上层棕黄色液
体 o沉淀物补充少量水使之溶解 o用稀盐酸酸化至刚
果红试纸变蓝k³ t ∗ ul o取出析出物 o过滤 o水洗至
中性 o呈金黄色 o烘箱烘干k{s ε 以下l o称重 o得猪
去氧胆酸粗品量 o按上法测定猪去氧胆酸含量 ∀
2 q2 q3 皂化工艺正交实验结果及统计分析≈v 经
统计分析结果见表 u o表 v ∀
方差分析因素主次关系为 Β Α Χ ,其中
Αt Αu Αv , Βu Βv Βt , Χt Χv Χu ,较佳方案
为 Αt Βu Χt ∀方差分析结果表明 : Β因素的影响具有
极显著意义( Π s .st) , Α, Χ因素的影响均具有显
著意义( Π s qsxl ∀
2 q2 q4 验证实验 从实验结果看 o较佳方案为
Αt Βu Χt ,而从正交实验的结果看 ,序列 u Αt Βu Χu为
最佳 ,序列 x次之 ∀为验证上述工艺的正确性 ,做工
艺 Αt Βu Χt及序列 u工艺 Αt Βu Χu 做对比实验各 u
次 ∀用同一批猪胆粉称取 ts ªo按工艺 Αt Βu Χt 及
Αt Βu Χu进行实验 ,测得猪去氧胆酸粗品得量及含
量 ∀得出工艺 Αt Βu Χt优于 Αt Βu Χu ,最终得出皂化
提取最佳工艺条件为 Αt Βu Χt ,即 {倍量的 {%氢氧
化钠液加热回流 ty «o其他条件不变 ∀验证结果见
表 w ∀
表 u 皂化工艺正交实验结果
编号
粗品得量
rª
猪去氧胆酸
含量r h
猪去氧胆酸
总含量r h
t { qus uv qtx t{ q|{
u z qzz u| qzv uv qts
v y qz| vs qsw us qws
w y qsu tv qx| { qt{
x ts qsx uu q{| uv qss
y z qy| uw qxs t{ q{w
z v qu{ uw qz| { qtv
{ | qxs ut qwv us qvy
| y q|{ tv q|t | qzt
表 v 皂化工艺方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 方差 Φ Π
Α |{ quz u w| qtvx zz qv{ s qsx
Β tyu qzx u {t qvzx tu{ qtx s qst
Χ xs qs| u ux qswx v| qww s qsx
∆ t quz u s qyvx
注 }Φs qsxku qul t| o Φs qstku oul ||
表 w 对比皂化工艺实验结果
编号
工艺条件
粗品得量
rª
猪去氧胆酸
含量r h
猪去氧胆酸
总含量r h
t Αt Βu Χt | .vu vs .sy u{ .su
u Αt Βu Χt | .ut vs .vy uz .|y
v Αt Βu Χu z .|s u| .z{ uv .xv
w Αt Βu Χu { qsu u| qxs uv qyy
2 q3 猪去氧胆酸精制工艺的优选≈{
2 q3 q1 粗品制备 称取猪胆粉 xxs ª皂化k{倍量
醋酸乙脂 o{ h氢氧化钠溶液 o加热回流 ty «l o静置 o
分层 ∀虹吸除去上层棕黄色液体 ∀沉淀物补充少量
水使之溶解 o用稀盐酸酸化至 ³ t ∗ u o取出析出
物 o过滤 o水洗至中性 o真空干燥k低于 {s ε l得猪去
氧胆酸粗品 wsz qy ªo得率 zw qtt h ∀
2 q3 q2 因素水平表 以猪去氧胆酸含量为指标 o进
行 |kvwl的正交实验 o根据文献及预试验结果 o将考
察因素定为 }乙酸乙酯量 !活性炭用量 !回流时间及
回流次数 o正交因素 !水平见表 x ∀
2 q3 q3 精制工艺过程 称取猪去氧胆酸粗品 tx
ªoo分别按 |kvwl表中设计的条件进行精制 o滤液加
us h无水硫酸钠放置 uw «脱水 ∀过滤 o滤液浓缩至
#xtw#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ x
¤¼oussw
原体积的 trv o放置等待结晶 o过滤结晶 o滤液再放
置等待结晶 o过滤合并结晶 o真空干燥 o称重 ∀每项
实验平行重复 t次 ∀将猪去氧胆酸精品研成粉末 o
精密称取 xs owx °ªo超声 tx °¬±o醋酸乙酯定容至 ts
°得样品液 o点样 o层析 o显色 o扫描测定含量 ∀计
算精品的含量 ∀
2 q3 q4 精制工艺正交实验结果及统计分析 计算
结果及方差分析见表 y o表 z ∀
表 x 精制工艺正交因素水平表
水平
Α
溶剂量
Β
活性炭量
r h
Χ
回流时间
r °¬±
∆
回流次数
t w倍 kys °l x ts t
u x倍 kzx °l ts us u
v y倍 k|s °l tx vs v
表 y 精制工艺正交实验结果
实验号
猪去氧胆酸
精品量rª
精品含量
r h
猪去氧胆
酸量rªtl
猪去氧胆酸
精品量rª
精品含量
r h
猪去氧胆
酸量rªtl
小计
rªul
t v qs| vx quw t qs{{ { u qyv v| qwx t qsvz x u qtuy v
u w qsv ws qtx t qyt{ t w quw vv qvs t qws{ y v qsuy z
v v qwz vu qx| t qtvs x v q|s vs qvt t qt{u t u qvtu y
w v qut wv qvs t qv{| | w qs| ws q|y t qyzx v v qsyx t
x u q{t vz q{w t qsyv v v qts vy qu{ t qtuw y u qt{z |
y u qt| v{ qy| s q{wz v u qyv vy qzw s q|yy u t q{tv x
z x q|| vy q{x u qusz u x qvt wu q{{ u quzy z w qw{v |
{ w qzs u{ qt{ t qvuw y w qts u| qvt t qust z u qxuy v
| u qxu u{ qxv s qzt| t t qx| vv qvx s qxvs v t quw| w
注 }tl猪去氧胆酸量kªl 猪去氧胆酸精品量kªl ≅精品含量k h l ~ul小计 u次平行实验猪去氧胆酸量之和
表 z 方差分析表
来源
离均差
平方和
自由度
方差
Φ
Π
Α s qtuv u s qsyt wz x qwuw t s qsx
Β t qxwy u s qzzv y{ qtyx s qst
Χ s qxwx u s quzu uw qsux s qst
∆ t qusu u s qyst xu q|| s qst
误差 s qtsu | s qstt vw
注 }查方差分析表 oΦs qstku o|l { qsu o Φs qsxku o|l w quy
从表 z及表 {可以看出 ow种因素的影响程度
依次为 Β ∆ Χ Α ∀其中 Αv Αt Αu , Βt
Βu Βv , Χv Χu Χt , ∆u ∆v ∆t , ΒΧ∆因素的影
响有非常显著性意义 ; Α因素的影响有显著性意义 ∀
较佳精制条件应为 Αv Βt Χv ∆u ,即 y倍量的醋酸乙
酯 ,x%活性炭 ,加热回流 vs °¬±u次 o同正交实验 z
相同 ∀
2 q3 q5 工艺验证 按上述条件与方法 o对最佳精制
工艺进行验证 o即 y倍量的乙酸乙酯 ox h活性炭 o加
热回流 vs °¬± u次 ∀结果与正交实验中得率最高的
序列 z吻合 o从而证明该工艺的合理性 o结果见表
{ ∀
3 讨论
3 q1 展开剂的选择 以环己烷2醋酸乙脂2冰醋酸
kwΒwΒs qzl为展开剂效果最佳 o样品斑点和杂质斑点
均能较好的分离 ~如以展开剂比例为 wΒwΒt o样品斑
点和杂质斑点不能较好的分离 ©值较高 ~而以展开
剂比例为 wΒwΒs qx o则 ©值较小 ∀
表 { 重复最佳工艺结果
编号 猪去氧胆酸量rª ξ ? σrª ≥⁄r h
t u qutu z
u u qtwz x u qt{{ s ? s qwyt sv s qsut sz
v u qusv {
3 q2 显色方法选择 用浸渍法显色所扫描出来的
数据稳定可靠 ~如用喷色法因喷涂不均匀导致数据
波动大 o不可靠 o使得重现性差 ∀需严格控制显色温
度和时间 o否则板面颜色变深k板面白色 o斑点紫色
为佳l o扫描数据不可靠 ∀
3 q3 含量测定方法选择 猪去氧胆酸粗品和精品
的薄层层析图中各胆酸类物质的分离效果较好 o对
猪去氧胆酸进行薄层扫描 o定量 o其他斑点不产生干
扰 o采用双波长薄层扫描法灵敏度好 o数据可靠 ∀若
以后需开展复方制剂研究可采用高效液相色谱法测
定制剂中多组分含量 ∀
3 q4 精制工艺中粗品加醋酸乙酯溶解不充分 o需加
热回流促进溶解 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 q一部 qusss qux| q
≈u 陈泽涛 o董 倩 o张 勇 o等 q流式细胞仪检测清开灵注射液
#ytw#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ x
¤¼oussw
及其有效成分诱导 2ys细胞凋亡及其机理研究 q中国实验
方剂学杂志 ousss oykyl ovz q
≈v 谢秀琼 q中药新制剂开发与应用 q第二版 q北京 }人民卫生出版
社 ousss qtvz q
≈w 祝 明 o陈碧莲 q薄层扫描法测定猪胆汁提取物中猪去氧胆酸
含量 q中国药业 ousss o|kyl }tw q
≈x 麻风华 o朱秀荣 o王卫东 o等 q双波长薄层扫描法测定猪胆粉中
猪去氧胆酸含量 o中成药 ousst ouvktl }y{ q
≈y 张建军 o薄少英 o徐航利 o等 q双波长薄层扫描法测定清开灵注
射液中牛胆酸及猪去氧胆酸的含量 q中国医院药学杂志 o
t||t ottkyl }uys q
≈z 万绍晖 q薄层扫描法测定牛黄降压丸及胆南星中猪去氧胆酸
的含量 q中国实验方剂学杂志 ot||| oxktl }yw q
≈{ 冯 芳 o马永建 o陈 明 o等 q反相高效液相色谱2蒸发光散射
检测法同时测定人工牛黄中多组分含量 q药学学报 ousss ovx
kvl }uty q
Στυδψ ον εξτραχτιον τεχηνιθυε οφ Η∆ΧΑ
¬±t o⁄ ≥«²∏2¼¬±ªu o ¬2µ∏¬v o • ¬¨v
(t . Χηινα2ϑαπαν Φριενδσηιπ Ηοσπιταλ, Βειϕινγ tsssu| , Χηινα ;
u . Βειϕινγ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε Υνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tsstsu , Χηινα ;
v . Τιανϕιν Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Τιανϕιν vssust , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ©¬±§²∏··«¨ ²³·¬°¤¯ ¬¨·µ¤¦·¬²±·¨¦«±¬´∏¨ ©²µ⁄≤k¤2«¼§µ²¬¼¦«²¯¬¦¤¦¬§l q Μετηοδ : ¦¦²µ§¬±ª·²·«¨ ²µ2
·«²ª²±¤¯ §¨¶¬ª± |kvwl o·«¨ ²³·¬°¤¯ ¬¨·µ¤¦·¬²±·¨¦«±¬´∏¨ º¤¶¶²∏ª«··«µ²∏ª« ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¬²±o¤±§·«¨ ¦²±·¨±·²© ⁄≤ º¤¶§¨·¨µ2
°¬±¨ §¥¼ ×≤ q Ρεσυλτ : ׫¨ ²³·¬°¤¯ ¬¨·µ¤¦·¬²± ° ·¨«²§º¤¶ ¬¨ª«·©²¯§{ h ¤ ¶²¯∏·¬²±¤±§ty «²∏µ¶q׫¨ ²³·¬°¤¯ ³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ° ·¨«²§º¤¶¶¬¬
©²¯§ ·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨ox h ¤¦·¬√¨¦¤µ¥²±o¤±§vs °¬±∏·¨¶·º¬¦¨ qΧονχλυσιον : ׫¨ ¤¥²√¨° ±¨·¬²±¨ § ¬¨·µ¤¦·¬²±·¨¦«±¬´∏¨ ¬¶²³·¬°¤¯ ¤±§©¨ ¤¶¬¥¯¨¬±
¬¨·µ¤¦·¬²± ²© ⁄≤ q
[ Κεψ ωορδσ] ⁄≤ ~ ¬¨·µ¤¦·¬²±·¨¦«±¬´∏¨ ~²µ·«²ª²±¤¯ §¨¶¬ª±~×≤
≈责任编辑 袁桂京
灰关联聚类法对几种促透剂促透效果的综合评价
王 晖 3 o李 昕 o许碧莲 o许卫铭
k广东医学院 药理学教研室 o广东 湛江 xuwsuvl
≈摘要 目的 }对几种促透剂的促透效果进行综合评价 ∀方法 }以双氯芬酸钠为模型药物 o以氮酮 !薄荷醇 !冰片 !油酸 !
蛇床子挥发油为促透剂 o在离体透皮吸收实验装置上进行透皮吸收试验 o计算累积透过量 !渗透速率 !稳态流量和滞后时间 o
运用灰关联聚类法评价促透效果 ∀结果 }对双氯芬酸钠的促透作用 o氮酮 !薄荷醇促透效果最好 o冰片 !油酸 !蛇床子挥发油次
之 ∀结论 }灰关联聚类法可客观地 !公正地评价促透剂的促透效果 ∀
≈关键词 促透剂 ~灰关联聚类法 ~评价
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlsx2swtz2sw
氮酮作为一种公认的促透剂 o在外用药物和经
≈收稿日期 ussv2sy2ts
≈通讯作者 3 王晖 oר¯ }kszx|luv{{xx{ o∞2°¤¬¯}ª§º¤±ª«∏¬
·²° q¦²°
皮吸收制剂中应用相当广泛 ∀近年来 o许多新的促
透剂逐渐被开发出来 o尤其是中药中的一些有效成
分如薄荷醇 !冰片 !樟脑 !蛇床子挥发油 !桉叶油等 o
引起了人们广泛的关注≈t2w ∀客观 !科学地评价促透
剂的促透作用 o对正确使用促透剂具有重要意义 ∀
#ztw#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ x
¤¼oussw