全 文 ：葛根提取物对乳腺 !子宫的毒理等方面的作用 o有待
进一步研究 ∀
≈参考文献
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≈u 王继峰 o牛建昭 o李 华 o等 q大豆提取物对去卵巢大鼠高脂代
谢的作用 q中国中药杂志 oussu ouzkxl }y q
≈v 王继峰 o李 华 o牛建昭 o等 q大豆提取物对去卵巢大鼠能量平
衡的作用 q中国中药杂志 oussu ouzkul }tvx q
≈w ¶¨¶¬±¤ q ¨ª∏° ¶¨¤±§≥²¼¥¨ ¤±¶} √ µ¨√¬¨ º ²©·«¨¬µ∏·µ¬2
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≈y 王伟群 o韩正康 o陈伟华 o等 q芒柄花素的促乳腺发育作用及机
理探讨 q南京农业大学学报 ot||v otyk增刊l }t| q
≈z 薛晓鸥 o金 哲 o牛建昭 o等 q葛根提取物对去卵巢大鼠阴道子
宫及垂体2性轴激素变化的影响 q北京中医药大学学报 oussu o
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≈{ 张庆荣 o韩正康 o陈 杰 q大豆黄酮对大鼠乳腺发育作用的实验
研究 q动物学报 ot||x ot{kvl }vvu q
Εφφεχτσ οφ Εξτραχτσ οφ Ροοτ οφ Κυδζυ ςινε ον Μαµ µ αρψ Γλανδ
ανδ Υτερυσ ∆εϖελοπ µεντ ιν Ρατσ
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Μετηοδ : ws • ¬¶·¤µµ¤·¶º ¬¨ª«·¬±ªyx ∗ {x ª º µ¨¨ µ¤±§²°¯ ¼ §¬√¬§¨ §¬±·² w ªµ²∏³¶}¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o ¶¨·µ²ª¨ ± ªµ²∏³o¨ ¬·µ¤¦·¶²©µ²²·²©
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[ Κεψ ωορδσ] µ²²·²©®∏§½∏√¬±¨ ~ °¤°°¤µ¼ ª¯¤±§~∏·¨µ∏¶~µ¤·
≈责任编辑 古云霞
大鼠灌服复方丹参方后血清中丹参素的测定
潘桂湘 o张伯礼 o高秀梅
k天津中医学院 中医药研究中心 o天津 vsst|vl
≈摘要 目的 }了解大鼠¬ª复方丹参方后水溶性成分的吸收情况 o建立大鼠血清中丹参素的含量测定方法 ∀方
法 }采用液液萃取法对血清样品进行预处理 o以对羟基苯甲酸为内标 o甲醇2乙腈2s qx h醋酸ku qxΒv qxΒ|wl为流动相 o
用高效液相色谱法于 u{t ±°检测 ∀结果 }大鼠¬ª复方丹参方后在血清中检测到丹参素 o用所建立的方法绘制了其经
时血药浓度曲线 ~而原儿茶醛则未在血清中发现 o检测到的是一个保留时间稍前于原儿茶醛的未知化合物 ∀结论 }大
≈收稿日期 ussu2sz2us
≈基金项目 国家重点基础研究规划项目kt|||wwsxwwsvl
≈通讯作者 ר¯ }ksuuluvsxtszy ∞2°¤¬¯}ª∏¬¬¬¤±ª³ tyv q¦²°
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第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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鼠灌服复方丹参方后 o丹参素可经胃肠道吸收入血 o呈快吸收慢消除的过程 ∀
≈关键词 复方丹参方 ~丹参素 ~高效液相色谱法 ~体内药物分析
≈中图分类号 u{v ~ u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvlsy2sxyv2sv
复方丹参方由丹参 !三七及冰片组成 o具有活血
化瘀 o理气止痛之功效 o是临床治疗冠心病 !胸闷 !心
绞痛的常用中药处方 ∀方中的化学成分根据其理化
性质和药理作用的差异 o可将之分为丹参水溶性成
分 !丹参脂溶性成分和三七皂苷类成分三大类 ∀丹
参水溶性成分含有多种酚酸类化合物 o该类成分具
有很强的抗脂质过氧化 !抗血栓等作用≈t o可能是复
方丹参方中的主要活性部分 ∀
传统中药多为口服制剂 o其有效物质往往以血
液为介质而输送到靶点产生作用 ∀就此而言 o给药
后的血清才是真正起作用的/粗的药物0≈u ∀所以 o
中药的药效物质基础应该在给药后的血清组成中进
行探讨≈v ∀虽然近年来国内对复方丹参方的研究较
多 o但对该方药效物质基础进行深入探讨的研究则
相对很少 ∀通过研究复方丹参方动物给药后血清中
的成分及其相应的药理作用 o则可以更直接地了解
到复方中真正起作用的化学物质基础 ∀所以本文对
大鼠灌服复方丹参方后丹参水溶性成分的吸收状况
进行了研究 o并建立了血清中丹参素的 °≤ 测定
方法 o为进一步阐明其药效物质基础提供科学的依
据 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
仪器 °ttss高效液相色谱仪 otvtt2四元
泵 otvuu2脱气机 otvty2柱温箱 otvtw2 ∂ 可
变波长检测器 o° √¨ q qsxst化学工作站 ∀
试药 甲醇 !乙腈为色谱纯 o水为超纯水 o冰醋
酸 !乙酸乙酯为分析纯 o丹参素 !原儿茶醛对照品k中
国药品生物制品检定所l o对羟基苯甲酸k化学纯l o
三氯醋酸k分析纯l o复方丹参方药液k取丹参和三七
提取物适量 o加蒸馏水配制成生药量比为 tsΒy的药
液l ∀
动物 ≥⁄大鼠 o雌雄各半 o体重kuss ? tsl ªo
北京维通利华实验动物中心提供 ∀
1 q2 色谱条件
¼³¨µ¶¬¯ ≤t{ w qy °° ≅ uxs °° ox Λ°色谱柱 o
甲醇2乙腈2s qx h醋酸ku qxΒv qxΒ|wl为流动相 o流速
为 t qs °#°¬±p t o检测波长为 u{t ±° o色谱图见图
t ∀
1 q3 样品的处理与测定
精密量取血清样品 t qs °o加入 t h 醋酸 xs
Λo内标溶液 xs Λots h三氯醋酸溶液 uss Λo用
涡旋混合器混旋 t °¬±otu sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±∀
将上清液转移至具塞尖底离心试管中 o用 w °乙酸
乙酯旋涡混合提取 t °¬±ov sss µ#°¬±p t离心 u °¬±o
分取有机层 o于 wx ε 水浴上通 u 流挥干 ∀临用前
残渣用甲醇 xs Λ溶解 o超声 t °¬±o旋涡混合 t
°¬±o离心ktu sss µ#°¬±p tlts °¬±o取上清液 ts Λ
进样 o以内标工作曲线法≈w 求算丹参素的血药浓度 ∀
图 t 大鼠灌服复方丹参方后血清样品的色谱图
q含对照品的血清样品
q空白血清样品 ≤ q含药血清样品
t q丹参素 u q原儿茶醛 v q对羟基苯甲酸 w q未知物
1 q4 标准曲线的绘制
1 q4 q1 标准贮备液配制 精密称取 w .s °ª丹参素
于 ts °容量瓶中 o用 t h醋酸定容至刻度 o然后取
适量用t h醋酸稀释成浓度为s qsty os qsw os qs{ o
s qty os quw os q{ °ª# °p t的丹参素标准溶液 ∀另
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第 u{卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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精密称取 w qt °ª对羟基苯甲酸于 ts °容量瓶中 o
用 t h醋酸稀释至刻度 o再取 t °稀释至 ts °作
为内标溶液 ∀
1 q4 q2 标准曲线的制备 精密量取空白血清样品
t .s °o加入不同浓度的丹参素标准溶液 xs Λo内
标溶液对羟基苯甲酸 xs Λots h三氯醋酸溶液 uss
Λo按 1 q3 方法进行处理与测定 ∀以丹参素与内标
物的峰面积比值k Ψl为纵坐标 o丹参素浓度k Ξl为
横坐标 o用最小二乘法进行线性回归 ∀
1 q5 给药方案与样品采集 ≥⁄大鼠随机分成 tu
组 o每组 v只k即每个取样时间点 v只l o实验前 tu «
禁食 o不禁水 ∀除空白组大鼠外 o各组大鼠按 u qx
°#tss ªp t剂量灌服复方丹参方药液 ∀大鼠于灌
服前和灌服后 tx ovs owx oys ozx o|s otus ot{s ouws o
v ys °¬±心脏采血 ovz ε 水浴温孵后 o离心ts °¬±
kv sss µ#°¬±p tl o分离血清 ∀
2 结果
2 q1 丹参素经时血药浓度测定结果 取血清样品
t .s °o按 1 q3 进行操作 o得大鼠¬ª复方丹参方药
液后丹参素的经时血药浓度 o结果见表 t ∀
表 t 丹参素经时血药浓度k ν vl
取血点
取血时间r°¬± tx vs wx ys zx |s tus t{s uws vys
血药浓度rΛª#°p t zsv qy x|| qz t{z qu t{v qz tuu qx tu{ qx yx q| v| qw ww q{ uy qz
2 q2 精密度试验 取空白血清 t .s °o加入不同
浓度的丹参素标准溶液制成高 !中 !低 v种不同浓度
样品 o按与血清样品相同的处理方法进行处理 o测定
日内精密度和日间精密度 o结果见表 u ∀
表 u 丹参素血药浓度
测定方法的精密度考察k ν xl
加入量
rΛª#°p t
≥⁄r h
日内精密度 日间精密度
ws t qw v qs
tys v qt w qv
{ss w qu x qy
2 q3 线性关系 按/标准曲线的制备0方法测得丹
参素与内标物的峰面积比值k Ψl与丹参素浓度在
ty ∗ {ss Λª#°p t线性关系良好 o回归方程为 Ψ
x qtzy Ξ n s qtt{ oρ s q||| s ∀
2 q4 回收率试验 试验方法同精密度 o按测得量与
加入量求算方法的回收率 o结果见表 v ∀
表 v 丹参素血药浓度
测定方法的回收率考察k ν xl
加入量
rΛª#°p t
测得量
rΛª#°p t
回收率
r h
≥⁄
r h
平均回收率
r h
vx vw |z qt u qt
tus ttz |z qx v qw |z qz
{ss z{| |{ qy w qv
2 q5 最小检测限 将适量丹参素溶液加入到空白
血清中 o按 1 q3 进行操作进样 o以 ≥r∴ts为定量
限 o≥r∴v为检测限 o测得丹参素最低定量浓度为
s qtx Λª#°p t o最小检测浓度为 s qsx Λª#°p t ∀
3 讨论
3 q1 进行样品预处理过程中 o曾比较了液2液萃取
与液固萃取的回收率情况 ∀结果显示液固萃取的萃
取回收率要低于液液萃取 ∀其原因可能在于丹参素
属弱酸性成分 o虽调节了溶液的 ³ 值 o但它在 ≤t{固
相萃取小柱上的吸附仍然不完全 o且其极性较大 o可
能在洗脱除杂过程中有部分的损失 ∀
3 q2 血清样品先用三氯醋酸处理 o然后再进行液液
萃取操作 o这两步处理一方面可以使蛋白去除更为
完全 o另一方面又调节了溶液的 ³ o使复方丹参方
中丹酚酸类成分处于游离状态 o有利于提取的完全 ∀
3 q3 大鼠灌服复方丹参方后丹参素的经时血药浓
度呈现快吸收慢消除的特点 }给药 tx °¬±即达到血
药浓度峰值 o表明丹参素在大鼠体内能够迅速吸收 o
起到速效的作用 ∀随后在 t ∗ y个小时丹参素缓慢
消除 o可能是丹参素分布到组织后停留的时间较长
造成 o也可能是复方中其他丹参酚酸类成分在胃肠
道或肝脏中代谢转化成丹参素所致 ∀
3 q4 由色谱图 t可见 τ t| °¬±左右处有一色谱
峰 o其保留时间稍小于原儿茶醛的 τ 值 o且该峰的
峰值随给药时间的不同呈不规则的变化 ∀由于代谢
物一般较原形药物极性增大 o在用反相柱进行分析
时保留时间提前 o因而提示该峰有可能为原儿茶醛
或其他酚酸类成分的代谢产物 o具体还有待于实验
的进一步证实 ∀
≈参考文献
≈t 黎莲娘 o张均田 q丹参及其同属植物的水溶性活性成分 q医药研
#wyx#
第 u{卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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究通讯 ousst ovskzl }u q
≈u 贺玉琢 q日本汉方药/血清药理学0 !/血清药化学0的研究概况 q
国外医学#中医中药分册 ot||{ ouskxl }v q
≈v 张礼和 q我对中药复方有效成分研究的一些看法 q化学进展 o
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≈w 曾经泽 q生物药物分析 q北京 }北京医科大学协和医科大学联合
出版社 ot||{ q
∆ετερµινατιον οφ ∆ανσηενσυ ιν
Ρατ Σερυµ αφτερ Οραλ Αδ µινιστερ Χοµ πουνδ Σαλϖια Ρεχιπε
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[ Κεψ Ωορδσ] ≤²°³²∏±§≥¤¯√¬¤ ¦¨¬³¨ ~ ⁄¤±¶«¨ ±¶∏~ °≤ ~¥¬²³«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ¤±¤¯¼¶¬¶
≈责任编辑 古云霞
胸痹心痛类病证古代方药的计算机统计及研究
方力行t o黄 瑛t o何 燕u o高 峰v o王胜昔t o梁慧凤t
kt q上海中医药大学 o上海 usssvu ~u q上海中医药大学 附属龙华医院 o上海 usssvu ~
v q上海交通大学 o上海 usssvsl
冠心病是当今社会严重危害人类健康的疾病之
一 o随着社会进步 o人口老龄化加剧 o本病发病率有
增加的趋势 ∀冠心病心绞痛在古代中医主要归属于
胸痹心痛等病证范畴 ∀开发积累年代久远的中医古
代文献中相关病证方剂 o对探求冠心病心绞痛治疗
的有效方药具有实用价值 ∀本课题以计算机技术为
辅助 o对相关方药进行了统计分析及研究 ∀
本研究建立的古代文献数据库中收录公元前至
t|tt年内的 xss多种主要中医古籍 o按照成书年代
先后收录相关病证有方名的方剂 o重复者不再收入 ~
收录了胸痹 !心痛 !真心痛 !胸痛 !胸背痛等 t{种相
≈收稿日期 ussu2tt2us
≈基金项目 上海市教委 st • sv
≈通讯作者 ר¯ }ksutlxwuvtzu{
关病证 o共 xss余张方剂 o每方按中文文摘格式输入
电脑 o建立本类病证古代方药数据库 ~并进一步对病
证 !药物标引 o然后运用数据库软件作全库处理及统
计分析 ∀xt{张方剂k每方收录于最早记载之书l o
使用的药物涉及 v|v种k不包括其他非心痛类症状
的对症加药l o这些药物使用的总频数为 vz|x ∀每
药使用平均频数为 | qyykvz|xrv|vl ∀高于平均频
数药物有 z{种 o占 t| q{ h kz{rv|vl ~这类常用药使
用频数占总使用频数的 z| qy h kvst|rvz|xl o统计
表略 ∀统计及初步研究结果如下 ∀
1 出现率居前 us位的药物
通过全库统计 o可以看到本类病证古代用药的
全貌 ∀出现率前 us位的药物依次是 }肉桂 vu qs h
k频数为 tyy o出现率 tyyrxt{l o生姜 vs qv h k频数
#xyx#
第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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